c－Ha－ras反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用

应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ）对人膀胱癌细胞Ｔ２４进行作用。结果显示：ＡＳＯ－ｒ能明显抑制癌细胞中ｒａｓＰ２１的表达，并能引起Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞生长增殖的抑制，且不同浓度的ＡＳＯ－ｒ其抑制率不同。结果表明：ＡＳＯ－ｒ能够抑制膀胱癌细胞株Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞的生长增殖，抑制作用大小与ＡＳＯ－ｒ的浓度有关。     

联合应用c—Ha—ras,c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖…

作者联合应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，ｃ－ｍｙｃ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ）对人膀胱癌细胞株进行作用，观察到ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ能明显抑制癌细胞中ｒａｓＰ２１、ｍｙｃＰ６２的表达，抑制了癌细胞ＤＮＡ合成及生长增殖，经ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ处理后癌细胞裸鼠致瘤力下降，这一结果表明：针对多外癌基因联合应有反义寡聚脱氧核苷酸，可能给膀胱癌的治疗提供新的途径，有进一步探索的价值。     

c—Ha—ras反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑…

应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ）对人膀胱癌细胞株Ｔ２４进行作用。结果表明：ＡＳＯ－ｒ能够抑制膀胱癌细胞株Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞的生长增殖，抑制作用大小与ＡＳＯ－ｒ的浓度有关。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞生长抑制的研究

本实验旨在探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸 (ＡＳＯＤＮ ｔ)抑制端粒酶活性[1] ,诱导肝癌细胞凋亡 ,从而抑制肝癌细胞生长的作用[2 ] ,为肝癌基因治疗提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.ＡＳＯＤＮ ｔ对细胞抑制作用的观察 :取 2× 10 7个 /Ｌ对数生长期肝癌细胞 (肝癌细胞株ＳＭＭＣ 772 1引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库 )接种于 96孔的细胞培养板中 ,每孔 10 0 μｌ,设3个复孔。分别加入ＡＳＯＤＮ ｔ(上海生工生物工程公司合成 ,序列为 5’ ＣＴＣＡＧＴ ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡ 3’ ,调节其终浓度分别为 1、2、3…     

反义c－Ha－rasDNA对人胃癌转化细胞致癌性的抑制

作者人工合成了一条１５聚反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓＤＮＡ，此反义ＤＮＡ与ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因转录起始区域的序列互补。其可以在转录和翻译水平上阻断ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因表达，使胃癌转化细胞的一些恶性表型（包括生长速度、软琼脂中集落形成，裸鼠致瘤性和分化程度）发生逆转。在反义ＤＮＡ的５’－端共价连接一个补骨脂素基团后，其生物学活性显著增强，和靶基因序列不完全配对的对照寡聚核苷酸链不具有上述肿瘤抑制效应。结果提示：反义ＤＮＡ及其衍生物是进行肿瘤基因治疗有效工具之一。     

反义寡聚核苷酸抑制人膀胱癌T24细胞系端粒酶活性的研究

目的研究反义寡聚核苷酸(asONs)能否抑制人膀胱肿瘤T24细胞系端粒酶活性和增殖活性。方法设计并合成2条针对端粒酶RNA模板区的asONs片段,在其作用于T24细胞第5天时,用7复孔法用聚合酶链反应-酶标法(PCR-ELISA)检测其对端粒酶活性的影响;分别在实验的第1、3、5、7天,用7复孔四唑盐比色试验(MTT)法检测其对细胞增殖活性的影响。结果经不同浓度(0、5、10μmol/L)处理5d后T24细胞端粒酶活性受到抑制,吸光度(A)值分别为0.79±0.10、0.24±0.14;经10μmol/L处理1、3、5、7d,T24细胞的增殖活性逐渐下降,A值分别为0.59±0.11、0.39±0.09、0.21±0.02、0.19±0.07,各组分别比较差异有非常显著性(P＜0.001)。结论asONs能够同时抑制人膀胱肿瘤T24细胞系端粒酶及细胞增殖活性,提示asONs可能通过抑制端粒酶活性达到抑制人膀胱肿瘤T24细胞系的增殖。     

