壳聚糖季铵盐对肺炎克雷伯菌的体外抑菌作用

目的 探讨壳聚糖季铵盐对肺炎克雷伯菌的体外抑菌作用.方法 以梯度稀释涂布平板法检测壳聚糖和壳聚糖季铵盐对肺炎克雷伯菌的直接抑菌作用;采用Real-Time PCR技术检测肺炎克雷伯菌生物膜形成相关的重要基因lsrR、lsrK和gmd的表达;并以结晶紫染色法检测肺炎克雷伯菌的生物膜形成情况.结果 干预后6h时点开始,壳聚糖和壳聚糖季铵盐孔的存活菌计数均显著降低(P＜0.05);干预后12 h壳聚糖季铵盐孔的存活菌计数显著低于壳聚糖组,壳聚糖季铵盐和壳聚糖对待检肺炎克雷伯菌的12h抑菌率分别为(72.6±8.0)％和(50.2±9.3)％(P＜0.05).壳聚糖和壳聚糖季铵盐均能上调lsrR基因表达;壳聚糖季铵盐使lsrK基因表达下调,gmd基因表达也有下调趋势.从干预后6h开始,壳聚糖和壳聚糖季铵盐对肺炎克雷伯菌的生物膜形成都有显著抑制作用,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);但壳聚糖组与壳聚糖季铵盐组之间比较差异并无统计学意义(P＞0.05).结论 壳聚糖和壳聚糖季铵盐能够有效抑制肺炎克雷伯菌增殖及生物膜形成.壳聚糖季铵盐的抑菌能力强于壳聚糖,同时可影响肺炎克雷伯菌生物膜形成相关的多个基因的表达.     

壳聚糖季铵盐的合成及结构表征

用异相法合成了水溶性壳聚糖季铵盐衍生物，并用红外光谱及核磁共振谱进行结构表征。结果表明：在中性反应条件下，壳聚糖分子的季铵盐衍生化反应主要发生于亲该中心Ｃ２位的氨基上，所合成的壳聚糖季铵盐衍生物可直接溶解于水。其水溶液可以任意比例与乙醇、丙二醇、甘油等混溶。     

应用氯化碘法定量测定壳聚糖季铵盐

碘化壳聚糖季铵盐 (ＴＭＣＩ)的季铵化度影响壳聚糖的物理、化学性质及生物活性 ,目前ＴＭＣＩ季铵化度定量检测方法有电位法和核磁波谱法[1 ] 等 ,但这些方法常受实验条件的限制 ,我们试用氯化碘法测定ＴＭＣＩ的季铵化度 ,并与电位法进行比较 ,报告如下。1　材料与方法1 .1     

肝素化壳聚糖季铵盐／壳聚糖复合膜抗凝血性能的研究

以壳聚糖季铵盐，壳聚糖为基本原材料，选用戊二醛为交剂剂及固定剂，制备一种物理机械性能较优的抗凝血材料。探讨了戊二醛及肝素钠两者用量对肝素化程度及血液生的影响。     

壳聚糖季铵盐的合成及其抗菌膜的研究

用壳聚糖和2,3-环氧丙基三甲基氯化铵合成了3种不同取代度(DS:37.3%,56.0%,81.5%)的壳聚糖季铵盐,并用红外光谱和核磁共振对其结构进行表征;测定了所合成壳聚糖季铵盐的溶解度、稀溶液pH稳定性、吸湿性等相关性质,同时对其成膜性、膜抑菌性作了初步研究。结果表明：壳聚糖季铵盐的溶解度、稀溶液pH稳定性和吸湿性随着壳聚糖季铵盐取代度的增加而增加;壳聚糖季铵盐具有良好的成膜性,所得膜透明光滑,有一定的强度和韧性,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果均明显优于壳聚糖膜。     

壳聚糖季铵盐作为基因递送载体的初步研究

目的考察壳聚糖季铵盐体外基因转染活性,寻求一种新的非病毒基因载体递送系统。方法凝胶阻滞实验分析壳聚糖季铵盐包裹质粒的能力,DNase I的保护实验分析载基因纳米粒的抵抗核酸酶降解的能力,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察转染液中有无牛血清和递送不同剂量的基因对转染效率的影响,寻求本递送系统较好的转染条件。另外,用MTT法测定壳聚糖季铵盐的细胞毒性。观察壳聚糖季铵盐和pcDNA 3．1-EGFP以何种比例结合形成的纳米粒、转染液中有无牛血清,质粒的量为多少时对人胚肾T细胞的转染效率是最高的;不同浓度的壳聚糖季铵盐对细胞生长的影响。结果壳聚糖季铵盐纳米粒能转入人胚肾T细胞,虽然转染效率略逊于聚乙烯亚胺,但是细胞毒性明显小于聚乙烯亚胺。壳聚糖季铵盐纳米粒转染细胞72h后效率较高,经综合分析,当pcDNA质量为2μG,壳聚糖季铵盐和peDNA以质量比为5结合形成的纳米粒,在无血清条件下对人胚肾T细胞进行转染,转染效率是最高的。结论壳聚糖季铵盐纳米粒能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达。因此,壳聚糖季铵盐用做基因递送的载体系统值得进一步的研究。     

