靶向调控的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3联合细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌的治疗作用

目的 观察人端粒酶逆转录酶启动子-二步转录增强系统调控下表达活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的重组腺病毒AdHTVP2G5-rev-casp3联合细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌(卵巢癌)的治疗作用.方法 应用活细胞计数法--细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞仪和蛋白印迹法(western blot)检测AdHTVP2G5-rev-casp3联合flavopiridol作用后卵巢癌AO细胞的细胞存活率、凋亡率、细胞周期和细胞中活性caspase-3片段p17及其底物聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶的裂解片段p85的表达情况;观测AdHTVP2G5-rev-casp3联合flavopiridol治疗前后荷卵巢癌裸鼠生存情况、移植瘤体积、肝酶水平及各器官组织的病理检查结果.结果 AdHTVP2G5-rev-casp3[感染复数(MOI)=5～20]或flavopiridol(300 nmol/L)单独作用均不引起AO细胞的显著凋亡,凋亡率均＜11%;联合应用能产生显著的协同杀伤作用,当两者分别以MOI=20、300 nmol/L联合作用时,细胞存活率为11.6%,凋亡率为73.5%,该协同作用在AdHTVP2G5-rev-casp3感染细胞后72 h再加入flavopiridol作用48 h最为显著.低剂量(MOI=10)的AdHTVP2G5-rev-casp3能引起细胞的S期比例显著增高(62.5%).两者联合作用后的AO细胞中p17和p85的表达水平也显著高于两者单独作用时.单独应用AdHTVP2G5-rev-casp3或flavopiridol均可延长荷瘤裸鼠的生存时间[分别为(141±14)、(134±10)d]并抑制肿瘤生长(抑瘤率分别为30%、40%),但两者联合应用具有协同作用,裸鼠生存时间可达(286±6)d,抑瘤率为81%.两者联合应用后裸鼠的肝酶水平无显著升高,肝等各器官组织的HE染色病理检查未见异常.结论 低剂量的活性caspase-3可引起卵巢癌细胞在S期的募集,从而增强细胞对flavopiridol的敏感性;低剂量的活性caspase-3联合flavopiridol对卵巢癌细胞具有显著的协同杀伤作用,能显著抑制移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的生存期,并降低flavopiridol对肝脏的毒性作用.     

活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3分子的构建及其致卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究

目的 构建能自我激活的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3分子,并探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的致凋亡作用.方法利用基因重组技术构建活性caspase-3分子--rev-caspase-3及其重组腺病毒--Ad-rev-casp3;应用免疫组化方法、细胞计数试剂盒8、流式细胞仪和蛋白印迹法分别检测rev-caspase-3作用后卵巢癌细胞系AO细胞中活性caspae-3蛋白的表达情况、细胞存活率、凋亡率、细胞周期、caspase-3活性亚单位p17和聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶(PARP)的分解产物p85的表达水平,应用透射电镜观察rev-caspase-3作用后细胞的超微结构,实时PCR技术检测细胞中凋亡相关基因的表达情况;建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测rev-caspase-3作用后裸鼠生存情况及肿瘤体积的变化.结果 Ad-rev-casp3作用后的AO细胞中显著表达活性caspase-3蛋白,细胞质明显棕染;细胞中活性caspase-3亚单位p17和PARP裂解片段p85的表达水平升高.Ad-rev-casp3以感染复数(MOI)为70作用后的AO细胞存活率为30.3%,凋亡率为40.2%.Ad-rev-casp3以MOI=10作用后的细胞凋亡率只为3.4%,但此时S期细胞比例高达56.5%,G1期比例下降至9.8%,与未感染Ad-rev-casp3(MOI=0)的AO细胞的S期和G1期比例显著不同(P均＜0.05).Ad-rev-casp3作用后的AO细胞呈现显著的凋亡形态改变,电镜下见明显的凋亡小体形成;细胞中活性caspase-3基因的表达水平显著升高,为9.44.Ad-rev-casp3能显著延长荷瘤裸鼠的生存期,平均生存时间为(213±16)d,并显著抑制移植瘤的生长,在第1次注射后53 d时抑瘤率为70%.结论 表达rev-caspase-3的重组腺病毒载体对卵巢癌细胞有强烈的致凋亡作用,并可显著延长荷瘤裸鼠的生存期,抑制肿瘤生长.     

