川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子a刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景:川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚.目的:观察川芎嗪对肿瘤坏死因子a 刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB 及其相关基因产物白细胞介素6 表达的影响.方法:体外培养HSC-T6 细胞株,取对数生长期的细胞用于实验.实验分为4 组:对照组仅加入细胞;TNF-a 组加入10 μg/LTNF-a;川芎嗪干预组先加入终浓度为10 μg/L 的TNF-a 作用30 min 后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1 000 mg/L;PDTC组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-a 作用30 min 后,再加入终浓度18 μmol/L 的核因子κB 阻断剂PDTC.结果与结论:MTT 结果显示100,200,400,600,1 000 mg/L 的川芎嗪均能抑制HSC-T6 增殖,且呈剂量依赖性.免疫细胞化学染色及Western blot 检测发现10 μg/L 的肿瘤坏死因子a 刺激后,HSC-T6 细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达明显增多(P < 0.01 或P < 0.05),200,400,600 mg/L 的川芎嗪及18 μmol/L 的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子a 刺激后HSC-T6 细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达(P < 0.01),且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显.相关性分析结果显示HSC-T6 细胞结缔组织生长因子和核因子κB 的表达呈正相关(r=0.980,P < 0.01).说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达,抑制肝星状细胞的增殖.     

人牙周膜细胞在羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB环境中的增殖

背景:羧甲基壳聚糖或血小板衍生生长因子均可促进对体外培养人牙周膜细胞的增殖。目的:观察羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB联合应用对体外培养人牙周膜细胞增殖和分化能力的影响。方法:取生长良好的第4或5代人牙周膜细胞,分组培养:对照组(仅含体积分数2%FBS的DMEM培养液)、10μg/L血小板衍生生长因子BB组、100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组、800mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组、100mg/L羧甲基壳聚糖组、800mg/L羧甲基壳聚糖组。结果与结论:①MTT检测:与对照组比较,其余各组均能促进人牙周膜细胞增殖,且100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB、800mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板衍生生长因子BB组细胞增殖高于其他组(P<0.05),100mg/L羧甲基壳聚糖+10μg/L血小板生性生长因子BB促增殖作用最显著(P<0.05)。②细胞周期检测:与MTT检测结果相符。③碱性磷酸酶活性:与对照组比较,除10μg/L血小板衍生生长因子BB组降低外,其余组均增强(P<0.05)。表明羧甲基壳聚糖和血小板衍生生长因子BB联合应用可促进人牙周膜细胞增殖和骨向分化。     

微小RNA-146a影响血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制

背景:微小RNA-146a通过负调控核因子κB信号通路介导免疫细胞和肿瘤细胞的增殖,但是否参与血管平滑肌细胞的增殖或凋亡未见研究报道。目的:观察微小RNA-146a对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:采用脂质体2000将50nmol/L微小RNA-146a反义寡核苷酸转染至大鼠血管平滑肌细胞,以转染错义链及PBS的细胞作为对照。结果与结论:微小RNA-146a反义寡核苷酸转染48h后,血管平滑肌细胞增殖减少(P<0.01)、凋亡增多(P<0.05),细胞的微小RNA-146a水平明显降低(P<0.01),核因子κBp65、增殖细胞核抗原蛋白表达明显降低(P<0.05)。说明微小RNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖,抑制凋亡,其机制与增加核因子κBp65表达有关。     

