骶髓后连合核内躯体初级传入粗纤维的证明及其意义探讨

近 2 0年来的研究表明 ,骶髓后连合核是接受和中继盆腔脏器初级传入信号的重要内脏感觉核团。通过盆神经传入脊髓的盆腔脏器初级传入神经纤维除一部分投射于中间带外侧核区参与排尿反射活动的调控外 ,其余部分基本上都投射于骶髓后连合核。本文作者等又曾发现躯体神经 (坐骨神经、阴部神经 )的初级传入粗纤维有一部分经后索投射于后连合核 ,推测这些躯体初级传入粗纤维可能与内脏传入细纤维汇聚于后连合核神经元并在此进行机能的整合、产生新的神经效应。但是投射于后连合区的躯体初级传入粗纤维 ,必须在电镜下直接证实。为此 ,本研究通过透射电镜及 HRP标记电镜技术探索了阴部神经躯体初级传入粗纤维在后连合核区的存在 ,并用 Philips CM-10 0电镜附件 Measuring装置测量了这种纤维的轴突直径和髓鞘厚度、通过计算求得了它们之间的比例 ( A/M值 ) ,藉此取得了科学地辨认并确证粗纤维的根据     

家兔躯体(坐骨神经)和内脏(膀胱)初级传入神经元向骶髓后连合核区的投射—HRP跨越神经节追踪观察

本文作者研究了膀胱(内脏)及坐骨神经(躯体)初级传入纤维向脊髓的投射。发现内脏传入纤维和躯体本体觉粗纤维都向S_2—S_4节段后连合核区投射,两者的投射区有重叠。推测内脏传入和躯体本体觉传入的纤维在后连合核可能有汇聚。另外,根据躯体本体党纤维在髓内跨节段分布的范围和位置以及盆腔脏器初级传入的投射位置,结合文献分析和讨论了脊髓后连合核的位置和形态。提出在脊髓内存在着一个和脑部的孤束核在形态及功能上酷似的脊髓后连合核的见解。它在吻侧以对称的狭细细胞带起于胸髓下段,向尾侧逐渐扩大位于Ⅵ层内侧部,到骶髓成为位于中央管背外方的核团,S_3以下两侧者合并形成位于中央管背侧后连合区的较大核团,一直可追踪到尾髓。     

盆内脏感觉二级传人通路的研究

向猫盆神经注入10％蓖麻毒素2μl,存活3～5天后,再注射20％HRP溶液于同侧臂旁外侧核,2～3天后多聚甲醛和戊二醛灌注动物及取材。电镜下发现,盆神经初级传入纤维的终末(溃变)与向臂旁外侧核投射的位于骶髓后连合核、中间带外侧核、后角Ⅰ层内的HRP逆行标记神经元,形成轴-树和轴-体突触,从而在超微水平确证了盆内脏感觉传入的二级传导通路起源于骶髓后连合核、中间带外侧核、后角Ⅰ层,投射到臂旁外侧核。     

猫骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布和定位投射

应用免疫组织化学和HRP与免疫组织化学双重标记的方法,对骶髓“内脏面”L-ENK样神经元的分布及其与副交感节前神经元和向臂旁外侧核及Barrington核投射的二级传入神经元的关系进行了研究。L-ENK样神经元分布于整个“内脏面”上,尤以中间带外侧核和后连合核为密集。在中间带外侧核内,L-ENK样神经元的分布与向盆神经注入HRP后逆行标记的副交感节前神经元的分布位置重叠,能明显地划分为背侧带和外侧带。在Onuf核及其与骶髓副交感核之间的联系细胞桥上首次发现有L-ENK样神经元存在。将HRP注入盆神经结合L-ENK免疫组织化学反应,在骶髓副交感核外侧带和背侧带均发现大量HRP/L-ENK双标细胞。几乎全部HRP标记细胞均为HRP/L-ENK双标细胞,个别双标细胞出现于中间带外侧核的中间带(interband)内。将HRP注入臂旁外侧核或Barrington核结合L-ENK样免疫组织化学反应,在“内脏面”的中间带外侧核、中介核和后连合核处都发现HRP/L-ENK样双标细胞。上述结果证明猫骶髓“内脏面”、Onuf核及联系细胞桥上均有L-ENK样神经元分布,其中“内脏面”向臂旁外侧核或Barrington核投射的二级神经元有一部分含有L-ENK样活性物质,骶髓副交感核的外侧带、背侧带和中间带均有L-ENK样副交感节前神经元。     

