局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡研究

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤后海马CA1区神经元凋亡、TUNEL阳性细胞变化,以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白的表达情况.方法 将健康雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠随机分为假手术组和I/R组,每组再分为缺血再灌注后3、6、12、24、48、72 h亚组.应用免疫组化方法检测再灌注后不同时间点大鼠海马CA1区神经元凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白的表达及Bcl-2/Bax比值变化,采用原位细胞凋亡检测(TUNEL)技术检测凋亡阳性细胞数.结果 各组非缺血侧相应区域神经元胞质中Bcl-2均有微弱表达.I/R组缺血侧海马CA1区于再灌注3 h开始出现Bcl-2和Bax蛋白微弱表达,随再灌注时间延长神经元内Bcl-2表达逐渐增强,再灌注24 h后Bcl-2表达达高峰,假手术组与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 I/R损伤后海马CA1区神经元不仅存在变性坏死,还存在明显的细胞凋亡且细胞凋亡在大鼠I/R损伤中发挥重要作用;I/R可诱导海马CA1区细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白表达,且其表达呈一定规律.     

硫化氢对短暂脑缺血/再灌注老年大鼠海马神经元Camkkβ、Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫化氢对短暂脑缺血再灌注老年大鼠海马神经元Camkkβ、Bcl-2和Bax表达的影响。方法健康雄性SD老龄大鼠120只,随机分为对照组(C组)、缺血/再灌注组(IR组)、H2S组(H组)和生理盐水组(S组),采用Pusinelli四动脉阻断法建立全脑缺血模型。H组缺血前10 min腹腔内注射H2S外源性供体NaHS;S组注入等量生理盐水;C组不行任何处理。大鼠脑缺血/再灌注后24 h进行神经行为学评分;脑缺血/再灌注后1、3、5 d采用TUNEL法检测神经元的凋亡情况,采用Western-blot法测定大鼠海马内Camkkβ、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺血/再灌注组老年大鼠脑缺血/再灌注24 h后神经行为学评分升高,海马TUNEL阳性神经元计数升高,Camkkβ表达升高,Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05);与缺血/再灌注组比较,H2S组老年大鼠脑缺血/再灌注24 h后神经行为学评分降低、海马区TUNEL阳性神经元计数降低、Camkkβ表达降低,Bcl-2表达上调、Bax表达下调(P<0.05)。结论硫化氢可通过降低神经元海马Camkkβ蛋白表达、上调Bc1-2蛋白表达、抑制Bax蛋白表达来减轻短暂脑缺血/再灌注损伤。     

亚低温对大鼠脑创伤后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察亚低温对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后海马CA3区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响,探讨亚低温脑保护的分子生物学机制.方法将大鼠随机分成假手术、单纯脑损伤和脑损伤后亚低温治疗3组,应用改良Marmarou方法制作大鼠TBI模型,分别用流式细胞仪(FCM)和免疫组化法检测各组动物脑海马CA3区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达.结果与假手术组相比,大鼠TBI后海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达增高(P<0.05),Bcl-2/Bax表达比下降(P<0.05).亚低温治疗后,大鼠脑海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达较单纯脑损伤组降低(P<0.05),而Bcl-2/Bax表达比升高(P<0.05).结论亚低温对TBI的脑保护作用机制可能与干预伤后凋亡相关基因表达并减少神经细胞凋亡有关.     

醒脑静注射液对大鼠脑损伤后细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的探讨醒脑静注射液对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后细胞凋亡的影响及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组、损伤对照组和醒脑静注射液治疗组,后两组再分为伤后6h、12h、24h、48h、72h和168h6个亚组,采用改进的Feeney法制作大鼠TBI模型,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果治疗组大鼠脑细胞凋亡率及Bax、Caspase-3表达较损伤对照组显著降低(P<0.05),而Bcl-2表达明显升高(P<0.05)。结论醒脑静注射液对TBI的脑保护作用机制可能与干预伤后凋亡相关基因表达并减少神经细胞凋亡有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白在海马表达的变化.方法 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,应用TUNEL法检测海马区细胞凋亡.结果 缺血再灌注2h后海马神经元Bcl-2、Bax蛋白开始表达,Bcl-2蛋白12h达高峰,Bax蛋白12h～24h达高峰,之后开始下降.再灌注2h后海马凋亡细胞开始表达,随着再灌注时间的延长,其表达不断增加.Bcl-2/ Bax的比率在再灌注开始时升高,再灌注12h达高峰,随后开始下降.结论 凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一,Bcl-2/ Bax的改变与缺血再灌注后海马的神经元存亡有关,缺血再灌注可导致海马神经元凋亡.     

