人骨髓间充质千细胞与骨转化羟基磷灰石复合培养研究

目的 观察人骨髓间充质干细胞(Mesen chymal stem cell，MSC)与骨转化羟基磷灰石的复合培养，证实骨转化羟基磷灰石是组织工程良好的载体材料。方法制备骨转化羟基磷灰石，体外培养MSC并材料复合，通过共聚焦显微镜和环境扫描电镜观察MSC与材料的复合情况。结果 MSC可以在材料上贴附、生长、繁殖、分化。结论 骨转化羟基磷灰石是良好的支架材料，易与MSC复合，适合种子细胞的贴附、生长、增殖和分化。     

兔骨髓间充质干细胞与纳米晶胶原基骨修复材料体外构建组织工程骨的实验研究

目的:研究兔骨髓间充质干细胞(marrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs)与纳米晶胶原基骨修复材料(nano-hydroxyapatite/collagen,NHAC)体外复合培养的结合程度,以及构建组织工程骨的可行性.方法:分离兔MSCs体外培养、纯化,取第3代MSCs与NHAC体外复合培养,第5,10 d后扫描电镜(SEM)观察二者复合程度.结果:兔MSCs贴壁生长,增殖速度快,生长曲线符合Logistic生长曲线;兔MSCs与NHAC体外复合培养,在第5,10 d进行扫描电镜观察,发现10 d时粘附于NHAC上的MSCs细胞数(38.52±7.21)明显高于5 d时粘附的细胞数(21.28±4.70),P＜0.01.结论:兔MSCs与NHAC体外复合培养结合程度较高,可以用来构建组织工程骨,为进一步的动物实验奠定基础.     

同种异体兔骨髓间充质干细胞复合纳米晶胶原基骨修复胫骨缺损的实验研究

目的探讨同种异体兔骨髓间充质干细胞（marrow mensenchymal stem cells，MSCs）与纳米晶胶原基骨（nano—hydroxyapatite／collagen，NHAC）修复材料构建的组织工程骨修复兔胫骨缺损的可行性。方法24只新西兰大白兔胫骨中段形成10mm长的骨缺损，右侧骨缺损处植入组织工程骨作为实验组，左侧骨缺损处植入单纯NHAC作为对照组。术后3、6、9、12wk分批处死动物，行一般情况、缺损区大体观察、X线、组织学染色分析等指标检测，行统计学分析，比较各组修复骨缺损的效果。结果24只新西兰大白兔均进入结果分析。①术后一般情况：各组兔术后恢复及进食均正常，伤口无炎症反应，愈合良好。②大体观察：实验组术后6wk骨缺损部分修复，9、12wk骨缺损完全修复，3、6、9、12wk骨缺损修复情况明显好于对照组。③X线：实验组缺损区术后3wk可见有骨痂生长，9wk骨缺损基本修复，对照组术后12wk缺损区基本修复，各观察时间点实验组骨缺损修复情况明显好于对照组。④组织学染色：实验组缺损区新生类骨样组织、编织骨和板状骨出现的时间较对照组早，并且不经软骨介导即可直接成骨，而对照组以“爬行替代”方式修复骨缺损。结论同种异体兔MSCs复合NHAC修复骨缺损的能力较单纯NHAC强且迅速，能够对大段骨缺损进行快速有效的修复。     

