抗表皮生长因子受体单克隆抗体对人胰腺癌裸鼠模型的化疗增敏作用

目的 观察鼠抗人EGFR单克隆抗体联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)、健择对裸鼠胰腺癌化疗效果的影响.方法 将人胰腺癌肿瘤细胞悬液注射于裸鼠背部皮下,建立肿瘤模型.干预组腹腔分别注射鼠抗人EGFR单克隆抗体(MMAb-2)、5-Fu、健择及其配伍联合用药;对照组腹腔注射生理盐水.干预4周后处死裸鼠,切取肿瘤,测量瘤体积,取肿瘤组织送病理学检查;免疫组化法检测肿瘤组织中bax、bcl-2的表达;免疫荧光法检测肿瘤组织中细胞凋亡指数,评价干预效果.结果 5-Fu、健择联合应用MMAb-2对裸鼠胰腺癌细胞增殖的抑制作用明显增强(P＜0.05),且能提高裸鼠胰腺癌细胞凋亡率(P＜0.05).结论 抗EGFR单克隆抗体能有效提高化疗药物5-Fu、健择对裸鼠胰腺癌细胞抑制作用的敏感性,可明显提高胰腺癌的化疗效果.     

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究和临床研究

目的 观察5-氟尿嘧啶(5-Fu)缓释剂对荷胰腺癌裸鼠肿瘤细胞及胰腺癌患者血清肿瘤标记物和细胞免疫的影响。方法 (1)5-Fu缓释剂的体外释放实验和体外抑瘤实验：测定浸出液药物的浓度，计算释放量；检测其浸出液对人胰腺癌细胞株PC3的抑制作用：(2)将荷胰腺癌细胞株Pc3裸鼠60只，随机分成静脉对照组(A组)、5-Fu静注组(B组)、基质植入组(C组)、大剂量5-Fu缓释剂植入组(D组)和小剂量5-FU缓释利植入组(E组)：治疗前及治疗后l4d测肿瘤大小。治疗2周后观察肿瘤组织学变化：免疫组化法测定bcl-2和Bax的蛋白表达水平；TUNEL法检测凋亡指数(Al)。(3)手术探查不能切除之胰腺癌69例随机分成3组：将5-FU缓释剂瘤内植入治疗组(治疗组)、术后行5-FU静脉化疗组(化疗组)和对照组。分别于术前1d和术后第14天采血，测定各组血清中NK细胞，T细胞亚群和CEA，CA50，CA19-9，CA125，CA242血清肿瘤标记物水平。结果 (1)5mg 5-FU缓释剂第1天释放量最大，为0．85mg，第3天为0．45mg，其后在0．25mg水平维持稳定的缓慢释放；释放时间长达l4d以上。(2)5-Fu缓释剂第1天的浸出液对人胰腺癌细胞株PC-3的抑制率达60．27％，第3天为34．25％，以后稳定在25．00％左右。5-Fu缓释剂瘤内注射治疗组裸鼠移植瘤生长速度减慢，bcl-2基因表达明显低于其他各组，而Bax基因表达明显高于其他各组，肿瘤细胞的Al明显高于其他各组。D组和E组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组。术后治疗组CD4 ／CD8 和NK细胞水平高于化疗组，而血清中E述5种肿瘤标记物低于对照组和化疗组。结论 5-Fu缓释剂能在2周内在体外较稳定地持续释放，对人胰腺癌细胞株PC3有持续抑制作用。该剂瘤内注射可明显抑制荷胰腺癌瘤裸鼠瘤体的生长，其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关；并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。该剂植入患者胰腺癌实体内，能明显降低5种血清肿瘤标记物水平，同时对患者的细胞免疫功能影响较小，5-Fu缓释剂可望成为治疗不能切除之胰腺癌的较好的制剂。     

抗表皮生长因子受体单链抗体联合放化疗治疗裸鼠移植胰腺癌的研究

目的 针对表皮生长因子受体(EGFR)的腺相关病毒(AAV)介导的靶向治疗作为一种新的治疗方式具有广阔的前景.实验通过对胰腺癌细胞株Aspc-1进行抗EGFR抗体的重组腺相关病毒(rAAV-anti EGFR)治疗及联合放疗、吉西他滨(简称化疗)等综合治疗手段,探索rAAV介导抗EGFR单链抗体对胰腺癌治疗的效果.方法 分别通过单纯化疗、单纯放疗、rAAV-anti EGFR治疗,rAAV-anti EGFR治疗联合化疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放疗、rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗干预胰腺癌细胞株Aspc-1及裸鼠移植瘤,检测细胞或移植瘤的凋亡率以及移植瘤生长情况.结果 体外实验提示,以上处理方式使肿瘤细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放化疗细胞凋亡率要高于rAAV-anti EGFR治疗、单纯放疗或单纯化疗(P＜0.05).体内实验提示,rAAV-anti EGFR治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05),且与放疗和化疗均有协同作用;rAAV-anti EGFR治疗后,组织中凋亡相关Caspase-3活性蛋白表达细胞数要显著高于对照组(P＜0.05),rAAV-anti EGFR治疗联合放疗或化疗其凋亡蛋白表达细胞数要多于单纯治疗组(P＜0.05).结论 rAAV-anti EGFR治疗在体内外均有良好的抗胰腺癌效应,其联合放化疗疗效优于单纯放疗或单纯化疗,且该病毒载体与化疗及放疗具有协同作用.     