DNA聚合酶α反义寡聚脱氧核苷酸抑制人胃癌细胞生长的研究

反义药物的研究为肿瘤的特异性治疗开拓了广阔的前景。DNA聚合酶α是真核细胞DNA合成的关键酶,与肿瘤的发生及发展密切相关。我们用DNA聚合酶α(DNA pol-α)mRNA作靶核酸,合成反义聚脱氧核苷酸(ASODN),作用于胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803,结果发现互补于pol-α mRNA翻译起始区的ASODN可特异地抑制二株人胃癌细胞系的生长,而对正常人脐静脉内皮细胞则不起作用。流式细胞仪分析癌细胞G0/1期比率升高,S期及G2M期比率降低,说明ASODN通过抑制DNA pol-α表达而抑制了细胞DNA合成。     

环氧合酶-2反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用。方法采用脂质体介导方法,分别构建转染COX-2反义真核表达载体和空载体的膀胱癌细胞系5637-AS细胞和5637-P细胞,RT-PCR及W estern b lot分析转染细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平。MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性。结果RT-PCR结果显示,5637-AS细胞COX-2/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA比值(0.65)明显低于5637(0.92)和5637-P细胞(0.90);W estern b lot提示5637-AS细胞COX-2/β-actin比值(0.29)明显低于5637细胞(0.46)和5637-P细胞(0.44)。MTT比色实验显示5637-AS细胞较5637-P、5637细胞生长速度减慢,三者倍增时间分别为3.6 d、2.9 d和2.9 d。体外侵袭实验结果表明,5637-AS侵袭细胞数显著低于5637细胞及5637-P细胞(18.20±5.97比45.40±8.12,18.20±5.97比44.10±6.47,P<0.01)。裸鼠成瘤实验中,5637-P、5637细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出,而5637-AS细胞第7天肿瘤长出;30 d后5637-AS细胞接种组瘤体重量(392.15 mg±33.58 mg)明显小于5637细胞(738.26 mg±66.32 mg),和5637-P细胞接种组(698.53 mg±88.76 mg),P<0.01。结论膀胱癌细胞中COX-2过表达与细胞的恶性表型相关,反义技术抑制COX-2表达可以逆转膀胱癌细胞的恶性表型。     

反义寡聚脱氧核糖核苷酸对猪促卵泡刺激素受体表达的影响

目的 :本研究旨在评价反义寡聚脱氧核糖核苷酸 (ODN)对促卵泡刺激素受体 (FSHR)mRNA表达的调节作用。　方法 :转染FSHR的CHO细胞系的mRNA水平用反转录 竞争性PCR方法进行定量测定。　结果 :结果显示用 10 μmol/L反义ODN可导致mRNA表达显著上升 ,2 4h后mRNA水平从 0 89± 0 0 6pg/ μg总RNA升至 1 6 4±0 0 8pg/ μg总RNA(P <0 0 5 )。用 0 33μmol/L反义ODN进行脂转染也得到相同结果 ,mRNA水平从 0 95± 0 0 8pg/ μg总RNA升高至 1 5 3± 0 0 7pg/ μg总RNA。这可能是由于FSHR蛋白翻译被抑制后上行调节mRNA合成所致 ,无义ODN对FSHRmRNA的表达没有任何作用。　结论 :本文结果提示针对猪FSHR翻译起始位点的反义ODN能上行调节猪FSHRmRNA的表达水平。     

野生型p53基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H－ras基因表达调控

通过逆转录病毒载体将外源野生型ｐ５３基因导入膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７和ＥＪ，使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低，丧失裸鼠致瘤性。细胞周期分析显示Ｇ０＋Ｇ１细胞比率明显增高，已证明，ＢＩＵ－８７和ＥＪ细胞都有ｒａｓ基因突变和表达扩增。进一步研究发现，转染的细胞内Ｈ－ｒａｓｍＲＮＡ表达低于非转染细胞。结果提示，增加细胞内野生型ｐ５３基因表达量能抑制突变的ｒａｓ基因表达，从而抑制膀胱癌细胞的恶性增殖。     

野生型P16例基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H—ras基因表达 …

目的 观察野生型Ｐ１６基因对膀胱肿瘤细胞恶性表型及Ｈ－ｒａｓ基因表达的影响。方法 构建Ｐ１６基因逆转录病毒表达载体，转染膀胱肿瘤细胞系ＥＪ；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交交检测外源Ｐ１６基因及Ｈ－ｒａｓ基因表达；流式细胞仪检测细胞周期；双层软琼脂培养检测细胞在体外形成克隆能力。结果 转染Ｐ１６基因后，肿瘤细胞生长速率降低，体外形成克隆的能力下降，细胞被抑制在Ｇ０＋Ｇ１期，细胞内Ｈ－ｒａｓ ｍＲＮＡ表达低     

