人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞分为对照组、谷氨酸损伤组和人参皂甙RD预处理组。对照组细胞正常培养;谷氨酸损伤组细胞置于含10 mmon/L谷氨酸的DMEM培养基中培养24 h;人参皂甙RD预处理组细胞经50μmol/L人参皂甙RD预处理30 min后,再加谷氨酸继续培养24 h。采用噻唑蓝比色法检测细胞活力;按试剂盒检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）释放量;流式细胞仪检测胞内活性氧（ROS）水平;按试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果人参皂甙RD预处理最佳浓度为50μmol/L。与谷氨酸损伤组相比,人参皂甙RD预处理PC12细胞活力明显增高（P〈0.05）,培养液LDH释放量明显降低（P〈0.05）,胞内ROS含量明显降低（P〈0.05）,胞内SOD含量明显增高（P〈0.05）。结论人参皂甙RD预处理可减轻谷氨酸引起的PC12细胞损伤。     

MPP+诱导PC12细胞损伤的蛋白质组学研究

目的研究Mpp~ 作用PC12细胞48h后蛋白质表达谱的改变,进一步在蛋白质水平上阐明帕金森病的发病机制。方法建立Mpp 诱导的PC12细胞帕金森病模型,提取对照组与实验组的细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(Differential Gel Electrophoresis,DIGE)系统构建双向电泳图,DeCyder软件分析蛋白表达差异信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定差异蛋白质。结果与对照组相比,实验组共有32个蛋白点发生变化;鉴定了其中7种结构和功能各异的蛋白。结论本研究鉴定出氧化应激和线粒体损伤相关的蛋白thioredoxin、MPPs,与细胞骨架相关的蛋白NF-L、ezrin,具有分子伴侣活性的蛋白NAC、crystaillin,与免疫炎症相关的蛋白gClqBP。这些蛋白的显著改变可能与PD的发病机制密切相关。     

齐拉西酮对PC12细胞的保护作用

目的探讨齐拉西酮对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导的PC12细胞活性的影响及其可能的机制。方法以NGF诱导后的PC12细胞作为细胞模型,分为不同剂量齐拉西酮组(5μM、10μM、20μM、50μM)和对照组(含5%胎牛血清的DMEM培养基)分别培养24h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测PC12细胞活性,免疫细胞化学观察细胞形态学改变以及蛋白质印迹法(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular single-regulated kinase,pERK)1/2的表达水平。结果仅20μM、10μM齐拉西酮组的PC12细胞活性分别与对照组的差异有统计学意义(P0.05);免疫细胞化学观察同样显示,仅10μM、20μM齐拉西酮组的pERK1/2的表达水平分别与对照组的差异有统计学意义(P0.05),20μM齐拉西酮组与其它齐拉西酮组的差异也均有统计学意义(P0.01)。Western blotting进一步证实了该结果。结论齐拉西酮能提高PC12细胞的活性,并上调pERK1/2的表达。提示齐拉西酮可能通过保护神经元活性发挥作用,而这种作用可能是通过细胞外信号调节激酶途径实现的。     

P38信号通路在Aβ介导的PC12细胞损伤中的作用

目的探讨P38信号通路在Aβ介导的PC12细胞损伤中的作用。方法体外培养PC12细胞,不同浓度的Aβ处理PC12细胞。用MTT法检测Aβ对PC12细胞活力的影响,免疫印迹法检测P38通路活化水平,并观察P38通路抑制剂SB203580对细胞活力的影响。结果 Aβ处理后,PC12细胞活力随Aβ浓度的增高而逐渐下降(P0.05);Aβ处理后P38表达水平从4h开始升高,12h达到高峰,并一直持续到24h;SB203580预处理能够明显抑制P38信号通路活化,并对PC12细胞起到保护作用。结论 P38信号通路活化参与Aβ介导的PC12细胞损伤。     

PC12细胞缺氧后细胞凋亡与DNA损伤相关基因表达关系的研究

目的 探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡与DNA损伤的关系。方法 采用TUNEL法,结合应用流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象,以及DNA损伤相关基因表达的改变。结果 在缺氧0.5h开始出现凋亡细胞,引时P53、P21^waf1/cip1蛋白表达开始增高。至缺氧1h凋亡细胞达高峰,此时P53、P21蛋白表达最高（P＜0.05）。至缺氧6－12h,则以坏死为主,此时以上基因表达均减弱。结论 PC12细胞在缺氧早期（0.5-2h）主要出现以凋亡为主的细胞死亡,伴有DNA损伤相关基因表达的动脉改变,提示缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重、损伤不能及时修复所致。     