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌细胞及移植瘤干预作用

目的检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞及移植瘤的干预作用。方法应用流式细胞仪和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（TUNEL）检测flavopiridol作用后卵巢癌细胞系AO的细胞凋亡率和细胞周期,应用实时荧光定量PCR技术检测flavopiridol作用前、后AO细胞中细胞周期蛋白（cyclin）D和活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3的表达情况。建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol干预后裸鼠的生存情况及肿瘤体积的变化,TUNEL和免疫组化方法分别检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况和微血管密度（MVD）。结果AO细胞在150、300、500nmol／L浓度的flavopiridol作用下,凋亡率分别为4．1％、10．7％和7．6％;G1期细胞比例显著增加,S期比例显著降低（P〈0．05）。flavopiridol作用后AO细胞cyclin D的表达量（0．25）显著下降,活性caspase-3的表达量（2．55）轻度升高,高于flavopiridol作用前的0．69（P〈0．05）、2．49（P〉0．05）。flavopiridol干预后裸鼠的累积生存率显著提高（P〈0．05）;裸鼠的平均生存时间为（141±14）d,显著高于磷酸盐缓冲液（PBS）作用后的（106±11）d,两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;在flavopiridol干预后53d时抑瘤率为40％。flavopiridol干预后裸鼠的肿瘤组织中有细胞凋亡发生,MVD为（12±5）个,显著高于PBS作用后的（35±10）个,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论flavopiridol能显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期。     

重组腺病毒载体介导的基因治疗及其与放射治疗联合应用对子宫颈癌HeLa细胞的作用

目的　观察重组腺病毒载体 (Ad)介导的野生型p5 3基因 (Ad p5 3)单独及与放射治疗(放疗 )联合应用 (联用 )对宫颈癌HeLa细胞的体内、外作用效果。方法　将Ad p5 3单独或与放疗联用 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术证实转染的成功性 ;通过细胞生长和存活的抑制实验、流式细胞仪分析、梯状DNA(DNAladder)实验 ,以及裸鼠皮下移植瘤的治疗实验 ,观察Ad p5 3对宫颈癌HeLa细胞的体内、外作用及可能作用机制。结果　RT PCR技术检测结果显示 ,加入Ad p5 3后 ,p5 3mRNA表达明显增加。在体外实验中 ,Ad p5 3对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为 6 1 8% ,单独放疗的抑制率为 4 4 6 % ,而Ad p5 3与放疗联用的抑制率为 85 5 % ,后者分别与前两者比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。在体内实验中 ,单独Ad p5 3与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为5 4 8%和 5 8 4 % ,而Ad p5 3与放疗联用的抑瘤率达到 77 4 % ,后者分别与前两者比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。结论　Ad p5 3在体内、外对宫颈癌HeLa细胞生长均有明显的抑制作用 ,而将其与放疗联用则抑制作用更明显。作用机理可能与Ad p5 3诱导细胞凋亡和引起细胞G2 ～M期的阻滞作用有关     

病毒蛋白22增强单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦基因治疗系统杀伤卵巢癌细胞的体内研究

