小檗碱对人高转移肺癌系（PG）细胞增殖的影响及机制研究

目的：通过离体实验初探小檗碱对高转移性人肺癌细胞株（PG）增殖能力的影响，并探讨其作用机制。 方法： 用MTT法测定小檗碱对PG细胞增殖能力的影响。用流式细胞术测定小檗碱对PG细胞细胞周期及凋亡的影响。用激光共聚焦显微镜观察小檗碱诱导PG细胞氧自由基的产生。 结果： 小檗碱能够抑制PG细胞增殖，且随药物浓度增加抑制效应增强，呈浓度依赖性(P<0.05，P<0.01)。小檗碱对PG细胞细胞周期具有阻滞作用，40 mg/L的小檗碱能引起PG细胞的凋亡。小檗碱作用6 h、12 h只有在终浓度大于或等于10 mg/L时开始产生氧自由基，低浓度的小檗碱作用24h后就能诱导氧自由基的产生。 结论： 小檗碱对PG细胞增殖具有抑制作用，后者可能与调节细胞内活性氧自由基产生从而影响细胞周期进程有关。     

小檗碱对人肺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞粘附的影响

目的 :通过离体实验探讨小檗碱对高转移人肺癌细胞株 (PG)与人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)粘附的影响及其作用机制。方法 :用虎红染色法测定PG与HUVEC的粘附率。用细胞ELISA法测定小檗碱作用HUVEC 12h、2 4h后 ,其表面粘附分子CD4 4及CD5 4的表达。小檗碱的终浓度分别为 2 5mg/L、5mg/L、10mg/L ;LPS终浓度为 1mg/L。结果 :(1)小檗碱处理HU VEC :当小檗碱作用于LPS激活的HUVEC(LPS -HUVEC) 6h、12h后 ,中、高浓度均能抑制其与PG的粘附 ,且有显著差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;药物作用 2 4h后 ,小檗碱各浓度均能…     

小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响，以探讨其抑制肿瘤侵袭转移的可能机制。方法：小檗碱（5、10μg／m1）处理PG细胞24小时，采用MTF法观察PC细胞与PG细胞的黏附（同质黏附），PG细胞与细胞外基质（FN和Martrigel）的黏附；用虎红染色法观察PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的黏附。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞E—cadherin、CD44的表达；RT—PCR法检测PG细胞E-cadherinmRNA和CD44mRNA的表达。结果：小檗碱（10μg/ml）可促进PG细胞的同质黏附（P〈0．05）；小檗碱（5、10μg／ml）可抑制PG细胞与FN和Martrigel的黏附（P〈0．01），并可抑制PG细胞与HUVEC的黏附（P〈0．05．P〈0．01）。经小檗碱（10μg／ml）作用的PG细胞，E-cadherinm及其mRNA表达明显增高（P〈0．01），而CD44及其mRNA的表达明显减少（P〈0．05）。结论：小檗碱通过促进PG细胞E—cadherin的表达而促进PG细胞间的同质黏附，抑制PG细胞CD44的表达而抑制其与细胞外基质及血管内皮细胞的黏附，这可能是小檗碱抗肿瘤转移的机制之一。     

小檗碱抑制高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的研究

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的作用并探讨其作用机制。方法：采用琼脂糖滴法观察PG细胞的运动能力，用下室加FN的Transwell小室法观察PG细胞的趋化运动能力，用铺Martrigel的Transwell小室观察PG细胞的侵袭能力。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞MMP2、TIMP2的表达；RT－PCR法检测PG细胞MMP2 mRNA和TIMP2 mRNA的表达。结果：小檗碱（10 mg/L）处理PG细胞 24 h 后：（1）PG细胞的迁移距离明显比对照PG短（P<0.01），趋向FN迁移的穿膜细胞数明显少于对照组（P<0.01）；（2）PG细胞与FN、Martrigel的黏附减少，与对照组比有显著差异（P<0.01）；（3）穿过铺Martrigel的Transwell小室微孔滤膜的PG细胞数明显减少，即可抑制PG细胞的侵袭能力(P<0.05)； （4）MMP2表达明显减少(P<0.05)，而TIMP－2的表达有升高趋势，与对照比无显著差异，但MMP2/TIMP2比值降低；（5） 小檗碱使PG细胞TIMP2 mRNA表达明显增加(P<0.05)，而对MMP2 mRNA表达无影响，MMP2 mRNA/TIMP2 mRNA比值降低。结论：抑制肿瘤细胞的运动能力、与细胞外基质的黏附、对细胞外基质侵袭，调节MMP2/TIMP2表达的平衡，从而维持细胞外基质的完整性，可能是小檗碱抗侵袭和转移作用的机制之一。     