莱菔硫烷拮抗PC12细胞氧化应激损伤的机制

目的 探讨莱菔硫烷对体外1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞氧化损伤模型是否具有保护作用及其机制.方法 以MPP+损伤PC12细胞制备氧化损伤模型.不同浓度的莱菔硫烷加入培养基观察各组细胞生长情况.后续实验分成4组:正常对照组(A)、莱菔硫烷组(B)、MPP+损伤组(C)、莱菔硫烷预处理+MPP+损伤组(D).通过MTT比色法检测细胞活力,观察不同浓度莱菔硫烷预处理PC12细胞活力变化及不同分组PC12细胞活力变化;流式细胞术检测不同分组PC12细胞中细胞凋亡率的变化;免疫印迹法测定不同分组PC12细胞内转录因子相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)及醌还原氧化酶1(NQ01)蛋白的表达变化.结果 A组细胞存活率(98.70％)与MPP+(500μmol/L)组(58.16％)相比差异有统计学意义(F =21.83,P＜0.05),D组细胞存活率明显提高.C组细胞凋亡率升高,D组细胞与C组相比差异有统计学意义,莱菔硫烷预处理后细胞凋亡率明显减低.C组Nrf2、HO-1、NQ01蛋白表达下降,D组Nrf2、HO-1、NQ01蛋白表达升高.结论 莱菔硫烷对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,莱菔硫烷对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用可能通过激活Nrf2-抗氧化反应元件通路途径实现.     

槲皮苷对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨槲皮苷对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法 PC12细胞培养后,MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和槲皮苷药物浓度的筛选,将PC12细胞分为对照组、模型组和不同剂量槲皮苷组。用400μmol H2O2刺激PC12神经元细胞使其发生凋亡复制阿尔茨海默病(AD)模型,MTT法检测PC12细胞存活率、硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和DAPI荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变,Western blot方法检测Cytc和caspase-3表达的变化。结果 400μmol H2O2诱导PC12细胞损伤明显,与模型组比较,槲皮苷组PC12细胞存活率显著提高(P<0.01),凋亡率显著下降(P<0.01),LDH释放量和凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达显著减少(P<0.01)。结论槲皮苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达有关。     

雷帕霉素对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨雷帕霉素对PC12细胞氧糖剥夺损伤(oxygen and glucose deprivation,OGD)的作用。方法选取处于对数生长期的PC12细胞,分为正常组、OGD组、溶剂组和1 nmol、10 nmol、100 nmol、500 nmol雷帕霉素组,OGD同时给予雷帕霉素处理,8 h后通过倒置显微镜观察细胞形态学的变化、MTT法检测细胞存活率的变化以及LDH活性检测细胞受损程度。结果与正常组相比,单纯OGD组细胞活性明显下降,且具有统计学意义(P0.05);与溶剂组相比,1、10、100、500 nmol雷帕霉素组细胞存活率均存在不同程度的增高,其中10、100、500 nmol组具有统计学意义(P0.05)。结论雷帕霉素对PC12细胞OGD损伤具有保护作用。     

小檗碱对阿尔茨海默病大鼠模型小胶质细胞活化的影响

目的 研究小檗碱对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型小胶质细胞活化的影响. 方法 18只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组和小檗碱组,每组各6只.后两组通过大鼠双侧海马立体定向注射凝聚态AB40(5 μg/L)建立AD大鼠模型,小檗碱组造模后灌胃给予小檗碱[50mg/(kg·d)]14 d.采用免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法和Western blot法研究小檗碱对小胶质细胞活化标志物CD11b和炎症负调节因子过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)表达的影响.结果模型组和小檗碱组大鼠海马CD11b阳性细胞数(74.0±13.4、121.5±19.9)、CD11b mRNA的相对拷贝数(4.08±2.43、5.52±1.83)较正常组(23.2±6.2、2.54±0.98)明显增加,PPARTγ阳性细胞数(42.5±5.6、31.7±8.7)、PPAR7mRNA的相对拷贝数(16.3±13.5、10.8±7.5)、PPARγ蛋白相对表达量(0.18±0.08、0.09±0.05)较正常组(93.2±11.3、40.6±17.1、0.31±0.111明显减少,比较差异有统计学意义;小檗碱组大鼠较模型组进一步增加海马CD11b阳性细胞数、CD11b mRNA的相对拷贝数和减少PPART阳性细胞数、PPARγ mRNA的相对拷贝数、PPARy蛋白相对表达量. 结论 小檗碱通过抑制PPARy的表达促进AD大鼠模型小胶质细胞的活化.     