猫骶髓“内脏面”和Onuf核L-ENK样成分的分布及其来源探讨——免疫组织化学方法研究

本文应用免疫组织化学(PAP)方法,对猫骶髓“内脏面”(后连合核及其两侧的中间带)和Onuf核的L—ENK佯阳性成分的分布进行了观察。发现L—ENK样阳性纤维和终末布满于“内脏面”,特别是密布于后连合核、中间带内侧核、中间带外侧核及与其相邻的侧索。此外Onuf核也可见密布的纤维和终末。在经秋水仙素予处理的动物,L—ENK样细胞也出现于“内脏面”,但以中间带外侧核和后连合核两处较多。Onuf核及后根节均未见L—ENK样细胞。分别横断预、胸、腰髓后,后连合核、中间带外侧核及与其相邻的侧索等处L-ENK样阳性纤维和终末略有减少。切断一侧腰骶神经后根,L—ENK样阳性纤维和终末的分布未见变化。综合本文结果和文献资料,提示骶髓“内脏面”和Onuf核的L—ENK纤维和终末主要来源于脊髓内部固有的L—ENK样神经元;小部分来源于上位脑结构的下行投射。本文不支持来自后根节的周围性来源。     

猫骶髓“内脏面”传出神经元和二级传入神经元的分布

应用HRP和荧光金标记技术,在荧光显微镜下观察了猫骶體“內脏面”的传出神经元和二级传入神经元的分布?咀偌磷⑷肱枭窬?标记的骶髓副交感节前神经元主要分布于同侧中间带外侧核,由它组成的骶髓副交感核在以S2为中心的两个骶髓节段内(有时为三个),形成长约6-10mm的细胞柱。在横切面上,核的中段以上分为位于Ⅶ层外侧缘的外侧带和位于Ⅴ层的背侧带,但在核的尾侧段则二者融合为一。中介核和中间带内侧核也存在少量逆标神经元。示踪剂注于臂旁外侧核或Barrington核(一侧或双侧)后,逆标的盆内脏二级传入神经元主要存在于骶髓中间带外侧核和骶髓后连合核,在中间带外侧核位于两团传出神经元之间的中间带,但在核的尾侧段则位于骶髓副交感核的背外侧部,个别细胞混杂于副交感节前神经元之间,中介核和中间带內侧核也有少量二级传入神经元分布?送?相当数量的盆内脏二级传入神经元位于后角Ⅰ层。本文结果证明猫骶髓中间带外侧核至少由两种不同性质的神经元即骶髓副交感节前神经元和盆内脏二级传入神经元组成,两者在中间带外侧核区有明确的定位分布,因此,可将骶髓中间带外侧核划分为传出亚核和传入亚核,传统上笼统地将骶髓副交感核等同于中间带外侧核是不恰当的。     

盆腔内脏感觉的二级传入通路——溃变和HRP标记光镜、电镜结合研究

<正> 关于盆腔内脏初级传入的行程和终止部位已有较多的研究,其结果认为主要终止于骶髓_(1-3)的Ⅰ、Ⅷ层及后连合核。史中立等研究证明,HRP注射于大鼠臂旁外侧核(PBL)在骶髓Ⅰ、Ⅷ层和后连合核可追踪到逆行标记细胞。因为PBL已被证明接受弧束核的内脏二级传入。本实验目的在于在电镜水平证实投射到PBL的骶髓Ⅰ、Ⅷ层和后连合核的神经元是否为盆腔内脏传入感觉二级神经元。家猫五只,将10％Ricin CA60 3μl注射一侧盆神经,3     

内脏和躯体初级传入冲动在猫骶髓后连合核的汇聚

用玻璃微电极细胞外记录的方法，观察了在电刺激猪盆神经和胫神经或机械性刺激会阴部时骶髓后连合核神经元自发放电频率的变化．共记录了80个单位放电神经元，其中13个为无关单位．电反应类型有3种：长潜伏期长串反应，短潜伏期长串反应，抑制性反应．在所观察的对刺激呈有效反应的67个单位中，30个（44．78％）对躯体和内脏刺激均起反应，其中，12个对盆神经和胫神经传入冲动都起反应；18个对盆神经和会阴部躯体感受野的传入呈汇聚性反应．对会阴部感受野施加各种机械性刺激，鉴定此汇聚神经元为WDR神经元．67个有效反应单位中还有5个（7.46％）只对内脏传入冲动，32个（47.76％）仅对躯体传入冲动做出反应．本研究从电生理学上验证了本教研室在形态学上发现的盆腔内脏（膀胱）初级传入和坐骨神经躯体初级传入在骶髓后连合核神经元的汇聚，并对汇聚的类型和意义进行了观察和讨论．     