胰腺癌——胰腺癌的辅助化疗

胰腺癌的发病率近年来在世界范围内有逐年增高的趋势，虽然手术是治疗胰腺癌的根本手段，但目前胰腺癌手术切除率仅为10％～15％，因此围手术期化疗、放疗等综合治疗尤为重要。目前使用的化疗药物中5-氟脲嘧啶(5-Fu)和丝裂霉素(MMC)的抗胰腺癌作用较为肯定，广为临床应用。目前各化疗方案仍主要以5一Fu为基础，最常用的方案有：5-Fu 阿霉素(ADM) MMC；5-Fu 顺铂(DDP)；5-Fu 健择(GEM)等。     

白藜芦醇对胰腺癌细胞的抑制作用

目的检测白藜芦醇(resveratrol,Res)体外单独及联合化疗药物对胰腺癌MIAPaCa-2细胞的抑制作用。方法在体外培养条件下观察Res,5-氟脲嘧啶(5-flurouracil,5-FU)和吉西他滨(Gemcitabine,Gem)分别对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖的影响,然后根据以上抑制结果,选择对MIAPaCa-2细胞抑制率在15%～30%的5-FU或Gem药物浓度,再与不同浓度的Res联合用药。在联合药物处理MIAPaCa-2细胞48 h后,同样用噻唑蓝(methyl thia-zolyl tetrazolium,MTT)法检测联合用药,检测其对细胞增殖的抑制作用。结果Res,5-FU及Gem体外单独用药均能显著抑制MIAPaCa-2细胞的生长增殖,Res联合384.4μmol/L 5-FU或5.0μmol/L Gem后,对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用显著提高,与单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外Res能显著抑制人胰腺癌MIAPaCa-2细胞的增殖,Res联合5-FU或Gem能显著提高对MIAPaCa-2细胞增殖的抑制作用。     

索拉非尼抑制人肝癌细胞耐药蛋白表达及其与氟尿嘧啶联用抑制裸鼠移植瘤生长的研究

目的 观察索拉非尼对人肝癌高转移细胞HCCLM3多药耐药蛋白表达的抑制作用及其与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用的协同效应.方法 使用索拉非尼和/或5-Fu对HCCLM3细胞进行干预后,应用免疫细胞化学方法、Western blot法分别检测细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)及耐药蛋白渗透性糖蛋白(P-gp)和拓扑异构酶2A(TOP-2α)的表达;将HCCLM3细胞接种于裸鼠皮下,并进行药物干预治疗,通过观察肿瘤体积的变化,评估药物对肿瘤生长的抑制作用.细胞实验及裸鼠实验均设置对照组(C)、索拉非尼组(S)、5-Fu组(F)、索拉非尼与5-Fu联用组(SF).结果 各组细胞的pERK、P-gp及TOP-2α表达分别为:C组(0.061 ±0.026、0.076±0.033、0.075±0.022)、S组(0.024±0.011、0.027±0.006、0.025±0.024)、F组(0.080±0.036、0.047±0.005、0.059±0.025)、SF组(0.027±0.015、0.022±0.019、0.038±0.020).与C组比较,S组和SF组的pERK、P-gp、TOP-2α的表达明显下降(P＜0.05).各组裸鼠皮下瘤体积(cm3)分别为:C组(5.292±1.523)、S组(1.620 ±0.784)、SF组(1.1100.402)、F组(4.327±1.709).与C组比较,S组和SF组裸鼠的肿瘤体积明显缩小(P＜0.05).结论 索拉非尼单独或与5-Fu联用能明显抑制HCCLM3细胞中pERK、P-gp、TOP-2α蛋白的表达及裸鼠皮下瘤的生长.     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的 运用基因转染技术,观察DPC4基因转染对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响.方法 构建表达DPC4基因的逆转录病毒载体,转染胰腺癌细胞BxPC-3,获取稳定表达DPC4的子代胰腺癌的细胞株BxPC-3/DPC4.观察5-Fu、吉西他滨(作用72 h)对胰腺癌细胞的抑制作用.同时应用半定量RT-PCR检测胰腺癌细胞内Mdr-1、Chk1基因的表达情况.结果 DPC4基因转染并稳定表达后,BxPC-3细胞对5-Fu、吉西他滨的IC50浓度(72 h)分别降低了1倍左右.同一浓度下,5-Fu、吉西他滨联合DPC4基因转染对BxPC-3细胞的体外抑制作用也明显增强,癌细胞内的Mdr-1、Chk1基因的mRNA表达明显下调.显示单独使用pLXSN/DPC4、5-Fu、吉西他滨,均能在体外抑制胰腺癌细胞的生长,但pLXSN/DPC4联合化疗药物,对癌细胞生长的抑制作用更为明显.结论 DPC4基因转染能够提高胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是通过下调Mdr-1、Chkl的表达来实现的.     

