应用荧光定量聚合酶链反应技术诊断胎儿弓形虫感染

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR )技术用于产前诊断胎儿弓形虫 (TOX)感染及其防治措施。方法　采用FQ PCR技术 ,检测 70例孕期TOXDNA阳性孕妇的羊水和 (或 )脐血的TOXDNA ,阳性者为胎儿TOX感染。对其中 48例TOX感染孕妇给予螺旋霉素常规剂量治疗 2个疗程 ,观察其治疗效果。结果　 (1) 70例TOXDNA阳性孕妇中 ,胎儿TOXDNA阳性 2 1例 ,胎儿宫内TOX感染率为 3 0 % ,羊水和脐血中的TOXDNA阴、阳性结果一致。 (2 )胎儿宫内TOX感染与孕妇血中TOXDNA含量高低有关 ,孕妇血中TOXDNA含量高时 ,对胎儿危害严重 ,胎儿宫内感染率也最高(5 5 % ) ;TOXDNA含量低时 ,胎儿宫内感染率也最低 (2 0 % ) ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 (3 )经螺旋霉素治疗的孕妇 ,其胎儿宫内感染率为 2 1% ,明显低于未治疗者的 5 0 % ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　孕妇TOX感染可危害胎儿 ,FQ PCR检测羊水中TOXDNA可准确地诊断胎儿TOX感染 ,孕期治疗可降低宫内TOX感染率     

实时荧光定量聚合酶链反应技术在产前诊断唐氏综合征中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR技术用于产前诊断唐氏综合征的可行性。方法采用实时荧光定量PCR法,分别检测85例唐氏综合征高风险的中期妊娠妇女的羊水和7例智残儿外周血标本中,21号染色体上特异区域基因片段(DSCR3)和管家基因片段(GAPDH),并计算两者的比值。同时采用细胞遗传学方法分析其染色体核型。结果80例羊水细胞DNA检测DSCR3／GAPDH比值在0．46—1．30之间,染色体核型全部正常;而另5例羊水细胞和7例智残儿外周血DSCR,／GAPDH比值明显升高,达1．64～1．98,染色体核型均为21三体。5例中有3例核型为47,XY, 21;1例核型为47,XX, 21;另1例为易位型[46,XY,-15, t(15;21)]。7例智残儿中4例为47,XY 21;3例为47,XX 21。结论实时荧光定量PCR技术可作为产前快速准确诊断唐氏综合征的有效方法。     

荧光定量聚合酶链反应技术快速产前诊断常见染色体非整倍体的临床应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(quantitative fluorescent polymerase chain reaction,QF-PCR)技术在快速产前诊断染色体非整倍体中的临床应用价值. 方法 分别选择21、18、13、X及Y染色体上的22个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点及AMXY作为遗传标记,用QF-PCR技术对因唐氏综合征筛查高风险和高龄妊娠(≥35岁)行介入性产前诊断的1740例孕妇的绒毛或羊水样本进行检测,并同时进行染色体核型分析,比较并分析2种方法 检测结果 的符合率.结果 共有1690例产前诊断样本同时成功进行染色体核型分析和QF-PCR技术检测.所有QF-PCR检测报告均在48 h内得出.QF-PCR技术共检出染色体数目正常1649例,占97.57％;异常41例,占2.43％.其中染色体核型分析检测到的1639例正常病例,QF-PCR技术检测结果 均正常.染色体核型分析检测到51例染色体异常中,有41例用QF-PCR技术成功检测出,包括30例21-三体、6例18-三体、1例45,XO、1例47,XYY、1例47,XXX、1例69,XXX,1例47,XXY[94]/46,XY[6](QF-PCR技术检测结果 为47,XXY).QF-PCR技术对21、18、13、X及Y染色体非整倍体检出率100.0％,无假阳性.对于唐氏综合征筛查高风险和高龄妊娠人群,QF-PCR与染色体核型分析这2种方法 检测一致性可达99.4％ (1680/1690),该人群中2例染色体数目异常嵌合体、4例结构异常嵌合体及4例染色体结构异常病例QF-PCR技术未能检出,占总检测样本0.6％(10/1690).结论 QF-PCR技术能够快速、准确、经济、高效地产前诊断染色体非整倍体,对于21、18、13、X及Y染色体非整倍体检出率100.0％,对于唐氏综合征筛查高风险和高龄妊娠人群,QF-PCR可以准确和快速地为孕妇提供99.4％的诊断信息.     

