超声联合一氧化氮微泡体外干预骨髓间充质干细胞安全性探讨

目的研究超声联合一氧化氮(NO)微泡体外干预大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的安全性。方法体外分离培养大鼠BMSCs,分为超声联合NO微泡组(包括1∶70,1∶50,1∶20浓度亚组)及空白对照组,体外干预后MTT法检测BMSCs增殖,PI染色流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期。结果与空白对照组比较,1∶20浓度组显著抑制BMSCs增殖(P<0.05);1∶50浓度组与1∶20浓度组明显诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论超声联合NO微泡体外干预BMSCs,1∶70浓度对其是安全的。     

三七总皂苷对类风湿关节炎患者环瓜氨酸肽特异性T细胞增殖的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)对类风湿关节炎(RA)患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞(CCP/AST)体外增殖的影响。方法体外分离培养24例RA患者外周血淋巴细胞,分为以下5组,空白对照组:不加任何干预药物;CCP组:仅加CCP干预(CCP终浓度为20μg/mL);甲氨蝶呤(MTX)对照组:同时加CCP与甲氨蝶呤干预(CCP与甲氨蝶呤终浓度均为20μg/mL);PNS低剂量组:同时加CCP与PNS干预(CCP与PNS终浓度分别为20、10μg/mL);PNS高剂量组:同时加CCP与PNS干预(CCP与PNS终浓度均为20μg/mL)。体外培养72h后,用CCK-8法测定T细胞增殖水平。结果 CCP组患者外周血淋巴细胞增殖(0.70±0.08)与空白对照组(0.49±0.06)相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);PNS低剂量组和高剂量组与CCP组相比,淋巴细胞增殖均可被明显抑制(0.57±0.06、0.47±0.06与0.70±0.08),差异均有统计学意义(P<0.01);且PNS高剂量组与PNS低剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PNS对CCP/AST增殖的抑制作用可能在RA的治疗中发挥重要作用,其抑制程度可能与PNS剂量有一定的相关性。     

柚皮苷对兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的观察柚皮苷(骨碎补的有效成分)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞的影响。方法将体外培养的兔BMSCs分为对照组(标准培养液)、柚皮苷组(不同浓度柚皮苷+标准培养液)、普通组(地塞米松10-8mol/L+β-甘油磷酸钠10 mmol/L+维生素C 50μg/L+标准培养液)和联合组(不同浓度柚皮苷+普通组)。倒置相差显微镜观察生长情况,MTT法检测不同浓度柚皮苷对兔BMSCs增殖的影响;扫描电镜、茜素红染色法和von Kossa银染色法观察各组细胞钙化情况。结果柚皮苷10-5mmol/L明显促进兔BMSCs增殖。培养3周后,联合组钙结节增多、钙化面积扩大最明显,柚皮苷组可见钙结节;对照组未见钙化。结论柚皮苷可促进兔BMSCs向成骨细胞分化。     

人参皂苷Rg1对培养大鼠骨髓间充质干细胞增殖影响的机制研究

目的研究人参皂苷Rg1对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖影响的可能机制。方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为药物干预组、对照组,药物干预组以1×10-6mol.L-1人参皂苷Rg1孵育48h,对照组未加药物常规培养;分别用骨髓CFU-F体外培养法、胸腺嘧啶核苷参入法及MTT法测定大鼠BMSC的增殖情况,同时测定BMSC的GATA转录因子1～3的表达及其与DNA结合活性。结果人参皂苷Rg1刺激后BMSC的GATA1和GATA2 mRNA表达与对照组相比分别上调1.42±0.31(P<0.01)和2.70±0.73(P<0.01)倍,并且人参皂苷Rg1刺激后BMSC的GATA与DNA结合活性明显增高。结论人参皂苷Rg1可促进大鼠BMSC增殖,其机制可能是通过上调GATA1和GATA2的表达以及其与DNA的结合活性来实现。     

