乳胞素诱导食蟹猴慢性帕金森模型的初步建立

目的 探索通过脑室内注射蛋白酶体抑制剂乳胞素的方法建立帕金森病(PD)食蟹猴动物模型。方法 选取老龄健康雄性食蟹猴3只,随机分为实验猴2只（A猴、B猴）、对照猴1只（C猴）。实验猴多次重复脑室内注射乳胞素,对照猴注射同等剂量的0.9%氯化钠溶液。于给药前后60 min观察其行为学变化。采用免疫组织化学方法染色和行为学评分对模型进行验证。结果 行为学观察结果示,实验猴出现类似PD典型的手臂震颤、运动迟缓、运动量减少等行为学改变;行为学评分与对照猴相比,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果示,实验猴酪氨酸羟化酶(TH)阳性面积较对照猴减少,差异有统计学意义(P<0.05);实验猴平均吸光度较对照猴减少,差异有统计学意义(P<0.05)。实验猴α-突触核蛋白(α-syn)阳性面积较对照猴增加,差异有统计学意义(P<0.05);实验猴平均吸光度较对照猴增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 该实验采用小剂量、多次重复脑室内注射蛋白酶体抑制剂乳胞素方式产生了类似PD的行为学改变,免疫组化结果显示黑质存在PD样病变,可认为已建立食蟹猴慢性PD模型,该模型能够较好地模拟PD患者的临床症状和病理进程。 [引用格式:国际神经病学神经外科学杂志, 2021, 48(4): 321-326.]     

食蟹猴神经干细胞的培养与分化

背景：关于神经干细胞以往研究多集中在啮齿类和人类,涉及非人灵长类的神经干细胞研究较少。 目的：建立食蟹猴神经干细胞的体外分离培养方法,并观察其分化潜能。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-07/2009-04在中山大学干细胞与组织工程研究中心完成。 材料：孕3~5个月的食蟹猴流产胚胎,由蓝岛生物技术有限公司(华南非人灵长类研究开发中心)提供。 方法：取食蟹猴胚胎的室管膜下区及海马区脑组织,放入神经干细胞悬浮培养液中,巴氏吸管吹打分散,得到单细胞悬液,调整细胞浓度为(2.0~5.0)×105接种于25 cm2培养瓶中,在37 ℃、体积分数为5%的CO2条件下进行原代悬浮培养。待形成神经球2周后,接种于预先包被多聚鸟氨酸/纤维连接蛋白的培养板上进行贴壁培养。每天向孔内添加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子各20 μg/L,待细胞增殖到90%左右传代扩增。 主要观察指标：利用免疫细胞荧光化学技术,对体外培养的食蟹猴神经干细胞表面标志性抗原nestin及其分化潜能进行鉴定。 结果：悬浮培养1周后,倒置显微镜下可见神经球形成,神经球在培养过程中逐渐增大。第4周将神经球进行贴壁培养后,24 h可见神经球贴附于板壁,并有突触从球中伸出,随后大量细胞从神经球中迁出,逐渐铺满板壁。添加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子培养的神经干细胞呈nestin+,而未添加两种因子的神经干细胞呈GFAP+,Tuj 1+,O4+。 结论：悬浮培养与贴壁培养相结合的方法较适合食蟹猴神经干细胞的培养及传代,分离出的食蟹猴神经干细胞具有分化为 星形胶质细胞、神经元细胞、少突胶质细胞的能力。     

突触素与癫痫

癫痫（epilepsy）是最常见的神经系统疾病之一,其发病机制复杂,目前认为癫痫发病是由于中枢神经系统兴奋与抑制性不平衡导致大脑神经元异常放电所致。近年研究表明,这种兴奋与抑制间的不平衡主要与离子通道、突触传递及神经胶质细胞的改变有关。癫痫发生时大脑海马部位出现的苔藓纤维异常出芽及伴随的突触重建被认为是其细胞机制之一。近年来研究的热点之一是海马结构的可塑性重建,这种可塑性主要表现在突触上。     

突触素与癫痫

癫痫（epilepsy）是最常见的神经系统疾病之一,其发病机制复杂,目前认为癫痫发病是由于中枢神经系统兴奋与抑制性不平衡导致大脑神经元异常放电所致。近年研究表明,这种兴奋与抑制间的不平衡主要与离子通道、突触传递及神经胶质细胞的改变有关。癫痫发生时大脑海马部位出现的苔藓纤维异常出芽及伴随的突触重建被认为是其细胞机制之一。近年来研究的热点之一是海马结构的可塑性重建,这种可塑性主要表现在突触上。     