应用荧光原位杂交技术快速诊断胎儿染色体数目异常

目的 探讨荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｃｅｎｔ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术在快速产前诊断胎儿染色体数目异常中的价值。方法 对２０例孕１６￣３６周,有产前诊断指征者,在Ｂ超引导下经腹抽取羊水后,应用Ｘ、Ｙ、１８号染色体着丝粒探针１３ｑ１４－ｑ２１和２１ｑ１１特异性探讨,对未培养的羊水间期细胞进行ＦＩＳＨ,然后用荧光显微镜进行观察,并用Ａｐｐｌｉｅｄ ｉｍａｇｉｎｇ染色体     

应用荧光原位杂交技术诊断羊水细胞染色体异常

探讨荧光源位杂交技术于产前诊断羊水细胞染色体异常的实验方法的应用价值。方法对３４例孕１６－２３周有产前认旨征者经腹部抽取羊水,用Ｃｈａｎｇ培养液传代培养,常规制备羊水细胞分裂中期染色体,应用生物素及地高辛标记的人类全着线粒探针和Ｘ、Ｙ、１３、２１、１８号染色体     

产前诊断中常见染色体异常的快速检测与核型分析技术的应用

最常见的胎儿染色体异常多发生于21、18、13号常染色体和性染色体X、Y。染色体数目异常或拷贝数的改变，包括21三体（唐氏综合征）、18三体（Edwards综合征）、13三体（Patau综合征）、45，X（特纳综合征）、47，XXY（Klinefelter综合征）和三倍体，约占产前诊断中有临床意义的染色体异常的80％。唐氏综合征可发生神经系统发育迟缓，心脏和其他器官的先天畸形；     

光谱核型分析技术在产前诊断染色体复杂核型异常中的应用

如何对精细的染色体异常做出准确的核型分析，一直是产前诊断中的研究课题。应用传统的细胞遗传学G显带技术进行的染色体核型分析，已经成为染色体异常的常规筛选方法。但其费时、费力，对复杂染色体核型异常的分析很不理想，难以自动化操作。荧光原位杂交技术具有高度的敏感性和特异性，但它只能检测已知的染色体核型异常。光谱核     

应用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测子宫颈人乳头状瘤病毒16、18型

人乳头状瘤病毒 (HPV)感染与宫颈上皮内瘤变 (CIN)和宫颈癌的发生有密切关系。与生殖道病变有关的HPV的亚型有近 30种 ,可分为低危型和高危型 ,高危型HPV主要为HPV 16、18型。我们应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)技术[1,2 ] ,检测不同宫颈病变组织HPV 16、18型DNA拷贝数量 ,以建立快速、准确地检测HPV16、18型DNA的方法。一、材料和方法1 标本来源 :收集 2 0 0 2年 8月～ 2 0 0 2年 11月我院妇产科送病理检查的宫颈病变活组织标本 (活检标本 ) 2 86份。另随机抽取 1991年～ 2 0 0 2年各种宫颈病变石蜡标本 35 1例 ,其中…     

产前诊断中常见染色体异常的快速诊断

最常见的胎儿染色体异常发生在21,18,13号常染色体和性染色体X、Y。染色体数目异常或拷贝数的改变,包括21-三体(唐氏综合征),18-三体(Edward综合征),13-三体(Patau综合征),45,X(特纳综合征),47,XXY(Klinefelter综合征)和三倍体,约占产前诊断中有临床意义的染色体异常的80%。对这些常见的染色体数目异常,标准的传统产前诊断方法是对羊膜腔穿刺获得的羊水细胞或绒毛抽吸获得的绒毛细胞进行培养,对染色体有丝分裂期的核分裂相进行分析。这就是大家所知的核型分析。除了常见的染色体数目异常,对所有的23对染色体都进行检查,可以检查出包括染…     

聚合酶链反应技术在妇产科的应用

聚合酶链反应技术在妇产科的应用唐小丽，彭芝兰，曹泽毅１９８５年Ｍｕｌｌｉｓ首创的聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术，是分子学领域的一大进展￣［１］。该技术为体外选择性扩增ＤＮＡ片段的一种方法，可用来检测和分析微...     