Treatment with gemcitabine and TRA-8 anti-death receptor-5 mAb reduces pancreatic adenocarcinoma cell viability in vitro and growth in vivo

Gemcitabine is a first line agent for pancreatic cancer, but yields minimal survival benefit. This study evaluated in vitro and in vivo effects of a monoclonal antibody (TRA-8) to human death receptor 5, combined with gemcitabine, using two human pancreatic cancer cell lines, S2VP10 and MIA PaCa-2. A subcutaneous model of pancreatic cancer was employed to test in vivo efficacy. S2VP10 and MIA PaCa-2 cells were treated with varying doses of gemcitabine and TRA-8. Cell viability and apoptosis were determined with an adenosine triphosphate assay and annexin V staining, respectively. Mitochondrial membrane destabilization was evaluated with fluorescence-activated cell sorting analysis of JC-1 stained cells. Caspase activation was evaluated by Western blot analysis. MIA PaCa-2 subcutaneous xenografts in athymic nude mice were evaluated for response to treatment with 200 μg of TRA-8 (intraperitoneal on days 9, 13, 16, 20, 23, and 27 postimplant) and 120 mg/kg gemcitabine (I.P. on days 10, 17, and 24). Tumor growth was measured with calipers. MIA PaCa-2 and S2VP10 cells receiving combination treatment with TRA-8 and gemcitabine demonstrated enhanced cytotoxicity, annexin V staining, and mitochondrial destabilization compared to either agent alone. Combination treatment produced enhanced caspase-3 and -8 activation in both cell lines compared with either agent alone. In vivo studies demonstrated mean subcutaneous tumor surface area (produce of two largest diameters) doubling times of 38 days untreated, 32 days gemcitabine, 49 days TRA-8, and 64 days combination treatment. TRA-8 is an apoptosis-inducing agonistic monoclonal antibody that produced synergistic cytotoxicity in combination with gemcitabine in vitro through enhanced caspase activation. These findings, with substantial inhibition of tumor growth in a mouse pancreatic cancer xenograft model receiving combination therapy, are encouraging for anti-death receptor therapy in the treatment of pancreatic cancer. Presented at the Forty-Seventh Annual Meeting of The Society for Surgery of the Alimentary Tract, Los Angeles, California, May 20–24, 2006 (poster presentation). Supported by the National Institutes of Health/NRSA T32 CA91078 Research Training Program in Surgical Oncology Training Grant (Dr. Kirby Bland P.I.) and NIH SPORE in Pancreatic Cancer 1 P20 CA10195-01.     

下调G蛋白信号调控因子2表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的:探讨下调G蛋白信号调控因子2(GPSM2)表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响。方法:构建GPSM2低表达的胰腺癌MIA-PaCa-2细胞并鉴定;将16只裸鼠随机均分为两组,分别皮下接种GPSM2低表达与自然表达的MIA-PaCa-2细胞构建荷瘤模型,两组中分别一半注射吉西他滨(100 mg/kg),一半注射等体积生理盐水(腹腔注射,3次/周,共注射4周),绘制瘤体生长曲线,并于末次注射后第3天处死裸鼠,测量肿瘤体积。结果:成功构建GPSM2表达下调的MIA-PaCa-2细胞。移植瘤的生长速度与体积大小的趋势均表现为GPSM2自然表达+生理盐水组GPSM2自然表达+吉西他滨组GPSM2低表达+生理盐水组GPSM2低表达+吉西他滨组。析因设计分析结果显示,单独吉西他滨或单独下调GPSM2基因表达对于抑制裸鼠瘤体生长的主效应均具有统计学意义(均P=0.000);吉西他滨联合下调GPSM2基因表达对于抑制裸鼠瘤体生长的交互效应尚未达到统计学意义(P=0.073);但吉西他滨联合下调GPSM2基因表达对于肿瘤生长的抑制作用相对于单独吉西他滨或单独下调GPSM2基因表达的单独效应均有统计学意义(P=0.000、0.003)。结论:下调GPSM2基因表达是否有增强胰腺癌细胞化疗敏感性的作用尚不确定,但下调GPSM2基因表达的同时予以化疗对胰腺癌生长的抑制效果明显强于两者单独作用。     