小檗碱抑制高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的研究

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞侵袭和迁移的作用并探讨其作用机制。方法：小檗碱（5mg／L、10mg／L）处理PG细胞24h，采用琼脂糖滴法观察PG细胞的运动能力，用下室加FN的Transwell小室法观察PC．细胞的趋化运动能力，用铺Martrigel的Transwell小室观察PG细胞的侵袭能力。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞MMP-2、TIMP-2的表达；RT-PCR法检测PG细胞MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA的表达。     

小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的：观察小檗碱对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用，以探讨小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制。 方法： 用小檗碱与体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，以MTT法检测细胞的增殖活性，免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，荧光染色法观察凋亡细胞核形态，用Rhodamine123染色，激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位。 结果： 不同浓度小檗碱与HUVEC共同孵育可明显抑制HUVEC的增殖(P<0.05，P<0.01)，呈现一定的浓度依赖性和时效性；20 mg/L小檗碱与HUVEC共同孵育48 h，可显著降低细胞核PCNA的表达（P<0.01），并可见凋亡细胞数增多、线粒体膜电位明显降低（P<0.01）。 结论： 小檗碱抑制血管内皮细胞的增殖，并促进血管内皮细胞凋亡，从而抑制肿瘤血管形成，可能是小檗碱抑制肿瘤生长与转移的机制之一。     

氧化修饰低密度脂蛋白对内皮细胞功能的影响

目的 观察氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）对内皮细胞NO／ET-1、t-PA／PAI-1合成、细胞表面细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs），在分另0加入不同浓度ox-LDL（50、100、150、200mg／L）孵育24h后，观察培养液中NO、ET-1、t-PA、PAI-1水平及细胞表面ICAM-1的表达。结果 ox-LDL可显著抑制NO、t-PA的合成。ox-LDL还可明显增加ET-1、PAI-1的分泌及诱导细胞表面ICAM-1的表达。结论 ox-LDL对内皮细胞具有明显的细胞毒作用，它对NO／ET-1、t-PA／PAI-．1及ICAM-1表达的影响可能是其致动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

青藤碱抑制TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达

目的： 研究青藤碱（SN）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导脐静脉内皮细胞（HUVECs ）VCAM-1表达的影响。方法： 从新鲜脐带中分离培养HUVECs。用TNF-α诱导HUVECs表达VCAM-1，实验组加入不同浓度的SN(0.25、0.5和1.0 mol/L)或地塞米松（1.0×10^-6 mol/L）进行干预，培养12 h后收获细胞，用实时定量PCR检测VCAM-1 mRNA的表达，用流式细胞仪检测细胞表面VCAM-1表达。结果： TNF-α可诱导VCAM-1 mRNA和VCAM-1的表达。进行药物干预后，各干预组相对VCAM-1 mRNA表达有不同程度下降(P<0.05)。SN（1.0 mol/L）和SN（0.5 mol/L）干预组细胞表面VCAM-1表达下降(P<0.05)。SN（0.25 mol/L）和地塞米松（1.0×10^-6 mol/L）干预组未显示对TNF-α 诱导的VCAM-1表达有抑制作用。结论： SN可抑制TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达。     