荧光定量聚合酶链反应检测儿童病毒性脑炎病原体的研究

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)检测儿童病毒性脑炎脑脊液(CSF)中的病原体的价值。方法 应用定性聚合酶链反应(PCR)对2002年1月至2004年10月保定市儿童医院收治的病毒性脑炎患儿78例的CSF标本筛选,检测最常见的引起病毒性脑炎的6种病毒,对单纯疱疹病毒(HSV)，柯萨奇病毒(CV)，埃可病毒(EV)阳性者做FQ-PCR检测，其中HSV分别在3个时点(治疗前、治疗中、出院时)检测DNA拷贝数。结果 定性聚合酶链反应阳性标本FQ PC检测100%阳性,HSV-DNA拷贝数在3个时点有统计学差异，病毒核酸拷贝数与临床表现一致。结论 FQ-PCR可作为儿童病毒性脑炎早期诊断的有效方法之一，动态观察HSV-DNA含量有助于指导治疗，估计疾病的发展和预后. Abstract Objective To discuss the value of using FQ-PCR to check pathogen in children viral encephalitis.Methods From Janurary,2002 to October,2004,PCR was used to select the children of viral encephalitis and check the six kinds of common virus which cause viral encephalitis and then we used FQ-PCR to check the children with HSV(+),CV(+)EV(+) while checking the copied number of HSVE-DNA before,during and after treatment.Results It was 100% that FQ-PCR checked the sample of PCR (+).The number of HSV DNA was different at three time points. The copied number of virus DNA was consistent with clinical symptom.Conclusion FQ-PCR is one of the effective methods to diagnose the children's viral encephalitis.Observing the number of HSV DNA is beneficial for instructing,treating and estimating the development and future disease. Key words Children’viral encephalitis;Pathogen;FQ-PCR;PCR     

荧光定量聚合酶链反应在临床检测沙眼衣原体和解脲支原体的应用

目的:检测不孕妇女和自然流产患者生殖道沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU）的感染率。方法:采用荧光定量聚合酶链反应方法,检测223例生殖门诊不孕妇女和自然流产患者宫颈分泌物CT DNA和UU DNA,同时选择50例正常早孕妇女宫颈分泌物作为对照。结果:原发不孕组妇女宫颈分泌物CT DNA和UU DNA阳性检出率分别为26.0％（平均拷贝数为:2.18X105/mL）和26.7％（平均拷贝数5.3 X105/mL）,高于正常早孕组（P<0.05）;继发性不孕组CT和UU阳性检出率分别为23.8％（平均拷贝数为:1.42X105/mL）和34.4％（平均拷贝数为2.77X105/mL）,与正常早孕组相比有显著差异（P<0.05）;习惯性流产组CT和UU阳性检出率分别为17.9％（平均拷贝数为:0.53X105/mL）和21.4％（平均拷贝数为:1.5 X105/mL）与正常早孕组相比无统计学意义。结论:荧光定量PCR可作为临床常规检测不孕妇女CT和UU感染的重要手段。     

应用荧光原位杂交产前诊断染色体异常的临床价值

目的:探讨应用荧光原位杂交(HSH)产前诊断染色体非整倍体的临床价值.方法:收集120例产前诊断孕妇的新鲜羊水进行FISH检测和染色体核型分析,并将结果与临床追踪确诊结果(随访的新生儿或引产的死胎脐血或外周血的染色体核型)作比较,同时根据FISH的检测效能和分析产前诊断方案,评价HSH的临床应用价值.结果:①HSH检测全部成功,其结果与临床追踪确诊的核型分析一致,并且染色体非整倍体检出率100%;1例孕晚期羊水细胞培养失败,2例羊水培养为四倍体镶嵌体胎儿经临床追踪确诊后为正常染色体.②产前诊断指征中,高龄、多项指征及其他因素的孕妇临床上对FISH及核型分析这两种方法的选择比较,差异无统计学意义(P>0.05);而血清唐氏筛查异常和超声筛查异常的孕妇分别倾向选择FISH(P=0.029)及核型分析(P=0.000).结论:HSH技术能快速准确检测染色体非整倍体的异常.母血清唐氏筛查异常孕妇产前诊断倾向选择FISH检测.FISH可作为孕晚期高危孕妇首选的产前诊断方法.     

多色探针荧光原位杂交技术用于诊断羊水细胞染色体异常

应用羊水细胞进行产前诊断 ,已广泛应用于临床。用间期细胞行原位杂交是检测染色体异常的新技术[1] 。我们应用双色Ｘ/Ｙ计数探针 ,多色Ｘ/Ｙ、13、18、2 1探针荧光原位杂交 (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ,ＦＩＳＨ)技术 ,对妊娠 12～ 2 2周孕妇行羊膜腔穿刺抽取羊水细胞 ,诊断染色体非整倍体和胎儿性别 ,现将结果报道如下。一、资料与方法1.资料来源 :选择 1998～ 2 0 0 0年在我院因分娩过畸形儿 ,要求行产前诊断或引产的孕妇 2 5例 ,孕周 12～ 2 1周 ,年龄 2 5～ 35岁。按不同孕周分为 5组 ,每两周为…     

