简易、快速、微量甲胎蛋白放射免疫测定——顺序饱和法(Sequential Saturation Method)

在用甲胎蛋白(AFP)检测原发性肝癌方面,我们在以前工作的基础上又摸索出一种新方法。其原理是利用过量的抗甲胎蛋白抗体与甲胎蛋白充分反应(第一反应);反应后,再用过量的~(125)I—AFP与未被甲胎蛋白结合的多余抗体反应(第二反应),剩余抗体越多,与~(125)I—AFP结合也越多,将这种抗原抗体复合物用15％PEG沉淀离     

甲胎蛋白放射免疫测定简易快速微量法及其应用

甲胎蛋白(AFP)不仅是诊断原发性肝癌的比较可靠指标之一,而且也可参照它预测异常胎儿。为了使其操作手续适应新的发展之需要,我们对之进行了一些改进。 经过实验,选择了抗体最佳浓度是1:20,000(最终反应浓度)。分离剂为22.5％的PEG(M=12,000)最终浓度达7.5％。标记抗原量定为5,000 CPM/分/管。除了PEG 100微升外,其它试液(包括标准液和正常兔新鲜血清)均为50微升。确定了上述条件后,我们进行了保温时间的选择。于37℃水浴中分别保温15、30、45、60、120、180分钟,再分别加入22.5％CPG 100微升,     

微量离心柱法与亲和交叉免疫电泳法检测甲胎蛋白异质体的研究

目的 比较微量离心柱法和亲和交叉免疫电泳自显影法两种方法 检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)对甲胎蛋白阳性的良恶性肝病鉴别诊断价值.方法 采用微量离心柱法和亲和交叉免疫电泳自显影法分别分析102例原发性肝癌、41例慢肝及肝硬化血清中的AFP-L3比率,比较2种方法 检测AFP-L3%对良恶性肝病鉴别诊断价值.结果 微量离心柱法和亲和电泳法对102例原发性肝癌AFP-L3%的敏感性分别是79.4%、91.2%.对41例慢肝、肝硬化AFP-L3%的特异性分别为70.7%、29.3%.亲和电泳法、微量离心柱法两种方法 检测肝癌的符合率分别为76.9%、73.4%,在ROC曲线下的面积AUC分别为0.791、0.758.4例AFP低值的原发性肝癌,采用亲和电泳方法 检测均为阴性,而采用微量离心柱方法 检测均为阳性.结论 微量离心柱法检测AFP-L3不仅操作简便、省时,而且比传统亲和电泳方法 更适合于AFP阳性良恶性肝病的鉴别诊断.     

微量抗原制备抗体及微量简便筛选抗体的方法

以微量纯化抗原,再加少许未经纯化的粗制抗原,于免疫小鼠后4～7天即可获得高效价的抗血清,这将对某些研究有实际意义。另外本文以0.5μg纯化抗原,做Dot blot,即可筛选杂交瘤上清。整个方法简便而节约,适于以微量纯化抗原制备抗血清及(或)单克隆抗体。     

新微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体对肝癌诊断的研究

目的探讨采用新型微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体AFP-L3在良恶性肝病及肝癌预警中的作用。方法应用装有耦联了小扁豆凝集素(LCA)的微量离心柱分离甲胎蛋白异质体,采用化学发光法检测AFP和AFP-L3,并计算AFP-L3在AFP中的含量比例[AFP-L3(%)],分析AFP-L3(%)升高者与良恶性肝病的关系。结果肝细胞癌患者血清中AFP-L3(%)明显高于其他肝病患者,P值均<0.001,以AFP-L3(%)≥10作为诊断指标,在已经确诊为肝癌的患者中灵敏度是90.9%。结论微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体AFP-L3在预警肝细胞癌诊断及鉴别诊断中具有重要临床价值,特别是对低甲胎蛋白含量的肝病鉴别具有重要临床价值。     

