缺氧对体外培养的鼠胚神经干细胞分化的影响

目的分离大鼠胚胎皮质神经干细胞（NSCs）进行体外培养,探讨缺氧对体外培养的鼠胚大脑皮质神经干细胞分化的影响。方法对孕14d（E14d）大鼠取鼠胚脑皮质用无血清培养技术分离培养神经干细胞,血清：培养基贴壁诱导分化。通过免疫细胞化学染色检测细胞分化情况;NSCs采用三气培养箱予以不同缺氧干预,缺氧培养后再用10％胎牛血清培养基进行贴壁分化,用MAP2免疫荧光染色检测缺氧对NSCs向神经元方向分化的影响。结果①大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,分化后可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原;②缺氧干预实验中,5％O2组尤以72h组可诱导NSCs向神经元方向分化。结论从大鼠胚胎皮质可成功分离NSCs,缺氧可影响NSCs的分化,适度缺氧可诱导离体培养的大鼠脑皮质NSCs向神经元方向分化。     

氯化锂对缺氧后神经干细胞磷酸化Caspase-9蛋白表达的影响

目的探讨氯化锂对缺氧后神经干细胞磷酸化Caspase-9(P-Caspase-9)蛋白表达的影响。方法分离培养新生Sprague-Dawley乳鼠神经干细胞(NSCs),建立缺氧NSCs模型。将NSCs分为正常对照组、单纯缺氧组、生理盐水干预组和1、3、5 mmol·L~(-1)氯化锂干预组。正常对照组乳鼠NSCs加无血清培养基,单纯缺氧组乳鼠NSCs仅缺氧1 h,生理盐水干预组乳鼠NSCs缺氧1 h后加生理盐水,3组氯化锂干预组乳鼠NSCs缺氧1 h后分别加入氯化锂至1、3、5 mmol·L~(-1)。免疫组织化学法检测各组乳鼠NSCs中P-Caspase-9阳性细胞表达。结果成功建立了NSCs缺氧模型。正常对照组、单纯缺氧组、生理盐水干预组及1、3、5 mmol·L~(-1)氯化锂干预组P-Caspase-9阳性细胞数分别为126.400±0.548、21.000±0.707、21.200±0.837、64.600±0.548、116.800±1.483、17.200±1.643。单纯缺氧组和生理盐水干预组乳鼠NSCs中P-Caspase-9阳性细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05);其余各组NSCs中P-Caspase-9阳性细胞数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化锂可能通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/Caspase-9信号通路调控缺氧NSCs增殖。     

一氧化氮合酶在缺氧胎鼠组织中的表达及当归保护机制的实验研究

目的:探讨一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)在宫内缺氧状态下胎鼠骨髓、软骨、神经组织中的表达,以及中药当归注射液(Angelica injection)对宫内缺氧组织的保护作用.方法:孕龄19天的Wistar孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组,分别给予尾静脉注射0.9%生理盐水、尾静脉注射0.9%生理盐水后建立缺氧模型及尾静脉注射25%的当归注射液后建立缺氧模型处理,行石蜡切片和免疫组化实验以及图像分析和统计分析.结果:对照组组织中nNOS低表达,缺氧组和当归组中nNOS高表达;而后两组比较,当归组nNOS含量比缺氧组明显减少(P<0.05).结论:成功建立宫内胎鼠缺氧模型.nNOS激活产生适量NO对胚胎发育起着生理调节作用,其过量表达则可能是宫内缺氧时引起胚胎多种组织细胞,特别是神经组织损伤的重要机制之一.当归注射液下调nNOS表达活性,对宫内缺氧胎鼠有保护作用.     

胎鼠嗅球分离培养出神经干细胞的研究

目的研究胎鼠嗅球中分离培养产生神经千细胞(NSCs)的情况。方法取孕16～18d的孕鼠。取胎鼠的嗅球,用含10％FCS的培养基培养传代分离出的细胞。免疫细胞化学方法鉴定培养和传代出的细胞,对染色阳性的细胞计数检测纯度。结果P^75染色阳性证明分离培养的细胞为嗅鞘细胞(OECs)；来源于嗅球的细胞培养出的神经球行NeS血染色阳性证明为NSCs；传代OECs纯度为95%-98％。结论胎鼠嗅球中可分离培养出NSCs,OECs可稳定传代。可以作为移植用的种子细胞。     