壳聚糖和羧甲基壳聚糖对口腔五种常见致病菌的抑菌活性研究

目的:比较小分子量壳聚糖及其衍生物羧甲基壳聚糖对口腔五种常见致病菌的体外抑菌作用。方法:用纸片药敏试验检测壳聚糖粘度5、(浓度2%pH6.5),羧甲基壳聚糖(MW-分子量1～2万,浓度2.0%1.5%1.0%0.5%)和羧甲基壳聚糖粘度30(浓度2.0%)对金黄色葡萄球菌,白色念珠菌,幽门螺杆菌,牙龈卟啉菌和变形链球菌的抑菌环情况,并测定以上浓度羧甲基壳聚糖MV1～2万和粘度30的抑菌率。结果:壳聚糖和羧甲基壳聚糖对5种致病因均有抑菌作用;但羧甲基壳聚糖只有接触性抑菌作用;2.0%浓度羧甲基壳聚糖的接触性抑菌作用最强,且小分子量优于中分子量;经高温处理的羧甲基壳聚糖抑菌作用稳定。结论:壳聚糖在pH6.5条件下对口腔五种常见致病菌的抑菌作用优于羧甲基壳聚糖;羧甲基壳聚糖只有接触性抑菌作用。     

壳聚糖季铵盐应用于创面治疗的研究进展

壳聚糖季铵盐是壳聚糖引入亲水性季铵盐基团得到的一类水溶性壳聚糖衍生物,不仅继承了壳聚糖的成膜性、抗菌性、絮凝性、生物可降解性等特性,还具有更好的水溶性,更强的正电性,更广的pH值适用范围,在生物医药、化工、农牧业等领域已有广泛应用,并随制备技术的不断成熟有了更多发展。本文主要介绍了壳聚糖季铵盐在创面治疗中的应用,并展望其在该领域今后的研究方向。     

中药桂皮醛对牙周致病菌的体外抑菌活性研究

目的 探讨桂皮醛对牙周主要致病茵的抗茵活性.方法 采用琼脂稀法药敏敏感试验,测定桂皮醛对牙周主要致病茵(国际标准株和临床分离株)的最小抑茵浓度(MIC).结果 桂皮醛能明显抑制牙周主要致病菌,标准株P.gingivalisATCC33277和F.nucleatum ATCCl0593的MIC值为32μg/mL,分离的77株临床株,其MIC值为32～256μg/mL,其中对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)的平均最低抑菌浓度为(72±0.008)μg/mL,对具核梭杆菌(F.nucleatum)的平均最低抑茵浓度为(96±0.009)μg/mL,对中间普氏茵(P.intermedia)的平均最低浓度为(141±0.031)μg/mL.结论 桂皮醛对牙周主要致病菌具有抗茵活性.     

戊二醛和季铵盐复合消毒剂对鸡常见病原微生物杀灭效果的研究

目的研究戊二醛和季铵盐复合消毒剂对鸡常见的几种病原微生物杀灭效果.方法将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和类炭疽杆菌培养,用PBS缓冲液和含有有机物的溶液(5%鸡粪和10%小牛血清)分别稀释成含菌5×106CFU/ml,分别加入到不同浓度的消毒剂中,作用不同的时间之后,进行平板细菌计数;将含2×105EID50新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)分别与不同浓度的复合消毒剂作用不同的时间,尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚(0.2mL),孵育7天,测其尿囊液中病毒血凝效果.结果 1∶500稀释的复合消毒剂在水溶液和有机物溶液中,10min能百分之百的杀灭大肠埃希菌和葡萄球菌,1∶100稀释时,在10?min内能杀灭类炭疽芽胞杆菌;0.1%的消毒剂在5?min内可有效杀灭NDV和AIV.结论戊二醛和季铵盐复合消毒剂有很强的杀菌和杀病毒能力,即使在有机物存在的条件下,也不影响其杀菌效果.     

