低温保存恶性疟原虫分离株溶化10余天后复苏培养成活报告

目的 :了解恶性疟原虫分离株在液氮干涸虫血溶化 10余天后能否复苏培养成活。方法 :运用Trager等体外连接培养法。结果 :2分离株均培养成活 ,并正常传代繁殖。结论 :低温保存 2年的冰冻含虫红细胞经慢速溶化后在 10～ 2 5℃常温下 ,其寿命可长达 10天左右。     

一种恶性疟原虫短期低温保存法

一种恶性疟原虫短期低温保存法江钢锋，洪佳冬（寄生虫学教研室）关键词恶性疟原虫，低温保存，保种中图号Ｒ３８２．３恶性疟原虫红内期的体外连续培养已成为疟疾研究的一项基本技术［１］，得到广泛应用，大大地促进了疟疾防治及研究的发展。开展疟原虫的体外培养及研究...     

一种恶性疟原虫短期低温保存法

恶性疟原虫红内期的体外连续培养已成为疟疾研究的一项基本技术，得到广泛应用，大大地促进了疟疾防治及研究的发展。开展疟原虫的体外培养及研究，虫种的保存是一个重要环节。常规的方法是液氮冷冻保存，可以长期保种。但是，日前不少地方尤其是基层的卫生防疫及研究单位，     

恶性疟原虫基因组的研究进展

本综述了疟疾的现状、恶性疟原虫基因组的特点及其研究意义。     

恶性疟原虫MESA基因的克隆和测序

目的克隆、测定恶性疟原虫海南株(FCC1／HN)成熟疟原虫感染红细胞表面抗原(MESA)基因序列，并进行序列分析。方法根据恶性疟原虫palo-alto株MESA基因已知序列，设计合成四对引物，用PCR技术从FCC1／HN株基因组DNA中扩增出4个部分序列重叠的MESA基因片段，分别克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定这4个基因片段的序列，拼接得到全长MESA基因序列。应用DNAstar、AnthProt软件辅助进行序列同源性比较和抗原表位区预测。结果PCR扩增得到特异的恶性疟原虫FCC1／HN株MESA基因片段，酶切及PCR鉴定获得了包含MESA基因片段的重组质粒。测序结果表明，FCC1／HN株MESA全基因编码区长4102bp，A T含量为72．11％，G C含量为27．89％，有1个内含子；编码1323个氨基酸残基，分子量为154470u。序列分析表明，FCC1／HN株与Palo-aho、D10株MESA蛋白在长度和序列组成上呈多态性，序列差异较大区域位于MESA蛋白的氨基酸重复区1、3、4、5和7。经多参数综合分析，有7个潜在的抗原表位区。结论测定、分析了恶性疟原虫FCC1／HN株MESA基因序列。FCC1／HN株MESA基因与其它分离株的MESA基因编码的氨基酸序列存在一定差异。     

恶性疟原虫感染的遗传学特征

寄生虫群体遗传规律的知识可为制定该寄生虫的有效控制措施提供重要依据。寄生虫的不同基因型 ,其虫株毒力、抗原性和抗药性存在差异 ,而寄生虫不同虫株间的杂交可以产生具有新基因型的克隆株。在一个特定地区 ,了解一种寄生虫针对某种药物或疫苗的基因授予频率的信息对于采用此药物或疫苗进行的控制措施的完成具有重要意义。然而 ,到目前为止这方面的资料还很少。恶性疟原虫生活史的复杂性使在自然环境中研究其群体的遗传学结构和动态显得困难。恶性疟流行的地区间差异除表现在疾病的流行程度、疟原虫感染的季节性、蚊虫的叮咬率等以外 ,更…     

恶性疟原虫红内期在体外存活时间的实验观察

目的 观察恶性疟原虫红内期在体外存活时间，分析其培养虫血的感染活力。方法 采用Tragers等常规体外培养方法，待恶性疟原虫体外连续培养的原虫率达到15％～20％时，吸取含虫血于保存液置4℃贮存，以后每天吸取少量虫血培养，24h观察原虫生长情况。结果 恶性疟原虫血4℃贮存2d疟原虫减虫率80．6％，10d几乎为100％；11d已未发现疟原虫。结论 估算体外培养的恶性疟原虫红内期在体外4℃贮存，存活时间不超过11d。     

