在可回用两水相体系中进行青霉素酰化酶的相转移催化裂解青霉素G为6-APA

在光敏感可回用高聚物PNBC与pH敏感型可回用高聚物PADB形成的两水相体系中进行同定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应.在这个两水相体系中,通过优化,在1%NaCl存在下,6-APA的分配系数可达5.78.催化动力学显示,达平衡的时间近7 h,反应最高得率约85.3%(pH 7.8,20℃).较相近条件下的单水相反应得率提高近20%.在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸义转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果.此外,采用周定化酶较固定化细胞效率高,占用下相体积小,较游离酶稳定性高,且完全单侧分配在下相.因此,在两水相中进行固定化酶的催化反应具有明显的优越性.形成两水相的高聚物PNBC通过488 nm的激光照射或经滤光的450nm光源照射,pH敏感型成相聚合物PADB可实现循环利用,高聚物的回收率在95%～98%之间.     

固定化酶催化合成头孢克洛与产物的分离纯化

应用来源于粪产碱杆菌的青霉素G酰化酶催化合成头孢克洛,并对生物转化反应过程进行了研究。在反应条件：pH 7.0、25 ℃、磷酸钠缓冲体系、加酶量3 U/mL和底物浓度60 mmol/L时,转化率达到85%,表明粪产碱杆菌青霉素G酰化酶具有较高的催化活力。研究了新型分离纯化方法,经过树脂分离的产物纯度超过95%,主要杂质含量小于0.5%,可以达到药典要求,为生物法合成头孢抗生素走向产业化奠定了基础。     

固定化青霉素酰化酶动力学参数测定

本文介绍一种测定固定化酶催化反应动力学参数的新方法。在纤维间扩散阻力和外扩散阻力存在下,改变底物输送流速,测定纤维状固定化酶的一系列对应反应初速度;用双倒数图和Dixon图分别求各种流速下的表观米氏常数(K_m~(?))和表观产物抑制常数,再用所求得的各种表观动力学参数与对应的底物输入酶柱的线速度倒数的线性关系式,两次图解求得本征动力学参数。采用这一方法求得纤维状固定化青霉素酰化酶催化重排酸水解的本征米氏常数(K_m)、产物7-ADCA和苯乙酸抑制常数的本征值(K_p,K_q)分别为6.9,16.8和94.4mmol/L。     

聚丙烯酸载体用于青霉素酰化酶的固定

以反应性单体丙烯酸和交联剂二乙烯基苯,以石油醚为致孔剂,通过悬浮聚合制备固定化酶的载体,并用于对青霉素酰化酶的固定。研究了丙烯酸与二乙烯基苯以不同摩尔比对青霉素酰化酶固定活性的影响,以及悬浮聚合时水油相比例的不同所合成的载体对固定化酶性能的影响。当丙烯酸和二乙烯基苯摩尔比为84.2:4时合成的载体固定青霉素酰化酶的酶活为2784U/g,而水油相比为2.75:1（丙烯酸和二乙烯基苯摩洋比为84.2:5）时固定青霉素酰化酶活达到2183U/g。固定青霉素酰化酶可使青霉素转化,得到半合成青霉素的中间体6-氨基青霉烷酸,由此可制成高效、广谱、服用方便的新青霉素。     

青霉素酰化酶研究——Ⅰ.抑制作用,纯化和性质

丙酮、乙醇和苯丙氨酸是大肠杆菌青霉素酰化酶的竞争性抑制剂,分别抑制模拟底物3-苯乙酰胺基6-硝基苯甲酸水解的活力。青霉素酰化酶粗酶液经硫酸铵盐析,pH5沉淀,SE-Sephadex C50层析,苯丙氨酸-Sepharose 4B疏水层析和DEAE-Sephadex A25层析可得纯酶,聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳呈现一条带,比活为27.5u/mg蛋白。纯化总活力回收率为28.1%。青霉素酰化酶分子量约为90000,有两个亚基,分子量分别为70000和20000,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,催化青霉素G水解的米氏常数为2.94mmol/L。     

固定化酶裂解Pen-GK生产6-APA的实验设计及其工业化

本文通过研究固定化青霉素酰化酶裂解青霉素工业钾盐(Pen-GK)生产6-APA的反应机理，确定了最佳裂解实验流程，并对裂解罐的搅拌装置、pH自控装置、加氨装置、温度自控装置、过滤系统等进行了最佳设计。     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

PGA在含环氧活性基的多孔高聚物载体上的固定化及修饰

研究了青霉素G酰化酶(PGA)在含环氧活性基的多孔高聚物载体上的固定化及修饰,优化固定化条件为1 mol/L,pH 8.0的磷酸钾缓冲体系,每克载体(湿重)投酶量为500~550 U,30℃下150 r/min固定化36~48 h,得到的固定化酶表观酶活为每克载体(湿重)177 U,表观酶活回收率35%。固定化酶经巯基乙醇修饰后提高了热稳定性。固定化酶水解青霉素G的最适pH为9.0,最适温度为47℃,在pH 4~9,40℃以下稳定。固定化酶的各项性能均优于游离酶。     

粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶拆分制备（S)-2-氨基-4-苯基丁氨酸

粪产碱杆菌来源的青霉素G 酰化酶（Alcaligenes faecalis penicillin G acylase ,AfPGA）可以对映选择性地水解N苯乙酰苯基丁氨酸制备（S）-2-氨基-4-苯基丁氨酸。反应体系的pH及温度对酶的对映选择性影响不显著。研究表明,水饱和的乙酸乙酯体系要优于传统的水相体系,该体系显著提高了底物N苯乙酰化苯基丁氨酸的溶解度,并可简化产物的分离过程。当底物的转化率为48.6%时,（S）2氨基4苯基丁氨酸的光学纯度（e.e.值）为99.8%。     

