内皮素—1诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达

为研究内皮素－1（ET－1）对培养的人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）I、Ⅲ型胶原合成的影响，应用贴块法培养人胎儿肺动脉平滑细胞，应用免疫细胞化学染色、原位杂交方法检测I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA的表达。结果显示，加入含10^-8mol/L ET-1的培养液培养48h和72h后，HPASMC I、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白表达明显增强。提示ET－1能够诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原合成增加，其调控机制之一是在转录水平下增强了I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。     

低氧诱导肺动脉内皮细胞转分化的初步机制研究

目的观察低氧培养下肺动脉内皮细胞转分化现象及转化生长因子β1（TGF-β1）对内皮细胞转分化的作用机制。方法通过组织贴壁法分离培养的肺动脉内皮细胞,分别在常氧（含21％O2、5％CO2、74％N2混合气体）和低氧（含1％O2、5％CO2、94％N2混合气体）条件下培养1、4、7d,检测细胞形态表型变化和TGF—β1表达水平。不同TGF—β1或其抑制剂SD-208刺激肺动脉内皮细胞,检测平滑肌细胞标准蛋白仅．平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的表达,来判断肺动脉内皮细胞转分化情况。结果低氧培养铺路石样肺动脉内皮细胞逐步向α—SMA高表达的多角形细胞改变,且TGF-β1表达水平明显增高。TGF—β1能刺激肺动脉内皮细胞可出现αSMA表达的增加,SD-208可抑制上述改变。结论低氧可促进肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化;TGF-β1在此讨稃中发挥重萼作用。     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

GLI1介导的巨噬细胞极化调控缺氧性肺动脉高压的作用及机制

目的：探讨神经胶质瘤相关癌基因家族锌指1 (GLI1)对缺氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）发生M1表型转化的作用机制及对肺动脉高压（PH）进展的影响。方法：将15只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、缺氧PH模型组和缺氧PH加GANT61给药处理组,每组5只。小动物超声、右心导管实验检测大鼠PH相关指标,确定GLI1特异性抑制剂GANT61对PH进程的影响。HE染色检测肺动脉壁厚度。免疫组化检测α-SMA及M1型极化标志物TNF-α和IL-1β蛋白表达。免疫荧光检测M1型极化标志物CD86及TNF-α表达。Western blot检测GLI1及NF-κB蛋白表达。qRT-PCR检测M1型极化标志物iNOS、CD86、TNF-α、IL-1β及IL-12 mRNA表达。CHIP-PCR验证GLI1调控NF-κB启动子活性。ELISA检测IL-12含量。CCK-8检测大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。结果：GLI1抑制剂GANT61可缓解缺氧大鼠PH(P<0.05)。与缺氧组相比,抑制GLI1可降低大鼠肺组织TNF-α和IL-1β表达（P<0.05）。细胞实验中,缺氧通过上调G...     

内皮素-1诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达

为研究内皮素 1(ET 1)对培养的人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMC )I、Ⅲ型胶原合成的影响 ,应用贴块法培养人胎儿肺动脉平滑肌细胞 ,应用免疫细胞化学染色、原位杂交方法检测I、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA的表达。结果显示 ,加入含 10 - 8mol LET 1的培养液培养 4 8h和 72h后 ,HPASMCI、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白表达明显增强。提示ET 1能够诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞I、Ⅲ型胶原合成增加 ,其调控机制之一是在转录水平上增强了I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达     

内皮素-1诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA表达

为研究内皮素-1(ET-1)对培养的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,应用贴块法培养人胎儿肺动脉平滑肌细胞,应用免疫细胞化学染色、原位杂交方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其mRNA的表达.结果显示,加入含10-8mol/L ET-1的培养液培养48h和72h后,HPASMC Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白表达明显增强.提示ET-1能够诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,其调控机制之一是在转录水平上增强了Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达.     