9 Survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞的抑制作用

目的:探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法:采用免疫组织化学法检测肝细胞癌（HCC）组织中survivin的表达。采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2，Western blot检测细胞survivin蛋白的表达，FCM检测细胞的凋亡率，观察细胞在软琼脂中的集落形成能力。建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，观察survivin ASODN的体内抑癌作用。 结果:（1）肝癌组织中survivin表达阳性率为75.8％(25/33)，明显高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);（2）survivin ASODN体外转染可明显下调HepG2细胞survivin蛋白表达，ASODN组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和SODN组(P<0.01)，ASODN组HepG2细胞在软琼脂中形成的集落数目明显少于空白对照组和SODN组(P<0.01);（3）ASODN组瘤体生长速度较空白对照组和SODN组明显减慢(P<0.01)，ASODN组瘤体重量较空白对照组和SODN组明显减轻(P<0.05)。结论:Survivin在HCC组织中高表达;survivin ASODN可以诱导HepG2细胞凋亡，在体外实验和动物实验中对HepG2细胞生长都有抑制作用。     

HESW与抗癌药物对膀胱癌细胞C－myc癌基因表达的影响

利用国产液电碎石机（ＥＳＷＬ－Ⅲ／２Ｍ型）产生的高能冲击波和１０－羟基喜树碱单纯或联合处理人膀胱癌细胞系（ＢＴ５６３７）。实验分对照组，ＨＥＳＷ组，药物组和联合组。冲击波条件：２００ＳＷ（１０ｋＶ，６０次／ｍｉｎ），药物浓度（０．１μｇ／ｍｌ），水温３７℃。采用α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，分析四组癌细胞Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达。结果表明：对照组Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达明显，其转录产物为２．７ｋｂ，而实验各组Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达完全被抑制。结论：ＨＥＳＷ，１０－羟基喜树碱及其联合对人膀胱癌细胞的生长抑制作用与Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达有密切关系。     

D-柠檬烯对人膀胱癌细胞生长和ras p21表达的影响

目的 探讨D-柠檬烯对人膀胱癌EJ细胞生长和ras p21表达的影响.方法 采用还原四氮唑复合物(XTT)、实时定量PCR、蛋白质印迹法,对D-柠檬烯处理后的人膀胱癌EJ细胞增殖、ras基因mRNA表达以及ras p21蛋白表达进行检测,比较用药前后EJ细胞生长和ras p21表达变化.结果 经2、4 mmol/L D-柠檬烯处理后的EJ细胞增殖活性吸光度(A)值分别为0.8014-0.016和0.148±0.008,与未给药组1.218±0.031比较,差异有统计学意义(P<0.05).1 mmol/LD-柠檬烯作用48h,EJ细胞ras p21 mRNA表达数638±9,与未给药组11170±25比较明显下调;rasp21蛋白表达相对值为0.792,与未给药组4.459比较明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 D-柠檬烯对EJ细胞生长具有明显的细胞毒作用,并呈一定的剂量效应关系,在无毒剂量下可促使ras基因mRNA表达F调和ras p21蛋白表达下降.抑制ras p21活性可能是D-柠檬烯抗肿瘤作用的重要机制之一.     

反义增殖细胞核抗原cDNA对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)反义cDNA对人膀胱癌裸鼠移植瘤模型生长的影响。　方法　脂质体介导反义PCNA真核表达载体转染人膀胱癌EJ细胞后 ,接种到裸鼠皮下组织 ,观察体内致瘤及生长情况 ;免疫组化检测瘤体PCNA蛋白表达 ,RT PCR分析瘤体PCNA、wt p5 3、c myc基因mRNA水平 ;并进行瘤体病理学评估。 　结果　反义PCNAcDNA导入后 ,EJ细胞体内致瘤活性降低 ,同对照组比较瘤体体积缩小 5 4 .2 3% (P <0 .0 5 ) ,重量减轻 4 2 .5 4 % (P <0 .0 1) ,瘤组织PCNA蛋白及mRNA水平分别减少 6 1.6 2 % (P <0 .0 1)和 72 .13% (P <0 .0 1) ,c myc基因表达下调4 7.34% (P <0 .0 1) ,wt p5 3表达活性无显著性改变 (P >0 .0 5 ) ,瘤体病理学特征改善。 　结论　转导反义PCNAcDNA能有效逆转肿瘤的恶性表型 ,是膀胱癌基因治疗的合理策略之一     