大豆异黄酮对成骨细胞增殖活性的测定和BGP mRNA的表达

目的研究不同浓度的大豆异黄酮对体外培养大鼠成骨细胞增殖活性和骨钙素(BGP)基因表达的影响。方法采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞,加入不同浓度的大豆异黄酮(20、40、60、80μg/μL),另设空白对照组。MTT法测成骨细胞增殖活性。提取细胞总RNA,RT-PCR半定量分析细胞BGP mRNA表达。结果 MTT结果显示,60和80μg/μL组成骨细胞增殖活性与对照组相比显示增高,有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示:60和80μg/μL组BGP mRNA表达增强,有统计学意义(P<0.01)。结论大豆异黄酮可以促进成骨细胞的增殖活性和BGP基因上调,并呈明显的剂量依赖关系。     

瑞舒伐他汀对猪骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及分泌功能的影响

目的观察不同浓度的瑞舒伐他汀在体外水平对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡及细胞分泌功能的影响。方法分离培养猪BMSCs,取第3代细胞随机分为对照组和不同浓度瑞舒伐他汀(0.001、0.01、0.1、1.0μmol/L)干预组。MTT比色法检测各组细胞增殖情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)流式细胞术检测各组抗凋亡情况,ELISA法测定细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)含量。结果与对照组相比,瑞舒伐他汀在一定浓度范围内(0.001～0.1μmol/L)可促进BMSCs增殖,抑制其凋亡,在0.01～1.0μmol/L内增加BMSCs VEGF和bFGF的分泌(P<0.05);当瑞舒伐他汀浓度升高至1.0μmol/L时则未见促增殖和抑制凋亡的作用(P>0.05)。结论瑞舒伐他汀在一定浓度范围内可促进猪BMSCs增殖,抑制其凋亡,并对VEGF和bFGF的分泌有促进作用。     

骨髓间充质干细胞旁分泌HGF体外调控肝星状细胞

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）与肝星状细胞（HSCs）体外共培养体系中,BMSCs旁分泌肝细 胞生长因子（HGF）对 HSCs 增殖、凋亡、活化的影响。方法 全骨髓贴壁法分离、培养、纯化大鼠 BMSCs,另培养 HSCs。6 孔板半透膜建立上下两层细胞非直接接触共培养体系,实验设 H 组（HSCs 单独培养）、H-H 组（HSCs 与 HSCs共培养）、M-H组（BMSCs与HSCs共培养）、M-H-C组（BMSCs与HSCs共培养并加c-met抑制剂）,各组细胞培 养48 h后,流式细胞仪鉴定BMSCs,检测HSCs凋亡率,MTT法检测HSCs的增殖,免疫荧光共聚焦定量检测HSCs中 α-肌动蛋白（α-SMA）的表达量,ELISA法检测共培养体系上清液中HGF的浓度。结果 MSCs高表达阳性表面分子 CD29、CD90,低表达造血细胞表面标记CD45;BMSCs能明显抑制HSCs的增殖、活化并促进其凋亡,且M-H组上清液 中HGF的浓度明显高于其他组。结论 BMSCs与HSCs共培养过程中,BMSCs通过旁分泌HGF促进HSCs的凋亡,抑 制HSCs的增殖、活化。     

创伤性脑组织匀浆条件下川芎嗪对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的最佳诱导剂量研究

目的观察创伤性脑组织匀浆条件下,川芎嗪诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞的分化,并寻找川芎嗪的最佳诱导浓度。方法①Wistar幼鼠麻醉后,取其股骨、胫骨和肱骨,从骨髓中分离BMSCs,接种于培养瓶培养并传代,于倒置显微镜下观察细胞形态。②采用Feeney自由落体撞击法制作中度脑损伤大鼠模型,取伤后24h大鼠创伤脑组织制作匀浆,用含1.00,1.15,1.30,1.45g/L 4种剂量盐酸川芎嗪的达氏修正伊氏培养基(DMEM)对体外培养的第4代BMSCs诱导12h。③倒置显微镜下观察细胞诱导后形态学变化,应用免疫细胞化学染色技术检测细胞内神经元特异性烯醇化酶(NSE)和细胞巢蛋白(Nestin)的表达,并比较4种剂量川芎嗪诱导后各组神经元样细胞抗原的表达率。结果原代细胞接种3d后多数细胞贴壁,传代后细胞贴壁速度和增殖更快,诱导后细胞出现类似神经元细胞样形态;免疫细胞化学方法检测显示多数细胞巢蛋白、NSE阳性表达,1.30g/L浓度组细胞的NSE阳性表达率最高,表达量为(66.4±4.7)%,细胞巢蛋白表达量为(62.23±4.47)%。结论川芎嗪可诱导BMSCs分化为神经元样细胞,在创伤性脑组织匀浆条件下1.30g/L为其最适诱导剂量。     

