BMP-7与PDGF-B在肾纤维化中的作用机制研究

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及血小板源性生长因子(PDGF-B)在肾间质纤维化大鼠模型中的表达变化及意义。方法清洁级Wister雄性成年大鼠60只随机分为三组:正常对照组、假手术组、单侧输尿管梗阻组(UUO)。分别在术后1、3、7、14天,每组取5只大鼠处死,取左侧肾脏行免疫组织化学方法检测肾组织中BMP-7、PDGF-B的表达水平。结果免疫组化光镜下,正常对照组BMP-7呈高度表达,在UUO组术后随梗阻时间延长BMP-7表达逐渐减少,术后14天表达量最弱;正常对照组及假手术组PDGF-B仅有少量表达,UUO术后随梗阻时间延长肾间质内PDGF-B表达逐渐增多,但各时相点肾小球均无明显表达。结论 (1)在正常肾脏中有着丰富的BMP-7表达,主要表达在肾小管间质,随着梗阻时间的逐渐延长表达呈进行性的下降。(2)在正常肾脏中PDGF-B仅见微量的表达,且随梗阻时间逐渐延长表达呈进行性上调。     

单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化过程中血小板衍生生长因子D的表达

背景：血小板衍生生长因子在肾间质中通过诱导肾小管间质细胞增生、表型转化、炎性细胞浸润等导致肾小管间质纤维化。 目的：观察血小板衍生生长因子D在单侧输尿管梗阻模型大鼠肾脏组织中的表达水平及随时间的演变情况。 方法：将成年健康雄性SD大鼠60只随机分为模型组及假手术组,将模型组大鼠左侧输尿管结扎剪断建立单侧输尿管梗阻模型,假手术组大鼠不结扎剪断仅游离左侧输尿管。术后3,7,14,21,28 d,通过免疫组化检测血小板衍生生长因子D在肾脏组织中的表达分布情况,实时荧光定量RT-PCR方法检测血小板衍生生长因子D mRNA的表达水平及变化。 结果与结论：假手术组血小板衍生生长因子D仅少量表达于肾小球系膜细胞及血管平滑肌细胞,而在模型组,血小板衍生生长因子D同时表达于肾间质纤维化区域,随纤维化程度加重,表达增多。同时模型组血小板衍生生长因子D mRNA表达量较假手术组显著增多(P < 0.05),且表达随时间延长逐渐增多。提示血小板衍生生长因子D在单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化过程中发挥着促纤维化的重要意义。     

纤维连接蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

背景：纤维连接蛋白表达增加在肾间质纤维化疾病进展过程中发挥着的重要作用。 目的：观察纤维连接蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达。 方法：72只大鼠随机等分为对照组、假手术组和模型组。模型组建立单侧输尿管梗阻模型;假手术组仅开腹游离左侧输尿管;对照组不做任何处理。 结果与结论：与对照组及假手术组比较,模型组大鼠梗阻时间越长,肾小管间质损害程度越重,纤维化越明显,肾组织中纤维连接蛋白、基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1表达即明显增多,且随着梗阻时间延长,肾组织中纤维连接蛋白、基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1表达呈持续增加趋势,至造模后第14天达到高峰,与同期对照组、假手术组相比差异有显著性意义(P < 0.01),说明在大鼠肾纤维化形成过程中,纤维连接蛋白的蛋白表达在肾损伤早期即显著增加,并随肾间质纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肾纤维化的发生。而基质金属蛋白酶9的高表达可能是加重肾间质损害的因素之一。     

依那普利干预后TGF-β、p27在大鼠肾间质纤维化中的表达

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后肾组织中TGF-β和p27表达的变化, 并探讨干预后两者之间的关系, 以进一步阐述其抗纤维化机制.方法:30只SD大鼠随机分成假手术组(sham-operated rates, SOR)、 UUO模型组、依那普利治疗组(UUO+ Enalaparil treated group , T-UUO).于术后第14天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察梗阻肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定TGF-β、 p27, RT-PCR法测定TGF-β、 p27mRNA的水平.结果:T-UUO组的肾间质损伤指数明显降低;T-UUO组与UUO组比较TGF-β的表达减弱( P <0.05), p27的表达增强( P <0.01), T-UUO组TGF-β与p27成负相关.结论:依那普利能减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度;UUO大鼠肾间质纤维化模型中, 依那普利抗间质纤维化机制可能与下调了肾组织中TGF-β的表达, 继而使p27的表达上调有关.     