胰岛素对高血压大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子A链和转化生长因子β1表达的影响

探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）增生及其长型血小板源生长因子A（PDGF－A）链和转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达的影响。结果发现：（1）胰岛素促进自发型高血压大鼠的血管平滑肌细胞（SHR－VSMC）增生,且呈浓度依赖性;而对正常血压的Wistar-kyota大鼠的血管平滑肌细胞（WKY－VSMC）增生无影响。（2）定量RT－PCR分析显示,胰岛素加强WKY－VSMC的TGFβ1mRNA的表达（P＜0．01）。但是减少SHR－VSMC的TGFβ1mRNA的表达（P＜0．001）。（3）胰岛素对二株系VSMC的长型PDGF－A上对表达水平无影响。结果表明,胰岛素选择性地加强SHR－VSMC的增殖,而对WKY－VSMC的增殖无影响。这可能和胰岛素能上调WKY－VSMC自分泌TGFβ1有关;而在SHR－VSMC,此反馈抑制失常,结果SHR－VSMC加速生长。     

TGFβ1基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响研究

了解 TGFβ1 基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响。用 DOTAP脂质体转染p MAMneo TGFβ1 于原代培养的血管平滑肌细胞 ,经 G4 18筛选 ,TGFβ1 表达经免疫荧光鉴定。原位杂交确定弹性蛋白的表达 ,微管吸吮系统确定平滑肌细胞与基质的黏附力。结果表明生理情况下的平滑肌细胞能表达少量的TGFβ1 及少量的原弹性蛋白。经 G4 18筛选 ,外源性 TGFβ1 在血管平滑肌细胞中稳定表达 ,能显著提高 2～ 3倍原弹性蛋白的表达及细胞与基质的黏附力。说明 TGFβ1 在血管组织工程中具有重要的应用价值     

Smad泛素化调节因子-2及其mRNA在增生性瘢痕组织中的表达

目的研究烧伤后增生性瘢痕组织中Smad泛素化调节因子－2（Smurf2）及其mRNA的表达。方法选取烧伤后增生性瘢痕患者9例,取材于患者整形手术切除的瘢痕,同时取同一患者剩余正常皮肤作为对照。Western blotting方法检测smurf2蛋白水平,RT—PCR检测其mRNA表达;进一步分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞,加入外源件转化生长凶子β1（TGF—β1）刺激,观察Smurf2蛋白和mRNA水平的变化。结果增生性瘢痕组织中Smurf2蛋白水平和mRNA表达显著高于正常皮肤（P〈0．05）,而且,在外源性TGF—β1刺激下,瘢痕成纤维细胞中Smurf2蛋白和mRNA表达呈时间依赖性增加。结论烧伤后增生性搬痕组织中Smurf2及其mRNA表达增强;在TGF—β1刺激下,瘢痕成纤维细胞中Smurf2及儿mRNA表达逐渐增加。     

TGFβl基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响研究

了解TGFβ1基因对血管平滑肌细胞弹性蛋白表达及与基质黏附力的影响。用DOTAP脂质体转染pMAMneoTGFβ1于原代培养的血管平滑肌细胞，经G418筛选，TGFβ1表达经免疫荧光鉴定。原位杂交确定弹性蛋白的表达，微管吸吮系统确定平滑肌细胞与基质的黏附力。结果表明生理情况下的平滑肌细胞能表达少量的TGFβ1及少量的原弹性蛋白。经G418筛选，外源性TGFβ1在血管平滑肌细胞中稳定表达，能显著提高2～3倍原弹性蛋白的表达及细胞与基质的黏附力。说明TGFβ1且在血管组织工程中具有重要的应用价值。     

转化生长因子-β1诱导大鼠毛乳头细胞转分化为成纤维细胞的研究

目的 研究大鼠触须毛乳头细胞在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导作用下转分化为成纤维细胞的可能性,从新的角度探讨增生性瘢痕的形成机制.方法 消化收集第4代毛乳头细胞,处理组以 TGF-β1（10 ng/mL）处理细胞4 d;对照组加入正常培养基（不含胎牛血清的DMEM/F12培养液）,每隔24 h观察两组细胞生长形态及生长方式;分别用实时一步法RT-PCR和流式细胞仪检测细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）的mRNA表达和蛋白表达,Western blotting检测成纤维细胞特异蛋白（FSP1）的表达.结果流式细胞仪检测TGF-β1诱导48 h、72 h后α-SMA表达明显低于对照组（P〈0.01）;TGF-β1诱导48 h、72 h、96 h后Vimentin表达明显高于对照组（P〈0.01）.实时一步法RT-PCR检测Vimentin的mRNA表达逐渐增强,α-SMA的mRNA表达在48 h后明显下降（P〈0.01）,但96 h后表达又有所增加;Western blotting法检测FSP1表达在诱导48 h后逐渐增加（P〈0.01）.结论 毛乳头细胞经TGF-β1诱导后,失去其典型的细胞形态及生长方式,而表现出成纤维细胞的细胞形态及生长方式;其相对特异性标记物α-SMA的表达下降,而成纤维细胞的相对特异性标记物Vimentin和FSP1表达增加.故TGF-β1可诱导大鼠毛乳头细胞转分化为成纤维细胞.     