双氢青蒿素和奎宁对恶性疟原虫早期配子体作用的随机比较

【目的】研究双氢青蒿素对恶性疟原虫早期配子体的抑杀作用。【方法】仅骨髓带恶性疟原虫早期配子体而骨髓与外周血液均无成熟配子体的患者11例,随机分为A、B2组。A组6例口服双氢青蒿素片7d总量480mg;B组5例口服硫酸奎宁片7d总量10500mg,定时取骨髓和外周血液涂片,观察两组配子体密度的变化。【结果】A组骨髓早期配子体药后10d全部转阴;而B组全部阳性,至药后14d仍有2/5例阳性。外周血液配子体转阴时间,A组为(4.8±0.9)d;B组为(22.0±5.8)d。【结论】双氢青蒿素能杀灭恶性疟原虫早期配子体,而硫酸奎宁似无此作用。     

恶性疟原虫抗药性测定方法及其影响因素

本文就疟原虫抗药性测定方法近几年的研究进展及其在测定中的影响因素加以综述。对抗药性测定方法,如传统的微量测试法和同位素测定法,以及近几年发展起来的利用HRP Ⅱ和LDH酶联免疫法、利用SYBR Green I等标记的荧光法和流式细胞仪法进行了介绍。文内还分析了血清、红细胞压积和原虫起始密度、原虫时期和状态等因素对测定值的影响。     

海南省乐东县恶性疟原虫对抗疟药的敏感性测定

目的了解乐东县恶性疟原虫对抗疟药的敏感情况,以指导用药. 方法采用Rieckmann体外微量法,于1999年测定氯喹、哌喹、咯萘啶、青蒿琥酯、双氢青蒿素及其加用氯喹的敏感性. 结果测定上述药物的ID50依次为244nmol/L、464nmol/L、7lnmol/L、3nmol/L、4nmol/L与11/1.32nmol/L.完全抑制裂殖体形成的平均浓度（CIMC）依次为353nmol/L、672nmol/L、102nmol/L、10nmol/L、13nmol/L与19/1.86nmol/L.前3种药的抗性率依次为85.71%、42.86%与14.29%.结论恶性疟原虫对氯喹、哌喹、咯萘啶产生抗性,对青蒿琥酯与双氢青蒿素均敏感,氯喹与双氢青蒿素联用体外测定有增效作用.     

气相冷冻法和液相冷冻法对人类精子运动能力、形态学及超微结构的影响

目的研究液氮蒸汽熏蒸法(简称气相冷冻法)和直接投入液氮冷冻法(简称液相冷冻法)对人类精子冷冻复苏后运动能力、形态学及超微结构的影响。方法选择25例捐精者的精液标本,按照1∶1的比例添加改良甘油-卵黄-枸橼酸钠(GYC)作为冷冻保护剂。每份精液标本等分为2份,分别进行气相法冷冻和液相法冷冻。复苏后,利用IVOS精子分析仪测定精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数,巴氏染色观察精子形态并计算形态正常率,透射电子显微镜观察精子超微结构。结果气相法冷冻从28℃降温到-185℃用时468 s,再经过1 h后降温到-196℃;液相法冷冻从30℃降温到-196℃用时90 s。两种方法冷冻复苏后精子总活动率、前向运动精子百分率、运动参数、形态正常率与冷冻前比较均明显降低(P<0.05)。气相法冷冻复苏后精子的复苏率、总活动率、前向运动精子百分率均高于液相法,差异有统计学意义(P<0.05);两种冷冻方法复苏后精子形态正常率、运动参数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。通过透射电子显微镜观察,使用GYC作为冷冻保护剂,两种方法冷冻复苏后,精子头部质膜和顶体膜超微结构未出现明显的损伤。结论改良GYC保护剂对精子超微结构具有保护作用;气相冷冻法冷冻人类精子的复苏结果优于液相法。     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的 建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法 采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血样,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性进行了初步研究。结果 筛选出4株抗LDHpf单抗,间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应,而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western-blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37%和86.67%,GICA与镜检法的符合率均为91.55%。结论 GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高,无需特殊仪器设备,有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