Bcl-2家族参与β-淀粉样蛋白对PC12细胞的致凋亡作用

目的：研究bcl一2家族(主要是bcl-xl和bax)基因及相关蛋白是否参与水溶性淀粉样蛋白对培养的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的毒性作用。方法：应用电镜和DNA电泳判断细胞损伤途径，应用RT-PCR，免疫细胞化学和免疫印迹判断bcl-2家族及其相关蛋白是否参与淀粉样蛋白的损伤作用。结果：10μmol／LAβ25-35作用24h后，电镜和DNA电泳均显示Aβ25-35可以导致PCI2细胞凋亡；RT-PCR表明药物作用后6h，bcl-xl mRNA表达量减少而bax mRNA表达量增加；免疫印迹和免疫细胞化学结果显示药物作用后24h，Bax蛋白增加而Bcl-xl无明显改变。结论：水溶性淀粉样蛋白可以导致神经细胞凋亡，bcl-2家族参与了作用环节，对阿尔茨海默病的发病起着重要的作用。     

大蒜素对6-羟多巴胺所致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的研究大蒜素对6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)引起的PC12细胞损害的保护作用和相关机制。方法使用6-OHDA在PC12细胞建立损伤模型,细胞活力、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放和细胞凋亡检测被用于观察大蒜素的保护作用,氧自由基(reactive oxygen species,ROS)和内源性抗氧化酶活性被用于检测其抗氧化活性,蛋白免疫印迹用于检测大电导、钙离子激活的钾离子通道(Large-conductance Ca2+-activated K+channels,BK)蛋白表达并研究可能的相关机制。结果 1大蒜素显著减轻6-OHDA所致的细胞活力下降和LDH释放,并抑制细胞凋亡。2大蒜素显著抑制6-OHDA所致的ROS产生和丙二醛(malondialdehyde,MDA)升高,并增加内源性抗氧化酶的活性。3大蒜素显著增加BK蛋白表达,使用BK阻滞剂paxilline可部分逆转大蒜素的保护作用。结论大蒜素通过激活BK和抗氧化机制对6-OHDA损伤的PC12细胞发挥保护作用。     

H_2O_2预处理抑制α-Synuclein的聚集并减轻Rotenone对PC12细胞的损伤

目的 探讨H_2O_2预处理(HPP)对Rotenone诱导PC12细胞损伤及α-Synuclein聚集的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTF法)、流式细胞仪、免疫印迹(western blot)技术及共聚焦显微镜分别检测细胞活力、细胞凋亡率、α-Synuclein的表达及聚集.结果 H_2O_2预处理能够减少α-Synuclein寡聚体的表达及聚集体的形成,增加PC12细胞活力(Rot组47%±3.67%,HPP+Rot组82%±6.69%),抑制细胞凋亡(Rot组49.68%±4.55%,HPP+Rot组18.73%±5.64%).结论 H_2O_2:预处理能减轻Rotenone对PC12细胞的毒性损伤作用,这种保护作用可能是通过抑制α-Synuclein寡聚体表达实现的.

Abstract：

Objective To explore the effect of hydrogen peroxide preconditioning on the aggregation of α-Synuclein and the injury of PC12 cells induced by rotenone. Methods MTT assay, flow cytometry analysis,western blotting and confocal microscopy were utilized to determine the cell viability, apoptotic ratio of PC12, the expression of α-Synuclein and the formation of α-Synuclein oligomers. Results Hydrogen peroxide preconditioning could down-regulate expression of α-Synuclein oligomers, inhibit the formation of α-Synuclein aggregation,increase cell viability (Rot group 47% ± 3.67% , HPP + Rot group 83.82%±6.69% ) ,and inhibit cell apoptosis ( Rot group 49.68%±4.55% ,HPP + Rot group 18.73%±5.64% ). Conclusion Hydrogen peroxide preconditioning can protect PC12 cells against Rotenone toxicity through downregulating the expression of α-Synuclein oligomers and inhibiting the formation of α-Synuelein aggregation.     