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠模型海马神经细胞凋亡的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法:将经行为学筛选合格的Wistar大鼠分为假手术组、VaD组、EPO组,采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立VaD模型。应用TUNEL染色检测大鼠海马的凋亡细胞数;通过免疫组化学和RT-PCR方法,检测大鼠海马Bcl-2和Bax蛋白以及其mRNA表达水平的变化。结果:EPO能明显抑制海马神经细胞凋亡,上调Bcl-2表达,抑制Bax表达。结论:EPO可能通过调控VaD大鼠海马Bcl-2和Bax表达,从而抑制神经细胞凋亡。     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

促红细胞生成素对低氧培养的海马神经元凋亡的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对低氧条件下原代培养的海马神经元凋亡的影响及其可能机制.方法 培养7 d的大鼠海马神经元随机分为常氧对照组、低氧对照组和重组人促红细胞生成素(rHuEPO)低氧处理组(简称rHuEPO处理组,又分100 IU/mL、150 IU/mL两亚组),以四唑盐(MTT)比色法测定培养12、24、36 h的细胞存活率,以Western blot蛋白印迹法测定上述时间点B细胞白血病-淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达.结果 EPO可明显增加低氧培养的海马神经元存活能力(P<0.01),但两剂量组之间差异无统计学意义;rHuEPO处理组神经元Bcl-2表达比同时间点低氧对照组明显增多(P<0.05),而Bax表达比低氧对照组明显减少(均P<0.01).结论 EPO可明显增加低氧培养的海马神经元存活能力,其作用机制可能通过调控Bcl-2和Bax表达实现.     

大鼠脑创伤后海马CA3区细胞凋亡及相关基因表达研究

目的研究弥漫性脑损伤后不同时间,大鼠海马CA3区细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况,探讨脑创伤后神经细胞凋亡的分子生物学机制.方法应用流式细胞仪和免疫组化法,分别检测脑创伤后不同时间海马CA3区细胞凋亡率及Bcl-2,Bax和Caspase-3基因在蛋白质水平的表达情况.结果脑创伤后海马CA3区存在不同程度细胞凋亡,Bcl-2在脑损伤后表达下降,而Bax和Caspase-3在脑创伤后表达升高;Caspase-3表达的峰值时间(72 h)出现在Bax之后(48 h).结论弥漫性脑损伤后,大鼠海马CA3区存在细胞凋亡及Bcl-2,Bax和Caspase-3的表达变化.Bcl-2/Bax表达比值下降早于Caspase-3的上升,Bcl-2/Bax表达比值改变可能与Caspase-3活化有关,进而启动并加重脑损伤后神经细胞凋亡.     

大鼠局灶性脑缺血时人参皂甙Rbl抑制细胞凋亡和调控凋亡基因的表达

目的 研究人参皂甙Rbl(Ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及神经细胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨人参皂甙Rbl的神经保护作用机制.方法 阻塞Wistar大鼠大脑中动脉制备短暂性脑缺血模型,出现神经功能缺失症状的大鼠随机分为缺血组和GRb1组,GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射人参皂甙Rb1(40mg/kg).每组按不同的再灌注时间(3h、12h、1d、2d、3d、5d和10d,每时间点4只)分为7个亚组.分别用原位未端标记法和免疫组织化学方法观察凋亡细胞、神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)、Bcl-2和Bax的表达.结果 与缺血组相比,GRb1组的各亚组凋亡细胞数下降,但只在再灌注12h～3d时有显著差异;GRb1组的NAIP阳性细胞数在再灌注12h～10d时明显高于缺血组;GRb1组的Bcl-2阳性细胞数在再灌注12h～10d时显著上升,Bax阳性细胞数则在相同时间点下降.结论 人参皂甙Rbl通过促进NAIP、Bcl-2表达和抑制Bax表达发挥神经保护作用.     