Smad交互蛋白1在增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响

目的研究Smad交互蛋白1（SIP1）在人增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响。方法收集临床整形手术切取的9例患者增生性瘢痕标本及其自体正常皮肤标本。分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs）,取第3-5代细胞用于实验。（1）免疫组织化学法检测增生性瘢痕组织标本及其自体正常皮肤组织标本中SIP1的表达情况。（2）真核表达质粒pcDNA3.1（＋）/SIP1转染HSFBs。按照随机数字表法将细胞分为6组：对照组;pcDNA3.1（＋）组（空载体组）;pcDNA3.1（＋）/SIP1组;对照＋TGF-β1组;pcDNA3.1（＋）＋TGF-β1组;pcDNA3.1（＋）/SIP1＋TGF-β1组。于转染后第48 h和72 h分别提取细胞总RNA和细胞总蛋白。应用实时荧光定量PCR法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）的mRNA表达水平;采用Western-blotting检测α-SMA的蛋白表达水平。结果 （1）免疫组织化学染色结果显示：增生性瘢痕组织中SIP1表达明显低于自体正常皮肤组织。（2）pcDNA3.1（＋）/SIP1转染HSFBs后纤维化相关因子的表达：①α-SMA的mRNA和蛋白表达水平：与对照组和pcDNA3.1（＋）组相比,pcDNA3.1（＋）/SIP1组在mRNA和蛋白表达水平均显著下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。当细胞给予TGF-β1刺激后,各组α-SMA表达均上调,但pcDNA3.1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA和蛋白表达水仍低于对照＋TGF-β1组,差异有统计学意义（P〈0.05）。②CTGF的mRNA表达水平：与对照组和pcDNA3.1（＋）组相比,pcDNA3.1（＋）/SIP1组在mRNA表达水平显著下调,差异有统计学意义（P〈0.05）。当细胞给予TGF-β1刺激后,各组CTGF表达均显著上调,但pcDNA3.1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA表达水仍低于对照＋TGF-β1组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论与正常皮肤组织相比较,SIP1在增生性瘢痕组织中低表达。SIP1基因转染HSFBs可降低纤维化相关因?     

Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1共转染人退变椎间盘髓核细胞对细胞外基质代谢的影响

目的探讨骨形态发生蛋白腺病毒表达载体（Ad—BMP-2）和转化生长因子-β1腺病毒表达载体（Ad—TGF—β1）共转染人退变椎间盘髓核细胞后对aggrecan和Ⅱ型胶原合成的影响。方法人退变椎间盘髓核细胞体外分离培养至第2代。为检测转入目的基因后蛋白表达情况,将其分为空白对照组、目的基因组和共转染组,细胞分别转染Ad—BMP-2（50MOI）、Ad-TGF-β1（50 MOI）及共转染（各50 MOI）,再用Western blot方法检测转染后细胞目的蛋白的表达;为探讨目的基因对细胞外基质代谢的影响,将研究对象分为空白对照组（A组）、Ad—BMP-2100 MOI（B组）、Ad-TGF—β1100 MOI（C组）、Ad-BMP-2和Ad-TGF—β1各50 MOI（D组）,用ELISA法分别检测转染第3天和第6天细胞上清液中aggrecan和Ⅱ型胶原的蛋白表达量。RT-PCR检测第6天髓核细胞内Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA的表达水平。应用方差分析比较组间差异,以P〈0．05表示差异有统计学意义。结果在转染目的基因载体后,目的蛋白表达增加。在转染后第3天和第6天各转染组细胞培养基中aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组（P〈0．01）,与转染单个基因组相比,共转染组的aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量明显增加（P〈0．01）;并且在转染后第6天共转染组髓核细胞内aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA表达也明显增加（P〈0．01）。结论转染Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1能促进aggrecan和Ⅱ型胶原合成,同时上调aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA的表达;共转染Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1对细胞外基质的mRNA和蛋白合成有协同作用。     