汉黄芩素对胰腺癌作用的体外、体内实验研究

目的：探讨汉黄芩素对胰腺癌Panc-1细胞体内外生长的影响。方法：将不同浓度（1,10,100 μmol/L）汉黄芩素作用胰腺癌Panc-1细胞24 h,用MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖与凋亡情况。将20只荷Panc-1细胞移植瘤裸鼠随机均分为对照组,汉黄芩素组（汉黄芩素60 mg/kg,1次/d）,吉西他滨组（吉西他滨150 mg/kg,1次/周）与联合用药组（汉黄芩素+吉西他滨）,连续给药2周并停药7 d后,比较各组移植瘤生长情况,用免疫组化法检测瘤组织微血管密度（MVD）与血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：与无处理的对照细胞比较,3个浓度汉黄芩素处理后的Panc-1细胞OD值均明显降低,凋亡率均明显升高,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。与对照组比较,汉黄芩素组,吉西他滨组与联合用药组移植瘤的生长均被明显抑制,抑瘤率分别为24.8%,30.5%,66.1%,联合用药组的抑制率明显大于两个单药组（均P<0.05）,但两单药组间差异无统计学意义（P>0.05）;3个治疗组肿瘤组织CD31（反映MVD）与VEGF的表达均明显减少,且吉西他滨组,汉黄芩素组,联合用药组减少程度依次明显,组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：汉黄芩素能抑制胰腺癌细胞的增殖并促进凋亡;能一定程度抑制胰腺癌在体内的生长,并增加肿瘤对化疗药物的敏感性,该作用的机制部分与抑制肿瘤的血管生成有关。

     

氟尿嘧啶与生长抑素受体基因联合治疗鼠 胰腺癌移植瘤的研究

目的 ： 观察生长抑素二型受体(SSTR2)基因体内转染后裸鼠胰腺癌移植瘤对5-氟尿嘧啶（5-FU）的反应，并探讨其可能机制。方法 ：将人胰腺癌细胞株panc-1种植于裸鼠背部皮下形成胰腺癌移植瘤模型。成模后动物随机分成4组（每组6只）;I组为对照组;II组为腹腔注射5-FU治疗组;III组为瘤内注射pCMV-6C-SSTR2-脂质体转染SSTR2基因治疗组;IV组为基因治疗+5-FU治疗组。观察肿瘤生长速度，测量瘤体大小及重量。用免疫组织化学方法和免疫印迹技术(Westernblot)检测转染效率;用凋亡原位检测方法(Tunel)检测胰腺癌细胞的凋亡率。结果 ：体内转染后SSTR2可重新表达。5-FU和SSTR2基因联合治疗(IV)组肿瘤生长速度显著慢于单独基因治疗(III)组及单独5-FU治疗(II)组和空白对照(I)组（ P <0.01）;最终肿瘤大小，重量也显著小于其他3组（均 P <0.01），而癌细胞凋亡率显著高于其他3组（均 P <0.01）。结论 ：SSTR2重新表达后可增强胰腺癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性，联合5-FU 和SSTR2基因治疗可望成为治疗胰腺癌新的途径。     

Interferon receptors and the caspase cascade regulate the antitumor effects of interferons on human pancreatic cancer cell lines

BACKGROUND: Interferons (IFNs) have antiproliferative effects on tumor cells. The apoptotic effects and sensitization to chemotherapy conferred by IFN therapy, however, are not clearly understood. The aims of the present study were to explore the apoptotic effects of IFNs in human pancreatic cancer cell lines and to attempt to define their ability to synergistically enhance sensitivity to 5-fluorouracil (5-FU) and gemcitabine, a mechanism that depends on the expression of IFN receptors. METHODS: Human pancreatic cancer cells were cultured alone or in combination with the chemotherapeutic agents 5-FU and gemcitabine. Differential dosages of IFN-alpha, -beta, and -gamma were also added to the cell lines concomitantly during a period of 24 to 96 hours. The cell line viability and effects of treatment were examined using the methylthiazol tetrazolium assay and single-stranded DNA apoptosis assay. The expression of IFN receptors was determined using immunohistochemistry. Caspase-8 inhibitor was used to block the caspase cascade. RESULTS: The antiproliferative and apoptotic effects of IFNs were most profoundly demonstrated on those cells that expressed the respective IFN receptor. The apoptotic effects provided by the interferons, however, were blocked by caspase-8 inhibition. The addition of IFNs significantly enhanced the cytotoxic effects of 5-FU and gemcitabine in those cell lines that expressed the corresponding IFN-alpha, -beta, or -gamma receptors. CONCLUSIONS: This study on pancreatic cancer cell lines has demonstrated that IFNs mediate apoptosis through IFN receptors and the caspase cascade. Enhanced cytotoxicity occurred when IFNs were combined with 5-FU and gemcitabine.