四环素对兔膝骨关节炎负重模型软骨基质金属蛋白酶1表达的影响

目的:观察四环素对兔膝骨关节炎负重模型软骨基质金属蛋白酶1表达的影响,探讨其对骨关节炎防治的有效性及其机制。方法:实验于2005-03/05在武汉科技大学医学院药理实验室进行。①分组处理:18只日本大耳白随机分为假手术组,模型组和给药组各6只。模型组和给药组将兔右侧膝关节前交叉韧带切断造成关节不稳定后,以石膏将左后腿固定于腹部,右后腿负重锻炼造成负重损伤,给药组每日给予四环素(35～40mg/kg)灌胃,其他2组给予等量生理盐水。②观察指标:4周后通过大体形态观察了解股骨内髁关节面的病理改变;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色结果观察蛋白多糖和胶原等基质含量;并检测软骨基质金属蛋白酶1水平。结果:18只兔进入结果分析。①大体观察结果:模型组出现软骨的退变,给药组较模型组关节退变为轻(P<0.05)。②关节软骨细胞形态和基质变化:模型组出现软骨表层缺损,表中层细胞明显减少,甲苯胺蓝染色明显减退;给药组仅见表层软骨细胞减少甲苯胺蓝染色较模型组深。③软骨基质金属蛋白酶1水平:假手术组呈阴性表达,给药组阳性表达率低于模型组[(63±6)%,(82±4)%,P<0.01]。结论:四环素可减轻兔膝骨关节炎负重模型的关节退行变性,减少软骨破坏和软骨基质丢失,其作用可能与四环素控制软骨基质金属蛋白酶1表达增高有关。     

阳和汤对兔膝骨关节炎木瓜蛋白酶模型IL-1、TNF-α的影响

目的:观察阳和汤对兔膝骨关节炎模型中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨阳和汤防治骨关节炎的作用机制。方法:选取4～6月龄健康新西兰兔32只,雌雄各半,体质量(2.25±0.25)kg;采用随机数字表法分为对照组、模型组、阳和汤组、筋骨痛消丸组,每组8只。适应性饲养2周后,除对照组外,其余3组均采用关节腔内注入木瓜蛋白酶复制膝骨关节炎兔模型:轻度弯曲兔膝关节,经关节正中或两侧进针,将1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.5 mL通过髌上韧带注入膝关节腔,每隔3天注射1次,连续3次。对照组与模型组予0.9%生理盐水灌胃;阳和汤组予6 g/(kg·d)阳和汤灌胃;筋骨痛消丸组予6 g/(kg·d)筋骨痛消丸灌胃。以上干预均1次/d,每周7次,共干预5周。停药1周后,处死全部实验动物,取兔股骨内髁关节软骨,采用肉眼、光镜下进一步观察苏木素-伊红染色后的关节软骨组织形态学改变情况;采用改良Mankin's评分标准评价软骨退变程度;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清和关节液中IL-1、TNF-α含量。结果:与对照组比较,模型组兔的软骨表面凹凸不平、局部缺损,软骨形态结构紊乱,软骨细胞数量减少,潮线紊乱消失,Mankin's评分增高,血清和关节液中IL-1、TNF-α含量增高,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,阳和汤组、筋骨痛消丸组兔的软骨缺损减轻,软骨形态结构较整齐,软骨细胞数量增多,潮线清晰,Mankin's评分降低,血清和关节液中IL-1、TNF-α含量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与筋骨痛消丸组比较,阳和汤组兔的软骨形态结构未见明显区别,血清和关节液中IL-1、TNF-α含量无明显区别,差异无统计学意义(P0.05)。结论:阳和汤对骨关节炎的软骨损伤具有修复作用,能有效延缓关节软骨退变,其作用机制可能与抑制IL-1、TNF-α等炎性因子表达有关。     

低频脉冲超声干预膝骨关节炎模型免关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达

背景：研究表明,低频脉冲超声能促进全层关节软骨缺损修复,延缓实验性早期骨关节炎的病变进展。水通道蛋白3存在于关节软骨及滑膜上．并在骨天节炎的发病机制中发挥重要作用。目的：探讨低频脉冲超声对实验性膝骨关节炎兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3表达的影响。方法：成年新西兰兔左后膝关节用管型石膏固定于伸直位制动6周制备实验性兔膝关节骨关节炎模型,造模成功后随机分为两组：实验组予以低频脉冲超声治疗（频率为1MHz,功率为2.0w）,1次/d．15min/次：对照组不接受超声治疗。分别于治疗后2,4,8周,采用免疫组纵化学方法观察兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达。结果与结论：随着造模后时间的延长,各组兔芙节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达均有所增加;与对照组比较,实验组兔哭节软骨及滑膜水通道蛋白3表达明显降低（P〈0.01）。说明低频脉冲超声能降低实验性兔膝骨关节炎关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达,从而缓解关节肿胀,延缓软骨及滑膜的退变,具有软骨及滑膜保护作用。     