小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞凋亡的影响

目的：探讨小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法比较不同浓度的小檗碱对体外培养及高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞凋亡的作用，同时应用流式细胞术及原位末端核苷酸标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果：不同浓度的小檗碱对NIT-1胰岛β细胞作用呈剂量依赖性：低浓度小檗碱（≤5 μmol/L） 对细胞无明显毒性，随浓度升高毒性作用明显。在培养基中加入高糖高脂及低浓度的小檗碱共同培养24 h, 小檗碱组细胞凋亡率低于高糖高脂组（P<0.01）。结论：小檗碱能抑制高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞凋亡。     

小檗碱对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附及粘附分子的影响

目的：通过研究小檗碱对淋巴细胞与血管内皮细胞粘附及粘附分子的影响,探讨小檗碱免疫抑制作用机制。方法：以小檗碱处理人淋巴细胞或人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）后,用蛋白染料染色法研究对淋巴细胞与内皮细胞粘附的作用,用细胞ＥＬＩＳＡ,免疫细胞化学染色法研究对细胞表面粘附分子表达的影响。结果：小檗碱能抑制静息的及ＩＬ－１,ＴＮＦ激活的内皮细胞与淋巴细胞间的粘附,其主要分子机制为下调内皮细胞表面粘附分子ＩＣ     

蜂胶水提物对血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的:采用TNF-α诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUCECs)活化,观察蜂胶水提物(WEP)对血管内皮细胞黏附分子表达的影响,从而探讨蜂胶抗动脉粥样硬化的作用及其机制。方法:用50μg/L TNF-α诱导体外培养HUVECs损伤,用50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L WEP分别进行干预6 h、12 h、24 h,利用流式细胞仪检测HUVEC表面ICAM-1和VCAM-1表达。结果:与对照组比较,模型组ICAM-1和VCAM-1荧光强度明显升高(P0.01)。与模型组比较,100 mg/L WEP组和200 mg/L WEP组ICAM-1和VCAM-1荧光强度明显降低(P0.01)。不同浓度WEP组ICAM-1和VCAM-1荧光强度随WEP浓度的增加下调。析因分析结果显示,用200 mg/L WEP和氟伐他汀钠(FS)联合预处理组与单一药物预处理组比较,ICAM-1和VCAM-1活性明显降低(P0.01)。结论:WEP能够减少ICAM-1和VCAM-1的表达,且在一定的范围内,有随WEP浓度升高和作用时间延长效应增强的趋势。WEP与FS联合用药,对抑制ICAM-1和VCAM-1表达有协同作用。     

球状脂联素上调脂联素受体1抑制晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的初步研究

目的:观察球状脂联素(gAd)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡时脂联素受体1(AdipoR1)表达的影响。方法:体外培养HUVECs,用不同浓度AGEs作用HUVECs,以及预处理gAd后再联合AGEs作用HUVECs。MTT比色法测定细胞活性、Annexin V-FITC/PI双染标记流式细胞仪检测细胞凋亡、实时定量RT-PCR检测内皮细胞AdipoR1 mRNA的表达。结果:AGEs作用HUVECs,细胞凋亡具有AGEs浓度依赖性(P0.05)。相同浓度AGEs作用HUVECs,有和无gAd预处理的2组比较,用gAd预处理组明显拮抗HUVECs凋亡(P0.01)。实时定量RT-PCR检测发现,gAd具有上调AdipoR1 mRNA表达的作用,与相同浓度AGEs作用的无gAd预处理组比较,差异显著(P0.01)。结论:gAd可能通过上调AdipoR1表达拮抗AGEs诱导HUVECs的凋亡。     

脂多糖诱导血管内皮细胞凝血途径相关因子基因表达变化

目的：观察脂多糖(LPS)对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织因子(TF)、组织因子抑制物(TFPI)和凝血酶调节蛋白(TM)的影响。方法：应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养，用生长良好的第2、3代细胞进行实验。同时应用CCK-8测定细胞在不同浓度的LPS(1-100 mg/L)处理前后细胞活性；应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TM、TF和TFPI mRNA水平。结果：浓度为10 mg/L的LPS对细胞活力与对照组相比没有显著差异。浓度为10 mg/L的LPS作用使HUVECs显著上调TF mRNA表达，6-24 h可以使细胞TFPI mRNA表达下调,以后渐恢复正常表达，72 h达到正常对照组水平，同时下调TM mRNA表达。结论：LPS(10 mg/L)对HUVECs的活性不造成直接的影响，可显著上调HUVECs的TF mRNA转录，抑制TFPI mRNA 的转录，而不改变TM mRNA的转录，这可能与LPS在感染过程中诱导血栓形成,血液凝固和DIC发生相关。     

