Sj 26基因转染树突状细胞抗血吸虫感染作用

目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染树突状细胞（DC）抗血吸虫感染保护性免疫作用。方法利用Sj26基因转染、空质粒pcDNA3转染和未处理DC分别免疫BALB／c小鼠3次，攻击感染后计数成虫和虫卵。结果Sj26基因转染DC免疫小鼠诱导34．5％的减虫率和48．5％的减卵率，明显高于空质粒pcDNA3转染DC组（16．8％和15.8％）和未处理DC组（14．6％和14．4％），空质粒pcDNA3转染DC和未处理DC组之间差异无统计学意义。结论Sj26基因转染DC可诱导抗血吸虫感染的保护性免疫作用。     

重组人Bcl-2腺病毒载体的构建与鉴定

目的　构建人bcl-2重组腺病毒载体。方法　通过酶切分析获得正向插入目的基因的真核表达载体pcDNA/bcl -2 ,然后将bcl -2定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdCMV中 ,通过体内同源重组 ,重组质粒与质粒pJM17共转染 2 93细胞 ,获得复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/bcl -2 ,进行扩增、纯化。通过PCR检测病毒DNA ,空斑实验检测病毒滴度。结果　腺病毒穿梭质粒与pJM17体内同源重组后获得含目的基因的重组腺病毒 ,病毒滴度为 2 0× 10 1 0 pfu/ml。结论　基因重组腺病毒载体能成功获得高滴度含目的基因的腺病毒     

小鼠GATA3基因重组腺病毒载体的构建和病毒制备

目的:在已克隆的小鼠GATA3基因基础上构建腺病毒载体,制备GATA3-adv。方法:Ad-Easy法通过同源臂重组的方式在细菌中获得重组腺病毒基因组质粒。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的质粒共转化BJ5183细菌,在细菌重组酶的作用下经抗性筛选获得重组腺病毒基因组质粒,将其线性化后转染HEK293中获得有活性的包装腺病毒。腺病毒荧光检测试剂盒定量腺病毒浓度。结果:成功制备了小鼠Adv-GATA3,其浓度为3.34×109copies/ml。结论:小鼠GATA3基因重组腺病毒载体的成功构建为进一步在基因水平进行免疫紊乱性疾病的干预研究奠定了基础。     

HBsAg腺病毒疫苗载体的构建及其免疫学研究

目的 构建含HBsAg基因的重组复制缺陷型腺病毒疫苗载体,观察小鼠抗HBsAg免疫反应. 方法以pEcob-6为模板,PCR扩增目的 基因HBsAg,腺病毒穿梭载体PAd-track-cmv与HBsAg经T4连接酶连接,重组为PAd-track-cmv-HBs穿梭质粒;腺病毒骨架载体质粒PAd-Easy-1再与PAd-track-cmv-HBs在大肠杆菌BJ-5183中同源重组PAd-Easy-1-HBs质粒,PAd-Easy-1-HBs脂质体介导转染293细胞,包装HBsAg重组腺病毒.30只小鼠随机分成3组,分别肌肉注射PAd-Easy-1(载体组)、HBsAg重组腺病毒(实验组)、PBS(正常对照组),免疫2次.2月后取小鼠血清检测抗HBsAg抗体反应. 结果 PAd-track-cmv-HBs穿梭质粒经上海基康生物技术公司进行DNA测序,结果与预期结果相同,含有完整的HBsAg目的 基因.PAd-Easy-1-HBs用Pac-1酶切,Pac-1能将载体切成两个片段,大片段约为30 kb,小片段约为3 kh.HBsAg重组腺病毒组抗HBsAg的OD值明显升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与PAd-Easy-1载体对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 HBsAg腺病毒疫苗载体构建成功,且能够诱导小鼠产生抗HBsAg.     

血吸虫Sj23基因转染对树突状细胞功能影响

目的 探讨日本血吸虫23kDa膜蛋白(Sj23)基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响。方法 利用脂质体介导的基因转染技术将Si23基因转染DC,流式细胞术(FCM)检测Sj23基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应(MLR)检测Sj23基因转染的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用。结果 Sj23基因转染后Sj23蛋白在DC中高表达,与pcDNA3转染的DC和未转染的DC相比,Sj23基因转染的DC摄取抗原的能力降低,能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论 Sj23基因转染DC后能促进DC的活化,增强DC的生物学活性。     

小鼠Calb2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:为了体外研究Calretinin(Calb2)基因在生殖系统、神经系统、视觉传导中的作用,构建小鼠Calb2基因表达重组腺病毒载体.方法:用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)方法,以小鼠Calb2 cDNA为模板,扩增Calb2基因.亚克隆后,将Calb2基因片段克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,...     