核因子κB及其抑制蛋白ⅠκBα在成年大鼠坐骨神经许旺细胞的分布

目的观察核因子κB及其抑制蛋白ⅠκBα在成年大鼠坐骨神经许旺细胞的表达,并分析二者之间的关系及意义.方法实验于2005-01/06在重庆工学院生物工程学院及第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成.随机取成年雄性SD大鼠6只,体质量200～250 g.1%戊巴比妥钠(20～40 mg/kg)腹腔麻醉后打开胸腔,用4%多聚甲醛溶液经左心室灌注后,取左侧坐骨神经,采用p65和p50(由p65和p50两个亚基组成的异源二聚体在核因子κB组成中发挥主要功能)及抑制蛋白ⅠκBα的多克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测核因子κB及其抑制蛋白ⅠκBα在正常成年大鼠坐骨神经许旺细胞的表达及分布.结果①p65和p50在坐骨神经许旺细胞胞浆中表达均很弱,胞核中则不表达.②ⅠκBα则在胞浆中有较强的表达,胞核中不表达.结论核因子κB及其抑制蛋白ⅠκBα在正常成年大鼠坐骨神许旺细胞经均有一定程度的表达,在胞浆中前者表达较弱,后者较强,二者在胞核中均不表达.     

核因子κB及其抑制蛋白IκBα在成年大鼠坐骨神经许旺细胞的分布

目的:观察核因子κB及其抑制蛋白IκBα在成年大鼠坐骨神经许旺细胞的表达,并分析二者之间的关系及意义。方法:实验于2005-01/06在重庆工学院生物工程学院及第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。随机取成年雄性SD大鼠6只,体质量200～250g。1%戊巴比妥钠(20～40mg/kg)腹腔麻醉后打开胸腔,用4%多聚甲醛溶液经左心室灌注后,取左侧坐骨神经,采用p65和p50(由p65和p50两个亚基组成的异源二聚体在核因子κB组成中发挥主要功能)及抑制蛋白IκBα的多克隆抗体进行免疫组织化学染色,检测核因子κB及其抑制蛋白IκBα在正常成年大鼠坐骨神经许旺细胞的表达及分布。结果:①p65和p50在坐骨神经许旺细胞胞浆中表达均很弱,胞核中则不表达。②IκBα则在胞浆中有较强的表达,胞核中不表达。结论:核因子κB及其抑制蛋白IκBα在正常成年大鼠坐骨神许旺细胞经均有一定程度的表达,在胞浆中前者表达较弱,后者较强,二者在胞核中均不表达。     

糖基化终末产物对视网膜色素上皮细胞表达NF-κB及VEGF的影响

目的研究糖基化终末产物(AGEs)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达核因子kappaB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法体外培养人RPE细胞,分别加入浓度为50mg/L、100 mg/L、200 mg/L的AGEs,采用免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达,免疫荧光染色观察NF-κB活化情况,应用Western Blot方法检测VEGF的蛋白水平。结果免疫细胞化学染色结果表明,对照组仅少量细胞有VEGF弱阳性表达,AGEs各浓度可见细胞浆黄色或棕黄色着染,随作用浓度的增加其表达逐渐增强。免疫荧光染色显示AGEs各浓度组可见NF-κB p65向细胞核内转移,但未见明显的浓度依赖性。Western Blot检测显示VEGF蛋白在50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L AGEs组比空白组及对照组VEGF含量明显升高(P0.05),200 mg.L-1组较其它组VEGF含量明显升高(P0.01)。结论AGEs能促使人RPE细胞VEGF表达上调,并可促进RPE细胞NF-κB的活化。     

靶向核因子κB p65siRNA促人血管内皮细胞EAhy926的凋亡

背景:作者前期工作已经证实,子宫内膜异位症患者的在位、异位内膜中核因子κBmRNA和蛋白均表达升高,核因子κB参与了子宫内膜异位症细胞黏附、侵袭和血管形成的病理过程.目的:观察RNA干扰技术(RNAi)靶向抑制核因子κB p65基因对人血管内皮细胞(EAhy926)增殖的影响.方法:10 μg/L血管内皮生长因子刺激下培养EAhy926细胞,给予转染核因子κB p65 siRNA,同时设立对照组,分别是阴性对照siRNA转染组、空白脂质体组及正常对照组(不给予其他任何处理),48 h后分别采用Heochst 33342荧光检测法、MTT法及流式细胞仪术检测细胞的增殖抑制与凋亡情况.结果与结论:与正常对照组比较,核因子κB p65 siRNA组的细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P＜0.05);而阴性对照siRNA转染组及空白脂质体组的细胞增殖抑制率及细胞凋亡率则差异无显著意义.结果证实,核因子κB p65 siRNA能显著抑制人血管内皮细胞增殖,促进内皮细胞的凋亡发生.     