天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞上皮-间质转化中的微RNA表达变化

目的探讨天龙咳喘灵提取物抑制转化生长因子B1（TGF-β1）诱导A549细胞上皮-间质转化（EMT）过程中微RNA（miRNA）的表达变化。方法体外培养A549细胞,TGF—β1刺激A549细胞60min后加入天龙咳喘灵提取物,应用相差显微镜观察A549细胞形态学变化。反转录-PCR、免疫印迹法检测a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）mRNA和蛋白表达。miRNA芯片检测A549细胞EMT前后miRNA表达的变化。结果细胞形态学观察、反转录-PCR及免疫印迹检测均显示,5μg/LTGF-β1可以诱导A549细胞EMT且可以被50mg／L天龙咳喘灵提取物抑制或逆转。miRNA芯片检测显示,与未处理的A549细胞比较,A549细胞EMT后有41种miRNA表达出现显著改变,其中26种表达上调2倍以上,15种表达下调2倍以上;与未处理的A549细胞比较,50mg／L天龙咳喘灵提取物抑制TGF—β1诱导A549细胞EMT后有46种miRNA的表达出现显著变化,其中25种表达上调2倍以上,21种表达下调2倍以上;与TGF-β1诱导A549细胞EMT比较,50mg／L天龙咳喘灵提取物抑制A549细胞EMT时有17种miRNA差异表达,其中13种表达下调2倍以上,4种表达上调2倍以上。结论天龙咳喘灵提取物可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT,并参与调控miRNA的差异表达,可能有助于阻止慢性肺部纤维化疾病的进展。     

不同浓度VEGF对AECII表达SP-B和TGF-β1的影响及意义

目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对肺泡II型细胞（type 2 alveolar epi-thelial cell,AECⅡ）表面活性蛋白-B（surfactant associated protein,SP-B）和转化生长因子-β1（transforming growth fac-tor beta-1,TGF-β1）表达的影响及意义。方法原代培养早产鼠AECII,采用real-time RT-PCR、细胞免疫染色等方法,观察VEGF对AECII SP-B及TGF-β1表达的影响。结果 Real-time PCR结果显示25ng/ml VEGF组与正常组相比SP-B mRNA表达水平明显上升（P〈0.05）。25ng/ml VEGF组与正常组相比TGF-β1 mRNA表达明显下降（P〈0.05）,其他各组与正常组相比无统计学差异（P〉0.05）。结论 VEGF在适宜浓度时有促进SP-B表达的作用,同时有抑制TGF-β1表达的作用,推测VEGF促进SP-B表达的作用与直接或间接抑制TGF-β1的表达有关。     

低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C α mRNA表达的影响

目的：探讨低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C(PKC)αmRNA表达的影响。方法：应用原位杂交技术了大鼠不同节段肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKCαmRNA的分布及低氧对在体和离体肺动脉平滑肌细胞及内皮细胞PKCαmRNA表达的影响。结果：正常大鼠各级肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,腺泡内肺动脉平滑肌细胞中的表达明显高于肌型肺动脉（P＜0．01）,低氧14d和28d肌型动脉和腺泡内肺动脉内皮细胞的表达均明显增高（P＜0．01）,腺泡内腺动脉平滑肌细胞的表达较对照组明显升高（P＜0．01）,低氧14d肌型肺动脉平滑肌细胞表达升高不明显,但低氧28d明显升高（P＜01）,正常条件下离体培养猪肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,低氧1h对其表达无明显影响,48,72h表达明显升高,以72h升高最显著（P＜0．001）,结论：低氧可促进肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKC amRNA 的表达,而以腺泡内肺动脉平滑肌细胞的变化最明显,PCKα在低氧性肺动脉高压的形成中可能起一定作用。     