电针对实验性兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/Smad1表达的影响

目的:观察电针(EA)治疗兔膝骨关节炎(KOA)模型关节软骨中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Smad1表达的变化,探讨电针治疗KOA的作用机制。方法:制作兔膝关节炎模型,将建模成功的新西兰兔纳入模型对照组;正常组和模型组行常规饲养,不行治疗;电针组行电针治疗20d。实验结束后,分别观察各组兔行为学评分、右膝关节宽度、软骨大体形态及组织学评分、软骨BMP-2、Smad1免疫组化及实时荧光定量PCR的变化。结果:电针组与模型组在行为学评分、软骨大体形态及组织学评分(Mankin评分)方面差异均无显著性(P0.05),电针组兔右膝关节宽度小于模型组(P0.05)。各组BMP-2免疫组化结果无显著差异,电针组较模型组Smad1蛋白质表达降低。模型组和模型对照组BMP-2 m RNA表达水平较正常组上调,差异无显著性意义(P0.05),模型组Smad1m RNA表达水平较模型对照组和正常组均显著上调(P0.05),电针组BMP-2及Smad1 m RNA表达水平较模型对照组和模型组均显著下调(P0.05)。结论:电针可能通过下调早期兔膝骨关节炎软骨BMP-2/Smad1的表达抑制骨赘形成,延缓膝骨关节炎的病理进程。     

体外冲击波治疗兔膝骨关节炎：白细胞介素1β及基质金属蛋白酶13的表达

背景：白细胞介素1β和基质金属蛋白13能促进软骨细胞的分解代谢,抑制软骨细胞的合成修复能力,引起细胞外基质的降解,在骨关节炎的发生中有十分重要的作用。 目的：观察体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13表达的影响。 方法：将30只新西兰兔随机分为治疗组、模型组、对照组,每组10只。治疗组和模型组均采用改良伸直位固定6周,制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后给予体外冲击波治疗1次,能流密度0.1 mJ/mm2,冲击次数1000次。对照组不作任何处理。各组兔于治疗后4周处死,取膝关节液和关节软骨。苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色法检测各组膝关节病理学形态改变,采用酶联免疫吸附法测定关节液白细胞介素1β水平,免疫组化法检测白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达。 结果与结论：治疗组和模型组关节液白细胞介素1β水平较对照组明显增高（P 〈0.01）,治疗结束后治疗组关节液白细胞介素1β水平较模型组下降（P 〈0.05）。治疗组和模型组软骨组织Mankin评分较对照组明显增高（P〈0.01）,治疗结束后治疗组软骨组织Mankin评分较模型组下降（P〈0.05）。治疗组和模型组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较对照组明显增高（P〈0.01）,治疗结束后治疗组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较模型组下降（P〈0.05）。结果可见体外冲击波能下调膝骨关节炎软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达,促进Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成,从而对膝骨关节炎起防治作用。     

早期非负重康复运动对膝骨关节炎大鼠关节软骨YKL-40表达的影响

目的观察非负重游泳运动对膝骨关节炎大鼠膝关节软骨YKL-40表达的影响,探讨非负重游泳运动防治膝骨关节炎的机制,为临床采用非负重游泳运动防治膝骨关节炎提供理论依据。方法将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、实验Ⅰ组、实验Ⅱ组,每组10只,对照组大鼠不予以任何干预,模型组与实验组大鼠采用木瓜蛋白酶注射法建立膝骨关节炎模型。对实验组进行为期6周的非负重游泳运动后,对所有大鼠膝关节软骨进行肉眼及光镜下观察形态改变并评分、免疫组化法观察YKL-40的表达情况。结果模型组、实验Ⅰ组、实验Ⅱ组大鼠膝关节软骨大体观评分分别为:4.10±0.74,2.90±0.74,2.10±0.57;改良Mankin评分分别为:6.17±0.16,4.69±0.18,2.95±0.15;YKL-40表达的AOD值分别为:0.33±0.02,0.29±0.02,0.26±0.03。三组大鼠膝关节软骨大体观评分、改良Mankin评分、YKL-40表达的AOD值均逐渐降低(P<0.05)。结论早期康复运动可以改变YKL-40在膝骨关节炎大鼠膝关节软骨细胞中的表达,能够延缓膝骨关节炎大鼠膝关节软骨的进一步退变。     

