牛S抗原的提取、鉴定及EAU模型的建立

目的 建立实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）动物模型，研究自身免疫病的发病机制。方法 依据AI－Mahdawi等的方法并加以改进，自牛视网膜组织提取S抗原，并用免疫Wistar大鼠。结果 提取的S抗原与文献报告结果大致相同，免疫的Wistar大鼠全部出现典型的EAU病变，观察临床症状及病理检测。结论 以牛S抗原免疫Wistar大鼠的EAU模型建立成功。     

视网膜S抗原在不同动物诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎

本研究从牛视网膜提纯了S抗原，将其免疫Hartley原鼠，SD大鼠和Lewis大鼠，诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU），但其发生率、临床及组织学表现则有很大没。根据本文的结果及文献报道的结果，胜者就其差异的原因及人类葡萄膜视网膜炎的关联性等方面进行了有关讨论。     

视网膜S抗原在不同动物诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎

本研究从牛视网膜提纯了S抗原,将其兔疫Hartley豚鼠、SD大鼠和Lewis大鼠,诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)。但其发生率、临床及组织学表现则有很大不同。根据本文的结果及文献报道的结果,作者就其差异的原因及与人类葡萄膜视网膜炎的关联性等方面进行了有关讨论。     

依那西普对大鼠实验性葡萄膜炎的治疗作用

目的应用光受体视黄醇类结合蛋白（IRBP）对Wistar大鼠进行免疫,建立Wistar大鼠自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型,研究依那西普对EAU的疗效和作用机制。方法选用雄性Wistar大鼠作为研究对象,动物模型建立使用IRBP于大鼠背部和胁腹部多点皮下注射。评价依那西普对EAU的治疗作用。结果①眼部组织学表现：EAU组Wistar大鼠成功复制疾病模型。②眼部组织学表现：依那西普治疗组Wistar大鼠组织学表现较EAU组明显减轻。③眼内液和血清TNF—a及IL-6水平：EAU组在炎症早期大鼠血清TNF—a浓度、血清和眼内液IL-6浓度高于正常对照组。结论依那西普可以有效改善IRBP诱导的EAU动物模型的眼部炎症表现,延迟发病时间,降低眼局部TNF—a和IL－6的水平。     

利用重组抗原检测抗SSB自身抗体及其临床意义

目的：利用重组抗原检测自身免疫疾患者血清中抗ＳＳＢ自身抗体并探讨其临床意义。方法：应用ＤＮＡ重组技术构建ＳＳＢ基因工程菌，并表达ＳＳＢ融合蛋白。经ＧＳＴ柱层析法化后，分别经蛋白质印迹（ＷＢＴ）法和酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测２０坐干燥综合征患者、６０份系统性红斑狼疮患者和３０份正常人血清。结果：经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（＋）的２４份患者血清，利用重组抗原检测均阳性，经常剂剂盒检测为ＳＳＢ（－）     

iNOS与IFN-γ参与EAU发病机制的研究

目的建立大鼠EAU模型,探讨iNOS与IFN-γ参与EAU发病及其相互作用的机制。方法用视网膜S抗原与Freund完全佐剂免疫大鼠诱导EAU模型。观察EAU发作时间、EAU临床评分及组织病理学改变;并采用免疫组织化学SP法,检测EAU组和对照组动物眼后部葡萄膜视网膜iNOS、IFN-γ的表达。结果EAU组动物的眼睛在免疫后不同时间发生不同程度的炎症（发病率为100%）,临床评分为3.14±0.61,具有阳性体征者均有葡萄膜视网膜组织病理学改变,模型建立成功。经免疫组织化学染色发现,EAU组iNOS、IFN-γ表达阳性率分别为93%、93%。结论iNOS与IFN-γ在Th1细胞参与EAU的发病机制中发挥一定作用。     

牛、羊胆汁中牛磺胆酸提取工艺的对比

目的：完善从牛、羊胆汁中分离提纯牛磺胆酸的工艺。方法：采用盐析、萃取、脱水等生物化学方法和吸附柱层析法及薄层层析色谱法从胆汁中分离纯化牛磺胆酸。结果：从牛、羊胆汁中提取的牛磺胆酸的纯度及提取率差异无统计学意义（P〈0.05）。结论：从羊胆汁提取牛磺胆酸,工艺更为简单,收益更高。     