目的　探讨病毒蛋白 2 2 (VP2 2 )的细胞间传递作用 ,以及其促进单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV TK ) 更昔洛韦 (GCV)基因治疗系统对卵巢癌移植瘤细胞的体内杀伤效应。方法　用慢病毒感染卵巢癌 3AO细胞 ,形成携带HSV TK基因的 3AO细胞 (3AO TK)及携带HSV VP2 2 TK融合基因的3AO细胞 (3AO VP2 2 TK)。分别在裸鼠皮下接种 10 %含卵巢癌 3AO TK(3AO TK组 )或 3AO VP2 2 TK(3AO VP2 2 TK组 )的混合细胞 ,并以接种单纯 3AO细胞裸鼠为对照 (3AO组 ) ,每组裸鼠 10只。当肿瘤体积达 15 0mm3后 ,分别于腹腔注射GCV 10mg kg、5 0mg kg。结果　注射 10mg kgGCV后 ,3AO TK组与 3AO VP2 2 TK组肿瘤体积、重量比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ,3AO VP2 2 TK组肿瘤生长明显受到抑制 ;注射 5 0mg kgGCV后 ,两组肿瘤体积、重量比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。注射GCV 10mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 37 7% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 91 5 % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;注射GCV 5 0mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 81 8% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 96 7% ,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　VP2 2介导的自杀基因产物细胞间扩散作用 ,可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

米非司酮诱导卵巢癌细胞株3AO细胞凋亡的研究

目的　观测米非司酮对卵巢癌细胞株 3AO和SKOV3细胞体外增殖和凋亡活性 ,雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)蛋白表达和细胞形态学的影响。方法　应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定 3AO和SKOV3细胞体外增殖活性。应用流式细胞仪 (FCM )检测米非司酮在不同浓度和培养时间下 ,3AO细胞的ER、PR、p5 3和bcl 2蛋白表达率、增殖率和凋亡率。应用光学和电子显微镜观察3AO细胞的形态学变化。结果　 3AO细胞在不同浓度米非司酮 (5、10、2 0、4 0、80 μmol/L)和不同时间培养 (2 4、4 8、72h)下 ,其生长抑制率由 1 7%增加至 75 0 % ,与剂量和时间呈明显正相关 (P <0 0 1) ,但SKOV3细胞增殖无明显变化 (P >0 0 5 )。 3AO细胞凋亡率与米非司酮剂量和培养时间呈正相关 (P <0 0 1)。米非司酮阻断 3AO细胞周期 ,使其停滞于G0 、G1期 ,降低S期细胞比率。米非司酮诱导 3AO细胞凋亡 ,光学和电子显微镜观察发现 ,经米非司酮培养的 3AO细胞呈现典型的细胞凋亡的特征性变化 ,包括染色体皱缩、细胞核碎裂和凋亡小体的形成。米非司酮显著升调p5 3蛋白表达 ,而降调bcl 2蛋白表达 (P <0 0 1)。米非司酮浓度为 10 μmol/L ,培养 2 4h时 ,3AO细胞 p5 3和bcl 2蛋白表达率分别为(5 4 8± 4 0 ) %和 (10 1± 1 2 ) % ,与对照的 (2     

体外模拟二氧化碳人工气腹对宫颈癌细胞生长的影响

目的 观察二氧化碳（CO2）人工气腹对宫颈癌细胞生长的影响，探讨其与乏氧的关系。方法 2005-10—2006-03华中科技大学同济医学院附属协和医院通过裸鼠右下腹腔注射宫颈癌细胞，注射宫颈癌细胞株（Hela）数量：4×10^9／L：将注射后40只裸鼠随机分成4组，每组10只：阴性对照组（常氧组）：仅给予右下腹腔注射宫颈癌细胞；CO2气腹模拟环境按CO2灌注压分3组：CO2灌注压4mmHg（1mmHg=0．133kPa）组，CO2灌注压10mmHg组，CO2灌注压16mmHg组．4周后观察裸鼠体重改变、切除瘤灶称瘤重、瘤体标本用免疫组化测定增殖细胞核抗原（PCNA）、Western-blot方法检测瘤体的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达．结果 与阴性对照组比较，CO2气腹各组裸鼠体重下降明显，而瘤体重量增加相对显著，并随着CO2灌注压的增高这种趋势更为显著（P〈0．05）；CO2气腹各组裸鼠PCNA表达显著高于阴性对照组（P〈0．01）；CO2气腹各组裸鼠HIF-1α蛋白的表达与阴性对照组比较明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）．结论 与阴性对照组比较，CO2人工气腹环境可促进宫颈癌细胞生长，其机制可能与HIF-1α激活了PCNA表达，促进了细胞增殖有关。     