云南高疟区抗疟药物临床研究中适宜恶性疟原虫密度范围的观察

通过对云南一恶性疟暴发点病人血液中无性体和有性体的观察发现,当地恶性疟无性体密度初发者几何平均值为1798/μl,95％可信限为1141～2836/μl,复燃者的几何平均密度为6540/μl.95％可信限为4230～10097/μl;初发者的无体密度比复燃者的低,复燃者高密度居多。有性体密度初发者几何平均值为158/μl,95％可信限为102～247/μl;初发者有体性密度比复燃的高。初发者有性体率为57.69％,复燃者仅为9.1％。原虫无性体与有性体密度间不存在统计相关。建议在选择无服抗疟药史者为观察对象.以有服抗疟药史者为观察对象,以及两类病人同时均作为观察对象时,宜分别以1000～3000/μl,4000～10000/μl和1000～10000/μl为无性体密度的适宜范围。而观察有性机体时,则以100～300/μl为其适宜密度范围。     

Serological cross-reactivities between the retroviruses HIV and HTLV-1 and the malaria parasite Plasmodium falciparum

Serum samples from three populations of Papua New Guinea, where Plasmodium falciparum malaria and human T-lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) are coendemic at high prevalence rates, showed statistically significant ELISA co-seropositivity and co-seronegativity. Cross-reactivity was further indicated by the presence of 10 bands ranging from 134 kDa to 18 kDa on immunoblots of electrophoresed whole lysate P. falciparum antigen against serum of HTLV-1 seropositive patients from an area where malaria is not present. Similarly, sera from patients positive for human immunodeficiency virus (HIV) from a non-malarious region produced immunoblot bands ranging from 134 kDa to 33 kDa to the P. falciparum antigen. The HTLV-1 and HIV serum samples yielded a number of immunoblot bands when reacted to an electrophoresed human O type red cell membrane antigen, but those bands had no identity to the cross-reactive bands on the P. falciparum antigen immunoblots. Malaria-positive sera from Papua New Guinean subjects presumed to be uninfected with HIV produced a variety of bands, some of intense prominence, to HIV antigen on diagnostic Western blots.     

抗恶性疟McAb的筛选与恶性疟免疫诊断研究

用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA)对11株抗恶性疟McAbs和4株抗食蟹猴疟原虫McAbs进行了筛选,其中McAbs11G5、13A2、13A1可包被到硝酸纤维素膜(NcF)上作为捕获抗体,McAb14D9可用于胶体金探针的标记。此外,为增加胶体金的标记效果和胶体金标记McAb14D9探针的敏感性,还对McAb14D9的等电点(pI)进行了测定,其pI为6.35。同时用筛选出的最佳McAbs对10份恶性疟病人感染血和10份健康人血样品进行了检测,并对这几株McAbs的交叉反应性进行了测定,结果表明McAbs11G5、13A1与14D9夹心时,对云南株和安微株恶性疟原虫红内期抗原呈现交叉反应,而且McAb13A1与14D9夹心时还可以用于检测间日疟抗原。     

A mathematical model of in situ freezing in liquid nitrogen

In situ freezing is a procedure, typically applied in neuroscience, to halt metabolism and diffusion. However, the freezing process is not instantaneous, and the regional concentrations of a compound under study may change before the tissue is completely frozen. Knowing the local freezing time, metabolic rate and the diffusion coefficient of the compound of interest, it should be possible to reconstruct the spatial concentration profile prevailing before the object was placed in the cryogen. A mathematical model for calculating the temperature changes at different depths in rabbit and rat heads cooled in liquid nitrogen has been developed. By comparing with experimental results it has been found that the mathematical model can be used for prediction of the local freezing time with a small error.     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗，利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条，以镜检和PCR法为对照，用GICA条检测门诊“四热”病人血样，评价其敏感性和特异性，并对其稳定性进行了初步研究。结果筛选出4株抗LDHpf单抗．间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应，而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western—blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准，CICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37％和86．67％．DICA与镜检法的符合率均为91．55％。结论GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高，无需特殊仪器设备，有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。