白藜芦醇激活Akt/eNOS信号缓解LPS诱导血管内皮细胞功能损伤的作用探讨

探究白藜芦醇调控Akt/eNOS信号影响脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞(VE)增殖、迁移和侵袭功能损伤。在VE细胞中添加不同浓度LPS(0,10,50,100,200,400,800和1 000μg/mL)和白藜芦醇(0,1,5,10,50,100,200和500μg/mL),确定LPS和白藜芦醇有效作用浓度,将VE细胞分为：Control组、LPS组(200μg/mL)和LPS+resveratrol组(200μg/mL LPS+50μg/mL白藜芦醇)。通过MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估白藜芦醇对LPS诱导的VE细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测VE细胞中p-Akt和p-eNOS表达。VE细胞活力随LPS和白藜芦醇处理浓度的增加而降低,在VE细胞中利用200μg/mL的LPS建立血管内皮细胞损伤模型,同时用50μg/mL的白藜芦醇处理。LPS组VE细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)均低于Control组。LPS+resveratrol组VE细胞的增殖(P<0.01)、迁...     

丹红注射液对感染性休克大鼠肺损伤的保护作用机制

目的观察丹红注射液(DHI)对感染性休克(SS)大鼠肺损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法2018年4月至2019年8月,48只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组、DHI干预组和阳性对照组,12只/组。采用腹腔注射脂多糖构建内毒素性休克致肺损伤模型;造模成功后,DHI干预组经腹腔注射2 mL/kg DHI,阳性对照组经腹腔注射1 mL/kg地塞米松,模型组和对照组大鼠均予以等体积生理盐水。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理改变;测量肺组织湿干质量比(W/D);采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6含量水平;采用免疫组织化学法检测肺组织核因子-κB(NF-κB)及κB抑制因子α(IκB-α)蛋白表达。结果模型组大鼠肺组织W/D较对照组增加［(5.56±0.51)比(4.02±0.37)］,DHI干预组肺组织W/D较模型组降低［(4.72±0.44)比(5.56±0.51)］(P<0.05),DHI干预组与阳性对照组W/D［(4.72±0.44)比(4.45±0.46)］比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组TNF-α［(0.66±0.08)μg/g比(0.23±0.06)μg/g］,IL-6［(128.04±10.35)ng/g比(38.17±6.82)ng/g］含量较对照组升高(P<0.05),DHI干预组TNF-α［(0.41±0.06)μg/g比(0.66±0.08)ng/g］,IL-6［(66.38±6.20)ng/g比(128.04±10.35)ng/g］含量较模型组下调(P<0.05),阳性对照组肺组织TNF-α［(0.38±0.07)μg/g比(0.41±0.06)μg/g］,IL-6［(60.54±5.27)ng/g比(66.38±6.20)ng/g］含量与DHI干预组比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,模型组NF-κB(p65)及IκB-α呈强阳性免疫反应,与模型组比较,DHI干预组NF-κB(p65)及IκB-α阳性反应减弱,阳性细胞百分比下降(P<0.05),DHI干预组与阳性对照组NF-κB(p65)及IκB-α阳性细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。结论DHI可能通过抑制NF-κB活化,减少TNF-α、IL-6等促炎细胞因子表达,在SS大鼠肺损伤中发挥保护作用。     