肿瘤坏死因子、更生霉素和干扰素-γ联合应用对人卵巢癌裸鼠模型的协同作用

目的：研究联合应用肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素－γ（IFN－γ）和更生霉素（KSM）对人卵巢癌裸鼠模型的协同作用。方法：将荷瘤裸鼠随机分成4组，分别用生理盐水、KSM、TNF＋IFN－γ、KSM＋TNF＋IFN－γ处理，观察肿瘤生长情况。结果：各组肿瘤相对体积比较，KSM组和KSM＋TNF＋IFN－γ组与对照组比较，差异有显著性（P＜0．05和P＜0．01）；TNF＋IFN－γ组与对照组比较，差异无显著性（P＞0．05），而KSM＋TNF＋IFN－γ组与KSM组比较，差异有显著性（P＜0．05）。结论：KSM与TNF、IFN－γ联合应用有协同抗卵巢癌细胞系3AO的作用，为临床应用提供了理论依据。     

白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨

目的：探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌模型的肿瘤生长及凋亡的作用。方法：于5周龄裸鼠腋窝外侧皮下注射1×10 7个／mLHela细胞悬液100uL,将15只构建成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,分别于瘤体内注射转染试剂Lipofectamine2000与基因重组质粒pDC316-hIL-24（A组）、空质粒pDC316（B组）以及磷酸盐缓冲液（C组）,比较干预后各组移植瘤的体积及抑瘤率。应用RT-PCR法测定移植瘤中h／L-24的表达．HE染色观察各组肿瘤组织形态学变化。免疫组化方法研究肿瘤细胞凋亡情况。结果：①IL-24基因成功转染人肿瘤细胞并在其中成功表达,至实验结束时,B组和C组移植瘤体积大于A组（F=63．395,P〈0．05）;A组的平均抑瘤率高于B组（t=130．920,P〈0．01）。②病理学观察见A组宫颈癌细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。⑧免疫组化结果显示,A组BCL-2蛋白表达低于其他2组（F=6．164,P〈0．05）,而其同源蛋白BAX表达高于其他2组（F=58．426,P〈0．05）。结论：基因重组质粒pDC316-hIL-24对宫颈癌裸鼠模型肿瘤生长具有明显的抑制作用,其可能通过激活细胞凋亡通路而诱导肿瘤细胞凋亡。     

全反式维甲酸与顺铂联合在体外对卵巢癌细胞株3AO增殖、分化、凋亡的影响及其机制的探讨

目的 观察全反式维甲酸（ATRA）和顺铂（CDDP）在体外对人卵巢癌细胞株3AO的增殖、分化和凋亡的影响，探讨全反式维甲酸提高3AO细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法 ATRA，CDDP以及两药联合分别处理卵巢癌3AO细胞株，MTT法检测细胞存活率，瑞氏染色后高倍镜下计数凋亡细胞数，细胞免疫化学测定bcl-2，p53的表达。显微镜下观察细胞形态变化。结果 细胞存活率在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，且低于同剂量单用组（P〈0．01）；细胞凋亡率在联用组中随ATRA剂量的增加而增加，且高于同剂量单用组（P〈0．01）；bcl-2在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，p53在联用组中随ATRA剂量的增加而增加。细胞形态随ATRA剂量的增加而趋向下成熟细胞。结论 全反式维甲酸能抑制卵巢癌细胞株3AO的增殖，诱导其分化，提高其对顺铂促凋亡效应的敏感性。其作用机制可能与bcl-2的表达下降有关，p53作用尚不清楚。     