核因子κB对血管成形术后平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的影响(英文)

背景:血管壁机械性损伤后的炎症和增殖效应是血管再狭窄的主要原因。核因子κB/Rel家族中的核因子κB在多种细胞类型中表达,激活一系列与血管壁病理生理相关的靶基因。目的:探讨核因子κB的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜和单核细胞化学趋化因子的作用。设计:随机对照动物实验。单位:上海交通大学医学院附属瑞金医院心内科。材料:3个月龄雄性SD大鼠126只,350～380g。引物合成和寡核苷酸合成:根据文献及国际互联网cDNA文库检索、设计,由上海生物工程公司合成;寡核苷酸合成:全硫代修饰,由上海生物工程有限公司合成。方法:实验于2001-05/2003-03在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和瑞金医院心血管实验室完成。采用贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,实验选用3～5代血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原和核因子κB蛋白水平。制作大鼠血管球囊损伤模型。SD大鼠随机分为7组,正常组:除球囊损伤外,其余手术操作同其他组相同;反义组;正义组;诱骗组;Scramble组;反义 诱骗组;模型组。每组分为6个时相点(6h,1,3,5,7,14d),每个时相点3只大鼠。检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子1、核因子κB p65和ERK2的表达水平。主要观察指标:①核因子κB p65寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的效应。②核因子κB p65基因表达定位和蛋白合成。③大鼠颈动脉球囊损伤后病理形态学改变。④单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达。⑤免疫组织化学检测球囊损伤后血管壁单核细胞化学趋化因子1的蛋白质表达。⑥Western blot检测球囊损伤后血管壁核因子κB p65,ERK2的蛋白合成。结果:①增殖的平滑肌细胞内增殖标记物增殖细胞核抗原表达增加。②增殖的平滑肌细胞浆、细胞核内均有核因子κB p65的基因表达;核因子κB p65蛋白水平增加。观察核因子κB p65基因表达水平,反义核酸组较对照正义组降低53.66%,诱骗性寡核苷酸组较诱骗对照组降低57.35%,差异均有统计学意义(P<0.05)。③核因子κB反义和诱骗寡核苷酸抑制增殖细胞核抗原表达,较阳性对照组分别降低45.12%,45.05%。④大鼠血管球囊损伤后第5天,正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值显著升高(P<0.05),7d后达到高峰。反义组、诱骗组显著降低内膜与中膜比值,反义 诱骗组较单独应用无统计学意义的降低效应。⑤反转录-聚合酶链反应显示球囊损伤后6h,单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达明显增加,1d后表达减少,3,5,7d单核细胞化学趋化因子1 mRNA持续而明显的表达增强,14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义 诱骗组在各时间点均能减少单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达。⑥Western Blot检测显示血管球囊损伤后6h,核因子κB p65、ERK2蛋白表达微弱,1d后ERK2蛋白表达略增强,核因子κB的蛋白合成明显增强。7d后p65,ERK2的蛋白合成达到高峰。第14天,ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱。反义组、诱骗组、反义 诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论:增殖的平滑肌细胞核因子κB p65基因表达增加,核因子κB调控单核细胞化学趋化因子1的基因表达和蛋白质水平。血管球囊损伤后,血管平滑肌细胞增殖有动态性变化。局部转染核因子κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因表达。     

