慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织蛋白质组的变化

目的:比较慢性间歇性缺氧大鼠与正常大鼠肾脏组织蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织中的差异蛋白表达谱。方法:以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和慢性间歇性缺氧大鼠的肾脏组织蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinum V5.0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与慢性间歇性缺氧相关的差异表达蛋白斑点为112个;经质谱鉴定的4个差异表达的蛋白斑点,慢性间歇性缺氧组量下调的差异点1个,即线粒体ATP合成酶δ亚基;上调的差异点3个,分别为己糖激酶、儿茶酚-O-甲基转移酶、脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1。结论:大鼠肾脏组织慢性间歇性缺氧损伤相关的差异蛋白表达变化可能通过多种途经影响肾脏功能。     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化

背景：肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤。 目的：比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制。 方法：应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15 min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析。 结果与结论：相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白。结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15 min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变。     

苯比芘作用于16HBE气道上皮细胞的蛋白质组学研究

目的应用蛋白质组学方法筛选出苯比芘（BaP）作用过的16HBE气道上皮细胞（处理组）与正常16HBE气道上皮细胞（对照组）的差异表达蛋白质,为阐明BaP对人体气道的致癌机制提供理论依据。方法培养人气道上皮细胞16HBE,并用BaP进行处理,采用双向凝胶电泳（2-DE）分离细胞总蛋白,运用 Image Master 2D Elite 5.0图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果建立双向电泳图谱,找出15个表达量有明显差异的蛋白质点,其中包括转酮醇酶、埃兹蛋白及泛素-蛋白酶体等与肿瘤发病密切相关的蛋白质。结论建立重复性较好16HBE人气道上皮细胞双向电泳图谱,并鉴定出一些与肿瘤发病机制相关的蛋白质,为阐明BaP对人体气道的致癌机制提供理论依据     

5-FU诱导人肝细胞癌MDR的比较蛋白质组学研究

目的 寻找与人肝细胞癌多药耐药相关的蛋白质分子,为进一步研究人肝细胞癌多药耐药机制提供依据.方法 体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞Bel-FU,MTF法检测Bel-FU的多药耐药性,双向凝胶电泳技术分析细胞Bel-7402与Bel-FU之间的差异表达蛋白,经MALDI-TOF/TOF质谱鉴定.Western blot验证2-DE及质谱的检测结果.结果 与Bel-7402比较,Bel-FU中有24个蛋白表达上调,其中包括FAK、TM3、ORP150、CRT、hnRNP K、80K-H protein、EF-1-D、phosphoprotein等,12个蛋白表达下调.Western blot法检测到蛋白FAK、CRT在Bel-FU中高表达,与2-DE结果一致.结论 通过建立人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU的2-DE图谱筛选了多药耐药相关的差异蛋白,为人肝细胞癌MDR的分子机制研究奠定了基础.     

缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞蛋白质组表达变化的初步研究

目的:采用将人肾小管上皮细胞置于缺氧环境中然后复氧的方法模拟缺血再灌注(ischemia reper-fusion,IR)所致肾损伤的发生和发展过程,研究IR对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响。方法:人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)常规培养,随机分为2组,IR组缺氧培养8h,然后复氧培养24h,对照组常规培养,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster2D Platinum V5.0软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与HK-2缺氧复氧诱导的差异表达蛋白斑点为109个;经质谱鉴定的7个差异表达的蛋白斑点包括:核糖体蛋白S2、普通转录因子ⅡH亚基1变体、双链断裂修复蛋白rad-21同源物、富含亮氨酸重复序列蛋白-45、DNA依赖性蛋白激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶Chk1和程序性细胞死亡蛋白-4。结论:IR组与对照组的表达蛋白质组相比较存在明显差异;7个与HK-2缺氧复氧诱导表达改变的蛋白质的功能涉及细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导、抗细胞损伤等,提示IR的发生发展与相应的病理生理过程相关。     