沙眼衣原体ompA基因真核表达载体的构建及在HeLa细胞中的表达

目的　构建沙眼衣原体 (Ct)ompA基因真核表达重组质粒 ,利用脂质体体外转染HeLa细胞 ,为核酸疫苗的研制作准备。　方法　应用PCR技术从D型Ct基因组中扩增ompA全长基因 ,重组入 pUCm -T克隆载体。将pUCm -T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应 ,亚克隆入 pcDNA3 .1真核表达载体的相应位点 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用脂质体将重组体 pcDNA3 .1/ompA转染HeLa细胞 ,免疫组化法观察目的基因的表达。　 结果　PCR扩增得到约 1.2kb的特异性ompA基因片段 ;序列测定证实与发布序列一致 ;构建得到真核表达重组体 ;重组质粒pcDNA3 .1/ompA在HeLa表达MOMP。　结论　CtompA基因能够在体外真核细胞中表达 ,为进一步研究CtDNA疫苗以及研究该蛋白的生物学功能提供实验基础。     

TCRVβ7.1重组腺病毒载体的构建

将TCRVβ7.1基因克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中,再穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒。然后用PCR,RT-PCR对其进行鉴定。     

HBsAg脉冲的树突状细胞对CIK细胞功能的影响

目的探讨HBsAg脉冲的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(C IK)增殖和杀伤作用的影响。方法选择慢性乙肝患者27例,分离外周血单个核细胞(PBMC),经HBsAg脉冲后,用3H-TdR掺入法检测该细胞对C IK细胞增殖的刺激作用,用乳酸脱氢酶释放法检测特异性C IK细胞对HepG2.2.15细胞的特异性杀伤作用。结果HBsAg脉冲的DC对C IK细胞的增殖具有刺激作用。由HBsAg脉冲的DC所诱导的特异性C IK细胞对HepG2.2.15细胞的特异性杀伤作用增强。结论HBsAg脉冲的DC可增强C IK细胞的杀伤活性。     

肿瘤相关基因hyrdC基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带hyrdC基因的高滴度重组腺病毒，为进一步研究hyrdC基因的功能及机制做准备。方法以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法扩增hyrdC基因，构建腺病毒重组质粒pShutth—CMV—hyrdC，线性化后采用电穿孔法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化BJ5183感受态大肠杆菌，挑选重组质粒将其转染293细胞，获得高滴度重组腺病毒Ad—hyrdC。结果成功地制备了高滴度携带hyrdC基因的重组腺病毒。结论采用AdEasy腺病毒载体系统能够构建携带hyrdC基因的重组腺病毒，为进一步研究hyrdC基因的功能及机制奠定了基础。     

HBsAg及抗-HBs同时阳性患者血清中HBV-S基因分析

目的分析HBsAg以及抗-HBs同时阳性血清中HBV-S基因的变异情况。方法对广州市部分中学生体检中发现的HBsAg以及抗-HBs均为阳性的血清提取乙肝病毒DNA,针对S基因进行巢式PCR扩增,将产物进行序列分析并比较结果。结果测序结果与Genbank中的序列比较,均发现S基因某些位点发生变异。结论HBsAg以及抗-HBs同时阳性的产生可能与HBV-S基因的变异有关。     

乙型肝炎表面抗原阳性者的血清标志物检测结果分析

目的了解河北省固安县人群中乙型肝炎表面抗原阳性者的血清标志物类型。方法对乙型肝炎表面抗原阳性人员进行了乙型肝炎5项(1.HBsAg,2.抗-HBs,3.HBeAg,4.抗-HBe,5.抗-HBc)检查。结果 1 215名HBsAg阳性人员中,乙型肝炎5项标志物模式1、3、5阳性占总数的35.56%,1、4、5阳性占总数的38.27%。1985年及以后出生1、3、5阳性占49.43%,1、4、5阳性占27.0%;1984年及以前出生1、3、5阳性占27.26%,1、4、5阳性占44.6%,2个年龄度的乙型肝炎标志物模式差异有统计学意义,χ2=61.35,P<0.01。结论乙型肝炎病毒感染者的血清标志物模式以1、3、5阳性(大三阳)及1、4、5阳性(小三阳)为主,小年龄段以1、3、5为主,大年龄段以1、4、5为主。     