STUDY ON ADHERENCE ABILITY OF PERIODONTAL PATHOGENS AND CARIOGENIC BACTERIA TO HYDROXYAPATITE DISKS

Objective To study the adherence activity of six representative periodontopathic and cariogenic bacteria to hydroxyapatite disks. Methods Six periodontopathic and cariogenic bacteria of P. gingivalis, A. actinomycetemcomitans, F. nucleatum, S. sanguis, A. viscosus and S. mutans were cultured in modified MD-300 chemostat according to total fifteen experimental groups of single-specie and each pair of periodontal pathogens and cariogenic bacteria, respectively. After 1 h attached live bacteria on removable hydroxyapatite disks was analyzed by culture technologies to evaluate the adherence level. Results The adherence activity of periodontopathic and cariogenic bacteria to HA was in the following order： S. sanguis 〉 A. viscosus 〉 S. mutans 〉 A. actinomycetemcomitans 〉 F. nucleatum 〉 P. gingivalis. The number of periodontopathic bacteria to HA was enhanced by S. sanguis and A. viscosus, respectively. When mix-cultivated with S. mutans, the colonization of P. gingivalis was reduced significantly（ P 〈 0. 001 ）. Periodontopathic bacteria had no effect on the adherence activity of S. mutans and A. viscosus, except S. sanguis. Conclusion It was showed that the adherence activity of periodontal pathogens was weaker than that of cariogenic bacteria and emphasized the importance of bacterial adherence in determining the level of bacterial colonization on tooth surfaces. It was suggested that periodontopathic bacteria can utilize initial colonizers to become those predominant bacteria in periodontal ecosystem, which maybe have close relation to the periodontopathic mechanism.     

壳聚糖膜促进牙周新附着的实验研究

为了探讨壳聚糖膜对牙周新附着的作用，在６只健康成年杂种犬的上、下颌前磨牙近中根的颊侧形成深５ｍｍ，宽４ｍｍ的Ｕ形骨缺损。实验组在缺损区周围牙槽骨放置壳聚糖膜，对照组不放膜。术后８周、１２周分别处死动物３只，取标本行组织学观察和定量分析。结果表明，壳聚糖膜具有阻止长结合上皮根向迁移和促进牙周新附着的作用。     

羧甲基壳聚糖促进牙周组织再生的安全性

目的 研究羧甲基壳聚糖在牙周局部应用中的安全性.方法 将32只小鼠随机分为4组,每组8只.A组为空白对照组;B组为腹腔注射环磷酰胺阳性对照组;C、D组为羧甲基壳聚糖梯度实验组,在手术缺损区置入不同剂量的羧甲基壳聚糖.术后4周处死动物,应用彗星试验、嗜多染红细胞微核试验计算彗星尾数和微核率;同时收集牙周组织标本进行组织学观察.结果 术后4周C、D组骨缺损区可见少量新骨形成,A组未见明显新骨形成;A组、C组、D组间红细胞微核率及彗星尾数差异无显著性(P>0.05),而B组的红细胞微核率及彗星尾数远高于A、C、D组(F=8.32、47.61,P<0.01).结论 局部应用羧甲基壳聚糖促进牙周组织再生安全可靠.     

阿司匹林－聚天冬酰胺共价复合物的合成及体外释放的研究

作者选用α、β－聚（３－羟丙基）ＤＬ－天冬酰胺［α、β－ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ＤＬ－ａｓｐａｒｍｉｄｅ］（ＰＨＰＡ）这一可生物降解的高分子作为载体，将阿司匹林（ＡＳＡ）通过羧酸酯键与之结合成阿司匹林－聚天冬酰胺共价复合物（ＡＳＡ－ＰＨＰＡ）。将该复合物完全水解后，用紫外分光光度法测定水解产物水杨酸的含量。由此得出该复合物中阿司匹林的接入率为４０．７％（Ｗ／Ｗ）。我们还对该复合物在ｐＨ＝７．４，离子强度μ＝０．５的磷酸缓冲液中的释放作了研究。结果显示：该复合物释放８天后即以零级动力学平稳地释放，平均释放速率以水杨酸计算为２．２２±０．２５μｇ／１０ｍｇ高聚物·天。     

载药量和粒度不同的NET-PHBA高分子药物的体外释放研究

作者分别对相同高分子母体粒度相近但载药量不同，以及载药量相同而粒度不同的高分子药物炔诺酮－α、β－聚（４－羟下基）－ＤＬ－天冬酰胺（ＮＥＴ－ＰＨＢＡ）作 了研究，并对其释放曲线进行了拟线性回归分析，较满意地解释了该药物体外释放行 为。实验表明，载药量为 ２０． １％，１２． ５％，７． ５％的 ＮＥＴ－ＰＨＢＡ，释放 ４个月，每天高聚物释放炔诺酮速率分别为 ０． ３７、０． ２５、０． ２３μｇ／ｍｇ，载药量对释放影响显著。粒度对释放的影响是粒度小，释放快；粒度大，释放慢。但粒度对低载药量的药物影响不明显。     