神经干细胞联合胶质细胞源性神经营养因子脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对脑内移植神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的存活、分化及对帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）模型大鼠的治疗作用.方法：采用原代培养胚胎14.5天的胎鼠腹侧中脑NSCs,单独或经GDNF预处理后移植入PD模型大鼠的纹状体,观察NSCs在纹状体的分化情况,以及PD模型大鼠旋转行为的变化.结果：联合GDNF移植NSCs比单纯移植的NSCs较多的转化为多巴胺能神经元,并能够改善PD模型大鼠的旋转行为.结论：GDNF可以促进中脑来源的NSCs向多巴胺能神经元转化,并对PD模型大鼠有较好的治疗作用.     

外源性神经节苷脂对神经干细胞增殖、分化作用的初步研究

目的 探讨外源性神经节苷脂(GM1)对从胎鼠大脑分离培养的神经干细胞(NSCs)增殖及分化的作用.方法 ①利用无血清培养技术从胎鼠大脑皮层和海马分离培养原代细胞,加血清诱导其分化.②在NSCs培养基和DMEM/F12培养基中加入不同浓度的GM1,观察GM1对NSCs增殖和分化的影响.结果 ①与不含GM1的NSCs培养基相比,在NSCs培养基中加入低浓度的GM1,NSCs的生长无明显改变,随着GM1浓度的增加,NSCs克隆球体积逐渐减小,细胞逐渐死亡;②在DMEM/F12培养基中单独加GM1而不加血清,NSCs克隆球均未见继续生长,也未见分化,而是迅速的死亡.结论 在NSCs培养基中,低浓度(12.5 μg/mL)GM1对NSCs的增殖无明显影响,但较高浓度的GM1对NSCs的增殖有抑制作用;在无血清的DMEM/F12培养基中,GM1不能诱导NSCs分化.     

小鼠胚胎脑源与脊髓源神经干细胞增殖能力的比较

目的 探讨小鼠前脑源和脊髓源神经干细胞 (NSCs) 的增殖能力差异.方法 选择孕14 d C57BL胎鼠, 机械分离法从前脑和脊髓分离培养神经干细胞, Nestin/Sox2免疫荧光染色鉴定NSCs.计算细胞倍增速率 (Multiplication rate) 和细胞倍增时间 (Cell doubling time) , Brd U/Nestin双标检测NSCs增殖.结果 由C57BL胎鼠前脑和脊髓分离得到的细胞群, 均可在体外分裂增殖形成神经球, Nestin&Sox2标记阳性.脑源NSCs增殖速度显著高于脊髓源 (P<0.05) , 而倍增时间则与增殖能力成反比;P5代时两种干细胞增殖最快;Nestin&Brd U双标的NSCs也证明了正在增殖的脑源NSCs (29.65±3.38) %显著多于脊髓源的NSCs (19.93±1.95) % (P<0.05) .结论 来源于前脑的NSCs增殖能力更强.     

血塞通注射液质量标准中生物活性测定的方法

目的建立科学的血塞通注射液生物活性测定方法,进一步完善其质量标准。方法随机选择不同厂家的血塞通注射液,在小鼠常压耐缺氧实验、抗疲劳游泳实验、体内血栓实验、断头存活时间实验中筛选合适的生物活性测定方法。结果小鼠常压耐缺氧实验,4个批号的血塞通注射液与与阴性对照组比较喘息时间延长,差异有统计学意义(P<0.05),符合要求;小鼠体内血栓实验,4个批号的血塞通注射液与阴性对照组进行比较小鼠的未偏瘫个数和偏瘫后恢复个数增多,统计结果具有统计学意义(P<0.05),符合要求。结论血塞通注射液质量标准中建立生物活性测定项是可行的。     

hVEGF121基因真核表达载体的构建及其在神经干细胞中的表达

目的 构建真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以探究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,hVEGF121)基因导入NSCs的表达变化.方法 分离培养胎鼠NSCs,并行nestin、GFAP...     