糖基化终产物对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的: 探讨糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白表达的影响。方法: 将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)用不同浓度(100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0 h、12 h、 24 h及36 h。采用原位杂交方法及Western blot检测巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白的表达水平。结果: BSA组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α呈弱表达;100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA 表达的平均积分吸光度值分别为18.76±3.17、26.58±1.61及34.23±2.25(BSA组为13.83±1.24,P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的平均积分吸光度值分别为22.67±1.46、34.23±2.25及42.28±3.14(0 h组为12.56±1.24,P<0.05)。100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为BSA组的1.34倍、1.87倍及2.46倍(P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为0 h组的1.82倍、2.71倍及3.34倍(P<0.05)。结论: 糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞巨噬细胞炎性蛋-1α mRNA及蛋白的表达。     

重组可溶性人CD40L诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的:探讨重组可溶性人CD40L(rsh CD40L)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤作用及其在动脉粥样硬化中的作用。方法:应用rsh CD40L刺激人脐静脉内皮细胞12 h;MTS法观察HUVECs的生存活性,ELISA法测内皮细胞E-选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子(ICAM)-1、组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)表达的变化,比色法测脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与正常组比较,不同浓度的rsh CD40L(0.5、1、2、3 mg/L)对内皮细胞的生存活性无明显影响;0.5 mg/L rsh CD40L即可增加内皮细胞E-selectin、s ICAM-1、TF、TFPI的分泌,差异有统计学意义(P0.01),同时增加内皮细胞MDA的含量、降低SOD活性(P0.05)。结论:0.5~3 mg/L rsh CD40L对内皮细胞生存活性无明显影响,但已经引起内皮细胞功能障碍,增加内皮细胞炎症和外源性凝血反应,诱导内皮细胞脂质过氧化物损,使其抗氧化能力下降。     

补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响

目的:探讨补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响及机理。方法:以培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)或在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清,以孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定人单核细胞系U937与HUVECs的粘附,并用流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)以及E-选择素的表达。结果:ox-LDL显著增强单核U937细胞与内皮细胞之间的相互粘附,如在试验体系中加入灌服补肾宁心方的动物血清,则粘附率明显降低(P＜0.01)。流式细胞仪分析结果显示ox-LDL能明显促进内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达,补肾宁心方中药灌服血清可显著下调内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达(P＜0.01)。结论:补肾宁心方含药血清可能通过下调内皮细胞表面粘附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞粘附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

HDL3抗脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的: 研究高密度脂蛋白3(HDL3)预处理对脂多糖(LPS) 损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并探讨其可能机制。方法: 以不同浓度(50、100和200 μg/L)HDL3预处理HUVECs 18 h,再加入1 mg/L LPS作用6 h。MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI双标后流式细胞术检测细胞凋亡,荧光显微镜观察单核细胞与HUVECs黏附,ELISA法检测培养液中VCAM-1含量,细胞免疫组织化学及Western blotting法检测细胞核内NF-κB p65的水平。结果: 与对照组相比,LPS作用后HUVECs增殖活力降低,细胞凋亡及单核细胞黏附显著增加,VCAM-1和核内NF-κB p65水平增加;HDL3预处理可以恢复HUVECs增殖活力,降低细胞凋亡及单核细胞与HUVECs的黏附,减少VCAM-1分泌,并抑制NF-κB p65的核转位,且呈浓度依赖性。结论: HDL3可拮抗LPS 对HUVECs的损伤作用,其机制可能与抑制NF-κB所介导的炎症反应有关。