口服普萘洛尔对血管瘤患儿血清中血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的研究口服普萘洛尔治疗血管瘤的效果,并探讨普萘洛尔治疗血管瘤的机制。方法回顾性分析采用口服普萘洛尔治疗颌面部血管瘤的13名患儿,采用ELISA法检测血管瘤患儿口服普萘洛尔前后血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平。结果所有13名患儿在口服普萘洛尔1个月后血管瘤瘤体均缩小,血清中VEGF水平较服药前明显降低[(343.15±45.13)pg/mL VS(232.23±32.46)pg/mL,P<0.05]。结论普萘洛尔治疗血管瘤效果确切,其作用机制可能与下调VEGF水平有关。     

血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠肺气肿模型中的表达

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体 2 (VEGFR 2 )在大鼠肺气肿模型中的表达及意义。方法　经气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠肺气肿模型。免疫组化法检测VEGF在肺组织的表达部位 ,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中VEGF的含量 ,Westernblot检测VEGFR 2蛋白的表达。结果　VEGF在肺泡上皮细胞、支气管粘膜上皮细胞及血管内皮细胞表达 ,模型组BALF的VEGF含量 (110 2± 4 6 0 .1)pg/mL较对照组 (2 0 17± 84 0 .6 ) pg/mL明显降低 (P <0 .0 5 ) ;模型组VEGFR 2蛋白的表达低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF及VEGFR 2的减少可能参与了肺气肿的发生     

血管内皮细胞生长因子基因转染血管内皮祖细胞移植促进缺血皮瓣存活的实验研究

目的探讨VEGF165基因转染血管内皮祖细胞(EPCs)移植促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率。方法体外分离、培养人脐血中EPCs,利用脂质体介导血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因体外转染EPCs,然后移植于裸鼠随意皮瓣,皮瓣早期断蒂。结果脐血中分离培养的EPCs表达CD34、KDR及CD133,VEGF165基因转染EPCs体外及体内检测均有VEGF165蛋白的表达。转染VEGF165基因的EPCs组和EPCs组移植裸鼠皮瓣后,EPCs整合到缺血部位新生血管中,与对照组的皮瓣存活率分别为97 2% ±2 8%、60 3% ±2 1%、34 2% ±1 8% (P<0 05 ),而且前二组毛细血管密度、血流灌注差异均有统计学意义(P<0 05),较对照组均有明显改善(P<0 05)。术后第7d时三组皮瓣中的EPCs密度分别为136个/mm2 ±10个/mm2、75个/mm2 ±6个/mm2、0个/mm2 (P<0 05 ); 第11天时EPCs密度分别为305个/mm2 ±26个/mm2、199个/mm2 ±18个/mm2、0个/mm2 (P<0 05)。结论脐血中的EPCs体外培养后移植体内可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率,而转染VEGF165基因的EPCs具有更强大的促血管新生的作用。     

血管内皮细胞生长因子基因转染诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为内皮细胞

目的：评价经腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染后的大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导成内皮细胞的可行性。方法：从大鼠骨髓中分离培养获取BMSCs，分别经Adv-VEGF、Adv-GFP转染，Western印迹分析检测VEGF蛋白的表达情况．细胞生长曲线测定BMSCs增殖特性．同时进行免疫表型鉴定．并与未转染细胞组比较。结果：Adv-VEGF转染组BMSCs可分泌VEGF蛋白，而其杂两组不分泌VEGF蛋白。转染VEGF基因后,BMSCs生长速度变快．向内皮细胞分化。与Adv-VEGF转染组BMSCs相比．Adv-GFP转集细胞组、未转染细胞组的BMSCs生长速度较慢．未有向内皮细胞分化的证据。结论：腺病毒介导的VEGF基因转繁可诱导BMSCs分化成内皮细胞。     

人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究

目的探讨人血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因转染骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对其影响。方法体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓EPCs,ELISA检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测对其增殖的影响。结果FITC-UEA-I和DiI-ac-LDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs增殖,注射转基因EPCs的大鼠皮下局部血管增加。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,并且具有血管内皮增殖刺激活性,为进一步研究hVEGF165基因修饰EPCs治疗血管内膜损伤性疾病提供实验依据。     