同种异体兔骨髓间充质干细胞复合纳米晶胶原基骨修复胫骨缺损的实验研究

目的 探讨同种异体兔骨髓间充质干细胞(marrow mensenchymal stem cells,MSCs)与纳米晶胶原基骨(nano-hydroxyapa-tite/collagen,NHAC)修复材料构建的组织工程骨修复兔胫骨缺损的可行性.方法 24只新西兰大白兔胫骨中段形成10mm长的骨缺损,右侧骨缺损处植入组织工程骨作为实验组,左侧骨缺损处植入单纯NHAC作为对照组.术后3、6、9、12wk分批处死动物,行一般情况、缺损区大体观察、X线、组织学染色分析等指标检测,行统计学分析,比较各组修复骨缺损的效果.结果 24只新西兰大白兔均进入结果分析.①术后一般情况:各组兔术后恢复及进食均正常,伤口无炎症反应,愈合良好.②大体观察:实验组术后6wk骨缺损部分修复,9、12wk骨缺损完全修复,3、6、9、12wk骨缺损修复情况明显好于对照组.③X线:实验组缺损区术后3wk可见有骨痂生长,9wk骨缺损基本修复,对照组术后12wk缺损区基本修复,各观察时间点实验组骨缺损修复情况明显好于对照组.④组织学染色:实验组缺损区新生类骨样组织、编织骨和板状骨出现的时间较对照组早,并且不经软骨介导即可直接成骨,而对照组以"爬行替代"方式修复骨缺损.结论 同种异体兔MSCs复合NHAC修复骨缺损的能力较单纯NHAC强且迅速,能够对大段骨缺损进行快速有效的修复.     

人骨髓间充质干细胞成骨诱导的研究进展

<正>干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下可分化为多种功能细胞,根据发育阶段不同分为胚胎干细胞和成体干细胞。骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)是骨髓基质系统中的一类多能干细胞,具有向中胚层和神经外胚层来源组织细胞分化的能力。BMSCs获取简便,分离培养较容易,移植排斥反应较弱,植入反应较为理想。哺乳动物来源的BMSCs是具有多向分化潜能的成体干细胞,相关研究证实其有强烈的成骨潜     

脱钙骨基质支架构建组织工程骨的实验研究

目的以同种异体骨脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)为支架材料,复合体外诱导培养的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),构建组织工程骨并通过裸鼠皮下异位成骨实验及裸鼠皮下致瘤性实验验证其成骨效果及安全性.方法贴壁法培养hMSCs,体外诱导培养扩增,以1.857×106/ml的密度与DBM复合构建组织工程骨,体外培养,并在扫描电镜下观察细胞与材料复合情况,进行组织学观察.同时进行了裸鼠皮下异位成骨实验.结果细胞与支架复合后3 d,细胞与DBM表面及孔隙可实现良好复合;复合后5 d,扫描电镜观察到细胞基质分泌旺盛,充满支架孔隙.裸鼠皮下成骨实验证明其成骨效果良好.结论以本实验中使用的细胞培养方法扩增、诱导分化的种子细胞生物安全性好,自制的DBM具有良好的生物相容性,可为种子细胞生长提供较好的三维空间,按照标准化工艺流程制备的组织工程骨安全、有效.     

骨髓间充质干细胞成骨性能的实验研究

目的研究骨髓间充质干细咆的生物学特性以及作为组织工程骨种子细胞的特点。方法分离培养兔骨髓间充质干细胞，与纳米晶羟基磷灰石胶原材料于体外联合培养，建立兔桡骨节段性缺损模型，分为空白组（n=8，不植入材料）、对照组（n=8，植入材料）、实验组（n=8，植入复合细咆的材料）。通过大体观察、组织学分析及X线摄片了解成骨情况。结果兔骨髓间充质干细胞在体外可以大量增殖，复合细咆的材料植入16周后，X线摄片可见桡骨缺损处连接良好。结论骨髓间充质干细胞具有很强的成骨作用，是一种较好的组织工程种子细胞。     

