细胞凋亡与细胞增殖在人肝细胞癌中的表达和意义

目的了解人肝细胞癌中细胞凋亡的形态与分布规律，探索细胞凋亡标记率和增殖标记率与肝细胞癌组织学分级的关系。方法 对２１例人肝细胞癌和１７例慢性肝病分别作ＴＵＮＥＬ标记和ＰＣＮＡ免疫组化检测，采用图像细胞仪作阳性细胞计数。结果 （１）细胞核染色质浓缩，边聚，胞浆嗜酸性变及核周空晕与ＴＵＮＥＬ标记有极好的相关性；（２）凋亡细胞胞多呈弥散分布，以癌坏死区周围多见，包膜浸润处少见；（３）增殖细胞率和凋亡细胞     

经肝动脉化疗栓塞术对肝细胞癌细胞增殖和细胞凋亡的影响

为研究经肝动脉化疗栓塞术 (TACE)对肝细胞癌细胞增殖和细胞凋亡的影响 ,分别采用免疫组织化学方法和 TUNEL方法检测 6 5例肝细胞癌患者术后存档石蜡切片组织中增殖细胞核抗原 (PCNA)与细胞凋亡的表达情况 ,并比较二者检测结果在术前行与未行 TACE两组间有无差异。结果显示 ,术前行 TACE组 (n=18例 )的 PCNA标记指数 (35 .83± 12 .2 3%)显著低于未行 TACE组 (n=47例 ,5 9.92± 2 3.5 7%) ,P<0 .0 5 ;前者的凋亡指数 (17.6 2± 6 .87%)显著高于后者 (9.76± 3.6 4%) ,P<0 .0 5。提示 TACE不仅能抑制肝细胞癌的细胞增殖 ,而且能够诱导细胞凋亡 ,这可能是其发挥作用的重要机制之一。     

Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及意义

目的　Survivin是凋亡抑制蛋白中的一种 ,选择性地表达于恶性肿瘤组织。该文研究Sur vivin基因在原发性肝细胞癌中的表达及生物学意义。方法　收集 2株肝细胞癌细胞株 ,4 0例原发性肝癌组织标本及相应的癌旁组织 ,以Westernblotting法检测Survivin蛋白表达 ;半定量RT PCR法检测SurvivinmRNA表达 ;肝癌细胞凋亡指数采用原位末端标记法检测。结果　 2株肝癌细胞株和 85 % (34例 )的肝癌组织表达Survivin蛋白和mRNA ,而癌旁组织内无一例阳性表达。Survivin蛋白表达的阳性率在肝内转移组为 93.5 % ,显著高于肝内无转移组 (5 5 .6 % ,P <0 .0 5 ) ;在门静脉癌栓浸润组为 92 .8% ,显著高于无门静脉癌栓浸润组 (6 6 .7% ,P <0 .0 5 )。RT PCR显示 ,2株肝癌细胞株和 85 .0 % (34例 )的肝癌组织表达SurvivinmRNA ,与Westernblotting的结果一致 ,SurvivinmRNA的表达水平在肝内转移组 (1.10 5± 0 .396 )和门静脉癌栓浸润组 (1.137± 0 .4 0 4 )中 ,显著高于肝内无转移组 (0 .5 72± 0 .0 82 )和无门静脉癌栓浸润组 (0 .6 2 7± 0 .12 2 ,P <0 .0 5 )。所有肝癌组织标本中均可检测到凋亡细胞 ,但Survivin表达阳性组的凋亡指数 (1.15 2 %± 0 .32 6 % )显著低于Survivin表达阴性组 (4.5 0 2 %± 0 .830 % ,P <0 .0 5     