质谱技术分析多发性骨髓瘤患者血清差异蛋白

目的应用双向电泳(2-DE)和质谱技术分析多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的差异表达蛋白,寻找MM特异性蛋白标记物。方法收集MM患者5例、其他血液系统恶性肿瘤患者及正常对照者血清各10例,三组样本等体积混合,去除高丰度白蛋白和IgG,应用2-DE分离3组血清样本,凝胶经银染显色和图像数据分析识别差异蛋白质点,以基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白质点进行鉴定。结果通过凝胶软件分析MM与疾病对照组及正常对照组血清2-DE图谱,共得到51个三倍以上差异蛋白点,对上述差异蛋白进行MALDI-TOF-MS质谱分析,共鉴定出22种阳性蛋白,其中13种蛋白表达上调,包括高表达蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RIO1亚型2、Rab相关蛋白Rab37亚型2、HP蛋白、锌指结构α2糖蛋白等;9种蛋白表达下调,包括α2-HS-糖蛋白、转铁蛋白、多聚素-1等。结论 MM组与疾病对照组和正常对照组间存在差异表达的蛋白质,这些差异蛋白有助于MM早期诊断和鉴别诊断,并为MM发病机制的进一步研究提供线索。     

miR-26a mimics转染人肝癌细胞株HepG2的表达蛋白质组分析

目的: 通过分析microRNA-26a(miR-26a)mimics转染对人肝癌细胞株HepG2 表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性。方法: 常规培养人肝癌细胞株HepG2,经miR-26a mimics转染48 h后进行细胞周期分析,并裂解转染72 h的HepG2细胞提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定。结果: HepG2细胞经miR-26a mimics转染后细胞增殖受到抑制;其蛋白2-DE图谱与对照组比较,差异表达超过2倍的蛋白斑点有11个。其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有8个蛋白斑点为表达下调。质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C 氧化酶5a、细胞周期蛋白E2、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白。 结论: miR-26a可能通过影响上述蛋白分子的表达,直接或间接地调控HepG2肝癌细胞的增殖、分化和死亡,以发挥其抗癌作用。     

失血性休克大鼠血浆蛋白质的差异分析

目的 应用蛋白质双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis, 2-DE) 技术分析在急性重度失血性休克(acute severe hemorrhagic shock, ASHS)条件下大鼠血浆蛋白质组表达的差异.方法 16 只雄性 Wistar大鼠随机分成对照组(sham hemorrhage shock, SHS)和ASHS模型组,每组8只.采用股动脉放血的方法制备模型,在规定时间内处死大鼠并收集血浆,去除血浆中的高丰度蛋白后进行 2-DE,运用 Image Master 2D Platinum v 5.0 凝胶图像分析软件对 2-DE 凝胶图像进行差异表达分析,有意义的差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行肽质量指纹图谱分析,借助Swiss-prot 数据库进行蛋白质搜索和鉴定.结果 SHS 组和 ASHS 组肝脏的 2-DE 图谱分别平均识别到(570.0±0.9)和(578.0±1.4)个蛋白质点,SHS 组和 ASHS 组肝脏间平均匹配率达 83.6 %～86.2 %,共发现 8 个差异有意义的蛋白质点,鉴定出了白蛋白、甲状腺激素结合蛋白-D 链蛋白和信号素-3D 前体等 3 种蛋白质.结论 以 2-DE 技术得到重复性和分辨率都较好的 2-DE 图谱,并初步鉴定急性重度失血性休克后大鼠血浆去除高丰度蛋白后的差异表达蛋白质,为深入研究失血性休克的生理病理机制及寻找失血性休克预防和治疗的生物标志物提供了依据.     

HCV患者外周血单个核细胞蛋白质表达质谱分析

目的:应用比较蛋白质组学的方法分析丙型肝炎患者外周血单个核细胞蛋白质表达模式的变化及寻找丙型肝炎相关生物标记分子,进一步识别鉴定其差异表达蛋白质,分析其对丙型肝炎慢性化机制的意义.方法:应用固相化pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)分离健康者(10)及HCV患者(28)PBMC的总蛋白质,凝胶银染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质指纹图谱,通过SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质.结果:得到两张2-DE图谱,HCV患者及健康者PBMC凝胶的蛋白质点数分别为625及614;初步筛选出HCV患者与健康者存在明显差异的12个蛋白点,经质谱分析,初步鉴定了10种蛋白质.这些差异蛋白质包括病毒蛋白、蛋白质合成与分解、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号转导相关蛋白质.结论:应用2-DE及MALDI-TOF-MS方法建立了HCV患者PBMC双向凝胶电泳图谱,分离并初步鉴定了10种与HCV感染相关的差异表达的蛋白质,为研究HCV慢性化相关机制提供新的线索.     