阿尔茨海默病记忆减退与脑CT改变的相关性研究

目的 观察阿尔茨海默病（AD）患者的脑CT变化,旨在探讨其记忆减退与脑CT形态学改变之间的关系。方法 采用脑CT检查,结合神经心理学测试,对30例AD患者和30例年龄、性别与之相匹配的健康老年人进行测试与比较。结果 MMSE得分与CT参数中外侧裂宽度和额角指数呈负相关,其差异有极显著性意义（P〈0．01）,说明AD患者额颞叶萎缩与其记忆障碍密切相关。结论 利用脑CT检查,结合简短精神量表（MMSE）,可从脑形态和脑功能对AD患者做出确切评价,为其临床诊断提供有力的客观依据。     

β-淀粉样蛋白25-35杏仁核注射对大鼠空间学习记忆及海马突触素表达的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）杏仁核注射所造痴呆模型大鼠海马突触素的改变及其与空间学习记忆力的关系。方法雄性Sprague-Dawley大鼠24只，随机分为正常对照组、假手术组（颅内注射5．0nmol 0．1％三氟乙酸）、痴呆模型组（颅内注射5．0nmol Aβ25-35），每组各8只。采用杏仁核注射Aβ25-35的方法建立大鼠痴呆模型；通过Morris水迷宫测试观察大鼠空间学习记忆能力的改变；应用免疫组织化学染色测定模型大鼠海马突触素表达的水平。结果大鼠痴呆模型建立6周后，痴呆模型组大鼠存在明显的空间学习记忆力障碍，为期6d水迷宫测试的平均潜伏期均明显长于正常对照组及假手术组，其中第4～6天与正常对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组织化学染色，痴呆模型组大鼠海马突触索表达的阳性数及着色密度均明显少于正常对照组及假手术组，其中与正常对照组的差异均有统计学意义（P均〈0．01）。结论Aβ25-35杏仁核注射所造痴呆模型的大鼠海马突触数量明显减少，其空间学习记忆力功能障碍可能与突触的减少有关。     

戊四氮点燃大鼠模型海马结构内突触体素的变化

目的：探讨癫痫时海马结构的可塑性。方法：利用图像分析分析仪戊四氮诱导的大鼠点燃模型海马CA1、CA3区及齿状回区突触体素的阳性免疫反应产物的光密度值（OD值）。结果：点燃组海马人各部突触体素阳性免疫反应产物光密度值较对照组增加,尤以CA3区苔藓纤维层的齿状回分子层内带为甚。结论：突触体素含量的变化一方面是点燃的结果,另一方面也可能导致点燃维持的分子学基础。     

神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠海马突触素表达和学习记忆能力的影响*

背景：前期实验已证实,移植入阿尔茨海默病大鼠脑内的神经干细胞能够存活、增殖,但其是否可替代损伤或坏死的神经细胞而重建神经通路,改善学习记忆能力尚不清楚。突触素是突触重建的重要标记之一。 目的：观察神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及突触表达的影响。 方法：SD大鼠随机数字表法分为正常对照组、阿尔茨海默病模型组、2周移植组和4周移植组,除正常对照组外制备阿尔茨海默病模型。另取新生24 h SD大鼠海马齿状回分离、培养神经干细胞,经Hoechst33258标记后植入2周和4周移植组海马CA1区,行Y迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,然后取脑进行尼氏染色和突触素免疫组织化学染色。阿尔茨海默病模型组则以同样的方法、同样的位点注入等量无菌生理盐水。正常对照组不施以任何处理。 结果与结论：①2周和4周移植组海马CA1区细胞比阿尔茨海默病模型组增多,但仍少于正常对照组(P < 0.05),平均吸光度与正常对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。②2周移植组和4周移植组大鼠海马结构内突触素吸光度值明显高于正常对照组和阿尔茨海默病模型组(P < 0.05)。③与阿尔茨海默病模型组相比,2周和4周移植组大鼠学习能力和记忆能力均显著增强,正确反应率明显提高(P < 0.05),而与正常对照组相比,差异无显著性意义(P > 0.05)。提示移植入脑内的神经干细胞可促进突触形成,改善学习记忆能力。     