对正常肝细胞、不典型增生、肝癌和癌旁肝细胞的ICM-DNA定量研究

目的；通过四组肝细胞的DNA含量检测，探索肝细胞癌的恶性证据。方法；采用图像细胞分析术和DNA组织化学染色。结果：不典型增生组和正常肝细胞的DNA指数和DNA倍体等无明显差别，但肝细胞癌组的NDA指数、异倍体非整倍体和DNA含量均高于不典型增生组(P<0．001)，两组的-↑x±s依次分别为1．34±0．43与0.67±0．18、60．44±20．34与17．63±3．93、48．55±14．7与13．13±3．4及12．85±3．45与6．0±0．64pg。肝细胞癌组中的2C、3-4C和5C百分率与不典型增生组也有显著差异(P<0．05～0．001)，其值依次分别为19．17±15．95与83．6±2．50、61．86±12．19与11．53±1．99及14．23±10．7与2．28±1．08。10例癌旁肝细胞组病例中5例DNA指数、非整倍体比例均近似肝细胞癌组。结论：图像细胞分析术的DNA定量检测有助于区别良恶性肝细胞。     

内毒素诱导肝细胞凋亡及肝细胞生长因子的抑制作用观察

目的观察内毒素(LPS)诱导肝细胞凋亡的作用及肝细胞生长因子(HGF)对LPS的拮抗作用。方法HepG2细胞传代培养24 h,分三组。对照组加原培养液,LPS组加含LPS(20μg/ml)的培养液,干预组加含LPS(20μg/ml)、HGF(40 U/L)的培养液．继续培养16 h。Tunel标记法检测细胞凋亡。结果LPS组细胞凋亡率为98．65%±0．64%．干预组为35．97%±0．45%,两组相比,P＜0．01。结论LPS可诱导肝细胞凋亡,HGF可抑制LPS所诱导的肝细胞凋亡。     

mdm2基因表达与肝细胞肝癌侵袭性的关系

以mdm2基固为指标。研究与肝细胞肝癌侵袭性有关的分子机理。应用RT—PCR方法，研究mdm2基固在34例癌组织和19例癌周肝组织中的表达情况及其与肝细胞肝癌侵袭性的关系，结果表明，mdm2基因表达值(均数±标准误)在癌组织中(50．18±5．24％)高于癌周肝组织(27．70±7．43%，P<0．05)，在侵袭性肝癌组(59．09％±7．28%)中高于非侵袭性肝癌组(37．87±6．37％，P<0．05)，而在不同大小肝癌组及不同包膜状况肝癌组中mdm2基因表达值没有显著差别。mdm2基因表达与肝细胞肝癌的侵袭性有关。     

细胞凋亡和p53、bc1-2蛋白在肝细胞癌中的表达

目的：探讨HCC中细胞凋亡情况及其与p53和bcl-2蛋白表达的关系。方法：细胞凋亡采用原位细胞凋亡检测法．p53和bcl-2蛋白表达采用免疫组他方法．细胞凋亡与p53、bcl-2蛋白表达的关系采用双标记法进行检测。结果：70例HCC中。癌组织和癌周组织中细胞凋亡指数(1000个细胞中)分别为3．63士1．96和10．63±3.64，bcI-2和突变型p53置自检出率分别为22．9％和42．9％．bcl-2主要表达在癌周组织中，抑制肝细胞凋亡。而p53则仅表过在癌组织，抑制癌细胞凋亡。双染色显示细胞凋亡与p53或bel-2不同时在一个细胞中表选。结论：HCC癌细胞凋亡减弱一突变型p53蛋白是癌细胞凋亡减弱的主要原因．而be-2则可能在维持HCC的肝脏功能方面具有重要作用。     

