miR-182在体内外肝癌细胞中的表达及对肝癌的诊断价值

目的 探讨mi R-182在体内和体外细胞中的表达及对肝癌的诊断价值。方法 荧光定量PCR检测正常肝细胞系L-O2与肝癌细胞系Hep G2、Hep G3B、Huh7的mi R-182表达,以及肝癌组和对照组各40例mi R-182的表达。并且用ROC曲线分析血浆mi R-182对肝癌的诊断效能。结果 (1)Hep G2、Hep G3B及Huh7三种肝癌细胞系的mi R-182表达水平均显著高于正常肝细胞系L-O2(均P<0.05);(2)肝癌组血浆mi R-182相对表达量远高于对照组(P<0.05);(3)肝癌组mi R-182的异常表达与性别、年龄、肿瘤大小无显著相关性(均P>0.05),而与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(均P<0.05);(4)ROC曲线分析提示mi R-182诊断肝癌的曲线下面积(AUC)为0.852(95%CI:0.762~0.942),敏感度为87.5%,特异度为80.0%,约登指数为0.675,阳性预测值为△Ct1=5.25,当低于这个值时,提示mi R-182表达升高,罹患肝癌的可能性增大。结论 血浆mi R-182的高表达可能成为肝癌诊断的新方法 。     

miR-339-3P靶向IP6K2基因调控前列腺癌EMT发生的功能研究

目的 探讨mi R-339-3P靶向六磷酸肌醇激酶2(IP6K2)对前列腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间充质转化(Epithelial Mesenchymal Transition EMT)的作用及其机制。方法 应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测前列腺癌组织和癌旁组织中mi R-339-3P和IP6K2的表达水平。利用细胞转染技术向人前列腺癌细胞PC-3分别转染mi R-339-3P-mimics、mi R-339-3P inhibitors、si-IP6K2(抑制表达)和PcDNA-3.1(+)-IP6K2(过表达),CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况,细胞划痕检测细胞迁移能力,Western blot检测靶基因IP6K2和EMT相关因子的蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-339-3P和IP6K2的靶向结合关系。结果qRT-PCR的结果显示,前列腺癌组织中mi R-339-3P表达水平低于癌旁组织,IP6K2表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。mi R-339-3P-mimics抑制IP6K2表...     

miR-590-5P通过下调靶基因S100A 10表达、抑制Wnt信号通道调控肝癌细胞增殖

目的:研究miR-590-5P对肝癌细胞增殖能力的影响以及参与HCC发生发展的机制。方法:利用QPCR对肝癌细胞株mi R-590-5P的表达谱系进行分析和验证,生物信息技术预测S100A10可作为miR-590-5P的潜在靶基因,并通过实时定量PCR以及Western blot进行验证。通过慢病毒载体在肝癌细胞株HepG2中过表达miR-590-5P,CCK-8法检测转染后细胞增殖,流式细胞技术检测转染后细胞周期变化,Western blot检测转染后细胞Wnt信号相关蛋白表达水平。结果:荧光定量检测结果显示,miR-590-5P在人肝癌细胞中低表达,而S100A10蛋白在肝癌细胞中高表达。S100A10 3’UTR luciferase报告系统验证表明,mi R-590-5P可以通过结合S100A10 3’UTR而抑制报告基因的表达。通过慢病毒系统在HepG2细胞中高表达miR-590-5P,可有效抑制S100A10基因的表达。在肝癌细胞HepG2中过表达mi R-590-5P,可通过调控细胞周期,明显抑制Wnt信号相关蛋白:Wnt5a、cMyc、Cyclin D1的表达水平,促进E-cadherin、Caspase3的表达,加速β-catenin蛋白的磷酸化,而调控细胞增殖。结论:mi R-590-5P在人肝癌细胞中低表达,而S100A10基因在人肝癌细胞中过表达,S100A10为mi R-590-5P的靶基因。mi R-590-5P在肝癌细胞中过表达,可有效抑制S100A10基因的表达,抑制Wnt通路的激活,使肿瘤细胞停滞在G1期,从而参与肝癌细胞增殖进程。     

miR26a靶向EZH2抑制肝癌HepG2细胞的增殖活性

目的 探讨mi R26a靶向EZH2抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性的影响并探讨其可能的分子机制。方法 设计合成mi R26a mimic,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和mi R26a mimic组,采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R26a的表达水平,MTT检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因系统检测mi R26a与EZH2的靶向关系,Western blot检测各组细胞中EZH2蛋白的表达。结果 MTT分析及流式细胞术的检测证实过表达mi R26a能够抑制肝癌细胞的增殖效应,促进肝癌细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因系统以及Western blot的结果均证实mi R26a能够显著下调EZH2在蛋白水平的表达。结论 mi R26a能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系。     

亚砷酸钠抑制肝癌细胞增殖与PML蛋白表达

目的：研究亚砷酸钠抑制肝癌（HCC）细胞增殖是否与早幼粒细胞白血病（PML）蛋白表达有关。方法免疫组织化学法、免疫荧光、蛋白免疫印迹法（Western blot）和荧光定量PCR检测HCC组织PML蛋白及基因表达。结果免疫组织化学分析显示随机选择15例高分化、中度分化和低分化HCC组织和细胞均不同程度表达PML蛋白。Western blot 分析发现24例HCC组织、HuH7、HepG2、Hep3B、SMMC‐7721和 L02细胞均表达 PML 蛋白。免疫荧光提示 HuH7、HepG2、Hep3B、SMMC‐7721细胞核均有PML蛋白颗粒,其中 HuH7和 Hep3B细胞表达PML蛋白较 HepG2、SMMC‐7721细胞多。24例 HCC组织, Hep3B、HepG2、SMCC‐7721和HuH7细胞都表达PML基因。亚砷酸钠不仅可下调HuH7和原代 HCC细胞表达PML蛋白,而且亚砷酸钠抑制HuH7,HepG2,Hep3B和SMMC‐7721细胞生长,随着暴露时间延长亚砷酸钠对HCC细胞抑制作用增强。结论HCC 组织和细胞系普遍表达PML 基因和蛋白,PML 蛋白可能是砷剂直接靶向作用的分子基础。     