一氧化氮合酶阳性神经元及纤维在大鼠脊髓的分布及其来源

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)脱氢酶反应观察了大鼠脊髓内一氧化氮合酶阳性神经元和纤维的分布。胞体浓染且突起显示良好的类似Golgi染色的阳性神经元分布于亘脊髓全长的中央管周围灰质(X层),胸腰髓(T1-L3)的中间带外侧核、中介核及腰骶髓(L6、S1)的骶髓副交感核和后连合核,少量弥散于后角Ⅳ～Ⅵ层。后角Ⅲ层内可见较多的胞体浓染或淡染但突起短或未见阳性突起的小型神经元。前角内无阳性神经元,但有较多串珠状阳性终末支,并在运动神经元胞体和树突上形成终扣。阳性纤维和终末在后角Ⅰ层和Ⅲ层密集,其它部位稀少。在胸腰段和腰骶段脊髓后角内、外侧缘有行向腹侧的内、外侧阳性纤维束,外侧束集中而粗大,阳性纤维束终止于中间带外侧核和后连合核。切断后根和半横断颈髓的实验表明,后角Ⅰ层的阳性纤维和终末主要来源于脊神经节内一氧化氮合酶阳性细胞的中枢突,而Ⅲ层内的阳性纤维和终末则为Ⅲ层和后角深层阳性细胞的突起。结合文献和本文结果可以推断,一氧化氮在躯体和内脏感觉的传入过程及内脏传出活动中是一种重要的活性物质。     

家兔支配膀胱的传出和传入神经成分在脊髓内的分布——HRP逆行追踪及跨神经节追踪研究

向家兔膀胱壁内注入HRP,通过逆行及跨神经节追踪证明:1.膀胱副交感中枢在S_(2～5)髓节(S_(3、4)为中心),主要位于中间带外侧核(占标记细胞总数78.37％),并由此向网状核、后角外侧缘、侧索、中介核及前角后外侧核内扩散。L_(1～5)也有相当数量的长轴突交感节前神经元被标记,说明膀胱壁内有副交感和交感两种节前神经元分布。2.被标记的初级传入神经元中枢突在骶段人背外侧束,主要沿后角外侧缘呈束状行向网状核和中间带外侧核,大部分终止于此,形成膀胱排尿反射的途径;一部分则更向内侧,在中介核到后连合核处形成终末带。另外还有一小束纤维,沿后角内侧缘向腹侧走行,终止于后连合核。这些核团可能是膀胱意识性感觉的中继处。在L_(2～4)也可见沿后角外侧缘走行终止于网状核、中间带外侧核的纤细纤维束。3.一侧膀胱受脊髓双侧支配,但以同侧为主。     

骶髓后连合核接受盆内脏伤害性信息传入的形态学证明

为阐明投射至骶髓后连合核的盆内脏初级传入中是否含有传递伤害性信息成分，本研究综合运用特异性标记初级传入Ｃ纤维的ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ跨节追踪技术，神经干局部涂抹Ｃ纤维毒素ＣａＰｓａｉｃｉｎ并结合ＳＰ免疫组化方法，研究了猫投射至骶髓后连合核的盆神经初级传入纤维中是否含有传递伤害性刺激的成分；同时观察了秋水仙素处理的骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４标记的初级传入神经元与ＳＰ免疫阳性神经元的关系。结果如下：（１）向盆神经注入ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ，骶１～３后根节内出现平均直径３４μｍ的标记细胞，后连合核内出现密集的标记终末，电镜下证明通过Ｌｉｓｓａｕｅｒ氏束进入脊髓内的标记纤维均为无髓纤维；（２）对盆神经进行局部Ｃａｐｓａｉｃｉｎ处理，引起后连合核内的ＳＰ免疫阳性纤维和终末明显减少；（３）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＦＩＴＣ标记细胞有１７％同时呈ＳＰ免疫阳性；（４）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ标记的盆内脏初级传人神经元的３９％同时呈ＳＰ免疫阳性。本研究结果在形态学上证实了骶髓后连合核接受盆腔内脏伤害性信息的传入，它可能是中继和整合盆内脏伤害性信息的低级中枢。     

内脏(盆神经)和躯体(坐骨神经)初级传入终末在猫骶髓后连合核的汇聚——溃变和HRP标记电镜研究

<正> 李继硕、秦秉志发现:来自膀胱壁的内脏初级传入纤维和来自坐骨神经初级传入纤维都有部分投射到骶髓后连合核,且两者互相重叠,推测该核区是内脏和躯体初级传入的会聚处。本实验用猫7只,以10％Ricin CA60 3μl注射于一侧胫神经和腓神经;3天后,以30％HRP(Toyobo)3μl注射于同侧盆神经,其中3只同时注射HRP 0.1μl于同侧臂旁核(PBL),再存活3天。以含2％多聚甲醛和2％戊二醛的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4)灌注动物。     