氧化苦参碱及甘草酸对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的：研究氧化苦参碱（OM）及甘草酸（GL）对撤除苯巴比妥钠(PB)诱导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法：以肝体重比、肝组织DNA含量、组织学改变及原位凋亡细胞Tunel标记为指标，观察OM150mg/kg及GL50mg/kg，腹腔注射1次／8h．对撤除PB后引起的小鼠肝细胞凋亡的影响，结果：阳性对照组肝体重比及肝DNA含量分别回落16．3％及32．4％；GL组肝体重比及肝DNA含量分别回落16．1％及28．9％；OM组肝体重比及肝DNA含量无明显回落，组织学检查及凋亡细胞Tunel标记示：阳性对照组及GL组肝细胞出现典型凋亡样改变，Tunel标记阳性；阴性对照组及OM组肝组织未见明显凋亡改变。结论：OM可阻断撤除PB诱导的小鼠肝细胞凋亡，GL对其无影响。     

大鼠肝纤维化模型肝细胞凋亡及肝细胞坏死的动态分析

目的　观察肝细胞凋亡和肝细胞坏死在肝纤维化形成过程中的变化 ,探讨其在肝纤维化发病机制中的作用。方法　雄性Wistar大鼠 32只 ( 85～ 95克 )随机分为 4组。A ,B ,C为实验组 ,采用腹腔注射CCl4 的方法造模 ;D为对照组 ,代之以生理盐水。于 2 ,4,6周末分别处死A ,B ,C三组大鼠 ,D组同期处理。取肝脏石蜡包埋 ,连续切片做病理学检查、细胞凋亡原位检测。测定血清ALT。结果　病理学检查A ,B ,C ,D四组分别符合肝纤维化的S1,S3 ,S4 ,S0 期。各实验组 (A ,B ,C)的肝细胞坏死记分值均高于对照组 (D) ( 1 6 7± 0 82 ) ,( 2 83± 0 75 ) ,( 2 5 0± 1 0 5 )vs( 0 16± 0 4 1) ,(P <0 0 1) ,肝细胞凋亡级数也均高于对照组 (D) ( 2 5 0± 0 5 5 ) ,( 2 83± 0 4 1) ,( 2 0 0± 0 6 3)vs( 0 33± 0 5 2 ) ,(P <0 0 1)。各实验组 (A ,B ,C)的ALT均高于对照组 (D) ( 76 83± 2 1 87) ,( 117 0 0±15 94) ,( 10 3 6 7± 36 6 8)vs( 39 16± 2 32 ) ,(P <0 0 5 )。结论　肝细胞凋亡和肝细胞坏死在肝纤维化发生过程中存在动态变化 ,二者在其不同时期发挥的作用不同。     

siRNA干扰纤维蛋白原α链基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

背景：纤维蛋白原（FG）是由肝细胞合成、分泌的糖蛋白。除凝血和纤溶外,FG在细胞增殖、血管发生、肿瘤的发生、进展和转移中亦发挥重要作用。肝细胞癌患者血浆FG水平显著高于健康人。目的：观察以RNA干扰技术抑制FG仅链（FGA）基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建FGAsiRNA干扰质粒,将重组质粒pU6．FGAsiRNA稳定转染入人肝癌细胞株HepG2,同时设置空质粒载体pU6转染组作为对照。以RT－PCR、蛋白质印迹法在mRNA和蛋白质水平验证干扰效果,以CCK－8实验和流式细胞术检测各组HepG2细胞的增殖和凋亡情况。结果：FGAsiRNA转染组HepG2细胞FGAmRNA和蛋白表达明显低于空载体转染组,细胞增殖显著受抑（P〈0．001）,细胞凋亡显著增加（P〈0．001）。结论：RNA干扰技术能有效下调人肝癌细胞的FGA表达,抑制肿瘤细胞生长增殖并促进其凋亡。FGA可能成为肝细胞癌治疗的潜在靶点之一。     

