线粒体和细胞凋亡

线粒体在能量代谢和自由基代谢过程中占有十分重要的地位.线粒体产生大量超氧阴离子,并通过链式反应形成活性氧(reactive oxygen species,ROS),当ROS水平较低时,可促进细胞增生;而当ROS水平较高时,使得线粒体MPTP开放,不仅导致跨膜电位崩溃,也使细胞包素C外漏[1].     

紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究

目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。     

间充质干细胞旁分泌物质诱导肝星状细胞凋亡的体外研究

目的:研究间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)旁分泌物质对活化的肝星状细胞Lx－2的影响及作用机制?方法:应用6孔塑料细胞培养板,每孔使用半透膜,构建Transwell共培养体系;将骨髓来源的间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BM－MSC)和人肝星状细胞系Lx－2分别接种在体系的上下层,并把此组作为实验组,单独培养的Lx－2作为对照组,观察培养液中MSC旁分泌物质对Lx－2的影响?采用流式细胞术及Hoechst33342染色法分别检测Lx－2细胞凋亡的情况,qRT－PCR和Western blot检测Lx－2中解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)的mRNA和蛋白水平的表达量,荧光探针法检测Lx－2细胞内及线粒体中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光强度,采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量?结果:与对照组相比,Hoechst 33342染色后可见部分Lx－2染色质固缩?颗粒状荧光等凋亡细胞典型表现,实验组Lx－2凋亡率是对照组的2.6倍(P < 0.05)?实验组Lx－2中UCP2 mRNA及蛋白表达量显著低于对照组(P < 0.05);实验组Lx－2细胞内和线粒体中ROS水平明显升高?细胞培养上清中MDA为(0.43 ± 0.47) mmol/L,显著高于对照组(0.16 ± 0.43)mmol/L(P < 0.05)?结论:MSC旁分泌物质有诱导Lx－2细胞凋亡的作用;可能与MSC旁分泌物质抑制UCP2的表达,促进细胞内及线粒体ROS过量生成有关?     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体功能及细胞凋亡的影响

目的 :探讨活性氧在体外对肠上皮细胞线粒体功能和膜电位 (ΔΨmt)的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :肠上皮细胞株 (SW - 4 80 ) ,采用活性氧 (reactiveoxygenspecies,ROS)的代表物 -过氧化氢 (H2 O2 )损伤模型 ,用 5 0 μmmol/L ,10 0 μmmol/L ,2 0 0 μmmol/L ,4 0 0 μmmol/L和 4mmol/L作用 1,3,6 ,12及 2 4h。线粒体功能采用噻唑蓝法 (MTT法 ) ;用罗丹明 (Rhodamme- 12 3)荧光探针检查活细胞线粒体膜电位变化 ;用Annexin -V荧光探针 ,流式细胞仪检测早期凋亡细胞。结果 :H2 O2 在低浓度 (5 0 μmmol/L ,10 0 μmmol/L ,2 0 0 μmmol/L)时线粒体功能未见明显改变 ,在高浓度 (40 0 μmmol/L ,4mmol/L)时可导致线粒体功能下降 ,同时使线粒体膜电位显著降低 ,细胞凋亡率显著增加。结论 :线粒体参与了H2 O2 诱导肠上皮细胞的早期程序性死亡及随后的细胞死亡 ,这种损伤作用与线粒体功能和膜电位下降密切相关。     

色霉素A2 诱导人肝癌HepG2 细胞凋亡

目的研究色霉素A2对人肝癌细胞HepG2 的凋亡诱导作用,以期为肝癌的治疗提供新的治疗药物。方法MTT法检测
色霉素A2作用HepG2、MCF-7、A549、7901 细胞后对细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察HepG2 细胞在色霉素A2（0、
60 nmol/L）的作用下,细胞染色质的变化;色霉素A（2 0、20、40、60 nmol/L）作用HepG2细胞24 h,显微镜观察细胞形态变化,采用
流式细胞术检测细胞凋亡率,活性氧水平及膜电位水平的变化。结果色霉素A2对人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制效果,且
呈时间,剂量依赖关系;药物作用细胞后,细胞染色质凝聚,染色加深;细胞形态方面发生细胞皱缩,并且细胞数目变少;流式细
胞仪测定结果显示,细胞凋亡率随药物浓度升高而增大,并且细胞内活性氧水平上升,线粒体膜电位水平降低。结论色霉素A2
诱导人肝癌HepG2细胞产生凋亡,其诱导HepG2细胞凋亡的机制可能与活性氧的升高及线粒体膜损伤有关。
     