硒与苯那普利抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的研究亚硒酸钠与苯那普利对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的保护作用及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组、UUO组(结扎单侧输尿管建立UUO模型)、UUO+硒组(亚硒酸钠0.2 mg/kg·d灌胃)和UUO+苯那普利组(苯那普利10 mg/kg·d灌胃),每组18只。术后第7、14和21天,各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE和Masson染色,观察RIF程度;免疫组化法检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达;Western blot检测CTGF和TGF-β1蛋白表达;比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果术后第7、14和21天,硒组和苯那普利组RIF较UUO组明显减轻(P<0.05);肾组织CTGF、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ表达强度和MDA含量明显低于UUO组(P<0.01或P<0.05);GSH-Px和SOD含量明显高于UUO组(P<0.05)。两干预组之间各项指标无明显差异。UUO组TGF-β1、CTGF、α-SMA、ColⅢ的表达和RIF指数与MDA含量呈正相关(P<0.05),与SOD和GSH-Px含量呈负相关(P<0.05);CTGF与α-SMA、ColⅢ的表达呈正相关(P<0.05),CTGF、α-SMA和ColⅢ表达与RIF病变程度呈正相关(P<0.05)。结论亚硒酸钠与苯那普利均可减轻UUO模型大鼠RIF。     

改良构建大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型

文题释义：肾盂积液：输尿管完全或不完全梗阻时,由于尿液无法正常排出体外而导致肾盂积液。慢性肾盂积液引起的肾脏损伤是不可逆的,可由多种上尿路梗阻性疾病诱发,导致肾盂肾盏扩大,肾小管与肾小球结构与功能丧失,进而肾组织萎缩。 肾间质纤维化：是各种慢性肾病发展至终末期的共同病理特征,以肾小管间质瘢痕硬化为特征,最终导致肾脏组织功能完全丧失。该过程受到转化生长因子β、成纤维细胞生长因子、内分泌等信号通路的调控,肾间质纤维化动物模型是研究相关药物药理机制的重要模型。 背景：传统的大鼠单侧输尿管梗阻手术方法,可以在较短的时间内(一两周)导致动物梗阻侧肾脏发生肾间质纤维化,但具有术后并发症较多、死亡率较高的缺点。 目的：优化并改良大鼠单侧输尿管梗阻手术操作,降低动物术后的并发症发生率,提高存活率,检测改良单侧输尿管梗阻方法建模大鼠的病理生理指标,为功能药理学基础研究提供背景数据支持。 方法：①取20只雄性SD大鼠,随机分为4组,分别进行传统单侧输尿管梗阻方法结扎、改良单侧输尿管梗阻方法结扎、不游离输尿管结扎、开腹腔但不结扎输尿管(假手术组)操作,术后14 d时比较组间大鼠肾间质纤维化成模率、死亡率、术后并发症发生率的差异;②另取28只SD大鼠,雌雄各半,随机分为改良组与假手术组,采用尿液分析、血细胞分析、血液生化分析方法,检测两组大鼠的生理指标,并通过苏木精-伊红染色与Masson染色法,观察改良组大鼠术后14,21 d时的肾脏组织病理学结果。 结果与结论：①与不游离输尿管结扎组大鼠相比,传统单侧输尿管梗阻组和改良单侧输尿管梗阻组大鼠的成模率高;②在单侧输尿管梗阻手术操作过程中,采用输尿管中段双结扎、中间不剪断的改良方法与传统方法相比,操作更简便易行,手术开创更小,肾间质纤维化成模快、成模率较高,动物术后死亡率与并发症发生率均低;③改良组与假手术组相比,术后14 d时的尿素氮、谷草转氨酶、白蛋白等血液生化指标差异有显著性意义(P < 0.05),其梗阻侧肾脏的组织病理切片苏木精-伊红染色与Masson染色结果均可见典型的肾间质纤维化病理特征。 ORCID: 0000-0001-7823-2897(孙杰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏微血管损伤与肾间质纤维化的关系研究