促红细胞生成素对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨促红细胞生成素在脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其可能的机制。方法采用Zea Longa改良线栓法制作局灶性大鼠脑缺血再灌注损伤模型。取健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和EPO干预组,每组15只大鼠。EPO干预组分别于缺血前2h、缺血后6h、缺血后24h予以EPO 3000 IU/kg腹腔注射。缺血再灌注组、假手术组和正常组于相应时间给与等量生理盐水。再灌注72h后进行神经功能缺损评分,检测Nissl小体、脑红蛋白(NGB)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达。结果与缺血再灌注组比较,EPO干预组的神经功能明显改善。EPO干预组Nissl小体减少的程度较轻。EPO干预组的NGB表达明显高于缺血再灌注组(P<0.01);而EPO干预组的MCP-1表达明显低于缺血再灌注组(P<0.01),均以缺血前2hEPO干预亚组明显。结论EPO可能通过上调NGB和下调MCP-1表达而减轻脑缺血再灌注损伤。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中脑钠肽表达的变化

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中脑钠肽(BNP)水平的变化. 方法 按照随机数字表法将成熟雄性Wistar大鼠100只分为假手术组、脑缺血再灌注组(再灌注组),再灌注组采用Longa法造模.2组按造模/手术后不同观察时间分为0h、3h、6h、9h、12h、24 h、48 h、72 h、1周、2周10个亚组,每亚组5只.应用HE染色、免疫组化法观察各组大鼠脑组织中BNP表达情况及病理变化. 结果 HE染色结果显示再灌注组大鼠脑组织出现神经元变性、坏死,细胞周围水肿;免疫组化染色结果显示各时间点再灌注组大鼠BNP含量均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05),其中造模48 h后大鼠水肿及BNP表达达到高峰. 结论 局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中BNP表达增高,考虑脑水肿为重要原因.     

局灶性脑缺血大鼠海马CA3区EPO和STAT-5的表达

目的观察局灶性脑缺血后大鼠海马CA3区促红细胞生成素（EPO）和信号传导转录活化因子5（STAT-5）的表达规律，探讨EPO和STAT-5在脑缺血损伤过程中的作用。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型，SD大鼠随机分为假手术组和脑缺血组，后者又分为2、12、24h三个亚组，免疫组化法检测各组大鼠海马CA3区EPO和STAT-5的表达水平。结果（1）脑缺血组各时间点大鼠海马CA3区EPO和STAT-5的表达水平均较假手术组明显增高（P％0．01）；（2）脑缺血组大鼠海马CA3区EPO和STAT-5阳性细胞数在2h明显增加；12h达到高峰，24h下降；（3）脑缺血组各时间点EPO和STAT-5表达水平同步增减。结论EPO有可能是通过EPOR-JAK2-STAT-5信号转导途径对缺血性脑损伤发挥保护性作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤模型大鼠与促红细胞生成素的神经保护作用

背景：近年来动物实验和体外细胞培养研究证实促红细胞生成素对脑缺血具有神经保护作用，有关促红细胞生成素脑保护的作用机制目前尚未阐明。 目的：通过观察缺血损伤区域脑组织细胞学形态，检测脑组织超氧化物歧化酶、丙二醛浓度，探讨促红细胞生成素对脑缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：采用线栓法建立Wistar大鼠局灶性缺血再灌注损伤模型，分别于缺血后2 h腹腔注射生理盐水3 000 U/kg、促红细胞生成素3 000，1 000 U/kg，并设假手术组。缺血再灌注损伤24 h后，应用苏木精-伊红染色法检测大鼠脑组织病理学变化，应用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分别测定超氧化物歧化酶活性和丙二醛浓度。 结果与结论：形态学结果显示促红细胞生成素高剂量组较生理盐水组皮质神经细胞存活数量增多，损伤程度减轻；促红细胞生成素高、低剂量组超氧化物歧化酶活性均明显高于假手术组和生理盐水组(P < 0.05)，丙二醛浓度明显低于假手术组和生理盐水组(P < 0.05)；促红细胞生成素高剂量组超氧化物歧化酶活性明显高于促红细胞生成素低剂量组，丙二醛含量明显低于促红细胞生成素低剂量组(P < 0.05)。提示经腹腔注射促红细胞生成素，可使大鼠脑缺血再灌注损伤区神经细胞存活数量明显增加，可显著改善组织的病理学改变，其保护作用可能是通过促红细胞生成素清除自由基，拮抗过氧化损伤实现的。     

短时间诱导高血压对急性脑缺血再灌注大鼠梗死体积的影响

目的探讨在不同缺血时间诱导高血压对急性局部脑缺血再灌注大鼠梗死体积的影响。方法61只年龄30～40周的SD大鼠,随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组和升压组。通过静脉滴注新福林对升压组动物进行诱导高血压治疗。结果(1)缺血再灌注组的梗死体积大于相应的缺血组。(2)升压组的梗死体积小于缺血再灌注组和缺血4h组。(3)在缺血4h再灌注2h升压组中,再灌注前15min升压组的梗死体积小于再灌注后30min升压组。结论(1)诱导高血压治疗能有效地减少急性脑缺血再灌注大鼠梗死体积。(2)再灌注前升压疗效优于再灌注后升压。     