血管内皮细胞生长因子165基因转染对兔骨缺损修复的影响

目的 构建pcDNA3．1-血管内皮细胞生长因子（VEGF）165质粒,观察其对兔骨缺损修复的影响。方法构建成重组真核表达质粒pcDNA3．1-VEGF165;采用30只新西兰大白兔,制备双侧桡骨骨缺损模型,实验组以体积等大的明胶海绵置于创腔,局部直接注射稀释的质粒液200ng;对照组以同量生理盐水代替质粒液,同法处理。于术后1、2、4、6、8和12周行X线照片后获取标本,观察缺损局部组织修复及新生血管并计算微血管密度（MVD）。结果pcDNA3．1-VEGF165质粒构建成功,测序正确。术后X线：1周时两组无明显差别,实验组2周骨痂形成、骨质修复,12周时骨质已正常,对照组表现为修复迟缓;HE染色：实验组2周大量新生血管形成、通血,4周成骨细胞大量增殖、骨小梁形成,12周骨皮质改建完成,骨髓腔再通;对照组经历过程类似,但相对时间延迟,12周时骨髓腔及皮质改建尚未完成。2周时对照组及实验组MVD分别为56．1±6．1、69．1±5．4,均较1周时42．2±6．4、47．0±7．5时增加,组间及组内间差异有统计学意义（t=8．0347,P=0．0000）。结论骨缺损局部直接应用PcDNA3．1-VEGF165质粒液后,可表达并上调VEGF165,具有促进局部微血管形成、加快骨缺损修复的作用。     

人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠骨髓基质细胞的实验研究

目的探讨对大鼠骨髓基质细胞进行重组人血管内皮细胞生长因子(VEGF)165基因修饰的可行性。方法采用全骨髓细胞贴壁培养法获得稳定的大鼠骨髓基质细胞,分别在脂质体LipofectamineTM2000和新型的阳离子聚合物Sofast介导下行pcDNA3.1-VEGF165转染骨髓基质细胞,在倒置显微镜下观察转染后细胞形态和生长情况的变化,通过免疫细胞化学鉴定VEGF在细胞中的表达情况。结果脂质体LipofectaminTM和新型阳离子聚合物Sofast介导转染的阳性细胞率分别为11.34%和11.42%,两者无明显差异。而细胞存活率分别为74.60%和85.88%,后者稍高于前者(P<0.05)。结论真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165可以成功地在骨髓基质细胞中表达,新型阳离子聚合物Sofast的转染效率与传统的脂质体无明显差异,而细胞毒性略小于传统的脂质体。     

血管内皮细胞生长因子的制备和生物活性测定

报道从牛脑制血内皮细胞生工因子的方法，鲜牛脑经匀浆，硫酸铵盐析，透析后，上Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＣ－５０离子交换柱，并用氯化钠梯度洗脱。利用ＥＣＧＦ对人脐静脉内细胞地增殖刺激效应测定其活性。当所得ＥＣＧＦ制品在含１０％新生牛血清或胎牛血清的培养液中含量为２５ｍｌ／Ｌ时，其最大刺激活性比对照组增加５５０％。     

增生期血管瘤血管内皮细胞培养

血管内皮细胞（ＶＥＣ）体外培养是研究血管形成的重要手段,通常采用大血管内膜或组织中微血管进行ＶＥＣ培养,但技术要求高,培养不易存活或传代。为提供更理想的血管生成的体外模型,我们选择增生期血管瘤按组织块法培养ＶＥＣ,并改良培养液配方。材料和方法标本来源...     

Intrastriatal Gene Transfer of Vascular Endothelial Growth Factor Rescues Dopaminergic Neurons in a Rat Parkinson＇s Disease Model

To examine the ability of intrastriatal gene transfer of vascular endothelial growth factor 165 mediated by adenoviral vector to rescue dopaminergic neurons in a rat model of Parkinson＇s disease （PD）, we constructed recombinant replication-deficent adenoviral vectors carrying the gene of VEGF165 （Ad-VEGF）, and injected Ad-VEGF （or Ad-LacZ and PBS as controls） into the striatum of rats 7 days after the lesion by 6-hydroxydopamine. The rat rotational behavior analysis and tyrosine hydroxylase （TH） immunohistochemistry were performed to assess the change of dopaminergic neurons. Our results showed that the rats receiving Ad-VEGF injection displayed a significant improvement in apomorphine-induced rotational behavior and a significant preservation of TH-positive neurons and fibers compared with control animals, It is concluded that intrastriatal gene transfer by Ad-VEGF may rescue the dopaminergic neurons from degeneration in a rat model of PD.     