生物蛋白胶与几丁糖预防肌腱粘连的临床研究

目的：评价生物蛋白胶和几丁糖对肌腱吻合后防止粘连及促功能恢复的作用。方法：３９例涂以生物蛋白胶、３９例涂以几丁糖及４１例不涂以任何药物的肌腱吻合,观察患者手指功能恢复情况,术后随访２～１４个月。结果：应用生物蛋白胶、几丁糖及不涂任何药物三组的手指功能恢复优良率分别为８４．７％、８７．３％、５１．２％,前两组明显优于后一组（Ｐ〈０．０１）。结论：生物蛋白胶、几丁糖对肌腱吻合后功能恢复有良好疗效。     

大鼠生精细胞体外培养条件的研究

目的:寻找一个最适合生精细胞体外培养的培养体系,为进一步培养人类生精细胞提供技术基础.方法:用单一酶-研磨-Percoll法制备15 d龄雄性大鼠生精细胞混悬液用于体外培养.①设计两种不同的培养条件:DMEM/F12和改良人类输卵管液(HTF)作为基础培养液,分为两组.每组根据添加不同浓度的激素分为6小组.添加的睾酮(T)和FSH浓度分别为:对照组H0(T 1 μmol/L,FSH 0 IU/L)、H1组(T 1 μmol/L,FSH 10 IU/L)、 H2组(T 1 μmol/L,FSH 25 IU/L)、H3组(T 1 μmol/L,FSH 50 IU/L)、H4组(T 1 μmol/L,FSH 100 IU/L)、H5组(T 0 μmol/L,FSH 50 IU/L). ②通过BRDU标记和流式细胞仪检测所有实验的生精细胞倍体的变化来判断其发育,进一步确认本研究使用培养条件的可靠性.结果:在生精细胞与支持细胞共培养过程中以改良人类输卵管液作为基础培养液,添加T 1 μmol/L ,FSH 50 IU/L或100 IU/L都适宜生精细胞体外培养;另通过BRDU标记及流式细胞仪检测均表明,在本研究条件下体外培养生精细胞能从初级精母细胞阶段分化到精子细胞阶段.结论:改良人类输卵管液作为基础培养液,添加浓度为50 IU/L或100 IU/L的FSH及T 1 μmol/L,最适合生精细胞的体外成熟培养.     

烧烫伤速效膏治疗烧,烫伤及抑菌作用的实验研究

目的：观察烧烫伤速效膏对烧烫伤的治疗效果，并观察其抑菌作用。方法：采用家兔复制烧烫伤模型，观察烧烫伤速效膏对深Ⅱ°烫伤、Ⅲ°烧伤的影响；并运用试管倍比稀释法，平皿内挖洞灌药法观察该制剂的抑菌作用。结果：试药能明显提高创面愈合率和脱痂率。烧伤面愈合率、脱痂率（7－28天）．提高约19％－35％及13％～38％。烫伤面愈合率（7～21天）提高约3％～52％，与对照组比较有显著性差异（P＜0．01）。该制剂还能抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌的生长繁殖。结论．药对烧烫伤具有明显治疗作用，并具有较强抑菌作用。     

正畸力对牙周组织改建的影响

目的：观察正畸力作用前后正畸牙龈沟液中血小板衍生生长因子（PDGF）和白介素-1D（IL-1β）含量的变化,探讨正畸力对牙周组织改建的影响。方法：选择24例需拔除4颗第一双尖牙矫治的青少年患者,牙列排齐整平后,用弹性橡皮链15呛正畸力拉尖牙向远中,上颌左侧尖牙为实验组,右侧上颌尖牙为对照组,不加力。分别在加力前,加力后1、3、7、14、28d收集实验牙和对照牙远中临面处的龈沟液,ELISA法检测龈沟液中PDGF和IL-1β的含量。结果：实验组尖牙龈沟液中PDGF、IL-1β的含量在加力后均升高,IL-1β含量3d时达高峰、PDGF含量7d时达高峰,28d恢复至加力前水平。对照组龈沟液中PDGF和IL-1β的含量维持在基线水平。结论：正畸牙受力后龈沟液中PDGF和IL-1β的含量发生动态规律性变化,说明二者参与了正畸牙移动牙周组织的改建。     

氟哌酸等常用抗生素对眼部病原菌的抑制作用

作者对临床分离的243株11种眼部病原菌进行氟哌酸及一组眼科常用抗菌剂的体外药物敏感试验。结果表明,抗菌谱及敏感率氟哌酸明显优于其他对照组抗生素(Ridit 值 X~2=309.4,X~2(5)=16.75,P<0.005),依次为:氟哌酸、庆大霉素、卡那霉素、氯霉素、青霉素。对于铜绿假单胞菌,氟哌酸与庆大霉素同样有效,而对于金黄色萄葡球菌尤其是醋酸钙不动杆菌,氟哌酸的抑菌效力比庆大霉素强。结合其良好的组织分布和低毒特性,氟哌酸不失为治疗眼部表浅感染的最佳选择。