硒对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的：探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡时DNA降解特点,以及硒对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法：紫外线分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min,同时添加亚硒酸钠（8ng/ml）,设立对照组。利用吖啶橙荧光染料染色鉴定凋亡细胞,利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果：紫外线可以诱导人肺成纤维细胞（28代）凋亡,作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时,未出现典型的DNA ladder现象。硒对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论：DNA ladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志,紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。硒具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

UVB对HaCaT细胞凋亡的影响

①目的　探讨紫外线B(UVB)对HaCaT细胞凋亡的影响及其作用机制。②方法　取培养的HaCaT细胞 ,用 30mJ/cm2 的UVB照射后继续培养 18h ,以流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位和细胞内游离Ca2 +水平 ,用透射电镜观察细胞的超微结构。③结果　UVB照射增加了HaCaT细胞的凋亡率 (t =5 .2 36 ,P <0 .0 1) ,降低了线粒体膜电位 (t=6 .897,P <0 .0 1) ,升高了细胞内游离Ca2 + 水平 (t =6 .0 4 6 ,P <0 .0 1)。细胞的超微结构因UVB照射而遭到严重破坏 ,胞浆内的细胞器大量减少 ,线粒体严重空泡化 ,髓样小体形成 ,核内染色质成块并边聚。④结论　线粒体膜电位的下降和胞内游离Ca2 + 的升高可能参与了UVB诱发HaCaT细胞凋亡的过程     

活性氧激活线粒体凋亡通路是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的重要机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,活性氧引起的线粒体膜电位丧失及凋亡作用的相关机制。方法 用活性氧荧光探针DCFH-DA探测经亚硒酸钠诱导的NB4细胞内活性氧的含量。流式细胞术检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化。Westem blot检测胞浆中细胞色素C含量的变化及细胞总蛋白中Bcl-xl、Bax和Bid的含量变化及切割行为。同时应用活性氧清除剂MnTmPy及活性氧激活剂BSO预处理细胞,观察Bid及凋亡的变化。结果 活性氧清除剂MnTmPy可有效抑制亚硒酸钠诱导的NIM细胞凋亡、线粒体膜电位丧失及Bid的切割;而BSO可促进线粒体膜电位丧失。结论 亚硒酸钠诱导NIM细胞凋亡的可能机制是通过刺激细胞产生活性氧,一方面下调抗凋亡蛋白Bcl-xl,另一方面激活线粒体打孔蛋白Bax和Bid,损伤线粒体使膜电位降低,促使线粒体释放细胞色素C。     

紫外线致Hep—G2细胞凋亡的分子机制初探

紫外线(UV)是人类最常接触的具基因毒作用的因子。为探索紫外线辐射致细胞凋亡和组织损伤的分子机制，本研究采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经紫外线辐射处理的Hep-G2细胞P53、Caspase3、bcl—2和P21等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况。结果表明经紫外线辐射处理的Hep-G2细胞的P53、Caspase3和bcl—2基因表达增加，而P21未见明显改变，提示P53、Caspase基因在紫外线辐射诱导的细胞凋亡中起重要作用，bcl—2增高可能有抑制细胞的过度凋亡。保持内在平衡的作用。P21保持不变或下降可能反映了细胞对DNA损伤应答的新途径。     