人肺癌单克隆抗体的制备及其抗原分子的鉴定

用人肺癌细胞株A549的细胞膜蛋白作为免疫原,采用杂交瘤技术成功制备了抗人肺癌细胞单克隆抗体McAb4E7,并利用双向电泳、免疫印迹杂交、肽指纹图谱和MALDI-TOF-MS串连质谱分析鉴定其相关抗原分子,发现其相关抗原在人肺癌细胞株A549及人肝癌细胞株HepG2中有表达,且在A549细胞中表达量较高。最后得到一个在A549细胞中表达的与单克隆抗体McAb4E7特异性结合的蛋白,并鉴定出这个蛋白是ATP合成酶β亚基,从而证明了ATP合成酶β亚基就是肺癌单克隆抗体McAb4E7的靶抗原,其可作为肺癌具有潜在治疗意义的靶点。     

缺氧后处理诱导大鼠心肌细胞蛋白质差异表达

目的研究缺氧后处理（hypoxic postconditioning,H-postC）与缺氧／复氧（hypoxia／reoxygenation,H／R）诱导的大鼠心肌细胞蛋白质差异表达,旨在从内源性蛋白表达变化的角度阐明后处理保护的分子机制。方法原代培养Sprague-Dawley（SD）乳鼠心肌细胞随机分为3组（均n=4）：（1）缺氧／复氧（H／R）组：将细胞置于缺氧仓内,通入95％N2-5％CO2混合气2h后,37℃常氧孵育24h;（2）缺氧后处理（H-postC）组：细胞置于缺氧仓内2h,复氧10mitt／缺氧20rain,反复2次,37℃常氧孵育24h;（3）对照组（control）：细胞置于CO2孵箱37℃常氧孵育至实验结束。提取各组心肌细胞蛋白质,经双向电泳分离、考马斯亮蓝染色后扫描分析蛋白质表达变化,选取9个差异显著的蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和NCBInr数据库检索。结果双向电泳可分离（553±31）个蛋白质,点匹配率为80．1％±1．5％。与对照组相比,6种蛋白质在H-postC组表达升高,而在H／R组表达降低;1种蛋白质在H-postC组和H／R组表达均降低,而H-postC组降低更为明显;1种蛋白质在H-postC组和H／R组表达均升高,而H-postC组升高更为明显;1种蛋白质仅在H-postC组表达升高。质谱鉴定的9种蛋白质可分为5类：①保护性伴侣分子：DJ-1蛋白、αB-晶体蛋白、热休克蛋白27;②细胞凋亡调节分子：星型胶质细胞磷蛋白15。非受体6型蛋白酪氨酸磷酸酶;③核糖核蛋白复合体组分：不均质核内核糖核蛋白K;④线粒体能量代谓十相关分子：线粒体ATP合酶D链、细胞色素C氧化酶亚单位VIa;⑤细胞骨架蛋白：β-肌动蛋白。结论H-postC可能通过上调保护性分子伴侣、调节细胞凋亡相关的信号分子、稳定核糖核蛋白复合体结构、维持线粒体功能活性、稳定细胞骨架而发挥心肌保护作用。     