人血管内皮细胞生长因子165基因真核表达载体的构建及其在大肠杆菌的表达

目的　获得人血管内皮生长因子 (hVEGF165)cDNA ,构建真核表达载体 ,并研究其在大肠杆菌中的表达情况。方法　采用PCR方法 ,从HL6 0细胞中扩增出hVEGF165cDNA ,将其克隆至 pcDNA3 真核表达载体上 ,构建成为 pCD hVEGF165重组质粒。将重组质粒转染感受态的大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 ,用Westernblot检测表达产物。结果　经酶切鉴定及基因测序证实hVEGF165cDNA基因克隆成功 ,并建立了高效表达的 pCD hVEGF165重组质粒。Westernblot检测表明 ,组建了具有高效表达hVEGF165的大肠杆菌菌株。结论　成功地克隆和表达出了hVEGF165基因 ,为进一步建立VEGF转基因动物模型 ,研究其在视网膜新生血管性疾病中的应用奠定了基础     

Human vascular endothelial growth factor cDNA cloning and expression in osteoblasts

Vascularendothelialgrowth factor(VEGF) ,al-so known as vascular permeability factor,is one ofthe mostimportant angiogenic factor in vivo.Recentresearch have indicated that gene transfer of nakedDNA encoding for VEGF in vivo was a potentialtreatment for myocardial and hindlimb ischemia[1,2 ] .Formation of new capillaries,a critical component oftissue growth and repair,is a recognized process inthe development,formation and remodeling of bone.To make use of VEGF gene therapy on bone diseas…     

Construction and identification of recombinant adenovirus-mediated gene transfer system for rat vascular endothelial growth factor

Objective To construct the recombinant adenovirus vector carrying rat vascular endothelial growth factor(VEGF), as preparation for genetic transfection that follows. Methods Rat VEGF was obtained by using RT-PCR amplification and then cloned into the shutter plasmid pDC316. Subsequently, this newly constructed plasmid pDC316-VEGF, after identification by nuclease digestion analysis and sequencing analysis, was transfected into human embryonic kidney cells HEK293 by Lipofectamine 2000 mediation, together with adenovirus-packaging plasmid pBHGE3. Based on the homologous recombination of the two plasmids within HEK293 cells, the recombinant adenovirus vector carrying VEGF and VDC316-VEGF was created. VDC316-VEGF was subsequently identified using PCR, purified using repeated plaque passages, proliferated using freezing and melting within HEK293 cells, and titrated using 50% Tissue Culture Infective Dose(TCID50) assay. ResultsThe newly constructed recombinant adenovirus was confirmed to carry rat VEGF based on PCR results, and its titration value determined based on TCID50 assay was 3×109 pfu/ml. ConclusionThe recombinant adenovirus carrying rat VEGF was successfully constructed. The newly constructed adenovirus can produce a sufficiently high titration value within HEK293 cells, providing a reliable tool for genetic transfection in further gene therapy researches.     