线粒体介导细胞凋亡的机制

50多年前 ,线粒体曾是生物学研究的焦点之一。由于线粒体在细胞中含量多 ,容易纯化 ,含有许多重要的酶类 ,细胞能量代谢的最重要过程三羧酸循环和氧化磷酸化都在线粒体内进行 ,因此 ,对线粒体能量代谢功能和结构的研究曾经在生物科学发展中占有重要的位置。但分子生物学和生物遗传学研究技术的突飞猛进使研究者把注意力集中在细胞核功能的研究上 ,对线粒体的兴趣慢慢减弱 ,有关工作出现了一段相对沉寂的时间。近 1 0多年来 ,对线粒体的研究又再现重视[1 ] ,但焦点已转向线粒体与细胞死亡、线粒体的进化生物学、线粒体分子病甚至法医学上。其…     

杨梅素对HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨杨梅素对人肝癌细胞系 HepG2凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度的杨梅素孵育HepG2细胞,在不同时间分别采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;采用乳酸脱氢酶（LDH）活力定量测定试剂盒测定细胞上清液LDH活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡途径关键蛋白的表达。结果杨梅素对HepG2细胞的凋亡诱导作用呈现剂量和时间依赖性。杨梅素作用于HepG2细胞,随杨梅素浓度增加,细胞凋亡率增加。与正常对照组相比,100μmol/L杨梅素作用于HepG2细胞24 h后,细胞存活率明显降低[（100.02±5.97）%vs.（71.60±3.75）%,P=0.006];早、晚期细胞凋亡率明显升高[（10.19±2.61）%vs.（2.52±2.05）%,P=0.003;（11.71±3.34）%vs.（3.69±1.13）%,P=0.004],差异均有统计学意义。随杨梅素浓度增加,线粒体途径的促凋亡因子BAX蛋白表达量增加,而抗凋亡因子BCL-2蛋白表达量降低。结论杨梅素能够诱导HepG2细胞凋亡,可能具有潜在的抗肝癌活性;线粒体途径在此过程中起重要作用。     

维生素C对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的 探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡对DNA降解特点,以维生素C对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法 紫外线（UVB）分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min,同时添加维生素C（50μmol/L）。设立对照组。利用吖啶荧光染料染色鉴定凋亡细胞,利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果 紫外线可以诱导人肺成纤维细胞凋亡,作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时,未出现典型的DNA ladder现象。维生素C对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论 DNAladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志,紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。维生素C具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

酸性核糖体蛋白P2在紫外线诱导的肿瘤细胞快速凋亡中的功能

目的研究酸性核糖体蛋白P2在紫外线（UV）诱导的细胞快速凋亡中的分子信号功能。方法选取小鼠淋巴瘤细胞3SB、人白血病细胞Jurkat、人宫颈癌细胞HeLa S3和人乳腺癌细胞MCF-7来研究其对UV诱导细胞凋亡的差异性。UV照射后,荧光显微镜活细胞染色计数分别观察细胞的凋亡形态学变化和凋亡率;Western blot分析凋亡相关的标志性蛋白的表达。并分别提取细胞质蛋白和细胞总蛋白,利用小型二维电泳、Western blot技术分析细胞质中游离的酸性核糖体蛋白P2的变化和总的P2的表达。结果 3SB和Jurkat细胞在UV照射后,24 h的凋亡率达100%,并观察到PARP和P21的激活;而HeLa S3和MCF-7细胞出现延迟性细胞凋亡。在快速凋亡的Jurkat细胞中,发现酸性核糖体蛋白P2去磷酸化。总的P2表达降低,存在剂量效应,并伴随着凋亡蛋白PARP的激活。结论酸性核糖体蛋白P2的去磷酸化及其在细胞内总量降低与UV诱导的细胞快速凋亡相关。     