槲皮素联合survivin反义核苷酸对肝癌细胞凋亡协同作用的研究

目的 探讨槲皮素联合survivin反义核苷酸(ASODN)对肝癌SSMC-7721细胞株增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 常规培养SSMC-7721细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价survivin ASODN联合槲皮素对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和细胞周期;荧光染色观察细胞形态学变化;并通过RT-PCR和免疫组化方法检测survivin基因表达变化.结果 survivin反义寡核苷酸转染SSMC-7721细胞后,可以显著抑制细胞增殖,其抑制作用具有剂量依赖性,且能诱导肝癌细胞凋亡;联合槲皮索和survivin反义寡核苷酸抑制作用更为显著(t=4.317,P<0.01);RT-PCR及免疫组化显示ASODN和槲皮素均使survivin mRNA和蛋白表达下降.结论 survivin基因反义寡核苷酸联合槲皮素能明显抑制肝癌SSMC-7721细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调survivin基因表达;两者具有协同作用.     

转化生长因子-α表皮生长因子受体反义寡聚核苷酸抑制人大肠癌细胞增殖的研究

目的 　探讨转化生长因子-α（TGF-α）、表皮生长因子受体（EGFR）反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对人大肠癌细胞株HR8348的作用。　方法　将TGF-α、EGFR反义寡核苷酸经脂质体包裹后转染人大肠癌细胞（浓度均为10 μmol/L）。采用四唑蓝比色法（MTT法）、细胞周期分析、裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。结果　TGF-α反义ODN、EGFR反义ODN均可明显抑制HR8348的增殖（抑制率分别为80.0%、82.5%）,并使裸鼠体内成瘤率下降（均为20.0%;对照组为100.0%）。G0/G1期细胞数明显增多（分别为63.9%、67.1%;对照组为31.1%）,S期细胞数相应减少（分别为35.6%、32.6%;对照组为53.9%）。结论　TGF-α反义ODN、EGFR反义ODN均能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖。     

反义c—Ha—rasDNA对人胃癌转化细胞致癌性的抑制

作者人工合成一条１５聚反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓＤＮＡ，此反义ＤＮＡ与ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因转录起始区域的序列互补。其可以在转录和翻译水平上阴断ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因表达，使胃癌转化细胞的一些恶性表型（包括生长速度、软琼脂中集落形成，裸鼠致瘤性和分化程度）发生逆转。在反义ＤＮＡ的５＇一端共价连续一个补骨脂素基团后，其生物学活性显著增强，和靶基因序列不完全配对的对照聚核苷酸链不具有上述肿瘤抑制效应，结果提示：     

VEGF反义核酸抑制人胰腺癌细胞的增殖

目的：探讨VEGF121反义核酸对体外培养胰腺癌细胞增殖的影响,以求证明VEGF反义核酸具有抑制肿瘤生长的作用。方法：将稳定转染有VEGF反义核酸pcDNA3-ASVEGF121的胰腺癌细胞系BxPC-3在体外条件下培养,采用ELISA法检测其培养上清液中的VEGF表达水平。检测肿瘤细胞生长曲线,通过克隆形成试验检测肿瘤细胞的体外增值能力。采用Annexin Ⅴ-FITC和PI双标记法以流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况。结果：VEGF反义核酸转染BxPC-3细胞后,肿瘤细胞培养液上清VEGF蛋白水平受到明显抑制。生长曲线显示肿瘤细胞生长明显受到抑制,并且肿瘤细胞克隆形成率降低。流式细胞仪检测显示VEGF反义核酸能促进细胞凋亡。结论：人反义VEGF121能显著抑制胰腺癌细胞的VEGF表达,并能抑制肿瘤细胞的生长,促进凋亡。     

N—ras,c—myc反义寡核苷酸与p53,p16基因联合抑制人肝癌细胞 …

目的 研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法 利用基因重组方法构建携带ｐ１６基因,ｐ５３基因的融合表达载体,利用基因合成仪体外合成Ｎ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸,并将Ｎ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ反应寡核苷酸与ｐｃＤＮＡ１６－５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果 联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢,软琼脂集落形成个数量少