肝细胞凋亡与肝癌癌前病变

目的观察肝细胞癌（HCC）癌分组织与单纯肝硬变二者在肝细胞凋亡的区别，以探讨癌前病变的特性．方法HCC癌旁标本及单纯肝硬变标本分别为24及对例（A及B组），全部作原位末端标记（ISEL），HBsAg免疫组化及HE观察分析ISEL阳性强度分4级，作A、B组比较，卡方统计．结果A组的肝细胞ISEL阳性率及阳性强度均显著高于B组（P＜0．01）．阳性细胞核深棕色，散在分布，以汇管区及纤维隔周边部为多．A组绝大多数属静息性门脉性肝硬变；而B组尚有慢活肝及侵重肝肝硬变炎症B组较A组明显（P＜0．05）．HBsAg阳性率A组89．4％，B组93．7％ISEL阳性与HBsAg、肝细胞活跃增生和肝细胞非典型增生无相关性此外，发现A组中有1例“凋亡性肝硬变”，其ISEL及HE均证明50％的肝细胞有凋亡结论HCC癌旁肝硬变的凋亡发生率明显高于单纯肝硬变者，认为肝细胞凋亡是HCC癌前病变的一种特性，与癌的发生有关．     

Fas基因的RNA抑制抗Alzheimer病细胞凋亡作用的研究

目的探讨Fas基因的RNA抑制对阿尔茨海默病(AD)的抗细胞凋亡作用。方法NGF诱导PC12细胞为类神经细胞。细胞随机分为对照组、模型组、GFP siRNA组;Fas siRNA组。对照组用完全培养液培养,其他三组细胞用Aβ25~35制作AD细胞模型。于制作模型前24 h进行转染。于造模后对Fas、Caspase-3及细胞凋亡率等指标进行检测。结果(1)模型组细胞凋亡率(49.33±18.93)明显高于对照组(4.05±0.67)(P<0.01),Fas siRNA组凋亡率(6.74±1.01)明显低于模型组(P<0.01)。(2)Fas、Caspase-3阳性率:模型组的Fas阳性率(41.65±9.67)、caspase-3阳性率(36.75±9.61)明显高于对照组(9.12±4.18,10.12±3.69)(P<0.01)。Fas siRNA组Fas阳性率(15.46±8.69)、caspase-3阳性率(19.13±6.75)明显低于模型组(P<0.01)。结论针对Fas的siRNA能有效地抑制AD细胞凋亡,对Aβ毒性作用下的神经细胞损伤有一定的保护作用。     

奥曲肽对人肝癌细胞生长增殖、甲胎蛋白合成及细胞凋亡的作用

目的　研究奥曲肽对肝癌细胞生长增殖及细胞凋亡的作用 ,探讨其对肝癌的作用机制 ,为临床应用提供实验依据。方法　采用MTT法、生长曲线观察奥曲肽对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响 ,电化学发光法测定培养上清液中甲胎蛋白 (AFP)含量 ,并用荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果　奥曲肽在 0 .0 0 5～ 80 μg/ml浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制肝癌细胞HepG2的生长增殖 ,并能显著减少肝癌细胞AFP合成。奥曲肽 (0 .2 5～ 4 .0 μg/ml)作用 4 8h后 ,荧光染色与透射电镜可见部分HepG2细胞呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测 ,出现凋亡峰 ,与对照组相比 ,细胞的凋亡率显著升高 (P <0 .0 5 )。结论　奥曲肽能够显著抑制肝癌细胞生长 ,并诱导肝癌细胞凋亡 ,有望成为治疗肝细胞癌的一个有效药物     

门脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的:观察门脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞凋亡及相关基因表达,探讨其对门脉高压症时内脏高动力循环形成的作用。方法:采用原位DNA片断末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学法,检测28例门脉高压症患者脾静脉和12例正常血管的平滑肌细胞凋亡及其相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果:门脉高压症患者脾静脉平滑肌细胞TUNEL-阳性细胞数为(24.3±2.6)％,正常对照组仅为(0.8±0.2)％,差异有显著性意义(P<0.01),Bax与Bcl-2阳性表达率分别为(22.06±3.2)％和(18.61±2.0)％,与对照组均为阴性比较(P<0.01)。结论:门脉高压症患者肝外血管平滑肌细胞可产生凋亡,Bax和Bcl-2蛋白参与血管平滑肌细胞凋亡的调节,凋亡与增殖失衡导致血管结构重塑,促进门脉高压症时内脏高动力循环的形成和发展。     