CXCR4抑制剂AMD3100联合硼替佐米对人淋巴瘤细胞株Ramos增殖、凋亡的影响

目的探讨CXCR4抑制剂AMD3100、硼替佐米对人淋巴瘤细胞株Ramos协同诱导凋亡作用。方法 1检测淋巴瘤患者骨髓单个核细胞中CXCR4及核因子κB(NF-κB)表达水平;2AMD3100、硼替佐米单用以及联合用药分别处理Ramos细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖;利用流式细胞术检测细胞凋亡;Wester blot检测NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1及Caspase-3表达水平。结果 1淋巴瘤患者骨髓单个核细胞中CXCR4、NF-κB表达增高;2AMD3100、硼替佐米作用Ramos细胞后,随着药物浓度的增加,对细胞增殖的抑制作用逐渐增强、凋亡增加,两药具有协同作用(P0.05);3AMD3100、硼替佐米单药组NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl及c-IAP1表达降低,Caspase-3表达升高,联合用药组作用增强。结论 AMD3100、硼替佐米对Ramos细胞的增殖抑制、凋亡促进具有协同作用,其作用机制可能是通过抑制NF-κB、Bcl-2、Bcl-xl、c-IAP1及增强Caspase-3表达。     

吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及Sox10表达的影响

背景：许旺细胞是神经组织工程的种子细胞,但其体外增殖缓慢,难以满足科研与临床对其的需要,而吡咯喹啉醌可以对多种细胞的增殖产生促进作用。目的：观察吡咯喹啉醌对许旺细胞的增殖作用并探讨其对许旺细胞Sox10基因表达的影响。方法：体外培养及纯化大鼠许旺细胞,S-100免疫荧光鉴定许旺细胞;细胞经无血清培养12h后,加入10nmol/L吡咯喹啉醌继续培养24h观察其形态学改变;加入不同浓度（0,1,10,100,1000,10000nmol/L）吡咯喹啉醌于许旺细胞培养24h,利用RT-PCR技术检测Sox10的mRNA表达。结果与结论：吡咯喹啉醌促使许旺细胞发生形态学改变,多数呈束状或并排生长,且细胞数目增多;1~1000nmol/L吡咯喹啉醌可使许旺细胞Sox10mRNA表达增高,100nmol/L时表达最高;10000nmol/L时对Sox10的表达表现为抑制作用（P〈0.05）。     

MTT法检测黄芪和丹参对人乳腺干细胞体外增殖的影响

目的：文献报道黄芪和丹参均可诱导间质干细胞向神经细胞分化。实验以乳腺癌患者乳腺再生为最终目的，通过MTT比色法分析不同剂量黄芪和丹参对体外分离培养的乳腺成体干细胞增殖的影响。 方法：实验于2006—0912007—09在吉林大学公共卫生学院放射生物实验室完成。①对象：女性非家族性乳腺癌癌旁病理证实为正常的乳腺组织取自吉林大学第一医院乳腺外科，共24例，患者年龄29-45岁，对治疗及实验均签署知情同意书。②实验方法：取切除的正常乳腺组织，去除血管及脂肪，剪碎至1．0mm’块，组织块消化培养传代后应用免疫磁珠分离收集MUC^-、ESA^＋标记的细胞，即乳腺成体干细胞，按1×10^8L^-1。密度接种于96孔培养板，无血清培养48h后更换培养基，设立4组：空白对照组不加任何药物；黄芪注射液组分为25，50，100，200mI几4个亚剂量；丹参注射液组分为12．5，25，50，100mL/L 4个亚剂量；黄芪＋丹参复合注射液组分为（25＋12．5），（50＋25），（100＋50），（200＋100）mL/L 4个亚剂量。③实验评估：各组加入对应药物后培养72h，加入5g/L MTT溶液20μL，再加入二甲基亚砜振荡溶解，在酶联免疫检测仪上测定各孔的吸光度值，分析乳腺干细胞的增殖情况。 结果：①乳腺细胞形态观察：乳腺组织原代培养后形成腺上皮细胞和肌上皮细胞。②乳腺干细胞增殖检测：黄芪注射液以50mL/L为界，剂量越小对乳腺成体干细胞的促增殖作用越强（P〈0．01），达200mL/L时产生抑制作用（P〈0．05）。丹参注射液剂量在12．5～100mL/L范围内变动时，均能够促进乳腺成体干细胞的增殖（P〉0．05）。黄芪与丹参复合注射液以（100＋50）mL/L为界，复合剂量越小对乳腺成体干细胞的促增殖作用越强（P〈0．01），且复合用药效果好于单独用药，当剂量达到（200＋100）mL/     

