应用Fura-2/AM测定兔视网膜细胞内游离钙的方法

目的：建立适宜条件下，用荧光指示剂Ｆｕｒａ－２测定乳兔视网膜细胞内游离钙（简称［Ｃａ２＋］ｉ）的方法。方法：用酶解制备视网膜细胞悬液。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载进行荧光测定。结果：经０．０５％胰蛋白酶消化１０分钟，可使细胞存活率达９０％以上。在３７℃条件下与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ温育４０分钟，于３０分钟内测定为最佳条件。结论：静息状态下（［Ｃａ２＋］ｉ）水平为（２２３±２７）ｎｍｏｌ／Ｌ，其值在文献报道范围内。高钾去极化，在Ｋ＋为２５ｍｍｏｌ／Ｌ和５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，分别使（［Ｃａ２＋］ｉ）增加了５９％和１４８％，由此证明视网膜细胞悬液制备和测定方法是可行的。     

Fura-2/AM法测定突触体内游离Ca~(2 )浓度的方法

采用新型Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２，测定冷冻伤性脑水肿时突触体内游离钙的离子浓度，以探讨突触体的制备方法和Ｆｕｒａ－２测定细胞内游离Ｃａ２＋浓度的方法及优缺点     

去甲肾上腺素对培育乳鼠心室肌细胞β受体的影响

目的：探索去甲肾上腺素对心肌细胞β受体影响的细胞内机制。方法：利用β－肾上腺素能受体放射性配基３Ｈ－ＤＨＡ和Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定心肌细胞受体和胞内游离钙。结果：（１）去甲肾上腺素可以引起心肌细胞β受体下调和胞内游离钙增高；（２）维拉帕米能抑制去甲肾上腺素诱导的β受体下调和胞内游离钙的增高。结论：去甲肾上腺素诱导心肌细胞内游离钙变化可能参与了心肌细胞β受体的调节     

钙指示剂Fura－2／AM对血小板功能及细胞内游离钙测定结果的影响

本实验结果表明，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载家兔洗脱血小板，当Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的浓度低于２μｍｏｌ／Ｌ时，３μｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ花生四稀酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集（透光度增加：７２．５±７．８４％）及释放反应（ＡＴＰ释放：１．１２±０．２１μｍｏｌ／４×１０５血小板）不受影响，但随Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度增加，ＡＡ的聚集和释放反应明显减弱（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度对单一血小板内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的静息水平无影响，但Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为２μｍｏｌ／Ｌ时，ＡＡ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ动员最明显。另外，标本中血小板的数量也明显影响［Ｃａ２＋］ｉ的测定结果（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示，Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度过高，很可能导致过多的钙离子被螯合，降低了血小板的功能，同时，细胞内游离钙与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的结合过程存在着饱和性。     

荧光控测法测定大鼠胰腺腺泡细胞游离钙离子的浓度

目的：测定大鼠胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度（简称［Ｃａ２＋］ｉ）。方法：采用新一代荧光指示剂Ｆｕｒａ－２，用双波长荧光分光光度计对大鼠胰腺细胞内游离钙离子浓度进行测定，用透明质酸酶及胶原酶等消化加机械分离得其细胞悬液，对细胞悬液荧光值及其相关数据进行测定。结果：测得大鼠胰腺细胞内［Ｃａ２＋］ｉ的值为１６５．１２±１１．４ｎｍ。结论：荧光控测法是当今测定活细胞内钙离子浓度的有效方法。     

去甲肾上腺素与培育乳鼠心室肌细胞β受体的影响

目的：探讨去甲肾上腺素对心肌细胞β受体影响的细胞内机制。方法：利用β－肾上腺素能受体放射性配基＾３Ｈ－ＤＨＡ和Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定心肌细胞受体和胞内游离钙。结果：（１）去甲肾上腺素可以引起心肌细胞β受体下调和胞内游离钙增高；（２）维拉帕米能抑制去甲肾上腺素诱导的β受体下调和胞内游离钙的增高。结论：去甲肾上腺素诱导心肌细胞内游离钙变化可能参与了心肌细胞β受体的调节。     

用Fura-2/AM检测巨噬细胞〔Ca~(2 )〕_i影响因素分析

用Ｆｕｒａ┐２／ＡＭ检测巨噬细胞〔Ｃａ２＋〕ｉ影响因素分析王斌１杜冠华２陈敏珠１作者单位：１安徽医科大学临床药理研究所，合肥２３００３２２中国医学科学院药物研究所，北京１０００５０用Ｃａ２＋荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ检测活细胞胞浆游离钙浓度（〔Ｃａ...     