当归对缺氧鼠胚模型神经干细胞增殖的影响

目的探讨当归注射液对宫内缺氧胚胎大鼠神经千细胞增殖的影响。方法将孕19天孕鼠经尾静脉注入当归注射液，用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧，将鼠胚大脑组织作神经巢蛋白免疫组化染色后，进行图像分析。结果缺氧组鼠胚Nesdn免疫组化反应较对照组增强，阳性细胞增多（P〈0．05）；而当归组鼠胚较缺氧纽减弱，阳性细胞减少（P〈0．05）。结论缺氧可刺激神经千细胞进入增殖状态；当归注射液对宫内缺氧大鼠神经千细胞可能具有保护作用；采用低张性缺氧方法制造胚胎宫内缺氧模型。     

离体培养神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2B的表达

目的研究离体培养的大鼠神经干细胞（NSCs）中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18～19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs，用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18～19天胎鼠海马的NSCs，即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。     

氟桂利嗪和拉莫三嗪对胎鼠缺血缺氧性脑损害的保护作用

目的研究氟桂利嗪(FNZ)、拉莫三嗪(LTG)及两药联合经孕鼠给药,对胎鼠宫内缺血缺氧性脑损害的保护作用。方法将孕20 d Wistar大鼠40只,随机均分为FNZ组、LTG组、FNZ LTG组和对照组。前3组大鼠于脑缺血缺氧术前3 d开始灌胃给药,每天1次,分别为FNZ 0.5 mg/(kg.d),LTG 10 mg/(kg.d),FNZ 0.5 mg/(kg.d) LTG 10 mg/(kg.d)。第3天给药后3 h,每组取8只孕鼠制作宫内缺血缺氧模型,剩余2只孕鼠直接行剖宫产取胎鼠,每胎5只。于缺血缺氧后6、12、24、48 h分别取胎鼠血清0.5 ml,采用ELISA法测定血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和酸性钙结合蛋白(S-100)水平。结果胎鼠缺血缺氧后,血清NSE和S-100水平明显升高。FNZ组、LTG组及FNZ LTG组胎鼠缺血缺氧后各个时间点血清NSE和S-100较对照组明显降低,差异均有极显著性意义(均P<0.01)。联合用药组效果更明显,组间比较差异亦有极显著性意义(P<0.01)。结论产前预防性灌胃FNZ、LTG对胎鼠宫内缺血缺氧性脑损伤具有保护作用,联合用药效果更明显。     

参麦注射液对缺氧／缺糖／复氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的：探讨参麦注射液对缺氧／缺糖／复氧诱导神经细胞损伤的影响，阐明参麦注射液治疗缺血性中风急性期的脑保护作用机制。方法：用孕17～18天SD胎鼠的大脑皮层做原代神经细胞培养，制作缺氧／缺糖／复氧致神经细胞损伤模型，采用Annexin V/PI双染色法行流式细胞仪检测，定量分析参麦注射液对神经细胞凋亡和坏死百分率的影响。结果:参麦注射液能降低缺氧／缺糖／复氧原代培养神经细胞的凋亡率和坏死率。结论:参麦注射液治疗急性缺血性中风的疗效机制与提高神经细胞耐缺血缺氧能力，抑制细胞凋亡，减轻坏死有关。     

神经干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠海马齿状回脑电活动的影响

目的观察外源性神经干细胞（NSCs）移植入局灶性脑缺血大鼠脑脊液（CSV）后海马齿状回（DG）脑电活动的变化。方法制作右侧局灶性脑缺血模型,右侧脑室注射体外培养胎鼠NSCs,通过神经电生理学方法,记录假手术组、脑缺血模型组、生理盐水组和NSCs移植组大鼠局灶性脑缺血90min后再灌注14dDG的脑电活动,分析脑电频谱。结果大鼠脑电图显示,NSCs移植组较脑缺血模型组和生理盐水组脑电活动恢复明显（P〈0．05）。结论NSCs移植入CSF可修复局灶性脑缺血后的脑损伤,促进脑缺血后的脑功能改善。     

宫内缺血缺氧后胎鼠脑内c-jun与Fas mRNA的表达及其相互关系

目的:研究c-jun与Fas mRNA在胎鼠缺血缺氧后脑内的表达关系,探讨围生期缺血缺氧脑损伤发病机制.方法:结扎Wistar孕鼠子宫血管,建立胎鼠缺血缺氧脑损伤模型.用原位杂交检测剖宫产娩出后存活不同时间大鼠大脑c-jun mRNA及Fas mRNA的表达.结果:缺血后15 min,大脑皮层和海马即出现c-jun mRNA的表达,缺血后1～2 h和24 h, c-jun mRNA出现两次高表达;而缺血后1 h,Fas mRNA在大脑皮层和海马出现表达,4 h和48 h出现两次表达高峰.结论:缺血缺氧引起了c-jun 及Fas mRNA的表达增强,c-jun的表达增加可能是Fas高表达的信号通路之一.     