下调X连锁调亡抑制蛋白基因表达增强多西他赛诱导膀胱癌细胞凋亡的作用

目的: 观察人源性膀胱癌细胞在下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达后,多西他赛对其敏感性的影响。方法: 以shRNA和shRNA-XIAP质粒分别稳定转染人源性膀胱癌T24T细胞。以荧光显微镜观察转染细胞。以RT-PCR和Western blotting法分别检测膀胱癌细胞XIAP mRNA和蛋白的表达。与T24T以及转染空载体的T24T细胞相比较,以ATPase法检测多西他赛对转染 XIAP 基因的膀胱癌细胞的细胞毒性。相差显微镜下观察,流式细胞术检测多西他赛预处理转染 XIAP 基因的膀胱癌细胞的凋亡率;以Western blotting法检测细胞内的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和caspase-3蛋白表达和裂解水平。结果: 荧光显微镜下分别观察shRNA和shRNA-XIAP转染的T24T细胞,均见稳定荧光。Western blotting和RT-PCR检测结果显示,人源性膀胱癌T24T细胞在稳定转染反义XIAP基因后,其XIAP蛋白和mRNA水平均显著降低。经多西他赛处理24 h后, 转染反义XIAP基因的T24T细胞IC₅₀为(1.23±0.62)nmol/L,远低于T24T以及转染空白载体的对照组细胞 。流式细胞术检测结果显示, T24T shRNA-XIAP细胞组(2 nmol/L和5 nmol/L)凋亡率 显著高于转染空载体细胞的凋亡率 。与转染空载体的细胞相比较,T24T shRNA-XIAP细胞内的PARP和caspase-3明显降低。结论: 下调膀胱癌细胞的XIAP基因表达后,可显著增强化疗药物多西他赛所诱导的膀胱癌细胞的凋亡,并增强多西化赛的细胞毒性。     

CAS基因在原发性肝癌组织中的表达及其与HBV感染的关系

目的 探讨细胞凋亡易感基因(CAS)可否作为肝癌的病理诊断标志物,以及肝细胞癌中CAS蛋白的表达与HBV感染之间的关系.方法 应用免疫组化法检测肝癌、癌旁组织及未发生肿瘤的肝硬化、肝炎组织中CAS蛋白的表达情况,同时应用免疫组化法、核酸原位杂交法检测HBV感染的肝细胞癌组织、癌旁组织中HBsAg、HBcAg以及HBV DNA的表达情况,分析肝细胞癌中CAS蛋白的表达与HBV感染之间的关系.结果 CAS蛋白在肝癌组织中的表达较癌旁组织明显升高(P＜0.01),而癌旁组织中CAS蛋白表达较未发生肿瘤的肝硬化、肝炎组织显著增强(P＜0.01).低分化型肿瘤细胞的CAS蛋白表达明显高于中分化型和高分化型(P＜0.01).CAS蛋白在HBV感染的肝细胞癌组织中的表达明显高于非HBV感染的癌组织(P＜0.01),其中HBV DNA阳性的肝细胞癌组织中CAS蛋白表达水平显著高于HBV DNA阴性的肝细胞癌组织(P＜0.05).结论 CAS蛋白在肝细胞癌组织中呈高表达,肝细胞癌分化愈低其表达愈强,表明CAS蛋白可作为肝细胞癌的病理诊断与分化程度的评价标志物.并推测HBV DNA可能通过上调CAS的表达,在HBV感染相关性肝癌的发生发展过程中发挥重要的作用.     

新的HCC血清标志物GP73在HCC中的表达及临床价值研究

目的研究新的原发性肝细胞癌（HCC）血清标志物高尔基体蛋白73（GP73）在HCC血清中的表达及临床价值。方法选取确诊为HCC者40例为HCC组;肝炎患者及肝硬化患者120例为肝病组;健康体检者120例为健康组。用双抗体夹心ELISA法检测三组血清GP73浓度;同时检测甲胎蛋白（AFP）及d．L．岩藻糖苷酶（AFU）作对比研究。结果HCC组血清中GP73的表达水平为（399．17±264．43）ng／ml,显著高于肝病组的（105．12±67．79）ng／ml和健康组的（66．51±46．2）ng／ml,差异均有统计学意义（P〈0．05）。GP73、AFP、AFU诊断HCC的敏感性分别为89．28％、62．5％和80．7％：特异性分别为87．1％、78．5％和68．7％,GP73敏感性及特异性均高于AFP和AFU。结论GP73是继AFP、AFU之后另一个新的优秀的诊断HCC血清标志物,具有重要临床价值。     

代谢综合征大鼠肝细胞线粒体损伤和mt DNA编码蛋白的表达变化

目的 通过观察代谢综合征(MS)大鼠肝细胞线粒体的损伤性改变及部分线粒体基因(mt DNA)编码蛋白的表达情况,探讨线粒体结构和功能改变的可能机制及其在MS发病中的作用.方法 采用经典的饮食诱导法建立喂养型MS大鼠模型.动态监测大鼠收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)...     