吗啡戒断性焦虑大鼠海马突触界面结构及突触素表达变化

目的 探讨吗啡依赖戒断焦虑行为与海马CA1、CA3区突触界面结构和突触素表达变化之间的相关性.方法 剂量递增法建立大鼠吗啡依赖模型,高架十字迷宫检测焦虑行为,透射电镜技术结合图像分析系统、免疫组织化学比较对照组、模型组和治疗组(各6只)大鼠海马CA1、CA3区突触界面结构和突触素(P38)的表达.结果 (1)行为学:模型组开放臂的次数和时间均少于对照组和治疗组[最小有意义差异t检验(下同),P＜0.01或P＜0.05).(2)突触界面结构:模型组CA1区突触后致密物厚度[(10.7±0.9)nm]、突触活性区长度[(45±4)am]、突触间隙宽度[(3.80±0.30)nm]和突触界面曲率(1.37±0.12)均高于对照组和治疗组(P＜0.01或P＜0.05);模型组CA3区突触后致密物厚度[(12.7±1.1)nm]、突触活性区长度[(53±8)nm]、突触间隙宽度[(3.81 ±0.59)nm]、突触界面曲率(1.39±0.30)亦均高于对照组和治疗组(P＜0.01或P＜0.05).(3)突触素表达:模型组CA1、CA3区突触素吸光度(A)值分别为(0.42±0.06)和(0.43±0.05),显著高于对照组(0.2±0.02,0.25±0.03)和治疗组(0.27±0.04,0.26±0.03).结论吗啡戒断焦虑行为与海马CA1、CA3区突触形态结构可塑性及突触素表达水平有一定的相关性.     

突触素与精神障碍

突触素是高度保守的磷酸化蛋白家族 ,只在神经元内特异性的表达 ,与突触囊泡的锚定转运密切相关 ,能调节神经递质的释放。突触素mRNA及蛋白质水平与精神障碍密切相关 ,突触素表达异常可能是精神障碍的发病机制之一。本文就突触素的结构、功能与精神障碍的关系进行文献综述。     

罗哌卡因所致的毒性惊厥对幼鼠学习记忆能力及突触素表达的影响

目的 制备罗哌卡因幼鼠毒性惊厥模型,观察毒性惊厥对幼鼠学习记忆能力和海马突触素表达的影响. 方法 选用21日龄SD鼠60只,按照随机数字表法分为罗哌卡因和生理盐水组(每组30只).2组各取20只并根据不同取材时间点又分为注射后24 b、3d、7d、60d4个亚组(每组5只),选取幼鼠海马组织,采用Western blotting行突触素蛋白含量测定;剩余各组10只于上述时间点进行水迷宫寻找平台潜伏期测试. 结果 罗哌卡因组幼鼠惊厥后寻找平台潜伏期随时间延长逐渐缩短,各时间点比较差异有统计学意义(P＜0.05).生理盐水组幼鼠惊厥后各时间点潜伏期比较差异无统计学意义(P＞0.05).罗哌卡因组24 h、3d时寻找平台潜伏期分别为(38.62±19.08)s、(18.40±7.95) s,明显长于同时期生理盐水组[(13.08±4.73)s、(14.17±3.28)s],差异有统计学意义(P＜0.05).罗哌卡因组幼鼠注射后24 h突触素蛋白表达为0.25±0.03,生理盐水组为0.34±0.03,比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 幼鼠单次罗哌卡因毒性惊厥对其学习记忆存在一过性的影响,推测与突触素蛋白表达有关.     

Deterioration in learning and memory of inferential tasks for evaluation of transitivity and symmetry in aged SAMP8 mice

This study examined age-dependent deficits in the learning and memory of inferential tasks, using an established senescence-accelerated mouse model in age-related brain dysfunction (SAMP8) and its genetically related inbred strain (SAMR1). The mice learned two sets of nonspatial odor-odor pairs by association learning successively (i.e., A-->B, X-->Y, then B-->C, Y-->Z). They were tested in transitive inference (i.e., A-->C, X-->Z) and symmetrical inference (i.e., C-->B, Z-->Y). In the probe test of A-->C, X-->Z transitive inference, 1-month-old SAMP8 and control SAMR1 at the same age significantly chose the alternative based on transitive inference, but 4- and 7-month-old SAMP8 performed at a random chance level, in comparison with unambiguous inference by control SAMR1 at the same ages. During the test of C-->B, Z-->Y symmetrical inference, SAMP8 at 1 month of age made errors as frequently as control SAMR1 at the same age, but SAMP8 at 4 and 7 months of age made more errors than SAMR1 at the same ages. At 4 and 7 months of age, SAMP8 made more errors than 1-month-old SAMP8. Control SAMR1 did not show such an age-related deficient. These results indicate that SAMP8 mice have age-related learning and memory deficits in the ability to perform inferential tasks. Age-related hippocampal dysfunction is suggested to be the cause of these age-related deficits in old SAMP8 mice during the performance of inferential tasks mediated by declarative memory.     