前列腺素E1对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：目前还缺乏前列腺素E1对骨髓间充质干细胞增殖影响的研究。目的：观察前列腺素E1与骨髓间充质干细胞共培养对细胞增殖作用的影响。方法：体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞。取第3代细胞利用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。以每孔1×104数量接种于96孔板,将前列腺素E1分别以O（对照组）,1,2,5,10,20,40,100pg／L的浓度作用骨髓间充质干细胞72h,以CCK-8法检测细胞增殖情况,观察最佳增殖浓度10％的前列腺素E1在不同时间（24,48,72h）对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果与结论：P3代骨髓间充质干细胞表面阳性率CDl1b／c为4．93％,CD29为99．93％,CD45为O．1％,CD90为99．58％,符合骨髓间充质干细胞特征。质量浓度为1,2,5,10,20,40,100t~g／L的前列腺素E1均可以促进骨髓问充质干细胞在体外的增殖,以10pg／L的作用最强。10pg／L前列腺素E1在作用48h后能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖（P〈0．05）,其作用呈一定程度的时间依赖性,72h达最高。     

蛇床子素可促进体外培养神经干细胞的增殖

背景：神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,但正常情况下,神经干细胞数目太少,且大部分处于静息状态,促进其增殖是神经干细胞治疗神经退行性疾病的关键。目的：观察蛇床子素对体外培养的神经干细胞增殖作用的影响,分析其促进增殖能力的作用机制。方法：体外培养神经干细胞,在增殖培养基中培养至第3代,加入不同浓度的蛇床子素（10,50和100μmol/L）作用24 h用CCK-8法检测细胞活力,再培养3,5,7 d后测量神经球半径,用免疫荧光组化法计数Ki67阳性细胞数目;再培养3 d后利用RT-PCR技术检测神经干细胞中Notch 1、Hes 1和Mash 1基因表达的情况。结果与结论：与正常组比较,50,100μmol/L的蛇床子素具有明显促进神经干细胞增殖能力的作用,100μmol/L作用最为显著,可引起Notch 1基因、Hes 1基因上调表达,对Mash 1基因基本无影响,说明蛇床子素对体外培养的神经干细胞具有促进增殖作用,其作用机制可能与激活Notch信号通路上的Notch 1、Hes 1基因有关。     

胶原补片上生长因子释放及对人骨髓干细胞增殖与分化的影响

背景：动物实验证明心肌细胞移植可改善心脏功能,但移植细胞效率较低,为减少移植细胞的流失,构建合适的移植载体与细胞共同移植于受体心脏已成为学界的共识。目的：观察经碳化二亚胺法处理,共价结合生长因子胶原补片上生长因子的释放情况,以及其对人骨髓干细胞增殖与分化的影响。方法：采用碳化二亚胺法将胶原补片激活后,对照组胶原补片直接保存于PBS内,实验组胶原补片继续浸于含有血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的PBS内,使其与生长因子共价结合,检测共价结合于胶原补片上生长因子的量;保存后1 d、3 d、7 d、2周、3周、4周,采用ELISA法检测上清液内血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的含量。将0.5＆#215;106的人骨髓间充质干细胞均匀接种于两组补片上,采用苏木精-伊红染色计数细胞,MTT法及Brdu增殖实验对比补片上的细胞增殖情况;以RT-PCR法检测两组细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况,SMA免疫荧光染色对比两组补片上的细胞分化情况。结果与结论：胶原补片上血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的共价结合率分别为42.4%,24.5%。保存4周内,胶原补片上的血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子均呈现持续、缓慢的释放模式。与单纯胶原补片比较,共价结合生长因子的胶原补片可在体外有效促进人骨髓间充质干细胞的增殖并抑制其分化。     