Sequential combination therapy with flavopiridol and autocatalytic caspase-3 driven by amplified hTERT promoter synergistically suppresses human ovarian carcinoma growth <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis> and in mice

Background

Induction of cell apoptosis and regulation of cell cycle are very attractive for treatments of tumors including ovarian carcinoma. Flavopiridol is a potent small molecular cyclin-dependent kinase(cdk) inhibitor, but its antitumor efficacy is not satisfied yet. Caspase-3 play a major role in the transduction of apoptotic signals and the execution of apoptosis in mammalian cells. We have successfully constructed the recombinant adenovirues AdHTVP2G5-rev-casp3 containing autocatalytic caspase-3 (rev-caspase-3) driven by amplified hTERT promoter system (TSTA-hTERTp). In this study, we applied it with flavopiridol to investigate their antitumor effect on ovarian cancer in vitro and in vivo.

Methods

Cell viabilities were determined using Cell Counting Kit 8 and flow cytometry. RT-PCR and immunoblotting assays were used to detect cellular apoptotic activities. Tumor growth and survival of mice bearing tumors were studied.

Results

Flavopiridol or AdHTVP2G5-rev-casp3 at low dosage alone was mildly cytotoxic in vitro with a viability rate of 86.5?±?4.7% for 300 nM flavopiridol and 88.9?±?5.4% for AdHTVP2G5-rev-casp3 (MOI 20). By contrast, significant synergism of their sequential combination was observed, and the treatment of AdHTVP2G5-rev-casp3 (MOI 20) infection for 72 h, followed by flavopiridol (300 nM) for 48 h, can result in the most synergistic cell death, with cell survival rate and apoptotic rate of 11.6% and 69.7%, respectively. The sequential combination showed synergistic tumor suppression rate of 77.8%, which was significantly higher than that of AdHTVP2G5-rev-casp3 (33.6%) or flavopiridol (40.1%) alone. The mean survival of mice treated with the combination was 286?±?8 d, which was synergistically longer than that of mice treated with AdHTVP2G5-rev-casp3 (141?±?14d), flavopiridol (134?±?10 d) or controls (106?±?11 d) (P?<?0.01).

Conclusions

The sequential combination of rev-caspase-3 and flavopiridol result in significant synergistic cell killing effects, significant tumor growth suppression and extended survival of mice bearing OVCAR3 cells. The combination should be further explored as a potential clinically useful regimen against ovarian cancer.

     

醋酸甲羟孕酮增强顺铂对人卵巢癌耐药细胞抗癌作用的研究

目的:观察醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢癌CoC1/cDDP细胞移植瘤的生长抑制作用及对DDP的耐药逆转作用,并分析其作用机制。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组5只。(1)对照组:腹腔注射等体积生理盐水;(2)DDP治疗组:每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg。(3)MPA治疗组:每只每次灌胃30mg/kg;(4)联合治疗组:每只每次灌胃MPA 30mg/kg,1h后每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg,每隔2天给药1次,共4次,于治疗第1、5、10、15、20天分别测瘤体积,20天后处死裸鼠,完整剥出瘤组织,称瘤重,计算抑瘤率;通过流式细胞仪检测亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞鉴定细胞凋亡,分析移植瘤细胞周期;用半定量RT-PCR法检测移植细胞组织Survivin-ΔEx3、caspase-3、P21WAF1/CIP1及GST-π4基因mRNA表达。结果:(1)MPA组、MPA+DDP组治疗第10天起皮下移植瘤体积明显小于DDP组和对照组,且进行性缩小(P<0.01);抑瘤率分别为51.63%、62.21%,均明显大于DDP组的6.84%(P<0.01),并且两组间有显著差异(P<0.01);(2)流式细胞仪分析显示,移植瘤出现亚G1期峰及AnnexinV+/PI-细胞均证实MPA能诱导CoC1/cDDP细胞凋亡,并显著高于对照组及DDP组,并出现G1期阻滞;与DDP合用除出现G1期阻滞外又出现G2/M期阻滞,S期明显减少,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞进一步上升;(3)半定量RT-PCR检测显示,MPA组Survivin-ΔEx3、GST-πmRNA下调,而P21WAF1/CIP1、caspase-3 mRNA上调,与DDP合用后,对Survivin-ΔEx3、P21WAF1/CIP1及GST-πmRNA的表达无协调作用,而对caspase-3 mRNA有协同上调作用。结论:MPA通过阻滞G0/G1期明显抑制了CoC1/cDDP移植瘤生长,并有很强的致凋亡作用,同时下调GST-πmRNA,从而逆转对顺铂耐药。     