慢性脑缺血老龄大鼠海马中突触素的表达特征

目的 研究老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中突触素表达特征.方法 应用免疫组化染色技术检测大鼠脑海马中CA1区、CA3区和齿状回中突触素的表达.结果 缺血组海马CA1区、CA3区和齿状回三处突触素灰度值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05.结论 老龄大鼠海马结构内CA1区、CA3区及齿状回内突触素和NR2B的表达明显减少.     

学习记忆能力下降大鼠神经细胞增殖的研究

目的　观察学习记忆能力减退老年大鼠海马齿状回神经细胞的增殖。方法　Morris水迷宫筛选出学习记忆能力减退大鼠 (痴呆组 )与正常大鼠 (对照组 )。BrdU标记海马齿状回增殖细胞。TUNEL法标记DNA片段原位检测凋亡细胞。计数海马颗粒细胞层与海马门的BrdU阳性细胞与凋亡细胞数。结果　痴呆组与对照组大鼠相比 ,海马颗粒细胞层BrdU阳性细胞显著增加 (P <0 0 1) ,而凋亡细胞数无显著差异 (P >0 0 5 )。海马门BrdU阳性细胞数及凋亡细胞数均无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　学习记忆能力减退的老年大鼠海马齿状回神经细胞增殖能力减低。     

Selective reduction of hippocampal dentate frequency potentiation in aged rats with impaired place learning

Induction of posttetanic potentiation (PTP) and long-term potentiation (LTP) was analyzed in hippocampal slices obtained from a) young 6-month-old Sprague-Dawley (SD) rats, all of them performing well in the Morris Maze, and b) aged SD 20-month-old and Fischer 344 24-month-old rats showing different degrees of ability in the same test. After the application of an electrical tetanus 1 s, 100 Hz, 50 μA in the stratum radiatum, no significant differences were found in the percent of induction of both PTP and LTP in the CA1 area of hippocampal slices obtained from rats of different strains and ages. After the application of an electrical tetanus 1 s, 100 Hz, 50 μA in the stratum moleculare, a significant difference was found in the percent of dentate PTP induction in hippocampal slices obtained from rats of different ages. Specifically, dentate PTP induction was significantly (p < 0.01) higher in slices obtained from young SD rats, and from old SD rats with a better performance in the Morris maze, escape latency less than 10 s and 150 cm, than in slices obtained from old SD or Fischer 344 rats that had shown poor performance in the Morris Maze. On the contrary, no significant differences were found in the percent of dentate LTP in hippocampal slices obtained from rats of different strains and ages. The data demonstrate that the induction of hippocampal dentate high-frequency PTP is selectively reduced in old rats with impaired Morris Maze performance.     

Improved specificity of hippocampal memory trace labeling

Recent studies have focused on the identification and manipulation of memory traces in rodent models. The two main mouse models utilized are either a CreER^T2/loxP tamoxifen (TAM)‐ or a tetracycline transactivator/tetracycline‐response element doxycycline‐inducible system. These systems, however, could be improved to label a more specific population of activated neurons corresponding to behavior. Here, we sought to identify an improved selective estrogen receptor (ER) modulator (SERM) in which we could label an individual memory trace in ArcCreER^T2 mice. We found that 4‐hydroxytamoxifen (4‐OHT) is a selective SERM in the ArcCreER^T2 × Rosa26‐CAG‐stop^flox‐channelrhodospin (ChR2)‐enhanced yellow fluorescent protein (eYFP) mice. The half‐life of 4‐OHT is shorter than TAM, allowing for more specificity of memory trace labeling. Furthermore, 4‐OHT allowed for context‐specific labeling in the dentate gyrus and CA3. In summary, we believe that 4‐OHT improves the specificity of memory trace labeling and will allow for refined memory trace studies in the future. © 2015 Wiley Periodicals, Inc.     

Reduced mastication stimulates impairment of spatial memory and degeneration of hippocampal neurons in aged SAMP8 mice

The involvement of reduced mastication in senile dementia was evaluated by examining the effect of cutting off the upper molars (molarless) on spatial memory and numbers of hippocampal neurons in aged SAMP8 mice. Molarless mice showed a decrease in both learning ability in a water maze and neuron density in the hippocampal CA1 region compared with control mice. These changes increased the longer the molarless condition persisted. The data suggest a possible link between reduced mastication and hippocampal neuron loss that may be one risk factor for senile impairment of spatial memory.