双酚A对前列腺癌PC-3细胞增殖和miR-19表达的影响

目的 :探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对人前列腺癌PC-3细胞增殖和mi R-19表达的影响。方法 :不同浓度BPA处理人前列腺癌PC-3细胞,以雌二醇(E2)作为阳性对照,6 d后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和Hoechst 33258荧光染色法测定BPA对PC-3细胞增殖的影响,real-time PCR检测mi R-19a和mi R-9b表达水平的变化,Western blot检测细胞中mi R-19的靶基因PTEN及细胞增殖相关基因p-AKT、AKT、PCNA和Cyclin D1的蛋白表达变化。结果:5×10-6~5×10-5 mol/L BPA显著促进PC-3细胞增殖,增加PC-3细胞中mi R 19a和mi R 19b的表达水平,降低PTEN表达并上调p-AKT、PCNA和Cyclin D1表达水平。结论:BPA可促进前列腺癌PC-3细胞增殖,其机制可能与BPA引起mi R-19表达上调有关。     

miR-122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究

目的探讨mi R-122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究。方法选取人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721,构建mi R-122 mimics稳定表达载体并对其进行转染,Real-Time PCR检测各组细胞株内micro RNA-122含量;CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测肝癌细胞迁移侵袭能力;生物信息学预测、荧光报告载体实验Real-Time PCR检测层粘连蛋白γ1(Recombinant laminin gamma 1,LAMC1)m RNA水平变化。结果与对照组人正常肝细胞株LO2相比,mi R-122过表达后,肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,LAMC1 m RNA含量显著降低,肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论上调mi R-122表达可通过调控LAMC1表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

基于生物信息学分析mi R-125b-5p在肺腺癌中的表达及预后价值

目的 应用生物信息学方法分析mi R-125b-5p在肺腺癌（LUAD）中的表达,预测其靶基因及预后价值。方法选取GEO数据库中LUAD顺铂耐药组织和细胞芯片,应用R软件筛选差异表达miRNA。应用miRBase数据库进行保守性分析,并采用db DEMC3.0数据库进行表达水平分析。利用Target Scan、mi RDB、mi RTar Base数据库预测靶基因,并运用DAVID在线网站对靶基因进行功能富集分析。联合TCGA数据库LUAD患者生存信息,进行预后分析。实时荧光定量PCR技术检测mi R-125b-5p在人正常支气管上皮细胞系16HBE、LUAD细胞系A549以及顺铂耐药细胞系A549/DDP中的表达水平。结果 分析芯片数据获得LUAD顺铂耐药相关miR-125b-5p,其具有高度保守性,并在LUAD中显著下调。预测到的54个靶基因主要富集在调节基因表达、细胞大分子生物合成等过程,以及Micro RNAs in cancer、Protein processing in endoplasmic reticulum、HIF-1 signaling pathway等通路。Kap...     

HBx与microRNA-21在肝细胞肝癌中的相互作用及其机制研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因编码的X蛋白(HBx)与micro RNA21(mi R-21)在肝细胞癌Hep G2细胞中的作用。方法:选取人肝癌细胞株Hep G2细胞,随机分为Hep G2细胞组、GFP腺病毒组和HBx腺病毒组,其中GFP腺病毒组和HBx腺病毒组细胞分别感染GFP腺病毒和HBx腺病毒,采用流式细胞仪检测各组细胞周期,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测ER蛋白表达,RT-PCR检测HBx m RNA和mi R-21表达。结果:HBx腺病毒组HBx m RNA相对表达量为(0.805±0.030),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组细胞G1期比例为(34.24±2.10)%,明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05),而S期细胞比例为(56.80±2.09)%,明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组mi R-21表达为(1.892±0.038),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05),而ERα蛋白表达为(0.21±0.03),明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组穿膜细胞数为(78.12±8.78),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05)。结论:HBx可促进肝癌细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与上调mi R-21表达和下调ER表达有关。     

金属硫蛋白表达及其对肝癌细胞系的作用

目的：研究金属硫蛋白表达及其对肝癌细胞系作用。方法：利用RT-PCR，研究Mt1在肝癌组织及癌旁组织，11种细胞中表达；利用基因转染方法，研究Mt1对肝癌细胞系HePG2作用。结果：Mt1在肝癌组织中表达弱于癌旁组织，在BEL、L-02、Huh-7、HepG2中表达增强，A375、CNE、Hep3B、QGY、YY、SK-hep-1中表达弱。Mt1对肝癌生长有促进作用，表现为bcl-2蛋白表达水平升高，bax蛋白表达下降，S期所占的比例明显升高。结论：金属硫蛋白在一些细胞系中高表达，一些细胞系中低表达，在肝癌组织中为下调表达，说明Mt1基因有表达特异性，并且Mt1对肝癌细胞HePG1有促进作用。