SureStrip HBsAg试剂条法检测乙肝表面抗原

[目的] 评价SureStrip HBsAg试剂条法对乙肝表面抗原的检测效果。[方法] 用SureStrip HBsAg试剂条法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清标本。[结果] SureStrip HBsAg试剂条法 HBsAg阳性率为5.24％(98/1869);ELISA法为5.19％(97/1869),两法比较差异无显著性(P>0.05)。溶血、脂血对检测结果无影响。[结论]SureStrip HBsAg试剂条法检测HBsAg具有快速、敏感、特异、简便、无污染等特点,值得推广应用。     

乙肝病毒preS1基因与截短C基因真核表达载体构建及表达

目的建立乙型肝炎病毒（HCV）preS1基因与截短C基因真核表达载体，并在CHO细胞中瞬时表达。方法PCR方法扩增HBV核心区羧基端部分缺失的基因片段和preS1全基因，克隆入真核表达载体pcDNA3．1（-）后测序鉴定，并通过脂质体瞬时转染CHO细胞。结果构建了真核表达载体pcDNA3．1（-）-Ct-preS1，成功转染CHO细胞，间接免疫荧光和RT—PCR证实pcDNA3．1（-）-Ct-preS1在CHO中表达截短的核心基因和preS1基因融合蛋白。结论成功构建preS1基因与截短C基因真核表达载体，可在CHO细胞中瞬时表达，为深入研究HBV基因免疫奠定了基础。     

ELISA与ECLIA对HBsAg弱反应性标本检测的比较

目的比较酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光（ECLIA）检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反应性标本的结果。方法将由酶联免疫法（ELISA）检测的HBsAg结果（S/CO）在0.7～5.0之间的824份弱反应性血清标本进行电化学发光（ECLIA）测定。结果①352例S/CO在0.7～0.99区间,即ELISA定性为阴性,ECLIA检测结果有48例COI≥1.0（阳性）,差异有统计学意义（P〈0.05）;②432例S/CO在1.0～LPC（弱阳性质控）,即ELISA定性为阳性,ECLIA检测结果有248例COI（cutoff指数）〈1.0（阴性）,差异有显著统计学意义（P〈0.01）;③40例S/CO在LPC～5.0,即ELISA定性为阳性,ECLIA检测结果COI≥1.0（阳性）。结论 S/CO在0.7～0.99的标本,ECLIA灵敏度优于ELISA;S/CO在1.0～LPC的标本,ELISA的影响因素较多,容易造成假阳性结果,应分析原因并进一步复查;S/CO在LPC～5.0的标本,ELISA和ECLIA方法均能准确地判断。     

某学院大学生乙型肝炎表面抗原的携带状况

目的了解大学生乙型肝炎病毒(HBV)携带状况及其影响因素。方法对某学院4 863名在校大学生用ELISA法测定其HBV血清标志物,同时对一些相关因素进行分析。结果男生HBsAg携带率高于女生(P<0.01),农村学生HBsAg携带率明显高于城市学生(P<0.01)。结论应加强对农村地区学生的HBV血清标志物检测和乙型肝炎疫苗的接种力度。     

西安市临潼区食品及公共场所从业人员HBsAg携带状况

目的掌握西安市临潼区食品及公共场所从业人员HBsAg阳性的携带状况,以加强该行业乙型肝炎高危人群的干预工作。方法2006年用全血乙肝表面抗原（WB—HBsAg）检测试条对11402名从业人员HBsAg携带情况进行检测。结果HBsAg阳性235人,HBsAg阳性率2．06％。男性HBsAg阳性率2．90％,女性1．55％,男性高于女性。结论HBsAg阳性率低于全国水平（9．75％）,但仍应加强对食品及公共场所从业人员乙肝疫苗的预防接种工作。     