目的:观察单侧输尿管梗阻(UUO)后小鼠肾脏管周毛细血管(PTC)损伤、继发低氧及肾组织纤维化的变化,进一步探讨管周毛细血管损伤和缺氧对肾间质纤维化的影响。方法:将48只雄性昆明小鼠随机分为UUO组和对照组,采用左侧输尿管结扎术复制UUO模型,于术后1、3、7、14 d分别处死2组小鼠取左肾。采用M asson染色评定肾间质损伤程度;免疫组织化学方法测定血小板反应蛋白-1(TSP-1)、低氧诱导因子-1α(H IF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达和PTC密度变化;免疫印迹检查VEGF蛋白表达的变化。结果:假手术组肾组织结构形态正常,无纤维化的表现。UUO术后第1 d TSP-1表达开始升高,第3-14 d时升高更加显著(P0.05);VEGF在第1 d表达升高,第3-14 d表达逐渐降低(P0.05);PTC密度随之逐渐下降,H IF-1α表达逐渐升高,肾间质面积逐渐扩大。相关分析显示,TSP-1与PTC密度呈负相关(r=-0.874),PTC密度与H IF-1α表达呈负相关(r=-0.930),VEGF表达与PTC密度呈正相关(r=0.745),PTC密度与肾纤维化面积呈负相关(r=-0.787),H IF-1α与肾纤维化面积呈正相关(r=0.835),均P0.01。结论:UUO模型小鼠TSP-1表达升高,VEGF表达下降,PTC损伤和组织缺氧加重,肾间质纤维化面积扩大;缺血和缺氧可能是UUO后肾组织病变发生发展的重要原因。     

IL-17在肾间质纤维化中的作用初探

探讨白细胞介素17(IL-17)在肾间质纤维化发生发展中的作用。采用的体内实验为,以单侧输尿管梗阻(unilateral ureteric obstruction,UUO)启动纤维化病理过程。将C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham)和单侧输尿管梗阻(unilateral ureteric obstruction,UUO)组,分别于术后第1、3、7天处死,留取手术侧肾组织。采用HE、PAS、PASM、Masson染色评价肾间质组织病理变化。以免疫组化、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-17在肾组织中的表达情况。体外实验为,分离培养C57BL/6小鼠肾成纤维细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)刺激使其转化为肌成纤维细胞,继而用蛋白免疫印迹法(western blotting)检测IL-17的刺激下α-SMA表达水平。结果显示,组织病理学检查显示随着梗阻时间延长,炎性细胞浸润明显,肾小管萎缩,间质面积增大,Ⅰ型胶原和α-SMA增多。PCR检测显示α-SMA mRNA表达增多。但ELISA结果显示肾组织中IL-17含量呈下降趋势。Western blot结果表明肌成纤维细胞在IL-17的刺激下,α-SMA蛋白水平显著下降。实验说明,单侧输尿管梗阻手术可导致相应侧肾组织发生纤维化病变,但肾组织中IL-17含量与纤维化病变并不一致,在体外实验中IL-17可下调肌成纤维细胞表达的α-SMA。     

胰激肽原酶减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的:探讨胰激肽原酶(PK)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾间质纤维化大鼠肾脏的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠建立UUO模型后随机分为4组:UUO7组、UUO14组、UUO+PK7组和UUO+PK14组,其中UUO+PK7组和UUO+PK14组给予腹腔注射PK(7.2 U·kg^-1·d^-1)治疗14 d,分别于第7天和第14天处死大鼠;假手术组给予生理盐水。采用Masson染色、HE染色和透射电镜观察各组大鼠的肾间质纤维化程度;免疫组化和Western blot法分别检测炎症因子、致纤因子、氧化应激、细胞凋亡及细胞自噬调控因子的表达。结果:PK治疗明显减轻UUO大鼠肾小管间质纤维化程度,并呈时间依赖性,这种改善伴随着炎症介质[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和Toll样受体2(TLR-2)]及致纤因子[转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)]的表达下调。UUO所致氧化应激表现为氧化酶[NADPH氧化酶2(NOX-2)和NOX-4]的表达增加和抗氧化酶[超氧化物岐化酶1(SOD1)和SOD2]的表达...     

E-钙黏蛋白在单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化中的作用

背景：细胞黏附的丧失及E-钙黏蛋白表达下降在肾小管上皮细胞转分化导致肾间质纤维化疾病进展过程中发挥着的重要作用。 目的：观察单侧输尿管梗阻模型大鼠肾小管间质纤维化动态及该病理过程中E-钙黏蛋白、整合素连接激酶蛋白的表达,探讨E-钙黏蛋白在肾小管间质纤维化中的作用机制。 方法：72只SD大鼠随机摸球法均分为正常组、对照组和模型组。模型组建立单侧输尿管梗阻模型;对照组仅进行假手术;正常组不做任何处理。分别于造模后第1,3,7,14天分批处死大鼠,检测梗阻侧肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织中E-钙黏蛋白、整合素连接激酶蛋白的表达。 结果与结论：与正常组及对照组比较,模型组梗阻时间越长,肾小管间质损害程度越重,纤维化越明显。造模后3 d大鼠肾脏组织E-钙黏蛋白mRNA及其蛋白表达水平即出现下调,第14天最低,整合素连接激酶蛋白表达则显著增加,与同期正常组、对照组相比,差异有显著性意义(P < 0.05)。说明E-钙黏蛋白的表达减少促进了肾间质纤维化的发生、发展,而整合素连接激酶蛋白的表达增加在肾间质纤维化的进程中可能也发挥了重要作用。      