PCNA LI和AI与脑胶质瘤病理分级的关系

目的探讨增殖指数(LI)和细胞凋亡指数(AI)与脑胶质瘤分级的关系。方法采用免疫组化和Tunel技术分别检测96例脑胶质瘤细胞增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达和细胞凋亡情况．并计算PCNA LI、AI和LI/AI。结果96例胶质瘤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级肿瘤中PCNA L1分别为26．79±3．45、44．32±5．83、83．31±13．67．显著高于正常脑组织(2．67±1．31),P均＜0．05。并且随着肿瘤分级的升高而递增。在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级肿瘤中AI分别为18．92±7．21,10．18±4．25．5．25±1．93,并随分级的升高而递减．Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级肿瘤的AI有显著差异,Ⅲ、Ⅳ级间无差异．PCNA LI与AI呈显著负相关(r=-0．832．P＜0．05)．各级别胶质瘤中PCNA LI/AI与肿瘤病理分级呈显著正相关性(r=0．924．P＜0．01)。结论脑胶质瘤PCNA LI/AI比PCNA LI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。     

肺癌抑癌基因1对HepG2细胞生长的抑制效应

目的探讨肺癌抑癌基因1（TSLC1）对人肝癌细胞株HepG2生长的影响。方法RT-PCR法制备TSLC1全长cDNA并克隆至真核表达载体pCI-neo，稳定转染至肝癌细胞系HepG2中。以转染空质粒pCI-neo的HepG2细胞为对照组，野生型HepG2细胞为空白组，显微镜下观察细胞形态，MTT法检测细胞增殖，FACSort流式细胞仪检测细胞周期，AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡情况。结果实验建立了高表达TSLCI蛋白的稳定细胞株。实验组细胞呈多角形，聚集成团，细胞之间的黏附非常紧密，对照组和空白组细胞呈梭形，细胞与细胞之间较疏散。与对照组和空白组相比，实验组细胞株细胞生长速度减慢，增殖受到明显抑制，G0／G1期细胞为63．66%±3．83％，高于对照组（47．45％±0．91％）和空白组（54．47％±0．96％）；S期细胞数为22．90％±6．04％，低于对照组（36．58％±0．61％）和空白组（33．61％±2．99％），P〈0．01，实验组细胞周期发生了G0/G1期阻滞。实验组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率分别为17．09%±0．20％和16．11％±0．40％，与对照组和空白组细胞相比均明显升高（P〈0．01）。结论TSLC1基因明显抑制HepG2细胞生长，并诱导细胞发生凋亡。     

对正常及大细胞性改变的肝细胞、肝癌和癌旁改变肝细胞ICM-DNA定量研究

目的探索正常肝细胞、大细胞性改变肝细胞、肝癌和癌旁改变肝细胞的DNA含量和形态特点.方法采用DNA组织化学染色和图像细胞分析术.结果10例癌旁改变(PC)组DNA指数(1.99±0.34)分别高于4例正常肝细胞(NH)组(0.98±0.12)和8例肝细胞的大细胞性改变(LCC)组(1.46±0.19)(P＜0.01),DNA倍体分布与NH、LCC和肝细胞癌(HCC)组存在差异(P＜0.05),核面积和核周长(74.0±52.3,63.9±33.9)低于26例HCC组(95.6±95.2,76.3±62.9)(P＜0.01).PC组中80%(8/10)为非整倍体DNA直方图表型,高于HCC组的53%(14/26),而多倍体占20%(2/10)低于HCC组26.92%(7/26)(P＜0.05).PC肝细胞核异型,核质浓缩,胞质嗜酸性或嗜碱性与HCC有过渡,置换性生长方式又与HCC相同.结论呈片块状分布或腺瘤样排列的PC肝细胞,其异常DI、非整倍体分布和DNA直方图表型应作为癌前状态.     