转腺病毒-人骨形态发生蛋白7软骨细胞分泌的透明质酸和Ⅱ型胶原

背景：软骨细胞自身分裂能力不强和去分化现象限制了其在组织工程中的应用。目的：观察腺病毒-骨形态发生蛋白7转染兔软骨细胞后骨形态发生蛋白7的表达及其对软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和透明质酸功能的影响。方法：包装骨形态发生蛋白7腺病毒载体,将其转染至兔第2代软骨细胞。检测骨形态发生蛋白7mRNA及蛋白的表达;检测软骨细胞中Ⅱ型胶原和透明质酸的变化。结果与结论：转染腺病毒-骨形态发生蛋白7后48,72h,RT-PCR和Western blot方法显示软骨细胞表达的骨形态发生蛋白7mRNA和蛋白均明显增加,RT-PCR和ELISA显示软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原和透明质酸也显著增加。说明应用腺病毒可成功将骨形态发生蛋白7转染至兔软骨细胞,并能促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和透明质酸。     

免膝创伤性关节软骨退变与修复的实验研究及康复治疗的临床意义

目的 探讨创伤性关节软骨退变与修复的规律.方法采用 Huleh法建立兔膝关节骨关节炎分期模型,通过特制的兔膝跑跳装置进行模拟训练,同时辅以关节内几丁糖注射,分组对照观察兔膝关节退变的修复过程.结果用药处理组的软骨破损程度明显轻于对照组 ; 而且 12周时,运动用药组的病理改变与其他两组比较,增生修复的软骨细胞增多,特别是增生的软骨表面细胞渐趋柱状排列.结论运动用药组可较单纯用药组更有效地防治关节软骨的退变,运动结合关节内用药更有利于关节功能恢复和关节功能结构的重塑和重建 .     

兔膝创伤性关节软骨退变与修复的实验研究及康复治疗的临床意义

目的探讨创伤性关节软骨退变与修复的规律。方法采用Huleh法建立兔膝关节骨关节炎分期模型,通过特制的兔膝跑跳装置进行模拟训练,同时辅以关节内几丁糖注射,分组对照观察兔膝关节退变的修复过程。结果用药处理组的软骨破损程度明显轻于对照组;而且12周时,运动用药组的病理改变与其他两组比较,增生修复的软骨细胞增多,特别是增生的软骨表面细胞渐趋柱状排列。结论运动用药组可较单纯用药组更有效地防治关节软骨的退变,运动结合关节内用药更有利于关节功能恢复和关节功能结构的重塑和重建。     

低频脉冲超声干预膝骨关节炎模型兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达

背景:研究表明,低频脉冲超声能促进全层关节软骨缺损修复,延缓实验性早期骨关节炎的病变进展。水通道蛋白3存在于关节软骨及滑膜上,并在骨关节炎的发病机制中发挥重要作用。目的:探讨低频脉冲超声对实验性膝骨关节炎兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3表达的影响。方法:成年新西兰兔左后膝关节用管型石膏固定于伸直位制动6周制备实验性兔膝关节骨关节炎模型,造模成功后随机分为两组:实验组予以低频脉冲超声治疗(频率为1MHz,功率为2.0W),1次/d,15min/次;对照组不接受超声治疗。分别于治疗后2,4,8周,采用免疫组织化学方法观察兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达。结果与结论:随着造模后时间的延长,各组兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达均有所增加;与对照组比较,实验组兔关节软骨及滑膜水通道蛋白3表达明显降低(P<0.01)。说明低频脉冲超声能降低实验性兔膝骨关节炎关节软骨及滑膜水通道蛋白3的表达,从而缓解关节肿胀,延缓软骨及滑膜的退变,具有软骨及滑膜保护作用。     