荧光探针Fura—2／AM测定大鼠肝细胞胞内游离钙离子浓度

采用胶原酶原位灌注法分离纯化了大鼠肝细胞，并用荧光探针Ｆｕｒａ／２／ＡＭ测定了细胞内游离钙离浓度度。结果显示，胶原酶原位灌注法可分离获得高纯度，高活率的单个大肝肝细胞，适用用荧光探针Ｆｕｒａ－２／ＡＭ测定胞内游离钙离子浓度；测得新分离大鼠肝细胞静息状态下的细胞内游离子浓度为１７４．５±５７．３ｎｍｏｌ／Ｌ。     

组胺对脑细胞内游离钙浓度的影响及其机制

目的 观察组胺对脑细胞内游离钙浓度的影响，并初步探讨其作用机制。方法 利用荧光探针Ｆｕｒａ－２测定乳鼠脑细胞内游离钙的浓度。结果 组胺可明显升高脑细胞内游离钙浓度，而异丙嗪可以阻断组胺的这一效应。结论 组胺升高脑细胞内游离钙浓度是由Ｈ１受体介导的。     

大承气汤对内毒素休克家兔白细胞内游离钙浓度的影响

目的：利用内毒素休克模型研究大承气汤对内毒素休克家兔白细胞内游离钙浓度的影响。方法：采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ 负载及荧光法测定对照组、内毒素休克组和大承气汤治疗组家兔白细胞内游离钙离子浓度。结果：与对照组比较，模型组的白细胞内钙离子浓度有明显升高（Ｐ＜ ０．０１）；与模型组比较，治疗组白细胞内钙离子浓度明显降低（Ｐ＜ ０．０１）。结论：大承气汤可使休克家兔白细胞内游离钙浓度明显降低，这是由于大承气汤抗钙超负荷，减轻其对组织的损伤，从而对细胞功能的调控起到保护作用。     

丙咪嗪对人血小板胞浆游离钙的影响

目的：观察丙咪嗪体外对人血小板胞浆游离钙的影响。方法：用Ｆｕｒａ２－ＡＭ荧光钙离子指示剂在体外测定人血小板胞浆游离钙离子浓度。结果：丙咪嗪明显抑制凝血酶诱导的血小板胞浆游离钙的升高，ＩＣ５０（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ５０％）为２０．０μｍｏｌ／Ｌ。丙咪嗪对凝血酶诱导的内钙释放亦有明显抑制作用（Ｐ＜０．０１）。结论：丙咪嗪不仅明显抑制人血小板胞外Ｃａ２＋跨膜内流而且抑制胞内储存Ｃａ２＋释放     

高钾离子引起PC12细胞内游离Ca2+浓度升高的机制

目的：分析高钾离子（Ｋ＾＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌ Ｉｍｉａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ＾２＋］ｉ，Ｃａ＾２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣ１浓度为３０￣１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ＾２＋时，高Ｋ＾＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－     

细胞内钙超负荷在大鼠胆汁性急性胰腺炎发病机理中的作用

细胞内钙超负荷在大鼠胆汁性急性胰腺炎发病机理中的作用沈骥吴宗平肖华宋永慧黄建民刘浦青凡严律南我们用荧光指标剂Ｆｕｒａ－２／Ａｍ测定了急性胰腺炎（ＡＰ）大鼠胰腺病理细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），同时观察胰腺组织病理变化，以探讨细胞内钙超负荷...     