Bax抑制因子1对人妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘滋养细胞凋亡的影响及其机制

目的：探讨Bax 抑制因子1（BI-1）对人妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）胎盘滋养细胞凋亡的影响及其机 制。方法：选取2018 年5 月至2019 年5 月新疆维吾尔自治区人民医院产科住院分娩的ICP 孕产妇15 例为研究对 象,设为ICP 组,另取15 例正常孕产妇作为对照组,免疫组织化学显色检测ICP 组和对照组孕妇胎盘组织BI-1 的 表达;体外培养滋养细胞系HTR8,应用不同浓度（10、50、100 μmol/L）的牛磺胆酸（TCA）进行刺激,RTPCR 及免疫印迹检测HTR8细胞BI-1 mRNA 及蛋白的表达;用过表达BI-1 的慢病毒载体感染HTR8细胞,荧光显 微镜及RT-PCR 检测感染效率后,将细胞分为对照组（NC组）、TCA处理的感染LV-NC 细胞组（TCA+LV-NC 组）、 TCA处理感染LV-BI-1 细胞组（TCA+LV-BI-1 组）;分别用Annexin V-FITC、透射电镜及JC-1 流式线粒体膜电位 检测试剂盒检测3 组滋养细胞凋亡、线粒体超微结构及线粒体膜电位;免疫印迹检测3 组细胞Cyt-C 及凋亡相关 蛋白Bcl-2、Bax 及cleaved caspase-3 的表达。结果：与对照组相比,ICP 组胎盘组织BI-1 表达显著降低;体外实 验结果显示,TCA能够显著降低HTR8细胞BI-1 mRNA及蛋白表达,且呈浓度依赖性;应用慢病毒成功建立过 表达BI-1 的滋养细胞系。与NC组细胞相比,TCA+LV-NC 组与TCA+LV-BI-1 组细胞凋亡率和线粒体损伤水平均 显著增加,线粒体膜电位明显降低;而与TCA+LV-NC 组相比,LV+BI-1 组细胞凋亡率与线粒体损伤水平均明显 降低,线粒体膜电位显著增加;过表达BI-1 能够有效阻止TCA导致的滋养细胞Bcl-2/Bax 比值的降低,以及线粒 体Cyt-C 的释放及cleaved caspase-3 表达的增加。结论：BI-1 在ICP 患者胎盘组织中的表达显著降低,而体外过 表达BI-1 可能通过上调滋养细胞中Bcl-2/Bax 比值,抑制细胞线粒体膜电位降低及结构损伤,从而减少Cyt-C 的 释放,最终降低凋亡蛋白caspase-3 活化而改善TCA诱导的凋亡作用。     

血管内皮生长因子C促进HeLa宫颈癌细胞粘着斑激酶活性的研究

目的探讨粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）介导血管内皮细胞生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF—C）促宫颈癌恶性进展的作用。方法提取不同病理分期的宫颈癌组织标本蛋白．采用Western-blot检测VEGF．C及FAK蛋白的表达情况。在体外培养宫颈癌细胞株HeLa细胞,采用Western—blot测定VEGF—C对FAK蛋白的表达和磷酸化的调控作用。结果随着宫颈癌恶性程度的增高,VEGF-C、FAK蛋白及磷酸化FAK蛋白表达水平均随之增加。与正常宫颈组织比较,宫颈原位癌（CIN）组织中VEGF．C、FAK、磷酸化FAK蛋白表达分别增加了（48±10）％、（78±14）％、（83±15）％,P〈0．05;宫颈鳞癌Ⅰ期各蛋白增高幅度分别为（104±22）％、（121±28）％、（143±30）％（P〈0．01）;宫颈鳞癌Ⅱ期（未放疗、化疗）各蛋白表达增高更为显著,其幅度分别为（195±28）％、（186±22）％、（204±31）％,P〈0．001。在培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞上,VEGF—C（100μg／L）处理24h后,可显著增高FAK蛋白、磷酸化FAK蛋白的表达,该作用可被VEGF—C单克隆抗体明显抑制。结论VEGF—C、FAK蛋白表达与宫颈癌恶性程度密切相关,VEGF—C可能通过上调FAK表扶殛苴磷酪化水平而但讲宫颈癌的熏忡讲犀     