壳聚糖及其衍生物对肝癌细胞SMMC7721生长的抑制作用

背景：壳聚糖的不同衍生物、不同的分子质量和脱乙酰度对抗肿瘤的作用有所不同。 目的：观察水溶性壳聚糖及其3种衍生物磺化壳聚糖、羧甲基壳聚糖、壳寡糖对肝癌细胞株SMMC7721生长的抑制作用。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2004—01／2006—12在江西省消化疾病研究所完成。 材料：肝癌细胞株SMMC7721由江西省消化疾病研究所传代培养。85．5％脱乙酰度壳寡糖和85％脱乙酰度水溶性壳聚糖为济南海得贝海洋生物工程有限公司产品；88.5％脱乙酰度壳聚糖和羧甲基壳聚糖为上海其胜生物制品有限公司产品。方法：①磺化壳聚糖的制备和鉴定：88．5％脱乙酰度壳聚糖与氯磺酸-甲酰胺磺化试剂制得磺化壳聚糖。由华东理工大学分析测试中心采用红外光谱分析检测。②MTT试验：将对数生长期的SMMC7721肝癌细胞株接种于96孔细胞培养板中，分别加入6个质量浓度（25，50，100，200，400，800mg／L）的水溶性壳聚糖、磺化壳聚糖、羧甲基壳聚糖和壳寡糖，并设空白对照组。常规培养72h后，加MTT溶液，孵育4h后终止培养，加二甲基亚砜，酶标仪测490nm波长A值。重复3次试验，取均值，计算抑制率。 主要观察指标：不同质量浓度壳聚糖及其衍生物对肝癌细胞的生长抑制率。结果：在4种不同壳聚糖及其衍生物中，水溶性壳聚糖和磺化壳聚糖可显著抑制肝癌细胞的生长（P〈0.001），其中以磺化壳聚糖最为显著，二者在质量浓度为50mg／L时就可抑制肝癌细胞的生长，并呈剂量依赖关系，在400mg／L和800mg／L时达到高峰。羧甲基壳聚糖和壳寡糖对肝癌细胞无生长抑制作用（P〉0．05）。 结论：水溶性壳聚糖和磺化壳聚糖对肝癌细胞具有显著的生长抑制作用，羧甲基壳聚糖和壳寡糖对肝癌细胞无生长抑制作用。     

胰岛素样生长因子Ⅰ抑制氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的体外试验

目的：胰岛素样生长因子Ⅰ作为重要的促细胞生长因子之一，其对内皮细胞凋亡影响的报道不多。实验拟验证和探讨胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及可能机制。 方法：实验于2006—12／2007—07在华中科技大学同济医学院协和医院心血管疾病研究所完成。①实验材料及分组处理：取人新鲜脐带（产妇或家属签署知情同意书）分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：胰岛素样生长因子Ⅰ组（1×10^-9mmol／L）、氧化型低密度脂蛋白（200mg／L）＋胰岛素样生长因子Ⅰ组（1×10^-9mmol／L）、氧化型低密度脂蛋白（200mg／L）组、正常对照组。分别在细胞培养24h后加入。②实验评估：采用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活力；DAPI细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化及细胞凋亡率的测定；并进行内皮细胞caspase-3活性的检测。 结果：①氧化型低密度脂蛋白可明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖，胰岛素样生长因子Ⅰ与氧化型低密度脂蛋白共同加入后，细胞增殖率明显上升（P〈0．05）。②氧化型低密度脂蛋白可诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡，而加入胰岛素样生长因子I刺激后细胞凋亡率降低（P〈0．05）。③caspase-3活性检测表明与对照组相比，氧化型低密度脂蛋白能明显上调caspase-3的表达，而胰岛素样生长因子Ⅰ＋氧化型低密度脂蛋白组caspase-3活性则降低（P〈0．05）。 结论：胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡具有抑制作用，可能与其下调caspase-3蛋白表达有关。     

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞（RSC96）生长的影响。方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数（0,10,15,20,25%）分组。结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为（470.625±2.546）,（4.121±0.026）和（0.172±0.002） ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组（P 0.05）。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时（10%和15%）具有促进RSC96增殖作用,高浓度时（20%和25%）抑制RSC96增殖。     