二苯乙烯苷对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的：探究二苯乙烯苷（TSG）对体外骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖和分化的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：利用全骨髓培养法从1月龄SD大鼠中提取BMSCs进行体外培养,然后给予药物干预。采用MTT法检测药物对BMSCs体外增殖的影响;PNPP法检测碱性磷酸酶（ALP）活性;ELISA法检测细胞培养上清液中骨钙素（OCN）含量;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）观察Col1a1、Runx2和β-catenin的mRNA表达情况。结果：TSG在1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1浓度下对BMSCs的增殖有明显的促进作用;经1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1 TSG处理3 d后,BMSCs中ALP的表达增加;经1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1 TSG处理7 d后,OCN表达也明显升高;此外,与对照组相比,经Wnt3a和TSG处理后,BMSCs中Col1a1、Runx2和β-catenin的mRNA表达上调。结论：TSG能在一定程度上促进BMSCs的增殖和成骨分化能力,其机制可能与提高Col1a1、Runx2和β-catenin相关成骨分化基因的表达有关。     

脑脊液对骨髓基质细胞作用的动态观察

目的 动态观察脑脊液对骨髓基质细胞向神经元方向分化的作用。方法 采用Percoll液分离大鼠骨髓基质细胞,体外扩增。当第2或第3代细胞生长达60％～70％融合时,加入不同病人脑脊液,分别于不同时间观察其形态学改变,取诱导后的细胞作免疫细胞化学鉴定。结果 在颅咽管病人脑脊液中骨髓基质细胞的分化速度较快,且发生政变的程度较大;而在脑外伤积水的病人脑脊液中骨髓基质细胞的分化速度相对较慢,且发生改变的细胞数较前者少。免疫细胞化学染色NSE呈弱阳性,NF呈弱阳性。结论 脑脊液可诱导骨髓基质细胞向神经元方向分化。     

The effect of titanium particles on rat bone marrow stem cells in vitro

In arthroplasty prostheses and dental implant, titanium is an excellent biocompatible material for its advanced physical qualities and better biocompatibility. However, it was reported that high ratios of titanium particles can be liberated due to the continual loading or articulation cycles of the implant. Because bone marrow stem cells (BMSCs) located adjacent to the implant are critical contributors to osseous tissue integrity, this study researched the influence of titanium particles on BMSCs’ viability, proliferation, and cell skeleton. In addition, the phagocytosis of titanium particles by BMSCs and expression of tumor suppressor protein p53 were also examined. It was found that exposure of BMSCs to titanium particles disrupted their viability and proliferation in vitro, which may due to the phagocytosis of titanium particles by BMSCs. Moreover, cell skeleton was destroyed and the p53 protein level increased as the titanium particles were added. For these results, it was concluded that titanium particles had a cytotoxic effect on BMSCs in vitro and would inhibit the bone formation around the implant.     

Genistein down‐regulates the constitutive activation of nuclear factor‐κB of bone marrow stromal cells in multiple myeloma,leading to suppression of gene expression and proliferation

Bone marrow stromal cells (BMSCs) play a central role in human multiple myeloma(MM) cell survival and proliferation. We explored the possibility of using BMSCs as a target for MM treatment using genistein, a chemopreventive agent with little or no toxicity in humans. NF‐κB was constitutively active in BMSCs and genistein down‐regulated NF‐κB in BMSCs as measured by an electrophoretic mobility gel shift assay. BMSCs also showed constitutively active Akt phosphorylation that was suppressed by genistein. Genistein also down‐regulated the expression of NF‐κB‐regulated gene products, including bcl‐2, bcl‐xl, Cyclin D1, IL‐6, and ICAM‐1, which was associated with the suppression of BMSC proliferation. MM cells can survive if co‐cultured with BMSCs, suggesting that the bone marrow microenvironment is important. However, genistein‐treated BMSCs provide little support to MM cells. Overall, our results indicate that genistein down‐regulates NF‐κB and phospho‐Akt of BMSCs in human myeloma, leading to the suppression of gene expression of bcl‐2, bcl‐xl, Cyclin D1, IL‐6, and ICAM‐1 suppression proliferation, thus providing a potential new target for the treatment of MM. Drug Dev Res 69:219–225, 2008. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的研究