大鼠脂肪干细胞复合纳米羟基磷灰石/胶原/L-聚乳酸体内成骨的研究

目的 观察大鼠脂肪干细胞复合纳米羟基磷灰石/胶原/L-聚乳酸成骨的特性.方法 在体外分离、培养大鼠脂肪干细胞(ADMSCs),并接种于纳米羟基磷灰石/胶原/L-聚乳酸(nHAC/PLA)共同成骨诱导培养7 d,将二者的复合体植入大鼠体内4、8、12周,观察成骨情况.倒置相差显微镜、流式细胞仪观察ADMSCs特征;将ADMSCs以含10%新生牛血清、0.1 μmol/L地塞米松、50 μmol/L抗坏血酸、10 mmol/L β-甘油磷酸钠、0.01 μmol/L维生素D3的高糖DMEM培养基进行成骨诱导培养,以Ⅰ型胶原免疫组化染色、碱性磷酸酶活性、RT-PCR检测骨钙素表达,了解其成骨特性;以HE染色法光学显微镜下观察ADMSCs-nHAC/PLA体内成骨的情况.结果 在倒置显微镜下,ADMSCs呈成纤维细胞样长梭形外观;利用流式细胞仪对第5代ADMSCs的表面抗原分子进行检测,95%表达CD29;成骨诱导7 d,ADMSCsⅠ型胶原蛋白免疫组织化学染色阳性,胞浆呈棕黄色;ADMSCs成骨诱导14 d,碱性磷酸酶活性水平逐渐升高;成骨诱导14、21 d,ADMSCs表达骨钙素 mRNA的RT-PCR鉴定显示在280 bp段有一条单一的目的条带.ADMSCs复合nHAC/PLA植入体内 4、8、12 w,见类骨质形成;随着植入时间的延长,类骨质逐渐增加.结论 ADMSCs复合nHAC/PLA具有良好的成骨能力,是骨组织工程较理想的构建方式.     

人骨髓间充质干细胞生物学特性的实验研究

目的建立人骨髓间充质干细胞体外分离、培养体系,并将其向成骨细胞定向诱导分化。方法采用梯度离心法从人骨髓血中提取骨髓间充质干细胞(m esenchym al stem cell,MSC),经体外培养扩增,观察其生物学特性。结果在体外培养条件下,骨髓MSC具有较强的增殖能力,并能被诱导向成骨细胞分化。结论建立了骨髓MSC体外分离、培养的体系,探讨了骨髓MSC的生物学特性,为进一步研究MSC作为骨组织工程的种子细胞打下了基础。     

诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的 明确大鼠骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)在体外全骨髓培养条件下的生物学特性及其向成骨细胞分化的能力,探索更为简便有效的BMSCs体外培养方法.方法 提取大鼠原代BMSCs,用酠EM完全培养基和成骨诱导条件培养基体外培养,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态;台盼蓝活细胞计数绘制细胞生长曲线;ALP检测试剂盒检测ALP含量变化和von Kossa染色检测细胞矿化结节,以判断细胞是否向成骨细胞分化.结果 全骨髓培养法在体外培养的大鼠原代BMSCs贴壁生长,呈梭形或多角形;使用Dex-SaMEM向成骨诱导后的BMSCs具有与成骨细胞在体外培养时相似的特征,倍增时间延长;合成ALP能力显著增强(P<0.05),von Kossa染色出现阳性的棕褐色或棕黑色团块的钙化结节.结论 全骨髓培养法取材方便,经成骨诱导培养的BMSCs表现出成骨细胞的形态特征和生物学特性,该方法可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法.     

骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞是一群均一的细胞，具有自身的增殖特征及组织化学特征．它在适宜的微环境中能分化为成骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞和星状神经细胞等，它易于分离、扩增，易于外源基因导入表达，有望成为细胞治疗和基因治疗的新型靶细胞，具有广阔的应用前景。     

构建组织工程骨与生物蛋白胶双相接种法的实验研究

目的观察采用生物蛋白胶（fibrin glue,FG）双相接种技术促进组织工程骨体外构建的可行性。方法以生物蛋白胶为介质,用双相接种技术将羊骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）与同种异体冻干脱钙骨基质（freeze-dried demineralized bone matrix,FDBM）复合,在体外构建组织工程骨,以静置接种法作为对照。通过细胞计数、光学和电子显微镜及四甲基偶氮唑盐比色法（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测观察细胞在支架材料上的粘附、生长情况。结果双相接种法在不同接种密度时都可保持细胞上架率维持在80%左右,上架细胞的数量随接种细胞密度增加成比例增加;FG对细胞的增殖没有明显影响,提高接种密度使细胞生长曲线提前达到平台期,各组的细胞数量峰值接近。结论双相接种技术可显著提高种子细胞的上架效率,可以作为一种体外构建组织工程骨的好方法。     