RAD51相关蛋白1在宫颈癌组织中的表达及通过TGF-β/Smad 通路 参与调控人宫颈癌细胞的增殖和凋亡*

目的：探讨RAD51相关蛋白1（RAD51AP1）通过调节转化生长因子β（TGF-β）/Smad 信号通路对人宫颈 癌细胞（SiHa）增殖和凋亡的影响。方法：收集2018 年7 月至2021 年3 月间南阳市中心医院51 例宫颈癌组织与 癌旁组织标本,免疫组织化学法检测宫颈癌组织RAD51AP1蛋白表达。筛选RAD51AP1高表达宫颈癌细胞系, 体外培养SiHa 细胞,分为对照组、si-RAD51AP1 组（ 转染si-RAD51AP1 质粒）、si-NC 组（ 转染si-NC 质粒）、 抑制剂组（TGF-β/Smad 通路抑制剂LY2109761）、si-RAD51AP1+ 激活剂组（ 转染si-RAD51AP1 质粒+TGF-β/ Smad 通路激活剂人重组TGF-β1）。采用MTT法与平板克隆形成实验检测各组SiHa 细胞增殖;流式细胞术检测 细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测细胞中RAD51AP1、TGF-β1 mRNA 水平;免疫印迹检测细胞中RAD51AP1 蛋白、TGF-β/Smad 通路相关蛋白及增殖、凋亡相关蛋白表达。结果：RAD51AP1在宫颈癌组织与SiHa 细胞系中 均显著高表达;抑制RAD51AP1表达或抑制TGF-β/Smad 通路后,细胞增殖活性、细胞克隆形成率及cyclin D1、 TGF-β1、p-SMAD2、p-SMAD3 蛋白表达水平显著减低,细胞凋亡率、Bax、caspase-3、cleaved caspase 3 蛋白 表达水平显著升高,而抑制RAD51AP1表达基础上使用TGF-β/Smad 通路激活剂后,可部分逆转上述变化。结 论：RAD51AP1在宫颈癌中表达上调,抑制RAD51AP1表达可通过抑制TGF-β/Smad 通路而抑制宫颈癌细胞增殖, 促进细胞凋亡。     

转化生长因子β1对肌成纤维细胞膜型基质金属蛋白酶1的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）对鼠肌成纤维细胞（C2C12细胞）分泌膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）的影响,探讨其内在机制。方法用不同浓度的TGF-β1（0、1、5、10ng/mL）干预C2C12细胞5h,200pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24h,用Western blot和Northern blot方法测定MT1-MMP及其mRNA表达。结果0、1、5、10ng/mLTGF-β1干预C2C12细胞5h,Western blot半定量检测MT1-MMP的结果分别为2.86±0.28、2.05±0.31、1.60±0.21、1.02±0.24,F=224.9,P〈0.01;Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示逐渐变弱。5ng/mLTGF-β1干预C2C12细胞4、12、24h,Western blot半定量检测结果分别为1.02±0.29、0.80±0.21、0.4±0.12,各时间点值比较,均P〈0.05。Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示随时间延长而逐渐变弱。200pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24h,再用5ng/mLTGF-β1干预C2C12细胞5h,半定量Western blot检测结果显示：内对照组0.82±0.12（siRNA-control＋5ng/mLTGF-β1）、空白对照组1.61±0.21（siRNA-control）、实验组1.84±0.23（siRNA-Smad3＋5ng/mLTGF-β1）,内对照组和实验组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;Northern blot定性结果显示：MT1-MMPmRNA表达在实验组和空白对照组较强,而内对照组较弱。结论TGF-β1抑制鼠C2C12细胞分泌MT1-MMP,呈剂量和时间依赖性;siRNA阻断Smad3表达可消除TGF-β1对MT1-MMP的抑制作用。     

Hypoxia decreases expression of soluble guanylate cyclase in cultured rat pulmonary artery smooth muscle cells

Nitric oxide (NO) has an important role in modulating the pulmonary vascular tone. NO acts, in part, by stimulating soluble guanylate cyclase (sGC) to synthesize the intracellular second messenger cyclic GMP. In vascular smooth muscle cells, sGC is a heterodimer composed of alpha1 and beta1 subunits. The objective of this study was to test whether oxygen concentration regulates sGC expression in cultured rat pulmonary artery smooth muscle cells (rPaSMC). rPaSMC were exposed to 0, 3, and 20% oxygen for 1-48 h, and sGC subunit mRNA levels were measured. Compared with rPaSMC exposed to 20% oxygen, sGC alpha1 and beta1 subunit mRNA levels were markedly decreased in rPaSMC exposed to 0% and 3% oxygen. The decrease in sGC subunit mRNA levels in hypoxic rPaSMC was detected as early as 6 h of exposure. Compared with rPaSMC exposed to 20% oxygen, exposure of rPaSMC to 3% oxygen progressively decreased sGC subunit protein levels at 24 and 48 h. There was also a 30% and 50% decrease in sGC enzyme activity in cells exposed to hypoxia for 24 and 48 h (P < 0.05 and P < 0.001, respectively, as compared with cells maintained in normoxia). These results demonstrate that hypoxia decreases sGC expression in cultured pulmonary artery smooth muscle cells and suggest that, in hypoxic vascular smooth muscle, decreased cyclic GMP synthesis may limit the vasodilator response to NO.