半胱天冬酶3前酶增强胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合双自杀基因系统治疗人卵巢癌的体外研究

目的探讨半胱天冬酶3前酶(procaspase3)能否增强胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶/5氟胞嘧啶+更昔洛韦(CDTK/5FC+GCV)系统对人卵巢癌细胞的体外杀伤作用。方法构建procaspase3的表达载体pcDNA3casp3和人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的CDTK融合双自杀基因表达载体pBTdel279CDTK。应用蛋白印迹法检测pcDNA3casp3和pcDNA3质粒转染后的3AO细胞(3AOpcDNA3casp3、3AOpcDNA3细胞)中procaspase3蛋白的表达情况;应用RTPCR技术检测pBTdel279CDTK和pBTdel279分别转染的3AOpcDNA3casp3和3AOpcDNA3细胞中CD和TK基因的表达情况;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪技术、蛋白印迹法和荧光底物分析法分别检测4种细胞在CDTK/5FC+GCV系统作用后的细胞存活率、细胞周期及半胱天冬酶3(caspase3)活性。结果3AOpcDNA3casp3细胞有明显的procaspase3蛋白表达,而3AOpcDNA3细胞则无表达。3AOpcDNA3casp3和3AOpcDNA3细胞在pBTdel279CDTK转染后均可检测到CD和TK基因,但在pBTdel279质粒转染后则CD和TK基因表达均为阴性。在5FC+GCV作用下,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞的存活率显著低于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞。在5FC(2mmol/L)+GCV(10μg/ml)作用48h后,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞的凋亡率为37.98%,S期比例为49.67%,分别高于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞的21.34%和35.76%,两者分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在5FC(1mmol/L)+GCV(1μg/ml)作用48h后,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞中的caspase3活性值为189.7,高于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞的44.9,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论procaspase3可显著增强CDTK/5FC+GCV系统对人卵巢癌细胞的杀伤作用。     

Differential induction of apoptosis by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in human ovarian carcinoma cells

OBJECTIVES: In this study, we examine the sensitivity of a panel of ovarian carcinoma cells, which includes four primary ovarian cancer cell samples, and four normal ovarian epithelium samples to tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). We also examine the intracellular regulation of TRAIL-mediated apoptosis. METHODS: The sensitivity to TRAIL was determined by short-term survival assays on seven ovarian carcinoma cell lines, four primary samples of ovarian cancer, and four normal ovarian epithelium samples. We assessed the activation of the apoptotic pathway in TRAIL-resistant and -sensitive tumor cells. The expression of TRAIL receptors was determined by flow cytometry. The protein expression of FADD, XIAP, caspase-8, caspase-3, BAX, and c-FLIP were determined by immunoblot analyses. RESULTS: We show that ovarian cancer cells display variable sensitivity to TRAIL-induced apoptosis although most cell lines have similar sensitivity to cisplatin. Normal ovarian epithelium samples were mostly sensitive to TRAIL. In sensitive cells, TRAIL induced caspase-8-dependent apoptosis, which subsequently led to activation of caspase-3. Both sensitive and resistant cells expressed caspase-8, caspase-3, FADD, XIAP, and c-FLIP at similar levels. A significant enhancement in cell death was observed in TRAIL-resistant cells when c-FLIP(L) levels were downregulated by RNA interference. CONCLUSIONS: These data suggest that sensitivity to TRAIL and chemotherapy does not necessarily correlate in human ovarian cancer cells. Cancerous cells isolated from patients with ovarian cancer show variable sensitivity to TRAIL but most normal ovarian epithelial cells are sensitive. In human ovarian cancer cells, c-FLIP(L) may participate to the regulation of the TRAIL signaling cascade.     