牛胎盘中肝细胞生长因子的纯化

用高速离心、分段盐析、亲和层析、超滤和阴离子交换层析法，从牛胎盘中分离纯化出一种肝细胞生长因子。结果表明，此因子的最终得率为０．００５ｍｇ／ｇ牛胎盘，其分子量约为９９０００ｕ，它能强烈刺激原代培养大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成。提示利用自制的亲和层析凝胶，通过此提纯流程可以得到一种肝细胞生长因子。     

牛胎盘中肝细胞生长因子的纯化

用高速离心、分段盐析、亲和层析、超滤和阴离子交换层析法，从牛胎盘中分离纯化出一种肝细胞生长因子。结果表明，此因子的最终得率为０．００５ｍｇ／ｇ牛胎盘，其分子量约为９９ ０００ｕ，它能强烈刺激原始培养大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成。提示利用自制的亲和层析凝胶，通过此提纯流程可以得到一种肝细胞生长因子。     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心，盐析及ＤＥＡＥ－纤维素，羟基磷灰石，葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻长有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索，结果；纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲ，Ｍｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛；ＤＬ－甘油醛，Ｄ     

中压液相层析法纯化人VLDL主要载脂蛋白

目的 建立中压液相层析分离法纯化人VLDL主要载脂蛋白(apo) E、CⅠ、CⅡ和CⅢ的方法.方法 以低温乙醇法制备人血浆白蛋白后的残余组分FⅡ Ⅳ为原料,经一次性密度梯度超离心得到VLDL.脱脂后的VLDL(apoVLDL)经中压Sephacryl S-200柱层析得到apoE和apoCs粗品.apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,apoCs经DEAE-Sephacel离子交换层析进行分离.结果 apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,可得纯度为93.8%的纯品;apoCs经离子交换层析分离得到纯度为92%以上的apoCⅡ、apoCⅢ.所纯化各载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ经免疫单扩和SDS-PAGE鉴定为免疫纯及电泳纯.结论 成功建立了一种可大量、快速、高分辨分离提纯载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ的方法.     

薄层分析等电聚焦方法测定重组MUC1等电点及其性质的应用

目的采用薄层等电聚焦方法检测含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗（简称重组MUC1），为不合有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗的下一步离子交换层析纯化蛋白提供参考依据。方法用两性电解质（Ampholine）制备薄层凝胶，平铺在LKB电泳仪上，先预电泳15min，然后加样，电泳至电流不在下降停止电泳。测量等电点标准蛋白距阳极的泳动距离，然后绘制标准曲线，计算出含有组氨酸尾的重组MUC1的等电点值。根据测定的等电点值，选用阴离子交换层析法方法纯化不合有组氨酸尾的重组MUC1。结果等电聚焦方法测定含有组氨酸尾的重组MUC1等电点为5．4，阴离子交换层析法方法纯化获得纯度为83．5％的不合有组氨酸尾的重组MUC1。结论等电聚焦方法间接测定含有组氨酸尾的重组MUC1等电点，为不合有组氨酸尾的重组MUC1进一步的离子交换层析纯化蛋白提供了参考数据。     

Apoptosis of infiltrating cells in experimental autoimmune uveoretinitis

Objective To investigate the cellular phenotype and apoptosis of infiltrating cells involved in experimental autoimmune uveoretinitis (EAU). Methods Immunohistochemical staining and in situ apoptosis staining were performed using monoclonal antibodies to monocytes and macrophages (ED1), major histocompatibility complex (MHC) class-Ⅱ antigen (OX6), T lymphocytes (R73) and TACS 1 Klenow kit on both ocular sections and wholemounts from Lewis rats after immunization with interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP). Results EAU was induced in 12 of 16 Lewis rats with a mean clinical inflammation score of 1.29±0.7.Influx of monocytes, lymphocytes and MHC class Ⅱ-positive cells into the uvea and retina was noted after immunization with IRBP. Apoptosis of infiltrating cells was observed in the uvea and retina, and more apoptotic cells were present in the iris and ciliary body compared with those in the choroid and retina. Conclusion Apoptosis of infiltrating cells occurs at the early stage of EAU, which may greatly contribute to the rapid regression of the inflammation induced by IRBP.     