大鼠感染性脑损伤中神经细胞内游离钙的变化

采用荧光法测定负载Ｆｕｒａ－２／ＡＭ大脑皮层突触体内游离钙「Ｃａ＾２＋」ｉ浓度大鼠感染性脑损伤中的变化及其意义。     

红细胞感染恶性疟原虫后游离钙浓度变化的研究

采用活细胞钙离子荧光指示剂Ｆｌｕｏ－３负载感染恶性疟原虫（Ｆｃｃｌ株）红细胞及正常红细胞，经流式细胞仪测定，根据荧光强度不同表示红细胞内游离钙浓度的变化，结果表明，感染红细胞内游离钙浓度分别为正常红细胞的１．８３和２．９９倍，呈明显增高。     

肺心病患者细胞内游离钙-钙调蛋白活性的研究

目的：通过测定肺心病患者血小板内游离钙离子浓度和钙调蛋白活性,探讨和ＣａＭ活性变化在肺心病,缺氧性肺动脉高压形成机制中的作用。方法：用荧光指标剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ标记示踪法和磷酸二酯酶法测定１９例肺心病急性发作期患者和２０例健康者血小板（Ｃａ＾２＋）＾ｉ,ＣａＭ活性。     

呼吸中枢M受体亚型与细胞内钙

目的探讨呼吸中枢Ｍ受体亚型与细胞内钙的关系。方法采用Ｆｕｒａ－２双波长荧光法测定Ｍ１和Ｍ２受体激动剂和拮抗剂对胎鼠桥脑和延脑神经细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。结果在静息状态下，其［Ｃａ２＋］ｉ为７２±６ｎｍｏｌ／Ｌ，加入２００μｍｏｌ／ＬＡｃｈ，［Ｃａ２＋］ｉ升高３８％，匹鲁卡品（Ｐｉｌ）０．４～２００μｍｏｌ／Ｌ无明显的升高细胞内钙的作用，而Ｍ２受体激动剂６β－乙酰氧基去甲托烷（６β－ＡＮ）１～１０μｍｏｌ／Ｌ。对神经细胞内的游离钙均无明显影响。Ｍ１－Ｒ拮抗剂哌仑西平（Ｐｉ）６０μｍｏｌ／Ｌ能拮抗Ａｃｈ升高细胞内钙的作用，Ｍ２－Ｒ拮抗剂ＡＦ－ＤＸ１１６２０μｍｏｌ／Ｌ不能拮抗。结论Ｍ１－Ｒ兴奋与细胞内钙升高有关。     

反复呼吸道感染患儿T细胞增殖及胞浆游离钙浓度的变化

目的：探讨反复呼吸道感染（ＲＲＴＩ）患儿Ｔ细胞增殖（ＴＬＰ）及其胞浆游离钙浓度（〔Ｃａ２＋〕ｉ）的关系。方法：采用ＭＴＴ比色法测定３０例ＲＲＴＩ患儿及３１名健康儿童ＴＬＰ，使用Ｆｕｒａ－２／Ａｍ做荧光探剂，双波长荧光分光光度仪测定Ｔ细胞活化及未活化时〔Ｃａ２＋〕ｉ。结果：ＲＲＴＩ患儿ＴＬＰ明显低于对照组，Ｔ细胞未活化时两组间〔Ｃａ２＋〕ｉ的差异无统计学意义，当Ｔ细胞活化时ＲＲＴＩ患儿〔Ｃａ２＋〕ｉ明显低于对照组。结论：ＲＲＴＩ患儿ＴＬＰ降低，Ｔ细胞活化过程中〔Ｃａ２＋〕ｉ的动员存在一定程度异常，这是其ＴＬＰ降低的原因之一。     

三七总皂苷对TNF、NO含量的影响及其机制研究

采用ｓｃ角叉菜胶２５ｍｇ／ｋｇ复制大鼠背部气囊滑膜炎模型。白细胞计数，蛋白含量分别用试管稀释法和Ｌｏｗｒｙ法测定。酶联免疫吸附分析法Ｒｉｖａｎｏｌ法和Ｆｕｒａ－２荧光分析法分别用于测定灌洗液中ＴＮＦ、ＮＯ含量以及中性粒细胞胞内游离钙水平的变化。     

中风患者血小板胞浆游离钙浓度测定

中风患者血小板胞浆游离钙浓度测定陈晓春，刘楠，邱大元，郑安，张洪采用钙荧光指示剂Ｆｕｒａ－２ＡＭ，对１２名健康人和５３例中风患者急性期和恢复期的血小板静息状态胞浆游离钙浓度进行测定，以期从分子水平探讨血小板在中风发病机制中的可能作用。一、对象和方法１...