促红细胞生成素对大鼠蛛网膜下腔出血后血管痉挛的防治作用

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的影响及其机制。方法 将60只成年SD大鼠随机分为正常组（6只）、假手术组（18只）、SAH组（18只）、EPO组（18只）;假手术组、SAH组合EPO组根据取材时间有分为1、3、7 d三亚组,每亚组6只。采用枕大池二次注血法建立SAH模型。EPO组建模成功后30 min内腹腔注射EPO（3 000 IU/kg,1次/d）。建模成功后1、3、7 d采用取材基底动脉行HE染色测量基底动脉管径及管壁厚度,采用免疫组化检测基底动脉血管壁核转录因子-κB（NF-κB）及内皮细胞型一氧化碳合酶（eNOS）的表达。结果 SAH后1、3、7 d,假手术组基底动脉管径、管壁厚度、NF-κB和eNOS表达水平与正常组无统计学差异（P>0.05）;与假手术组相比,SAH组各时间点基底动脉管径均明显减小（P<0.05）,管壁厚度均明显增加（P<0.05）,NF-κB表达水平均明显增加（P<0.05）,eNOS表达水平均明显降低（P<0.05）;与SAH组相比,EPO组基底动脉管径、管壁厚度均明显改善（P<0.05）,NF-κB表达水平均明显降低（P<0.05）,eNOS表达水平均明显增加。结论 EPO能够显著改善大鼠SAH后CVS,机制可能是通过上调eNOS的表达、抑制NF-κB的表达来实现的。     

山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的研究山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组及山楂叶总黄酮组(60、30、15mg/kg),线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型。观察再灌注3d后脑梗死面积,通过免疫组织化学染色方法测定MMP-9的表达。结果山楂总黄酮组(60、30mg/kg)的脑梗死面积较缺血再灌注组明显减少,MMP-9的表达明显低于缺血再灌注组,P<0.01。结论山楂叶总黄酮能明显地减少脑梗死的面积,降低MMP-9的表达,发挥脑保护作用。     

高压氧对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对低氧诱导因子-1a的影响

目的探讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注大鼠神经元的保护作用及其对低氧诱导因子(HIF)-1a的影响。方法选取SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、治疗组,每组10只。采用线栓法建立脑缺血再灌注模型,采用TTC染色观察脑缺血再灌注大鼠梗死灶体积;行为学评分观察其神经功能缺损;蛋白印迹法观察HIF-1a的表达及HBO干预后的改变。结果与模型组相比,治疗组大鼠脑梗死灶体积,行为学评分及HIF-1a的表达均明显减少(P<0.05);与假手术组相比,治疗组HIF-1a的表达无明显增加(P>0.05)。结论HBO治疗能抑制组织HIF-1a的表达,从而对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

侧脑室注射重组人血管生长素对脑缺血再灌注大鼠的影响

目的观察经大鼠侧脑室注射重组人血管生长素(Angiogen in,ANG)对脑缺血再灌注大鼠的影响。方法线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,大鼠随机分成4组:ANG治疗组、牛血清白蛋白对照组、MCAO对照组及假手术组,观察大鼠体重的变化,并于治疗3d后进行HE染色、细胞凋亡检测以及vWF因子免疫组织化学染色。结果脑缺血再灌注3d后ANG治疗组大鼠与MCAO对照组及牛血清白蛋白对照组相比,体重显著降低(P<0.05),缺血脑区神经元变性、坏死、间质水肿以及胶质细胞增生程度减轻,凋亡阳性细胞数明显减少(P<0.05),微血管计数增加(P<0.05)。结论侧脑室注射ANG可改善脑缺血大鼠脑内间质水肿和神经元变性,降低凋亡细胞数量,增加微血管数量。ANG可降低脑缺血大鼠体重。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬酶-9 mRNA表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬酶9(caspase9)mRNA表达的影响。方法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为脑缺血再灌注组(A组)、EPO干预组(B组)。制模后A、B两组再分为6h、12h、24h、48h、72h5个亚组。在相应时间点断头取脑,逆转录聚合酶链反应技术检测大鼠皮质caspase9mRNA的表达,并与对照组(C组)比较。结果全脑缺血再灌注后,(1)A组caspase9mRNA的表达各时间点明显高于B组和C组(均P<0.05);(2)B组在6h、12h、24h、48h时caspase9mRNA的表达明显高于C组(均P<0.05),但72h时与C组比较差异无显著性。结论EPO对缺血再灌注损伤后神经元的保护机制之一与阻滞或下调凋亡通路中的caspase9的表达有关。