蛋白酶体抑制诱导的PC12细胞帕金森病模型

目的探讨蛋白酶体抑制剂对PC12细胞的作用以及用该药物制作帕金森病(PD)模型的可能性。方法用不同浓度蛋白酶体抑制剂PSI作用于PC12细胞24、48、72 h后,以MTT法检测细胞活性,荧光染色检测凋亡细胞百分率,HE染色观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果不同浓度PSI作用于PC12细胞24 h时,细胞存活率无变化;作用48~72 h时,1~20μmol/L PSI使细胞存活率分别降至47.03%~58.98%和19.58%~34.72%;凋亡细胞由1.15%升至5.27%。HE染色显示经PSI处理的PC12细胞胞浆内有嗜酸性包涵体出现,透射电镜下细胞呈凋亡的超微结构特点。结论PC12细胞蛋白酶体受抑模拟了PD的两大病理特点,蛋白酶体功能异常可能是PD的发病因素之一,短期抑制PC12细胞的蛋白酶体功能可作为PD的细胞模型。     

活化素A对百草枯所诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察重组人活化素A(rhAct)对百草枯所诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:将百草枯、活化素A、Ldeprenyl加入体外培养的PC12细胞中,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力的变化;免疫细胞化学法和RTPCR评价细胞的酪氨酸羟化酶和Bcl2蛋白及mRNA表达水平的变化,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化,比较各组的差异。结果:预先给予活化素A和Ldeprenyl的两组细胞活力明显高于百草枯损害组,酪氨酸羟化酶和Bcl2蛋白及mRNA的表达强于损害组,同时两组的凋亡细胞明显减少,活化素A和Ldeprenyl两组间无显著差异。结论:活化素A和Ldeprenyl通过上调Bcl2的表达,抑制凋亡的发生,而对百草枯所诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

小檗碱对阿尔茨海默病大鼠模型胰岛素降解酶表达的影响

目的 研究小檗碱对AD大鼠模型胰岛素降解酶(IDE)表达的影响.方法 18只SD大鼠采用完全随机数字表法分为正常组、模型组和小檗碱组,每组6只.正常组不做任何处理,模型组及小檗碱组大鼠通过双侧海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40(5 μg)建立AD模型.小檗碱组造模后灌胃给予盐酸小檗碱50mg/kg,1次/d,共14d.采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法观察小檗碱对IDE表达的影响.结果 小檗碱组大鼠IDE mRNA的相对拷贝数(45.70±12.80)较正常组(23.40±11.30)及模型组(34.20±6.70)明显增加,小檗碱组大鼠海马IDE蛋白相对表达量(0.61±0.05)较正常组(0.23±0.03)及模型组(0.46±0.07)明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40可以导致海马部位IDE表达增加,小檗碱可以通过促进IDE的表达而促进Aβ的清除.     

雌激素对MPP+诱导的PC12细胞损伤的防护作用

目的　探讨在离体的细胞培养物中 ,雌激素 (estrogen ,E)对 1 甲基 4 苯基吡啶离子(MPP+ )诱导的帕金森模型是否具有保护作用。方法　以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型 ,将MPP+ 或E加入培养的PC12细胞 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞活性及代谢状态 ,SABC法检测酪氨酸羟化酶 (TH)的含量 ,流式细胞术检测细胞凋亡率 ,比较各组的差异。结果　随MPP+ 浓度增加 ,细胞活性下降 ,MPP+ 浓度为 2 5 0 μmol/L时 ,吸光度A570 值为 0 30± 0 0 7,符合帕金森病细胞模型 ;随E浓度增加 ,细胞活性升高 ,呈量效依赖关系 ;当雌激素浓度 >10nmol/L ,细胞活性无明显增加。单纯用E组A570 值为 0 6 1± 0 17,比空白对照组 (0 4 9± 0 11)、MPP+ 组 (0 30± 0 0 7)、E +MPP+ 组 (0 5 6± 0 16 )细胞活性高 (P <0 0 5 ) ;TH阳性细胞平均吸光度E组 (0 4 6± 0 0 6 )比空白对照组 (0 2 2± 0 0 7)、MPP+ 组 (0 10± 0 0 3)、E +MPP+ 组 (0 2 4± 0 0 4 )高 (P <0 0 5 ) ;凋亡率E组(11 5 % )比对照组 (31 3% )、MPP+ 组 (6 3 5 % )、E +MPP+ 组 (33 6 % )低 (P <0 0 5 ) ,每组细胞数为 2× 10 5个 /ml。E +MPP+ 组比MPP+ 组细胞活性高 ,TH含量高 ,凋亡率低 (P <0 0 5 )。结论　雌激素对PC12细胞可     