白细胞介素-15治疗3AO裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探讨白细胞介素-15(IL-15)治疗3AO裸鼠皮下移植瘤的效果及其机制。方法:建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组,每组12只。I组为顺铂(cD-DP)3mg/kg;Ⅱ组、Ⅲ组分别为IL-1550μg/kg,100μg/kg;Ⅳ组为cDDP1.5mg/kg加IL-1550μg/kg;Ⅴ组为对照组,注射生理盐水(各组药物均腹腔注射,按每只裸鼠0.2ml配制),1次/d,连用1周。观察移植瘤成瘤率、裸鼠生存期、生存延长率及肿瘤生长曲线。停药1天,1周,2周后,观察移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;对移植瘤及裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查。结果:实验组与对照组相比荷瘤裸鼠生存延长率,脾脏重量,移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数均有明显差异。病理学检查示各治疗组均见肿瘤坏死,肿瘤细胞周围及肿瘤内淋巴细胞明显浸润。IL-15治疗组脾脏有充血增生表现,肝脏肝细胞嗜酸性变性,肝细胞水肿,周围有浊肿;cDDP治疗组肾脏近曲小管和远曲小管细胞水肿,管腔变小;对照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变。结论:IL-15对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,其机制可能与IL-15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关。     

2-甲氧雌二醇对子宫颈癌细胞及其移植瘤的作用

目的探讨2-甲氧雌二醇（2-ME2）对HeLaS3细胞的作用,以及对鼠荷人宫颈癌移植瘤的作用。方法应用细胞增殖检测和细胞周期分析,检测加入不同浓度2-ME2的HeLaS3细胞及二甲基亚砜（实验组）的生长情况和细胞周期变化,以仅加入二甲基亚砜的HeLaS3细胞作为对照（对照组）;采用荧光显微镜观察HeLaS3细胞的形态变化,以DNA电泳检测细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法检测2-ME,对诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的表达。此外,建立鼠荷人宫颈癌移植瘤模型,口饲2-ME2（75mg／kg）14d,检测肿瘤体积的变化,并通过原位细胞凋亡检测,分析肿瘤中的细胞凋亡情况。结果1μmol／L2-ME2作用48h后,HeLaS3新生细胞数是对照组的81％（P〈0．05）,作用96h,是对照组的19％（P〈0．01）。5μmol／L2-ME2作用20h后,凋亡细胞由对照组的4％增至16％,G2／M期细胞由对照组的16％增至55％（P〈0．01）;荧光显微镜发现典型的核固缩及形态异常的有丝分裂中期细胞,DNA电泳发现典型的梯状DNA条带。iNOS的表达随2-ME：作用时间延长和浓度增加而变化,与凋亡变化相似,而且iNOS抑制剂1400W抑制了2-ME2诱导的细胞凋亡。在动物实验中,与对照组相比,2-ME2治疗组宫颈癌移植瘤体积下降34％;原位细胞检测发现,2-ME2治疗组肿瘤切片中凋亡和坏死细胞增多。结论2-ME2具有抑制人类宫颈癌细胞HeLaS3及鼠荷人宫颈癌移植瘤生长的作用,有可能成为宫颈癌抑制剂,