PEG修饰青霉素酰化酶及其在两水相生物转化体系中的分配

厅用对甲苯磺酰氯法,用聚乙二醇对青霉素酰化酶进行化学修饰,修饰酶的比活为未修饰酶的75％,稳定性比游离酶有了很大提高。酶在带修饰酶的聚乙二醇与葡聚糖组成的两水相体系中的分配系数为25。     

青霉素过敏快速皮试仪在儿科应用的体会

目的 探讨青霉素快速皮试仪在儿科临床应用的可行性.方法 从440例做青霉素过敏试验的患儿中,随机分成实验组220例和对照组220例,采用青霉素快速过敏试验法与采用传统青霉素过敏试验皮内注射法作对照,并观察记录.结果 两种皮试方法结果比较,差异有统计学意义,两种皮试方法致患儿疼痛比较,差异有统计学意义.结论 青霉素快速皮试仪准确性高,效果可靠,安全,无痛,省时,具有临床应用价值.     

高分子载体材料对青霉素酰化酶的固定化作用

介绍了天然高分子材料和合成高分子材料对青霉素酰化酶的固定化作用，着重讨论了高分子材料的制备、性质及其表面修饰对固定化酶活性和使用稳定性的影响。     

心理因素可导致青霉素皮试假阳性

目的：论心理因素可导致青霉素皮试假阳性。方法：直接询问法、间接询问法和对照法。结果：同等人数用直接询问法阳性率占35％,用间接询问法阳性率占15％,且女性多于男性。结论：从观察结果发现,青霉素皮试假阳性不仅与局部刺激、全身症状而且和心理因素有关。     

功能基化聚丙烯酸甲酯固定化青霉素酰化酶

合成了一系列大孔丙烯酸甲酯－二乙烯苯交联共聚物,经酰肼化、叠氨后固定青霉素酰化酶,考察了反应条件对固定化酶的影响,当交联剂用量为３０％,至孔剂量为１３０％,混合致孔剂（正庚烷与乙酸乙酯）中正庚烷的质量分数为５５％时,所制的载体经活化后得到的固定化酶酶活较高,为９５ｕ／ｇ（湿）,用分批式反应器连续水解青霉素Ｇ钾盐,使用６３批次后仍保留酶活７９．４％。     

对主诉青霉素阳性患者的临床再探讨

目的　对 12 3例以往青霉素阳性患者 89例青霉素皮试阳性者再分析。方法　对 89例青霉素皮试阳性者运用 0 .2 %利多卡因作为溶液配制剂进行测试 ,定人观察 ,同时避免了在皮试液的温度、浓度、皮试部位、病人心理等方面易发生假阳性的因素。结果　在 89例青霉素皮试局部阳性者中 ,青霉素阴性为 69例 ,注射青霉素后有阳性反应者 14例 ,有阳性症状者 6例 ,分别占77.5 1%、15 .7%、6.85。结论　假阳性率的产生与测试者、皮试液、病人三者均有一定的联系 ,皮试时要规范操作、爱岗敬业 ,可减少假阳性的产生     

男性青霉素假阳性400例分析

目的了解青霉素类假阳性反应发生的原因;方法将400例男性老年患随机分为两组用高低两种浓度试液做比较试验,数据经统计学处理;结果低浓度试液假阳性率明显低于高浓度试液,P<0.01,有显差异;结论假阳性反应和皮试液浓度过高有关。     

UPLC-MS/MS检测女金丸中9种青霉素类抗生素残留*

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法同时检测女金丸中9种青霉素类抗生素残留。方法 采用ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）分离，以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱。在电喷雾离子源，正离子模式下，以多反应监测模式（MRM）扫描进行检测，外标法定量。结果 9种抗生素在相应范围内呈良好线性关系，相关系数（r）均大于0.999；检测限为0.01～0.03 ng·mL-1，定量限为0.02～0.1 ng·mL-1；平均回收率（n=6）为75.4%～100.2 %，RSD 为0.54%～3.43%。结论 该方法准确、简便、灵敏、高效，可用于女金丸中9种青霉素类抗生素残留的检测。     

青霉素过敏试验皮试仪与皮内注射的对比研究

目的：研究快速青霉素过敏皮试仪在临床应用中的安全性。方法：从2004年2月至2007年12月随机选取在我院治疗的12669例患者,并随机分为皮试仪组和皮内注射组,对比结果。结果：皮试仪组6341例,阳性38例,阳性率0．6％;皮内注射组6328例,阳性262例,阳性率4．14％,两组皮试阳性率有显著差异,根据皮试结果用药,均无严重不良反应发生。结论：青霉素快速过敏皮试仪方法简便、无痛、所需时间短、安全性强,准确性高,使用效果好,可代替皮内注射法,适合推广应用。     

青霉素G酰化酶调节基因定点诱变的研究

构建了大肠杆菌中青霉素G酰化酶（PAC）的调节基因（pacR）翻译起始密码定点突变株。对突变后PAC的表达调控特征进行了研究，结果表明：突变株的pac基因表达后能正常加工成24ku、65ku的α亚基和β亚基；突变后，虽然PAC表达仍需要苯乙酸诱导，但是，可诱导性提高，形成低组成型表达，无葡萄糖有分解代谢物阻遏效应，因而pacR对PAC表达水平存在着影响，pacR基因是葡萄糖以及它的分解代谢物在分子水平上影响PAC表达的另一作用因素。采用突变株进行发酵生产中，PAC产量较亲株提高3倍，而且可以采用葡萄糖作为碳源，有利于改善PAC的生产。