二十碳五烯酸对人肝癌HepG2凋亡细胞线粒体的影响

目的:探讨二十碳五烯酸(EPA)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对线粒体的影响. 方法:HepG2细胞与经EPA处理后,DNA Ladder检测细胞凋亡的发生,应用线粒体荧光探针和四唑盐(MTT)比色法分析细胞线粒体数量和功能,应用免疫印迹法和特异性底物检测HepG2细胞Caspase-9蛋白酶的表达和活性. 结果:终浓度为120 μmol/L EPA处理HepG2细胞24 h后,可以检测到凋亡标志性的DNA梯形带;细胞线粒体数量减少,MTT比色法检测A值为0.173±0.065(P＜0.01),提示线粒体功能降低;线粒体相关凋亡级联反应的启动分子Caspase-9蛋白表达增加,Caspase-9酶活性增强至75.4±4.8,与未经EPA处理HepG2细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论:EPA可能通过损伤线粒体诱导人肝癌HepG2细胞凋亡.     

Ca^2＋在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用

目的 了解细胞内外钙离子浓度对紫外线（ＵＶＢ）辐射诱导成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３）凋亡作用的影响。方法 ＵＶＢ照射成纤维细胞１０ｍｉｎ,培养１２ｈ后,用流式细胞仪测定凋亡率。结果 ＵＶＢ照射组比ＵＶＢ不照射组凋亡率有显著增加;ＵＶＢ照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ｃａ＾２＋浓度不同存在明显差异。结论 ＵＶＢ辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ｃａ＾２＋浓度有关,Ｃａ＾２＋参与了凋亡的信号转导。ＵＶＢ诱导     

解耦联蛋白2对糖尿病小鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究解耦联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)与糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠心肌细胞凋亡的关系。方法:用雄性UCP2敲除小鼠(UCP2-/-)及C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,各组分别饲养7天及28天。采用Hochest荧光染色观察糖尿病小鼠心肌细胞形态学的变化,Westernblot方法检测凋亡蛋白caspase3的表达。结果:①DM28天组Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。DM28天组较DM7天组染色质明显浓缩,荧光强度明显增加。UCP2-/-+DM7天组较DM7天组染色质浓缩减轻,颗粒状荧光减少;UCP2-/-+DM28天组较DM28天组染色质浓缩明显减轻,颗粒状荧光明显减少。②Western blot结果显示:UCP-/-+DM7天组cleaved-caspase3蛋白表达较DM7天组稍下降,无统计学意义(P>0.05);UCP2-/-+DM28天组cleaved-caspase3蛋白表达较DM28天组明显减少,(P<0.05)。结论:UCP2与糖尿病心肌细胞凋亡存在密切关系。     

活性氧诱导细胞凋亡的研究进展

活性氧(ROS)作为细胞调控中的一种信号分子,诱导细胞凋亡,目前已经为广大生命科学的学者所接受。ROS在细胞凋亡过程中扮演两种角色,作为外界诱因,ROS诱导细胞凋亡;然而当其他诱因在体内激发细胞凋亡时,ROS是这一过程中的产物,然后作为信号分子,具有调节细胞凋亡的作用,其机制可发生在凋亡过程的各环节。对ROS与细胞凋亡关系的研究进展进行综述。     

解耦联蛋白2(UCP2)与胰岛β细胞功能研究进展

 解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)是位于线粒体内膜的一种质子载体,在高糖、高脂、过氧化物等信号的作用下,可将线粒体内膜外质子转运至内膜内,从而改变线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrance potential,MTP,ΔΨm)。β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose stimulated insulin secretion,GSIS)能力及线粒体内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平密切依赖于线粒体ΔΨm变化,因此可被UCP2调节。本文就UCP2调控β细胞功能和细胞内氧化应激的研究结果作一综述,为今后的深入研究提供参考。     

紫外线诱导细胞凋亡分子机制的研究进展

由于近年来大气中臭氧层的破坏，辐射到地面的紫外线（ultraviolet，UV）增多。近年来研究发现UV不仅能引发日光性皮炎、皮肤老化、免疫抑制、白内障和皮肤癌等疾病，还能诱导细胞发生凋亡。机体通过凋亡这种方式清除受损的细胞，从而避免癌症的发生。因此，有关UV诱导细胞凋亡的分子机制成为此领域研究的热点。