缩宫素对胎鼠脑缺氧损伤的保护作用

围产期胎儿缺氧、缺血可导致婴儿神经系统异常。用无糖、缺氧人工脑脊液培养胎鼠脑切片造成脑细胞损伤模型,研究缩宫素的保护作用。电镜观察显示,缩宫素可使细胞凋亡明显减少;免疫组化测定结果显示缩宫素可使胎鼠海马CA3区缩宫素受体（OTR）和γ-氨基丁酸A受体β1亚基（GABA_ARβ1）明显增多。实验结果表明缩宫素对胎鼠缺氧、缺血神经元的损伤有保护作用。     

叶酸对缺氧新生鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的：探讨叶酸（FA）对缺氧条件下体外新生大鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法：取24h内新生SD大鼠大脑半球,进行NSCs原代培养。分为正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组共4组。培养第3天除正常对照组外其他3组进行缺氧处理,造成缺氧损伤：培养6d后收集细胞,进行MTT法、5-溴脱氧尿苷（BrdU）掺入法和免疫组化双标记法检测叶酸对缺氧NSCs增殖的影响。结果：MTT检测显示,正常对照组细胞OD值较缺氧模型组高,差异有统计学意义（P〈0．05）;缺氧叶酸添加组OD值明显高于其它缺氧组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化双标阳性率比较,缺氧模型组双标阳性率明显下降,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,缺氧叶酸添加组明显高于其它几组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：长时间持续缺氧可造成神经干细胞缺氧损伤;添加叶酸使缺氧神经干细胞增长率增加．提示叶酸能促进体外缺氧新生鼠神经干细胞的增殖。     

中药注射液抗家兔心肌缺血再灌注性心律失常的实验研究

目的:研究参麦注射液、血塞通注射液、参麦注射液与血塞通注射液合用抗家兔心肌缺血再灌注性心律失常的作用。方法:将32只家兔随机分为4组,复制在体心肌缺血再灌注模型,分别于再灌注前经静脉注射9.0 g/L氯化钠注射液、参麦注射液、血塞通注射液、参麦注射液 血塞通注射液。结果:参麦注射液与血塞通注射液均能够降低再灌注性心律失常的发生率、病死率;参麦注射液与血塞通注射液合用具有明显的抗再灌注性心律失常作用(P<0.05)。参麦注射液与血塞通注射液均能够升高心肌组织超氧化物歧化酶的活性,降低心肌组织丙二醛的含量;二者合用效果更明显(P<0.05)。结论:参麦注射液、血塞通注射液、参麦注射液与血塞通注射液合用有抗再灌注性心律失常的作用,参麦注射液与血塞通注射液合用较应用其中单一药物效果更好。     

缺氧对鼠胚大脑神经元c-Fos表达的影响及当归保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠大脑神经元内c-Fos表达的影响及当归注射液是否对缺氧鼠胚大脑神经元有保护作用。方法:将孕15d孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,鼠胚大脑组织经c-Fos和神经元特异性标记物-神经元特异烯醇化酶(NSE)免疫组化双标染色后,进行图像分析。结果:三组鼠胚大脑中神经元特异烯醇化酶阳性细胞数量差异没有显著性;而缺氧组中c-Fos/NSE双染阳性细胞比对照组增多(P<0.05);当归组双染阳性细胞比缺氧组减少(P<0.05)。结论:缺氧可刺激鼠胚大脑神经元内c-Fos的表达。当归注射液对缺氧鼠胚大脑神经元可能有保护作用。     

血塞通注射液治疗冠心病心绞痛临床疗效观察

目的观察血塞通注射液治疗冠心病心绞痛的疗效。方法用丹参注射液作为对照,记录用药前后心绞痛症状,心电图改变。结果血塞通注射液治疗后,病人的心绞痛总有效率为89．2％,心电图改善总有效率为72．9％。结论血塞通注射液治疗冠心病心绞痛疗效显著,值得推广应用。