胎盘凋亡及细胞转运与新生儿PBMC HBsAg关系

目的 探讨胎盘凋亡及外周血单个核细胞(PBMC)母-胎转运与HBsAg阳性孕妇新生儿PBMC HBsAg的关系。方法 用等位基因特异性PCR(As-PCR)筛选母儿信息病例对,用原位末端杂交法检测HBsAg阳性孕妇足月胎盘凋亡指数,用免疫荧光双标法检测新生儿PBMC涂片上的HBsAg和谷胱甘肽S转移酶(GST);采用SPSS 16.0软件进行分析。结果 86例新生儿PBMC中20例(23.26%)HBsAg阳性,31例(36.05%)GST阳性,HBsAg、GST共存者13例(15.12%);发生PBMC母-胎转运组的胎盘凋亡指数与未发生转运组的胎盘凋亡指数差异有统计学意义(t'=2.38,P=0.02),且胎盘滋养层细胞凋亡率高与PBMC转运相关(t=2.75,P=0.01);新生儿PBMC HBsAg阳性组的胎盘细胞凋亡指数与阴性组的胎盘细胞凋亡指数差异无统计学意义(t=0.34,P=0.74);PBMC转运与新生儿PBMC HBsAg阳性有关(χ²=9.48,P=0.00),发生PBMC转运的新生儿发生PBMC HBsAg阳性的危险性是未发生PBMC转运新生儿的4.95倍(OR=4.95,95%CI=1.70~14.39)。结论 妊晚期胎盘细胞凋亡增加有利于PBMC母-胎转运,感染HBV的PBMC可能通过胎盘进入胎儿血循环进而导致新生儿HBV感染。     

Global epidemiology of hepatitis B virus infection: new estimates of age-specific HBsAg seroprevalence and endemicity

Objective

Chronic hepatitis B virus infection is one of the most serious infections and a major risk factor for deaths from cirrhosis and liver cancer. We estimate age-, sex- and region-specific prevalence of chronic HBV infection and calculate the absolute number of persons being chronically infected.

Methods

A systematic review of the literature for studies reporting HBV infection was conducted and worldwide HBsAg seroprevalence data was collected over a 27-year period (1980–2007). Based on observed data, age-specific prevalence and endemicity were estimated on a global level and for all world regions for 1990 and 2005 using an empirical Bayesian hierarchical model.

Findings

From 1990 to 2005, the prevalence of chronic HBV infection decreased in most regions. This was particularly evident in Central sub-Saharan Africa, Tropical and Central Latin America, South East Asia and Central Europe. Despite this decrease in prevalence, the absolute number of HBsAg positive persons increased from 223 million in 1990 to 240 million in 2005. Age-specific prevalence varied by geographical region with highest endemicity levels in sub-Saharan Africa and prevalence below 2% in regions such as Tropical and Central Latin America, North America and Western Europe. Asian regions showed distinct prevalence patterns with lower intermediate prevalence in South Asia, but up to 8.6% HBsAg prevalence in East Asia. Strong declines were seen in South East Asian children.

Conclusion

Declines in HBV infection prevalence may be related to expanded immunization. The increasing overall number of individuals being chronically infected with HBV, and the widespread global differences in HBV prevalence call for targeted approaches to tackle HBV-related mortality and morbidity. HBV infection prevalence data are needed at country and sub-national level to estimate disease burden and guide health and vaccine policy.     

Preparation and testing of a Haemophilus influenzae Type b/Hepatitis B surface antigen conjugate vaccine

The majority of conjugate vaccines focus on inducing an antibody response to the polysaccharide antigen and the carrier protein is present primarily to induce a T-cell dependent response. In this study conjugates consisting of poly(ribosylribitolphosphate) (PRP) purified from Haemophilus influenzae Type b bound to Hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) virus like particles were prepared with the aim of inducing an antibody response to not only the PRP but also the HBsAg. A conjugate consisting of PRP bound to HBsAg via an adipic acid dihydrazide (ADH) spacer induced strong IgG antibodies to both the PRP and HBsAg. When conjugation was performed without the ADH spacer the induction of an anti-PRP response was equivalent to that seen by conjugate with the ADH spacer, however, a negligible anti-HBsAg response was induced. For comparison, PRP was conjugated to diphtheria toxoid (DT) and Vi polysaccharide purified from Salmonella Typhi conjugated to HBsAg both using an ADH spacer. The PRP_AH–DT conjugate induced strong anti-PRP and anti-DT responses, the Vi–_AHHBsAg conjugate induced a good anti-HBsAg response but not as strong as that induced by the PRP_AH–HBsAg conjugate. This study demonstrated that in mice it was possible to induce robust antibody responses to both polysaccharide and carrier protein provided the conjugate has certain physico-chemical properties. A PRP_AH–HBsAg conjugate with the capacity to induce anti-PRP and anti-HBsAg responses could be incorporated into a multivalent pediatric vaccine and simplify formulation of such a vaccine.