人脑神经生长因子的分离和纯化及其生物学活性的鉴定

人胎脑经离心、透析和离子交换纤维素层析等方法,分离纯化２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）。根据７ＳＮＧＦ和其活性亚单位β－ＮＧＦ的等电点的不同,分离得到２．５Ｓ的ＮＧＦ。用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电脉测得其分子量约１３．３。用等电聚焦电泳测得其等电点分别为９．０、９．２和９．３５。在ＰＣ１２细胞的培养过程中,加入ＮＧＦ的提取物可以促进ＰＣ１２细胞的突起生长。     

米糠蛋白酶解产物中血管紧张素转化酶抑制剂的研究

目的从米糠蛋白酶解产物中提取制备血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂。方法采用等电点沉淀的方法提取米糠中的蛋白质，先后经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后，采用凝胶层析法分离酶解组分，检测各组分ACE抑制性，对活性较强的组分用阳离子交换树脂SP—Sephadex C-25作进一步的分离检测。结果获得的ACE抑制肽分子量为307．1，其等电点在5～6之间。它在消化液中具有稳定性。其IC50为0．061mg／ml。结论从米糠蛋白酶解产物中获取了ACE抑制剂。     

牛肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链非胶原区1的分离纯化及其在抗肾小球基底膜相关疾病中的应用

目的:分离纯化抗肾小球基底膜(GBM)抗体的特异性靶抗原,并评价其在抗GBM抗体检测中的应用价值.方法:通过孔径不同的筛网从牛肾脏中提取牛肾小球,采用改良的40 g*L-1去氧胆酸钠破坏肾小球细胞而获得GBM,经胶原酶消化后收集可溶性牛GBM粗抗原.在pH 7.5的条件下经Mono Q阴离子交换层析柱分离纯化肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链非胶原区1[α(Ⅳ)NC1],并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定其纯度及活性.应用2 mg*L-1纯化的牛α(Ⅳ)NC1包被酶标板,建立牛α(Ⅳ)NC1-ELISA 方法检测血清中抗GBM抗体,并与经典的以人GBM可溶性蛋白为粗抗原的ELISA法进行对照研究.血清来自90例已知抗人GBM抗体阳性的患者、100例正常人和50例其他肾脏疾病患者.对两种方法进行相关分析并计算牛α(Ⅳ)NC1-ELISA的敏感性、特异性.结果:纯化的牛α(Ⅳ)NC1经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表现为相对分子质量为25×103和50×103的蛋白并可被抗GBM抗体阳性血清所识别;应用牛α(Ⅳ)NC1-ELISA法检测抗GBM抗体的敏感性和特异性分别为100%和98%,与人GBM粗抗原-ELISA的相关性为0.6.结论:应用改良的去氧胆酸钠方法破坏肾小球内细胞并进一步经MonoQ离子交换柱分离纯化牛α(Ⅳ)NC1,可以得到高纯度的特异性靶抗原;纯化的牛α(Ⅳ)NC1可以作为特异性抗原来检测人抗GBM抗体.     

重组人瘦素的分离纯化

目的：探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法：采用强阴离子交换柱(Sepharose Qfast flow)和疏水层析柱(Phenyl Sepharose 6 fast flow)在pH7．5的条件下进行纯化。结果：经Q柱一步纯化后，产物纯度由42．3％到达89．6％，随后通过疏水层析纯化后，产物纯度达到96．2％。经SDS—PAGE证实为单一蛋白条带。结论：通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。     

雷公藤内酯醇对试验性色素膜视网膜炎Th_1反应相关因子的抑制作用

目的:探讨雷公藤内酯醇（TP）对试验性色素膜视网膜炎（EAU）Th1反应相关因子的抑制作用。方法:用ELISA检测IL-12、IFN-γ水平;采用原位杂交染色法,观测TP对EAU的T淋巴细胞IL-12mRNA的表达的影响;采用电泳迁移率改变试验对EAU T淋巴细胞NF-AT活性检测。结果:①TP能有效的降低S-抗原诱导产生的EAU（P<0.05）;②TP能降低EAU T淋巴细胞IL-12、IFN-γ分泌水平;③P能抑制EAT淋巴细胞IL-12 mRNA的表达;④TP抑制EAU T淋巴细胞NF-AT活性。结论:TP对EAU的免疫抑制作用可能是通过抑制与Th1反应相关的调节因子使Th1反应减弱,而使EAU的发病率明显降低。