微量离心柱法分离检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)及其临床意义

目的探讨甲胎蛋白异质体（AFP-L3）在肝细胞癌诊断中的意义。方法应用预装有耦联小扁豆凝集素（LCA）的琼脂糖微量离心柱分离AFP-L3，采用双抗体夹心、化学发光法检测AFP和AFP-L3，并计算AFP—L3值，以AFP〉20μg／L，AFP-L3〉10％作为阳性判断标准。结果肝细胞癌患者血清中AFP、AFP-L3水平明显高于其他肝病患者，P值均〈0．001，肝癌患者以AFP、AFP-L3作为诊断指标的敏感度分别是85．1％、72．3％，特异度分别是55．4％、97．2％；8例肝病患者AFP-L3〉10％，影像诊断未发现肝癌，至少三个月以后确诊肝癌。结论甲胎蛋白异质体（AFP—L3）在肝细胞癌诊断及与良性肝病的鉴别诊断中具有重要价值。     

组织芯片微量抗体的免疫组化染色

组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue microarrav)技术，是由Kononen等于1998年首先建立并报道，一般是将数十至上百个甚至更多小的组织整齐有序地排列在一张载玻片上而制成缩微组织芯片，即组织切片。组织芯片蜡块可连续切片100～200张，这样用同一套组织芯片即可对上百种生物分子标记(如抗体、DNA和RNA)进行分析、检测，     

SF_(82022)简易、快速、微量甲胎蛋白放射免疫测定一聚乙二醇(Polyethylene Glycol;PEG)沉淀法

甲胎蛋白(Alpha Fetoprotein;AFP)检测,是诊断原发性肝癌的比较可靠指标之一。我们曾就放射免疫硫酸铵沉淀法的实验进行了改进,并和放射自显影火箭电泳法作了比较。在此基础上,我们进一步研究了这个方法。本法操作要点是:在尖底小试管中依次加入50微升0.05MPH7.4的PBS、50微升标准或待测样品,50微升1:5000稀释的     

用体细胞融合产生抗α-甲胎蛋白和癌胚抗原的抗体

一、引言 癌胚抗原(CEA)是一种分子量约200,000道尔顿的糖蛋白,Gold和Freedman报道,CEA作为一种抗原,仅存在于人消化道腺癌和2—6个胎儿的消化器官。1969年报道了放射免疫测定病人血清中的CEA,36例结肠腺癌病人中,35例血清循环CEA水平低限为2.5ng/ml,而非消化道恶性和良性肿瘤病人血清CEA水平极低。结合完全去除肿瘤后的病     

介绍一种检测甲胎蛋白的井形免疫电泳法

<正> 本文介绍一种用增大血清标本用量,以提高检出灵敏度的甲胎蛋白(AFP)“井形”免疫电泳测定法。本法操作方便,设备简单,对AFP的检出灵敏度可达20～30ng/ml左右。 一、材料 (一)井型模板(图1):取有机玻璃3×80×100mm一块,10×15×94mm一块(以等距钻打直径6mm孔),2×3×10mm二条,用三氯甲烷按图1粘合而成。     

微量全血标本检测EHF IgG抗体的研究

在EHF的早期快速免疫学诊断技术中,大多采用血清标本检测抗体。由于血清标本静脉采血,对个别危重病人和小儿采血困难者,往往给血清学诊断带来一定困难,对于     

微量蛋白质的电泳提纯法

我实验室以聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)为主要方法,通过对微克水平的小鼠血清清蛋白,小鼠血红蛋白,卵清蛋白,与脱氧核糖核酸酶的分离纯化,建立了一种装置简单、操作方便的微量蛋白质的电泳提纯法。该法的提纯率达86％以上,回收率达70％以上。     

颅骨标本的简易维护法

<正> 在骨学教学标本中,颅骨是较为难得的,也是易于损坏的教具。尤其是面颅的眶腔和鼻腔,如:眶部的泪骨、筛骨的眶板,鼻腔中的下鼻甲骨、犂骨、筛骨的垂直板和中鼻甲等,由于骨质极薄,损坏最严重。以至必须大量补充,但仍不能满足要求。有些学校为了延长颅骨的使用寿命,采取措施如在眶腔、鼻腔周围钻些孔眼,用铁丝或铜网固定于眶鼻腔上。但有碍于对颅骨的外形和内部结构的仔细观察。对颅骨也有损伤。     