目的研究体外大鼠骨髓间充质干细胞的生长特性。方法在无菌条件下,取大鼠骨髓,采用密度离心法和全骨髓贴壁法联合培养并结合传代获取、纯化细胞,倒置显微镜观察其形态,流式细胞术检测其表面抗原CD29、CD90及CD34的表达。CCK-8法测定第1、3代细胞的增殖情况,并绘制其生长曲线。结果经全骨髓贴壁法和密度梯度离心联合培养,所得到的原代细胞形态呈椭圆形、圆形、三角形,接近融合状态时可呈现均一的长梭形,排列规则。传至第8代时,细胞的增殖能力减弱,其形态宽大畸形,呈树枝状。经流式细胞仪检测,所分离的细胞CD29的表达率为94.97%,CD90的表达率为88.50%,CD34的表达率为2.23%。CCK-8法显示第3代细胞有较强的增殖能力。结论体外培养的大鼠BMSCs是骨组织工程的优良种子细胞。     

慢病毒载体介导的bFGF基因转染兔BMSCs的实验研究

摘要： 目的 观察在体外培养条件下, 慢病毒载体介导的碱性成纤维细胞生长因子 （bFGF） 基因转染对兔骨髓基质干细胞 （BMSCs） 生物学特性的影响。方法 采用密度梯度离心法及贴壁筛选法获取 BMSCs; 利用慢病毒载体将 bFGF 基因转染到 BMSCs 中, 根据转染条件分为 bFGF 转染组、 空病毒组、 未转染组, 转染后分别对 3 组细胞的形态 bFGF mRNA 及蛋白表达、 细胞增殖情况、 细胞周期及碱性磷酸酶 （ALP） 活性进行观察。结果 采用密度梯度离心法和贴壁筛选法, 成功获得高纯度的 BMSCs。载有 bFGF 基因的慢病毒转染 BMSCs 后, 细胞形态无明显变化, 而 bFGF mRNA 与蛋白表达均明显增强、 细胞增殖曲线上移、 增殖期细胞比例增大、 ALP 活性明显增高, 与空病毒组及未转染组比较, 差异均有统计学意义 （P＜0.05)。结论 利用慢病毒载体将兔 bFGF 基因导入体外培养的 BMSCs, 目的基因获得稳定表达, 并且自身过表达的bFGF 可以促进BMSCs 的增殖与成骨分化。     

骨髓来源成骨细胞体外成骨表达的研究

目的探索在体外诱导兔骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化及成骨表达的特性。方法抽取兔骨髓,通过离心法获取单个核细胞,在体外经条件培养基培养21d,通过倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察成骨细胞的形态学特点;应用MTT法测定成骨细胞活性;并检测成骨细胞分泌碱性磷酸酶活性及形成矿化结节情况。结果体外BMSCs可在成骨条件培养液下诱导培养后可向成骨细胞分化,经倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察证实,诱导后BMSCs由长梭形转变为短胖形的成骨细胞,MTT检测成骨细胞活性良好,分泌碱性磷酸酶并形成矿化结节。结论骨髓基质干细胞在体外可定向诱导为成骨细胞,并具有成骨细胞功能,有希望成为理想的种子细胞应用于临床。     

HSV-1体外感染骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:在体外原代培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染骨髓间充质干细胞情况。方法:分离骨髓间充质干细胞,并对其作鉴定。用HSV-1感染骨髓间充质干细胞,提取总DNA,PCR法扩增骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段。结果:骨髓间充质干细胞经14d诱导后,碱性磷酸酶含量增高,形成钙结节,表现出成骨细胞特性。HSV-1感染骨髓间充质干细胞,细胞出现典型的病变,PCR法成功扩增出骨髓间充质干细胞内的HSV-1特异性片段。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在体外可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。HSV-1可以在体外感染骨髓间充质干细胞。