细胞因子与针灸治疗膝骨关节炎：实验与应用

背景：研究表明针灸治疗膝骨关节炎具有一定的效果.目的：详细阐述针灸治疗膝骨关节炎的细胞因子实验研究进展.方法：查阅PubMed、WOK、CNKI、维普、万方等相关数据库,查找关于针灸治疗膝骨关节炎实验研究的文献,对资料进行初审,剔除无关文献,保留与膝骨关节炎相关细胞因子研究文献,排除重复研究及不典型报道.结果与结论：共纳入48篇符合标准文献,包括中文文献31篇,英文文献17篇.经分析得出：与膝关节骨性关节炎相关的细胞因子大体上分为损伤性细胞因子和保护性细胞因子.损伤性细胞因子有基质金属蛋白酶、白细胞介素、肿瘤坏死因子α、前列腺素E2、一氧化氮、软骨寡聚基质蛋白等,保护性细胞因子有骨形态发生蛋白、转化生长因子β、骨保护素、胰岛素样生长因子1、碱性成纤维细胞生长因子等.大量实验研究表明针灸可以降低损伤性细胞因子如基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、前列腺素E2、软骨寡聚基质蛋白、一氧化氮的含量、调节基质金属蛋白酶1/组织金属蛋白酶抑制剂1的比值失衡,提高保护性细胞因子如骨形态发生蛋白、转化生长因子β、骨保护素、胰岛素样生长因子1、碱性成纤维细胞生长因子的含量.从而起到抗炎,防止关节软骨退变,促进软骨组织修复的作用.     

以关节不稳建立的大鼠骨关节炎模型

背景：骨性关节炎是一种复杂的多病因退变性关节疾病。早期进行骨性关节炎的防治尤其重要。但获取足量的适合研究的早期骨性关节炎的人类骨标本十分困难。目的：观察关节不稳方法建立骨关节炎模型大鼠的关节软骨组织学变化。方法：10周龄雄性SD大鼠随机分为2组：实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于术后1,2,4,6,8周取右膝关节标本,行病理组织学检查分析大鼠骨关节炎病程的变化情况。结果与结论：①术后2,4,6,8周,实验组关节软骨退变程度呈现轻度糜烂、溃疡磨损、严重磨损、骨赘形成等病理变化。②术后1,2,4,6,8周,实验组关节软骨评分均明显高于对照组（P〈0．05）。结果显示该实验采用内侧副韧带切断＋内侧半月板切除方法成功建立了大鼠膝关节骨关节炎模型,且造模后4周内的病理、形态学改变类似于人类早期膝关节骨关节炎表现,是研究早期骨关节炎的理想模型。     

“双固一通”温针灸实验性膝骨性关节炎模型兔Bcl-2及Bax蛋白的表达

背景：软骨细胞凋亡在骨性关节炎的发生发展中起到关键作用。目的：观察＂双固一通＂温针灸预防兔膝骨性关节炎过程中对兔膝关节软骨Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法：采用结扎股静脉法建立兔膝骨性关节炎模型,造模后采用＂双固一通＂温针灸法进行干预,针灸穴位包括关元（CV4）、足三里（ST36）、内膝眼（EX-LE4）、犊鼻（ST35）和阳陵泉（GB34）,1次/d,留针20min,连续8周。结果与结论：膝骨性关节炎后,兔的软骨细胞凋亡指数明显升高（P〈0.01）,＂双固一通＂温针灸可降低软骨细胞凋亡指数（P〈0.01）。免疫组织化学染色显示：＂双固一通＂温针灸兔和模型兔关节软骨Bcl-2表达明显增高（P〈0.05）,而＂双固一通＂温针灸兔和正常兔关节软骨Bax的表达明显低于模型兔（P〈0.05）,＂双固一通＂温针灸兔Bcl-2/Bax高于模型兔和正常兔（P〈0.05）。说明＂双固一通＂温针灸可上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达抑制软骨细胞过度凋亡,对兔膝骨性关节炎起防治作用。     

膝类风湿关节炎与骨关节炎的MRI与病理对照研究

目的：对比分析膝类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）与骨关节炎（Osteoarthritis,OA）的MRI和病理表现特点,进一步分析RA的病变机制.方法：收集我院确诊的行全膝关节置换术（Total knee arthroplasty,TKA）并进行组织病理学检查的RA患者12例和OA患者10例,比较二者的MRI表现以及所对应部位组织病理学的表现特点.结果：膝RA及OA组髌股关节、胫股内侧关节软骨病变差异无统计学意义（P＞0.05）,胫股外侧关节软骨病变差异具有显著统计学意义（P＜0.05）,胫股内、外关节软骨下骨病变差异具有统计学意义（P＜0.05）,膝RA及OA组内、外半月板前角、体部、后角病变差异具有显著统计学意义（P＜0.05）.膝RA关节软骨、软骨下骨及半月板病理学发现大量炎细胞浸润、血管增生,OA组仅见软骨纤维化、半月板基质黏液性变性,少见炎细胞、血管增生.结论：RA组膝关节各部分的破坏程度普遍高于OA组,病理学提示可能与血管炎有关.     