兔骨髓间充质干细胞的生物学特性实验研究

目的 了解兔骨髓闻充质干细胞的生物学特性，为组织工程寻找理想的种子细胞。方法 采用Percoll梯度离心及体外细胞贴壁培养技术对兔骨髓间充质干细胞分离、纯化和原代、传代培养观察。细胞染色。结果 获得的兔自体骨髓间充质干细胞形态均一，传代细胞之间有着不全相同增殖生长特点。细胞染色：PAS、ANAE阳性，AIP、ACP阴性，苯胺蓝染色阴性，胶原I型免疫染色为阳性，胶原Ⅱ型免疫染色则为阴性。结论 骨髓间充质干细胞具有独特生物学特性，将成为组织工程独特的种子干细胞。     

运用组织工程学原理构建间充质干细胞的三维培养体系

目的　探讨普通重力和模拟微重力条件下构建人间充质干细胞的三维培养体系。方法　将人间充质干细胞和人发角蛋白共同置于普通重力和模拟微重力条件下进行培养。结果　当转速为 37.2r min时 ,人发角蛋白在旋转式细胞培养系统中呈悬浮状态 ,沿一条与氧交换膜的轴心垂直的环形轨道随液体流转动 ,1× 10 3个 ml的人间充质干细胞和人发角蛋白共培养 7d ,在模拟微重力条件下有较多的间充质干细胞贴附生长于人发角蛋白表面 ,密集、平行排列 ,细胞在人发表面几乎形成密集的一层 ,在普通重力条件下人发角蛋白表面生长的间充质干细胞较稀疏 ,大多呈多角形。结论　普通重力和模拟微重力条件均适合于间充质干细胞的三维培养 ,而后者更有利于人间充质干细胞的三维培养体系的构建     

脐带组织间充质干细胞分离及向成骨与脂肪细胞的分化

目的探讨人脐带组织间充质干细胞体外分离、扩增与成骨、成脂肪细胞诱导分化的方法与条件。方法取脐带沿血管长轴切开,去掉血管,再将脐带重新缝合形成环状,灌入胶原酶悬液,6～8h后灌洗离心,获取细胞培养、扩增,细胞呈集落生长后传代,取传代细胞进一步行免疫表型测定和成骨、成脂肪细胞诱导分化。结果去除血管后获取脐带组织细胞的方法,可获得贴壁生长的细胞,呈短棒状或梭形样细胞,易扩增和形成集落,有基质细胞免疫表型表达,成骨诱导分化的细胞茜素红染色胞浆中有大量的钙沉积,碱性磷酸酶钙钴法染色胞质呈灰黑色,阳性细胞百分率>85%;成脂肪分化的细胞油红染色示胞浆充满了油滴空泡。结论脐带组织存在具有间叶细胞分化能力的间充质干细胞,并可在体外进行培养扩增形成集落细胞传代,传代细胞表达基质细胞表面抗原,能够向成骨细胞、成脂肪细胞分化。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养

目的 观察体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的生物学特性。方法 通过贴壁法培养、鉴定大鼠骨髓MSCs，观察其生长规律及光镜结构特点。结果 大鼠MSCs 7代以前增殖速度较快，细胞接种后1～2d为滞留期，3d后达对数生长期，第6天进入平台期。免疫组织化学染色显示MSCs表达CI）44，不表达CD45；光镜下可见MSCs呈梭形、纺锤形和多角形，核居中，有1～2个核仁。结论 培养的细胞为骨髓MSCs；在体外培养条件下细胞生长性状稳定，可作为组织工程的种子细胞。     

骨组织工程中脐带间充质干细胞的应用进展

MSCs是具多向分化与自我复制能力的干细胞,能够分化成为多种类型的组织细胞。相比于骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞,MSCs成本较低、来源充足、对捐献者不构成病毒或细菌感染,在未来的临床应用中展现了较好的发展与应用潜力。该文对骨组织工程中脐带间充质干细胞的应用进展进行分析。     

骨髓基质干细胞构建组织工程神经修复神经缺损的研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)存在于骨髓和其他一些组织(如脂肪等),它不仅具有干细胞的基本特征,而且具有自我更新和多向分化的潜能,它分离、培养的成功,以及向神经细胞分化的成功,为修复周围神经损伤提供了一种新的组织工程学种子细胞来源。本文就BMSCs作为种子细胞构建组织工程神经过程中的机制和所面临的新挑战进行综述,以探讨一种更新更有价值的周围神经缺损修复思路。