大鼠孤束核内5—HT和内脏神经初级传入终末与向臂旁核投射神经元的联系—激

本文在激光共聚焦扫描显微镜下观察了内源性５－ＨＴ终末、Ⅸ、Ⅹ脑神经初级传入终末在孤束核内与向臂旁核投射神经元之间的联系。分别向臀旁外侧核微量注射四甲基罗丹明,Ⅸ、Ⅹ脑神经干内微量注射生物素化葡聚糖胺,以免疫荧光和荧光组织化学方法显示５－ＨＴ、内脏神经初级传入终末和孤束核内的四甲基罗丹明逆行标记神经元。结果发现,大量罗丹明逆行标记细胞（红色）主要位于注射侧孤束核的内侧、小细胞亚核及连合核。同部位也同时观察到５－ＨＴ能阳性终末（蓝色）和内脏神经初级传入终末（绿色）。两种终末的终扣和膨体紧靠逆行标记神经元的胞体和树突或与其重叠,这些可能是突触连接部位的接触点。本文结果提示：中枢内的下行性５－ＨＴ纤维可能直接作用于孤束核内向臂旁核投射的神经元且通过与内脏神经传入终末在此处的汇聚,而产生新的神经效应。     

大鼠腰骶髓后连合核SP受体免疫阳性神经元与SP免疫阳性终末的突触联系

应用免疫组织化学双重反应的方法研究了大鼠腰骶髓后连合核内ＳＰ受体免疫阳性神经元在光、电镜下的特征及其与ＳＰ免疫阳性终末的突触联系。结果证明，ＳＰ免疫阳性终末和ＳＰ受体阳性胞体及树突均密集分布于后连合核区。在光镜下双重免疫反应阳性结果显示二者重叠分布，且可见大量的ＳＰ样免疫阳性终扣与ＳＰ受体阳性胞体或树突紧密接触。电镜下证明ＳＰ受体免疫阳性产物不仅位于突触后部位而且分布于胞体和树突的非突触部位，有４２％的ＳＰ受体阳性树突与ＳＰ阳性终末形成突触连接。在此未发现ＳＰ受体免疫阳性终末。通过一系列实验证明：腰骶髓后连合核神经元接受由ＳＰ介导的外周伤害性信息的传入，且其主要为盆腔脏器内脏初级传入成分。     

投射于腰骶髓后连合核的传递伤害性刺激的初级传入纤维的来源探索—c-fos表达方法

本课题组的既往研究曾发现 ,膀胱的初级传入投射纤维中有一部分传递伤害性刺激 ,投射于腰骶髓的后连合核。本研究的目的是通过比较盆腔内脏和后肢躯体性结构的伤害性刺激诱导 FOS阳性反应在大鼠后连合核的表达状况 ,藉以确定投射于后连合核的传递痛信号的初级传入的来源。本实验分别向盆腔内脏的膀胱和直肠以及坐骨神经支配的小腿外侧皮肤及腓肠肌等四个不同部位注入 2 %福尔马林溶液 ,用免疫组织化学方法观察了腰骶段脊髓内 FOS的表达状况 ;并向此四部位注射生理盐水作为对照。结果证明 ,将 2 %福尔马林溶液注入膀胱或直肠内腔后可主要诱导 L6,S1 ,S2 节段后连合核出现大量 FOS阳性细胞核( 2 5～ 95个 /片 ) ;向小腿外侧皮肤或腓肠肌注射福尔马林溶液 ,则主要在背角浅层出现浓密的 FOS阳性细胞核而在后连合核仅发现极少量的 FOS阳性细胞核 ( <5个 /片 ) ;在不给予福尔马林刺激的对照组 ,后连合核内也出现极少量散在的 FOS阳性细胞核 ( <3个 /片 )即后连合核内出现极少量的传递躯体伤害性刺激的传入成分与不给予福尔马林刺激的对照组结果无明显差别 ,这种极少量的神经元在神经机能的传递上不应有何作用。因而 ,本研究结果提示 ,盆腔内脏来源的痛信号初级传入成分是后连合核内唯一的有机能意义的痛传入成     

大鼠腰骶髓后连合核与脑干之间的往返联系及其意义探讨——HPP 法研究

秦秉志等以及另外一些作者曾发现膀胱的内脏初级传入神经元向骶、尾髓后连合核区有较密集的投射。有人推测,此区是尿意感觉的中继处。另外,自 Barrington 以来,一些作者认为脑桥吻端的背外侧被盖核(TLD)和排尿反射有关。为了探索此两区之间的形态学联系及其与排尿反射机能的关系,     