非多态性位点多重荧光定量PCR技术在产前诊断胎儿染色体非整倍体异常中的应用

目的 探讨非多态性位点多重荧光定量PCR(QF.PCR)技术快速产前诊断胎儿染色体非整倍体异常的可行性.方法 2006年3月至2007年11月间,收集南京大学医学院附属鼓楼医院早孕期自然流产绒毛组织、中孕期羊水及妊娠晚期的胎儿脐血共63例为研究组.同期60例健康成年人外周血标本(男、女性各30例)作为正常对照组.采用非多态性位点QF-PCR技术检测两组各样本的染色体非整倍体异常情况,以人釉原蛋白基因(AMXY)位点为内参照,根据公式计算剂量系数(DQ)值,DQ值在0.7～1.3之间为正常,>1.3为染色体扩增,<0.7则为染色体存在缺失.当2个以上位点电泳峰与AMXY比值异常时,为性染色体数目异常,即各位点与性染色体峰面积比值均>2.0或<0.7.将QF-PCR的检测结果与染色体核型分析结果进行比较.结果 (1)正常对照组中女性性染色体检测结果为AMX,男性性染色体检测结果为AMX、AMY,与染色体核型分析结果一致.各常染色体DQ值的均值为0.7～1.3,标准差为0.05～0.12.(2)研究组63例中有19例为染色体非整倍体异常,其中13例与核型分析结果一致.与核型分析结果不一致的6例中,1例在18q22.3的CNDP2基因位点表现为三体改变,位于18q12.1的CDH2基因位点表现为正常二倍体,其DQ值为1.28,染色体核型分析为47,XY,+18;5例非多态性位点QF-PCR结果提示有染色体拷贝数异常,而核型分析结果未见异常,其中1例为47,XY,+13,核型分析结果为46,XX;1例为Y染色体缺失,而核型分析结果为46,XY;另外3例中1例为47,XX,+16,2例为47,XX,+13,而核型分析结果均为46,XX.(3)研究组63例中有44例染色体为正常二倍体,其中36例(82%)与核型分析结果一致.与核型分析结果不一致的8例中,1例为培养失败;2例非多态性QF-PCR结果为正常男性,而核型分析结果为正常女性;4例核型分析为多倍体,其中3例核型分析为69,XXX,1例核型分析为92.XXXX;1例核型分析为45,XX,rob(13;21).结论 采用非多态性位点QF-PCR技术进行产前诊断胎儿染色体非整倍体畸形,具有通量高、快速、价廉等特点,有较好的临床应用价值.     

荧光定量PCR技术及其在产前诊断和卵裂球植入前诊断中的应用

鉴于目前对染色体异常和基因突变所致的遗传性疾病尚无有效治疗方法 ,积极开展产前诊断和卵裂球植入前诊断 ,避免和减少遗传性疾病患儿的出生 ,是根治遗传性疾病、提高人口素质的关键。通常主要通过外周血淋巴细胞、羊水细胞或绒毛细胞体外培养进行细胞核型分析或通过染色体荧光原位杂交(FISH)进行染色体异常的检测 ,但上述方法不能进行单基因病的诊断 ,并且技术要求较高 ,耗时长 ,常需几天或几周 ,因此可能会耽搁治疗时机。近年分子遗传学和分子生物学的迅猛发展为产前诊断和植入前诊断提供了新的方法。荧光室量 PCR(QF- PCR)是 2 0世…     

荧光原位杂交技术及染色体核型分析在产前诊断中的应用价值

目的探讨与羊水细胞染色体核型分析相比,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在产前诊断中的优缺点及临床应用价值。方法对2009年1月至2010年2月华中科技大学同济医学院附属同济医院208例孕妇抽取羊水体外培养后进行染色体核型分析,其中53例同时应用FISH技术直接对间期核细胞进行13、18、21、X、Y的染色体数目检测。结果 (1)208例中,共完成羊水细胞核型分析199例,诊断成功率为95.7%(199/208),其中异常染色体核型占8.04%(16/199),报告时间平均为(22.49±6.12)d。(2)同时进行核型分析和FISH检测的53例患者,核型分析及FISH诊断成功率均为100%,共发现染色体异常4例,占7.55%(4/53);其中结构异常3例(经核型分析诊断)、数目异常1例(核型分析及FISH均诊断成功)。(3)在染色体数目的诊断上,53例的FISH检测与染色体核型分析的一致率为100%,平均报告时间为2～4d。结论 (1)FISH技术应用于产前诊断染色体数目异常,成功率高,准确可靠,较常规核型分析方法有效缩短报告时间。(2)对于可...     