用于制备抗体芯片的抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及特性分析

目的：制备抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体（mAb），并用于制备抗体芯片。方法：利用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人AFPmAb的杂交瘤细胞株；对抗体的亲和力、特异性等特性进行分析；利用抗体相加实验，双抗体夹心ELISA、胶体金免疫层析实验以及抗体芯片技术对抗体表位及其配对情况进行分析研究。结果：共获得16株稳定分泌抗人AFPmAb的杂交瘤细胞株，从中筛选出多组性能优良的配对抗体，结合抗体芯片技术，最终筛选出适合制备抗体芯片的配对抗体。结论：当抗体包被材料或包被方法发生改变时，会引起mAb构象发生变化，从而影响抗体的配对效果。因此，筛选适合制备抗体芯片的配对mAb时，需要对mAb的特性进行综合分析，选取特异性好，亲和力高的mAb进行配对筛选。     

ELISA捕捉法与双抗体夹心法检测HFRSV-IgM抗体的比较

前文报道ELISA双抗体夹心法检测HFRSV-IgM抗体用于早期诊断取得良好结果。但gG抗体的竞争抑制作用影响了实验的敏感性,为此本研究将其改为捕捉法。两方法平行检则307份血清,结果如下。 技术参数:所用试剂工作浓度、作用时间相当。特异性:两方法检测肾病、肝病、其它     

微量福氏佐剂-抗原乳化液的简易快速制备

在单克隆抗体制备中,因免疫动物对象是小自鼠,而且每批只免疫3～5只,所以常需制备微量(0.5～3ml)佐剂—抗原乳化液。而现有的方法制备微量乳化液存在一些缺点。如研磨法和常规磁力搅拌法,因器皿粘附乳化液较多。造成抗原损失,特别是造成某些珍贵抗原的损失,而不适合微量制备;两注射器推拉法虽也用于微量制备,但因不易将抗原溶液逐渐加入佐剂中而很难乳     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立

目的制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白(hAFP)单克隆抗体,初步建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗hAFP单抗的杂交瘤细胞株;对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析;双抗体夹心ELISA法筛选最佳配对抗体;初步建立DAS-ELISA检测方法并检测血样,绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。结果共获得12株稳定分泌抗hAFP单抗的杂交瘤细胞株,其中Ab 1~Ab 5 5株单抗的腹水效价均高于600万,Ab 5的效价高达3000万;特异性鉴定结果表明Ab 1~Ab 5均能够特异识别天然hAFP分子,但Ab 5与人血清白蛋白(HSA)存在较强交叉反应;抗体配对实验共筛选出5对(Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和Ab 4/HRP-Ab 1)能够满足hAFP检测要求且无交叉反应的配对抗体,最终确定Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 2和Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4为最佳配对组合;利用最佳配对抗体组合建立标准检测曲线,其线性检测范围为5~250 ng/ml,最低检测限2 ng/ml,检测上限400 ng/ml,优于进口试剂盒的线性范围5~200 ng/ml和最低检测限5 ng/ml;样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率99.2%(119/120例),阴性血清准确率100%(40/40例)。结论筛选获得的4株高亲和力、高特异性抗hAFP单抗均可应用于DAS-ELISA试剂盒的研制,Ab 1和Ab 3适合作为捕获抗体,Ab 2和Ab 4适合作检测抗体;自制试剂盒的线性检测范围和最低检测限均优于进口试剂盒,表明具有商用价值。     

一种简易的凝胶干燥法

<正> 聚丙烯酰胺凝胶电泳已成为分子生物学常用的分析手段之一。将电泳分离结果作为永久性资料保存,较好的方法是在无损的条件下使凝胶干燥。目前国外有些公司已生产商品凝胶干燥仪,但是价格过于昂贵。本文报道一种利用国内实验室常用设备和材料制备凝胶干片的简易方法。     

ELISA法检测甲胎蛋白异质体用于肝癌诊断的探讨

目的应用ELISA检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3),并探讨AFP-L3浓度在HCC组与良性肝病组诊断与鉴别诊断的价值。方法用ELISA法检测137例AFP阳性的肝病患者血清AFP-L3浓度,用ROC曲线分析AFP-L3。结果 92例HCC患者AFP-L3浓度为109.04±62.51ng/mL,明显高于45例良性肝病组(25.96±49.43ng/mL)P0.001。HCC的ROC曲线面积为0.819,以AFP-L3浓度37.89ng/mL为临界值,分析HCC患者与良性肝病患者AFP-L3浓度异常的敏感性为83.7%,特异性为88.9%,诊断正确率为85.4%。结论用ELISA法检测AFP-L3浓度对HCC诊断与良性肝病鉴别诊断有较高的临床价值,操作简便,费用低廉。