大鼠腰骼髓“内脏面”传出和上行投射神经元的定位分布——HRP与荧光金追踪法研究

用HRP与荧光金(FG)结合的示踪法,观察了大鼠腰骶髓“内脏面”副交感节前神经元和上行投射神经元的定位分布。发现FG注入一侧臂旁外侧核或Barrington核后,逆行标记的金色荧光细胞出现于双侧L_5～S_2的“内脏面”,细胞密集于后连合核和中间带外侧核(IML),此外,还出现于双侧的I层及外侧脊髓核(LSN)。HRP注射于一侧盆神经后,逆标细胞出现于术侧的L_6和S的IML,偶见于中介核(IC)。在IML内,HRP标记的副交感节前神经元位于其腹侧份,而FG标记的上行投射神经元主要位于背侧和背内侧部,亦可见少数FG标记细胞混杂在HRP标记细胞之间。本研究结合已有的研究对IML的命名、组成和功能以及LSN的组成进行了讨论。     

三叉神经躯体传入成分向孤束核投射的间接途径—HRP跨节和逆行追踪技术的光镜和电镜研究

用HRP跨节及逆行追踪的光镜和电镜技术探索了三叉神经(TGN)躯体性传入成分向孤束核(NTS)的间接投射通路。HRP微量注射于闩平面的NTS后,逆行标记细胞出现于与TGN尾侧亚核背外部邻接的脊束内的间质核。同时,此核又是TGN的舌神经和眶下神经初级传入的投射部位。电镜观察发现,HRP标记的舌神经和眶下神经初级传入终末与间质核内神经元的树突形成较多的突触连接。有部分标记终末与向NTS投射的神经元的逆行标记树突和树突棘在间质核内形成突触连接。另外,本文研究证明,间质核和TGN尾侧亚核浅层的细胞构筑基本相同,且有些间质核的细胞团系由尾侧亚核浅层结构向脊束内突入而形成,故可将两者视为一个统一体。据此,本文作者认为,TGN和NTS之间存在着经间质核中继的两级神经元传入通路,经此通路传入的冲动应属于躯体性质。推测由两级神经元组成的这个通路可能是针刺TGN领域体表穴位调控孤束核内脏机能的结构基础。     

大鼠脊髓P物质受体分布的免疫细胞化学研究

用免疫细胞化学技术对大鼠脊髓和脊神经节内Ｐ物质受体的定位分布进行了系统的研究。结果证明，Ｐ物质受体阳性胞体和树突主要密集地分布于脊髓全长的Ｉ层；此外，还发现Ⅱ层的外侧部出现少量阳性胞体和树突，来自Ⅱ层的阳性树突穿过Ⅱ层后进入Ⅰ层；Ⅲ￣Ⅴ和Ⅹ层也可见中等密度的阳性胞体和树突；Ⅵ层和Ⅶ层仅见少量阳性胞体和树突，但胸髓中间带外侧核、骶髓副交感运动核、骶髓后连合核内可见大量浓染的阳性胞体和树突；Ⅷ、Ⅸ层、     

孤束核内儿茶酚胺能神经元汇聚内脏传入与口面部躯体伤害性信息并向臂旁核投射

为了研究内脏初级传入与口面部深层组织躯体伤害性信息是否汇聚于孤束核(NTS)中向臂旁核(PBN)投射的儿茶酚胺(CA)能神经元。本实验将SD大鼠随机分为两组。第一组动物以生物素化的葡聚糖胺(BDA)注入颈部迷走神经主干跨节追踪,四甲基罗达明(TMR)注入臂旁外侧核(LPB)逆行追踪,福尔马林刺激咬肌并行FOS的免疫荧光组织化学染色;第二组动物以BDA注入颈部迷走神经主干跨节追踪,福尔马林刺激咬肌并行FOS和酪氨酸羟化酶(TH)染色。在激光扫描共聚焦显微镜下对两组大鼠NTS内的标记细胞和纤维进行了观察。两组实验中,主要在NTS的内侧、中间内侧和连合亚核内观察到重叠分布的TMR、FOS或TH、FOS单标神经元。其中部分TMR逆行标记的或TH阳性神经元呈FOS阳性并与BDA跨节标记的纤维和终末形成紧密接触。提示大鼠NTS内的CA能神经元可能汇聚了内脏初级传入和口面部深层组织的躯体伤害性刺激信息并向LPB投射。