细胞凋亡与肝细胞癌的发生

肿瘤细胞不仅增殖和分化异常,同时细胞凋亡也发生异常,这两方面任一变化,都可能引起肿瘤产生。本文对肝细胞凋亡的过程、生物化学活动及其在肝细胞癌发生中的作用作一综述。     

球囊血管损伤后平滑肌细胞凋亡对内膜增殖的影响

目的检测球囊损伤动脉血管后,平滑肌细胞的凋亡及血管紧张素Ⅱ受体阻断剂对其影响,探讨血管平滑肌细胞增殖机制。方法40只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为1组(对照组):假手术组;2组:手术后7d组;3组:手术后14d组;4组(氯沙坦组):手术+氯沙坦14d组,行球囊血管损伤术。采用原位末端标记法(TUNEL法)及组织学方法结合图像分析,检测各组血管平滑肌细胞凋亡和内膜增生情况。结果TUNEL阳性细胞率,氯沙坦组(41.5±9.7)%明显高于2组(28.3±5.8)%和3组(21.1±8.6)%,差异有显著性(P<0.01)。氯沙坦组内膜增生(38.8±10.1)μm明显轻于3组(93.4±22.2)μm,差异有显著性(P<0.01)。结论血管平滑肌细胞凋亡不足,可能是球囊损伤后血管内膜增殖的机制之一。血管紧张素Ⅱ受体1(AT1)阻断剂氯沙坦能增加血管平滑肌细胞凋亡。     

去氢表雄酮通过Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡和细胞周期阻滞

目的 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期阻滞的作用。方法 应用MTT比色法检测不同浓度（1、10、50、100、200μmol／L）的DHEA或DHEAs与HepG2和HT-29细胞孵育8、24、48、72 h对两种细胞系的生长抑制作用;应用流式细胞术检测不同浓度的DHEA或DHEAs对细胞凋亡及细胞周期的变化;采用Western blot检测细胞内磷酸化Akt（Ser473,Thr308）蛋白的水平。结果 （1）不同浓度DHEA作用细胞24h时,HepG2的存活率24h时分别为92．7％±0．9%、84．7％±1．2％、62．4％±0．8％、49．5％±0．8％和50．7％±0．3％,HT-29细胞的存活率分别为92．5％±0.4％、89．5％±0．7％、80．5％±1．1％、67.5％±1.5％和70．6％±0．6％,与对照组相比,DHEA明显抑制HepG2和HT-29两种细胞的生长。在浓度为100μmol／L作用24 h时作用明显,而DHEAs对HepG2及HT-29细胞的增殖无明显影响。（2）100μmol／L的DHEA显著抑制两种细胞周期进程, HepG2细胞G0／G1期细胞比例显著升高,可以达到68．4％±2．0％,而对照组为48．6％±1．2％。HT-29细胞在100μmol／L时的G0／G1期的比率为90．3％±2．7％,而对照组仅为59．0％±1．2％,S及G2／M期细胞明显减少。（3）100μmol／L DHEA作用24 h时能显著诱导HepG2细胞凋亡（凋亡率为18．6％±2．2％）,而DHEAs却无此作用。（4）HepG2细胞在100μmol／L和200μmol／L DHEA作用24 h后,磷酸化Akt（Thr^308）、磷酸化Akt（Set^473）蛋白表达显著降低,这种作用在应用PI3K抑制剂和PI3K激活剂后分别被增强和消除。结论 DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用。而对于不同的肿瘤细胞系,DHEA可能通过调节Akt的信号通路来诱导细胞凋亡,还可能通过阻滞细胞周期,使其阻滞在G0／G1期。DHEAs对细胞的生长没有明显的作用。