蛋白质组学技术鉴定的PC12细胞的细胞骨架蛋白

目的:使用蛋白质组学的技术手段,鉴定大鼠肾上腺皮质细胞瘤细胞系PC12细胞内的细胞骨架蛋白。方法:提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Elite分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)分析,鉴定。结果:用二维电泳技术分离,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出5个PC12细胞的细胞骨架蛋白。结论:PC12细胞蛋白质组中部分细胞骨架蛋白胶图位点的建立,为今后探讨这一类蛋白在神经系统疾病中的作用奠定了基础,并提供了新的侯选治疗靶点。     

重组pIRES-AD7c-NTP质粒的构建表达及其对PC12细胞凋亡的影响

目的构建重组pIRES-AD7c-NTP质粒,探究其对PC12细胞凋亡的影响。方法构建pIRESAD7c-NTP重组质粒,通过脂质体体外转染至PC12细胞内,RT-PCR检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax的mRNA表达变化含量变化。结果成功构建pIRES-AD7c-NTP重组质粒并转染至PC12细胞内;重组质粒转染组出现了明显的细胞凋亡,流式细胞仪检测出典型凋亡峰;重组质粒转染组中bcl-2表达低于对照组,bax表达高于对照组。结论 AD7c-NTP重组质粒转染组PC12细胞内bcl-2/bax表达异常,说明AD7c-NTP增加凋亡促进蛋白的表达、同时减少凋亡抑制蛋白的表达,可见AD7c-NTP可导致神经细胞发生凋亡,为后续研究提供实验基础。     

P^38激酶在PC12细胞缺氧／再给氧损伤中的作用

目的：探讨ＰＣ１２细胞缺氧／再给氧损伤的信号转导机理。方法：培养的ＰＣ１２细胞先缺氧（９５％Ｎ２／５％ＣＯ２）６ｈ,然后重新给氧,预测不同时间点细胞的存活率和ｃａｓｐａｓｅ－３的活性;用ＭＴＴ法测存活率,ｃａｓｐａｓｅ－３检测试剂盒测ｃａｓｐａｓｅ－３活性。用ｐ３８拮抗剂ＳＢ２０３５８０孵育细胞２ｈ,之后缺氧／再给氧,观察ＳＢ２０３５８０对细胞存活率和ｃａｓｐａｓｅ－３活性的影响。结果：ＰＣ１２细胞缺氧／再给氧后ｃａｓｐａｓｅ－３活性的影响。结果：ＰＣ１２细胞缺氧／再给氧后ｃａｓｐａｓｅ－３活性明显增加并使细胞存活率下降,ＳＢ２０３５８０明显降低缺氧／复氧后ｃａｓｐａｓｅ－３的活性并使细胞死亡减少。结论：ＰＣ１２细胞缺氧／再给氧后至少可以通过激活ｐ３８、ｃａｓｐａｓｅ－３信号分子诱导ＰＣ１２细胞死亡。     

姜黄素对PC12细胞蛋白酶体活性的双相作用

目的 研究不同浓度姜黄素(curcumin,Cur)对PC12细胞蛋白酶体活性的影响.方法 用四氮唑盐(MTT)法检测细胞活力、荧光分光光度计检测蛋白酶体糜蛋白酶样水解酶活性.结果 0.5μmol和1.0μmol的姜黄素对PC12细胞活力无影响,5μmol和10μmol的姜黄素使细胞活力分别下降28.6%和48.5%;0.5μmol和1.0μmol的姜黄素使糜蛋白酶样水解酶活性分别增加31%和44% ,而5μmol和10μmol的姜黄素使糜蛋白酶样活性分别下降32%和45%.结论 低浓度姜黄素诱导蛋白酶体活性,可能通过此途径保护多巴胺能神经元.