Klotho suppresses renal tubulo‐interstitial fibrosis by controlling basic fibroblast growth factor‐2 signalling

Increased basic fibroblast growth factor‐2 (FGF2) and reduced Klotho have both been reported to be closely associated with renal fibrosis. However, the relationship between Klotho and FGF2 remains unclear. We demonstrate that FGF2 induced tubulo‐epithelial plasticity in cultured HK‐2 cells, accompanied by a reduction in Klotho expression, whereas recombinant Klotho protein could inhibit the action of FGF2. The FGF2 effects required extracellular signal‐regulated protein kinase 1/2 activation, which was suppressed by Klotho. Moreover, Klotho also restrained FGF2‐induced fibroblast proliferation and activation. The inhibitory effect of Klotho on the activity of FGF2 was likely due to its potent ability to compete with FGF2 binding to FGF receptor 1. Unilateral ureteral obstruction (UUO)‐induced renal fibrosis was associated with an increase in FGF2 and a reduction in Klotho expression in wild‐type mice, whereas FGF2^–/– mice largely preserved Klotho expression and developed only mild renal fibrosis after obstructive injury. Furthermore, administration of Klotho protein in UUO mice significantly reduced renal fibrosis, concomitant with a marked suppression of FGF2 production and signalling. These studies demonstrate a feedback loop between Klotho depletion and FGF2 activation in renal fibrosis. Our results also suggest that Klotho treatment reduces renal fibrosis, at least in part, by inhibiting FGF2 signalling. Copyright © 2014 Pathological Society of Great Britain and Ireland. Published by John Wiley & Sons, Ltd     

肾脏纤维化大鼠模型尿液中差异表达基因筛选及生物信息学分析

目的研究大鼠肾脏纤维化(RF)模型尿液中差异表达的基因,并对其进行生物信息学分析。方法将大鼠分为对照组和纤维化模型组,单侧输尿管结扎术建立大鼠肾脏纤维化模型,收集尿液。提取总RNA,构建测序文库并进行转录组测序。对差异表达的mRNA进行了GO分析和KEGG分析,并对miRNA的前体和lncRNA的家族进行预测和分类。结果肾脏纤维化模型组的尿液和对照组相比,得到813条表达上调转录本数据以及213条表达下调的转录本数据。结论利用转录组高通量测序结合相关生物信息学分析,可为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能。     

PAX2基因沉默对UUO大鼠肾功能的影响

目的:探讨PAX2基因沉默对梗阻性肾病大鼠肾功能的影响。方法:64只幼年雄性大鼠随机分为阴性对照组(NC)和沉默组(RNAi)各32只,均于转染后按照3、5、7、14 d分为4组,每组8只,留取血、尿和肾组织标本,实时定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative PCR,R...     

Pentoxifylline protects against loss of function and renal interstitial fibrosis in chronic experimental partial ureteral obstruction

Tubulointerstitial fibrosis (TIF) is a hallmark of chronic kidney disease resulting from diverse etiologies and predicts severity and progression of the kidney disease. To investigate the pathogenesis of TIF, complete unilateral ureteral obstruction (UUO) is the most widely used animal model. However, UUO precludes evaluation of renal function. In the present study, we created a rat model of chronic partial ureteral obstruction (PUO), which allowed assessment of renal function at different intervals after obstruction. We examined the effects of pentoxifylline (PTF), a phosphodiesterase inhibitor used clinically to treat peripheral artery disease, on renal function and TIF. Studies were performed in sham-PUO rats and rats with 14-day PUO or 30-day PUO receiving vehicle in drinking water or PTF (400?mg/liter in drinking water). At day-14 PUO, glomerular filtration rate (GFR) was markedly and similarly depressed in rats receiving vehicle or PTF as compared with sham-operated rats. However, at day-30 PUO, GFR in rats receiving PTF was significantly higher than that in rats receiving vehicle, approaching the level seen in the sham-operated rats. At day-30 PUO, histologic studies also revealed a marked reduction of TIF in rats treated with PTF as compared with the rats receiving vehicle in drinking water. Western blot analysis demonstrated that at day-30 the expression of α-smooth muscle actin (an indicator of renal fibrosis) in the medulla was significantly reduced in PUO rats treated with PTF. In conclusion, PTF treatment ameliorated renal fibrosis and helped preserve renal function in a rodent model of PUO.