牙种植体与许旺细胞联合培养时脑源性神经营养因子及神经生长因子mRNA的表达

背景：许旺细胞很可能是促进骨整合种植牙周围神经再生的有效因子。目的：观察许旺细胞与牙种植体复合培养时脑源性神经营养因子与神经生长因子mRNA的表达,分析牙种植体与许旺细胞的相容性。方法：取成年犬发生Wallerian变性的坐骨神经,用酶消化法和差速贴壁法相结合培养许旺细胞,以1×108L^-1浓度接种于喷钛砂酸蚀的牙种植体表面和培养皿。分别在细胞培养的第1,3,6,8,11天,以反转录-聚合酶链反应检测许旺细胞中脑源性神经营养因子与神经生长因子mRNA的表达。结果与结论：许旺细胞与牙种植体复合培养时,脑源性神经营养因子与神经生长因子的表达趋势与许旺细胞单独培养时相同,呈单峰型;但两种基因的表达水平高于许旺细胞单独培养组,且达到表达峰值的时间较早。提示喷钛砂酸蚀表面的牙种植体能够促进许旺细胞的基因表达,两者具有良好的相容性。     

水溶性壳聚糖对体外培养成纤维细胞生长及表型的影响

背景:研究表明壳聚糖可间接促进成纤维细胞的增生和胶原的合成。利用壳聚糖和特定的成纤维细胞一起构建肌腱损伤修复的组织工程材料,以期在促进损伤修复的同时防止粘连。目的:观察水溶性壳聚糖对3T3TK成纤维细胞生长及表型的影响。设计:观察对照实验。单位:九江学院医学院。材料:3T3TK成纤维细胞由中国科学院细胞库提供。水溶性壳聚糖(规格:60目、30CPS,济南海得贝海洋生物工程有限公司),DMEM(低糖)(美国GIBCO公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程研究所),青霉素、链霉素(美国Biosharp公司),胰蛋白酶(北京博大泰克生物基因技术有限责任公司)。方法:实验于2004-11/2006-04在九江学院医学科研中心的系统生物学临床应用实验室(江西省高校重点实验室)完成。①常规培养3T3TK成纤维细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,接种96孔板,共设5组,每组5孔,共25孔,每孔加细胞悬液200μL,培养24h后弃上清,前4组各孔分别加入含不同浓度壳聚糖的DMEM培养液200μL,壳聚糖终浓度分别为1,0.1,0.01,0.001g/L,第5组为阴性对照组,加不含壳聚糖的DMEM培养液,采用CellTilter-GloTM细胞活力测试盒检测不同浓度壳聚糖对成纤维细胞活力的影响。②常规培养细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,接种24孔板,共设4组,前3组每孔分别加入含1,0.1,0.01g/L壳聚糖的DMEM培养液1mL,第4组为阴性对照组。采用羟脯氨酸、碱性磷酸酶试剂盒分别检测细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量。主要观察指标:①水溶性壳聚糖对体外培养成纤维细胞活力影响。②细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量。结果:①细胞活力检测结果:不同浓度壳聚糖组与阴性对照组相比,细胞活力差异均无统计学意义(P>0.05)。②细胞培养上清液的胶原与碱性磷酸酶的含量:1g/L和0.1g/L浓度壳聚糖组细胞培养上清液中的羟脯氨酸含量分别为(7.598±0.770),(8.366±0.308)mg/L,高于阴性对照组[(11.269±0.707)mg/L,P<0.01];胶原含量分别为(56.703±5.748),(62.437±2.301)mg/L,低于阴性对照组[(84.099±5.280)mg/L,P<0.01]。,随壳聚糖浓度的上升,胶原含量下降,呈剂量依赖。与阴性对照组相比,各浓度壳聚糖组细胞培养上清液中碱性磷酸酶活性均无显著差异(P>0.05)。结论:水溶性壳聚糖并不明显抑制3T3TK成纤维细胞的活力,但能使其分泌胶原的量显著减少,提示壳聚糖具有作为肌腱修复的组织工程材料,并抑制肌腱修复中粘连形成的潜力。