原发性膝骨关节病中血清相关生物标志物的表达

背景：近年来随着分子生物学的不断发展,反映关节软骨早期退变等有关病理变化的实验室指标已是研究的热点问题。目的：探讨C-末段交叉连接的Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白在原发性膝骨关节病患者中的临床意义,寻求原发性膝骨关节病特征规律与C-末段交叉连接的Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白的相关性。方法：纳入膝骨关节病组患者70例,健康志愿者18例设为对照组,采用酶联免疫夹心法检测两组血清中C-末段交叉连接的Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白的水平。结果与结论：原发性膝骨关节病患者血清中C-末段交叉连接的Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白均明显高于对照组,进一步深入研究发现在不同的性别、年龄及X射线的变化中均存在显著性差异,不同中医证型中风寒湿痹型患者C-末段交叉连接的Ⅱ型胶原明显低于肝肾亏虚型和气滞血瘀型患者,而软骨寡聚基质蛋白间比较差异无显著性意义。说明C-末段交叉连接的Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白与膝骨关节炎的发生发展有着密切关系,两者联合应用能显著提高诊断的准确性,在膝骨关节炎的发病机制中具有重要的作用,与软骨的退变密切相关,并且可以反映病情、证型等变化。     

兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型的建立

背景：临床发现同时患有骨质疏松症和骨关节炎患者占相当大的比例,而且目前对骨质疏松与骨关节炎相互关系的认识不一致。目的：建立骨关节炎合并骨质疏松症的动物模型。方法：将14只新西兰大白兔随机等分为模型组和正常组。模型组新西兰大白兔行双侧卵巢切除,正常组新西兰大白兔不作任何处理。结果与结论：去除卵巢10周后,模型组大白兔关节软骨出现明显的退变,血清雌二醇、股骨骨密度水平较正常组显著下降（P〈0.01）,而关节软骨Mankin评分比正常组显著增高（P〈0.01）;且软骨Mankin评分与骨密度和血清雌二醇呈负相关,而骨密度与血清雌二醇水平呈正相关,表明实验成功建立了兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型。     

兔髋臼软骨损伤后髋关节发育及髋臼软骨中的骨形态发生蛋白7

背景：研究发现,在灵长类动物尺骨缺损模型中外源性重组人骨形态发生蛋白7能治愈自体骨不能愈合的缺损。目的：观察兔髋臼软骨局部损伤对髋臼发育及髋臼软骨中骨形态发生蛋白7含量的影响。方法：选用4周龄家兔36只,麻醉后暴露左侧髋关节。用刮勺在髋臼 Y 型软骨后上部刮除约1.5 mm×2 mm×0.5 mm髋臼软骨作为实验侧;同时按上述方法暴露兔右侧髋关节,不损伤软骨作为对照侧。术后第4,6,8周分别拍摄骨盆平片观察髋关节发育状况。并且每次处死12只兔并对标本进行大体观察、组织学、免疫组织化学法检测。结果与结论：实验侧术后4,6,8周X射线测定示髋臼逐渐变浅且形态不规则,股骨头变得扁平,出现髋关节半脱位和脱位。苏木精-伊红染色示髋臼软骨缺损区再生填充组织表面微薄层的纤维组织向深层逐渐移行为纤维软骨,软骨增殖层和肥大层软骨细胞失去正常的柱状结构,排列较乱。免疫组织化学检测示随着时间增加,标本中骨形态发生蛋白7染色由呈强阳性渐变淡。对照侧具有典型的关节透明软骨结构。结果提示,髋臼软骨破坏可引起发育性髋关节发育不良表现,并且髋臼软骨破坏区骨形态发生蛋白7含量随时间的延长而减少。     

RhoA/ROCK信号通路在异常应力下关节软骨中的表达

背景：RhoA/ROCK信号通路在活体内关节软骨退变或者骨性关节炎的病理过程中是否发挥着作用,为此设计了该实验。目的：探索RhoA/ROCK信号通路在软骨退变过程中的作用。方法：采用家兔右膝关节伸直位制动模型,对制动2,4,6周及对照组家兔的右膝关节胫骨平台负重面全层软骨进行苏木精-伊红染色、番红O染色及RhoA、ROCK免疫组织化学染色,比较制动前后软骨组织学、病理积分及RhoA、ROCK表达变化情况。结果与结论：随着制动时间的延长,关节软骨退变程度逐渐加重,Mankin评分逐渐增加,且各组评分之间差异有显著性意义（P〈0.05）。免疫组织化学提示RhoA、ROCK表达变化主要集中在切线层及中间层软骨,且二者在关节软骨退变过程中表达变化趋势一致,均为先增多后减少。结果表明,在关节软骨退变过程中,RhoA/ROCK信号通路表达先递增后逐渐降低,RhoA/ROCK信号通路在异常应力所致的关节软骨退变过程中发挥了效应。