应用多重巢式及荧光聚合酶链反应技术对β地中海贫血进行植入前遗传学诊断

目前，国外对β地中海贫血的植入前遗传学诊断，主要应用巢式PCR结合突变检测技术”。但由于β地中海贫血基因的高度异质性，我国β地中海贫血突变基因类型与国外报道的不同。本研究根据我国常见的β地中海贫血突变基因类型，应用多重巢式PCR及荧光PCR技术，于2003年对4例β地中海贫血患者进行了临床植入前遗传学诊断，获得1例临床妊娠。现将结果报道如下。     

先天性泌尿系统畸形胎儿的染色体核型及拷贝数变异产前诊断结果分析

目的:探讨胎儿先天性泌尿系统畸形(CAKUT)遗传学病因及胎儿染色体核型分析和高通量测序拷贝数变异(CNV)检测在产前诊断中的应用。方法:回顾性分析孕中期(孕17～26周)超声检查发现CAKUT胎儿,行介入性产前诊断包括G显带染色体核型分析及CNV的检测结果,并随访妊娠结局。结果:(1)1215例CAKUT胎儿中检出染色体异常193例,检出率15.88%,染色体核型分析与CNV检测一致均异常的共189例,其中染色体非整倍体+CNV异常176例,不平衡易位+CNV异常13例;193例中182例(94.30%)为非孤立CAKUT。(2)仅CNV异常20例,检出率1.65%(20/1215);20例中11例致病变异,9例疑似致病变异(家系调查证实8例新发突变,1例母系来源),其中10例为非孤立CAKUT。临床意义不明变异44例,其中28例家系调查证实25例为双亲之一来源、3例为新发突变。(3)产前诊断非整倍体176例,不平衡易位13例,致病和疑似致病CNV 20例经遗传咨询后孕妇知情选择后均终止妊娠,临床意义不明变异中新发变异因多发异常3例终止妊娠。结论:胎儿CAKUT特别是非孤立CAKUT...     

多重荧光定量PCR方法的建立及其在快速产前诊断中的应用

目的 探讨用于快速产前诊断的多重荧光定量PCR(QF-PCR)方法的建立并评价其临床应用价值.方法 2008年5月到2009年7月在北京协和医院产前诊断中心进行产前诊断的孕妇170例,其中收集羊水123例,新鲜绒毛9例,脐血20例,自然流产绒毛18例.孕妇均为汉族,平均年龄(34.1±4.6)岁,平均孕周为(19.6±1.0)周.采用基因组DNA提取试剂盒提取羊水、绒毛及脐血标本中DNA.采用3种荧光素标记的引物,针对人类染色体中的短串联重复序列(STR)位点参照基因库(GenBank)和文献资料设计并合成20对引物,其中21号染色体6对引物,18号染色体4对引物,13号染色体4对引物,X和Y染色体1对通用引物,另有X染色体4对引物,Y染色体1对引物.设计检测方案为每份标本均进行两套8重QF-PCR(8×QF-PCR),共检测21、18、13号染色体及性染色体各4个位点;如果无法达到诊断要求,再追加第3套4个位点.同时与染色体核型分析结果进行对照.结果 (1)核型分析:170例标本均成功进行了核型分析,其中正常核型151例(89%,151/170),异常核型19例(11%,19/170).(2)QF-PCR检测:170例标本中,QF-PCR成功检测167例(98%),失败3例,QF-PCR检测均在2～3 d得出结果.QF-PCR检测结果正常134例,均与核型分析结果一致;核型分析异常的19例中,QF-PCR检测出异常18例(其中8例21三体及3例18三体).167例QF-PCR成功检测标本中,第1套+第2套引物组合共确诊150例(90%,150/167),加用第3套引物组合共检测3例(2%,3/167),另有14例不提供信息(8%,14/167).(3)QF-PCR诊断效率:QF-PCR用于常见非整倍体异常产前诊断的敏感度为95%(18/19),特异度为100%(134/134),假阳性率0(0/134),假阴性率5%(1/19),阳性预测值为100%(18/18),阴性预测值为99%(134/135).(4)QF-PCR检测常染色体及性染色体结果:21号常染色体STR位点中D21S1270和D21S1411杂合度最高,性染色体中DXS8377杂合度最高,扩增较稳定.结论 多重QF-PCR技术能成功用于常见非整倍体异常的快速产前诊断,检测结果准确,适合于规模较大的产前诊断中心进行大样本检测.