子宫内膜巨噬细胞通过调控血管内皮生长因子A的表达影响胚胎着床

目的研究小鼠子宫内膜巨噬细胞（macrophages, Mφ）对血管内皮生长因子A（VEGFA）表达的影响,探讨其在胚胎着床过 程中的作用。方法取第3.5（雌鼠交配后次日晨阴道见栓为第0.5）孕鼠30只,随机分为3组,实验组（E）、对照组（C）和空白组 （B）。E组向左侧宫腔内注射消除巨噬细胞的药物：氯膦酸二钠脂质体（clodronate liposomes, CL）,右侧注射磷酸缓冲盐脂质体 （PBS liposomes, PL）;C组向双侧宫腔内注射PL;B组向双侧宫腔内注射等体积灭菌PBS溶液。注射后48 h,获取第5.5小鼠子 宫和卵巢,统计各单侧子宫的胚胎着床数。采用免疫组化技术检测子宫内膜、卵巢内Mφ数量,并观察着床位点和非着床位点 VEGFA的表达变化。流式细胞学方法检测子宫F4/80+CD11b+Mφ相对百分比,观察注射CL对子宫Mφ的选择性抑制作用。结 果流式细胞学和免疫组织化学方法均显示,E组左侧子宫注射氯膦酸二钠脂质体后,与E组右侧和C、B组比较,局部巨噬细胞 被显著抑制（P<0.05）,抑制率达74%。各组卵巢Mφ数量间则未见明显差异。E组左侧子宫的胚胎着床部位宫腔未闭合,平均 胚胎着床数为2.20±1.81个,显著低于E组右侧5.10±1.91个（P<0.05）。在着床位点,伴随子宫Mφ受到抑制,子宫内膜的VEGFA 蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论子宫内膜中的Mφ为胚胎着床所必需,其机制可能是通过调控VEGFA的表达,影响宫内膜 容受性及胚胎着床。     

血管内皮生长因子基因多态性与子宫内膜异位症的相关性

目的：探讨温州地区人群中血管内皮生长因子（VEGF）基因多态性与子宫内膜异位症（简称内异 症）遗传易感性的关系。方法：应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR-RFLP）对2014 年3月至2015年3月在温州医科大学附属第一医院妇科就诊的150例卵巢型内异症患者（内异症组）和150 例健康对照者（对照组）进行VEGF基因rs3025040C/T、rs10434G/A多态性位点进行分析,分析等位基因 及基因型的分布及其与内异症发病的风险关系。结果：内异症组患者VEGF-rs3025040C/T位点C、T等位 基因频率分别为76.67%和23.33%,对照组为58.00%、42.00%,差异有统计学意义（χ2=23.762, P ＜0.001, OR =1.800,95% CI =1.410～2.298）,提示在VEGF-rs3025040C/T位点上携带有C等位基因的妇女更易得内异症。 内异症组患者VEGF-rs10434G/A位点G、A等位基因频率分别为60.00%和40.00%,对照组为81.67%、18.33%, 差异有统计学意义（χ2=34.084, P ＜0.001, OR =1.344,95% CI =1.207～1.497）,提示在VEGF-rs10434G/A位 点上携带有A等位基因的妇女更易得内异症。结论：VEGF-rs3025040C/T、rs10434G/A位点多态性与内异 症发生的易感性有关。     

缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子在婴幼儿血管瘤的表达及意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在婴幼儿血管瘤和婴幼儿正常皮肤的表达情况。方法:采用免疫组织化学S-P染色法,检测HIF-1α、VEGF在婴幼儿血管瘤及正常皮肤的表达。结果:HIF-1α、VEGF表达水平在血管瘤与正常皮肤之间差异有统计学意义(P<0.05)。血管瘤中HIF-1α与VEGF表达呈正相关。结论:HIF-1α与VEGF在血管瘤中呈阳性表达,可能参与促进血管瘤血管生成。     

大鼠颌下腺血管内皮生长因子cDNA的转移及表达

目的：探讨以颌下腺为靶器官,进行血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因治疗后,颌下腺中ＶＥＧＦ含量变化。方法：构建了ＶＥＧＦ基因表达的真核细胞表达载体,以阳离子脂质体为介质,向大鼠颌下腺转染外源性的ＶＥＧＦ基因,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术观察ＶＥＧＦ基因的表达,ＥＬＩＳＡ方法检测颌下腺中ＶＥＧＦ的含量变化。结果：转ｐＢＫＣＭＶ－ＶＥＧＦ１２１基因后第１天,大鼠颌下腺内ＶＥＧＦ的表达及涎液中ＶＥＧＦ的含量即开始     

血管内皮生长因子在动脉粥样硬化斑块中的表达

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）在动脉粥样硬化斑块中的表达。方法: 利用高胆固醇饲料复制兔动脉粥样硬化模型,采用免疫组织化学方法,观察VEGF在胸主动脉粥样硬化斑块中的表达。结果：正常兔主动脉组织中未见VEGF蛋白阳性表达,而动脉粥样硬化斑块区VEGF蛋白表达明显增加。结论：动脉粥样硬化斑块中VEGF表达增加,并可能参与动脉粥样硬化发生和发展的病理过程。