穿心莲内酯对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增值细胞核抗原蛋白表达的影响

目的 探讨穿心莲内酯（AD）对人皮肤基底细胞癌A431细胞生长、凋亡及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。方法 应用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率, Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测细胞PCNA蛋白表达。结果AD呈时间、剂量依赖性抑制A431细胞生长增殖;且同一时间点50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著（P＜0.05）。AD组作用A431细胞24h时,部分细胞核染色质出现典型凋亡形态学改变。不同浓度AD作用A431细胞24h,早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率均随AD浓度升高而逐渐增加,且50mg/L、100mg/L AD组与溶媒对照组相比差异显著（P＜0.05）。AD作用A431 24h细胞内PCNA蛋白随AD浓度升高表达逐渐减少。AD作用A431细胞24h后,线粒体膜电位下降明显,与溶媒对照组相比较,50mg/L、100mg/L AD组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 AD可明显抑制A431细胞生长增殖,其抑制细胞增殖可能与下调PCNA蛋白表达有关。AD能诱导A431细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞线粒体膜电位下降有关。     

干扰长链非编码RNA MNX1-AS1对卵巢癌细胞的干样特性、氧化应激以及线粒体功能损伤的影响

目的：探讨干扰长链非编码RNA（lncRNA） MNX1-AS1对卵巢癌细胞的干样特性、氧化应激以及线粒体 功能损伤的影响。方法：将KOV3 细胞随机分组,进行处理及培养,RT-PCR 检测RNA MNX1-AS1 的表达,筛选 干扰效果最明显的序列;观察干细胞成球情况;免疫印迹检测干细胞标记物蛋白八聚体结合转录因子4（OCT4）、 性别决定区Y 框蛋白（SOX2）和ATP 结合转运蛋白G 超家族成员2（ABCG2）的表达;检测氧化应激标记物丙 二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量;荧光探针检测活性氧（ROS）的含量;流式细胞仪检测线粒体 膜电位的变化;免疫印迹检测B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）/Bcl-2 相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶3（cleaved cas3）/cas3、c-Myc 的表达。结果：3 个序列对比显示MNX1-AS1-shRNA3 干扰组最为显著,选择此组为后续实 验干扰组,分组为对照组、阴性对照组（shRNA-NC）、干扰组（MNX1-AS1-shRNA3）;与对照组相比,MNX1- AS1-shRNA3 干扰组SKOV3 干细胞成球数量、直径减小,干细胞标记物蛋白OCT4、 SOX2、ABCG2 的表达显著 降低,SOD 活性、c-Myc 蛋白表达均显著降低,线粒体损伤标记物蛋白的表达（Bax/Bcl-2、cleaved cas3/cas3）、 MDA与ROS 含量均显著升高,线粒体的膜电位下降。结论：干扰lncRNA MNX1-AS1 诱导卵巢癌细胞的干样特 性降低、氧化应激增强、线粒体损伤加重,干扰lncRNA MNX1-AS1 对SKOV3 细胞抑制效果显著,具有靶向治 疗卵巢癌的潜力。     

实时荧光定量RT-PCR检测肝细胞癌中删基因的表达

目的探讨PTCH基因在肝细胞癌组织中的表达及其与肝癌病理分级的关系。方法提取手术切除18例不同病理分级的人肝癌、癌旁组织和6例胆管结石手术切除的正常肝组织中的总RNA并逆转录为cDNA。应用实时荧光定量RT-PCR法观察人肝细胞癌组织与癌旁组织中PTCH基因的相对表达水平,以及观察人正常肝组织中PTCH基因的表达水平。结果PTCH在所测18例肝细胞癌组织与癌旁组织中均有表达,在6例正常肝组织中不表达，且在病理分级为Ⅰ和Ⅱ级的癌组织中PTCH的mRNA表达水平显著高于癌旁组织（P〈0．01），而在病例分级为Ⅲ级的癌组织中PTCH的mRNA表达水平显著低于癌旁组织（P=0．024）。结论随着肝癌恶性程度的增加PTCH的mRNA表达量呈递减趋势，提示PTCH可能参与了肝细胞的早期癌变过程。