PTEN基因变异与人脑胶质瘤预后的关系研究

目的探讨PTEN基因变异与人脑胶质瘤病理级别、生存期及病人年龄、性别、肿瘤生长部位的关系。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性电泳分析（PCR-SSCP）结合银染技术和双重PCR技术．检测80例胶质瘤PTEN基因9个外显子点突变与基因缺失情况。结果15例（18．8％）发生基因点突变。27例（33．8％）存在基因缺失。PTEN基因失活与星形细胞瘤病理分级显著性相关（P〈0．05）。其中高度恶性胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）的突变率（31．3％）和缺失率（52．1％）明显高于低度恶性者（Ⅰ～Ⅱ级）（P〈0．05）；与病人性别、年龄及肿瘤生长部位无关。PTEN基因第5、6和8外显子是胶质瘤病人的热点基因突变区。PTEN基因失活的胶质瘤病人生存期明显低于基因正常者。结论人脑胶质瘤PTEN基因与病理分级和生存期关系密切。可作为一项独立的预后指标。     

人脑胶质瘤PTEN基因变异的研究

目的进一步了解PTEN基因突变和缺失在人脑胶质瘤发生和恶性进展中的作用。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合银染技术和双重PCR分别检测10例正常脑组织、10例脑膜瘤、80例胶质瘤PTEN基因第5和第8外显子区域上的突变与缺失情况。结果发现10例正常脑组织和10例良性脑膜瘤均无PTEN基因点突变发生,80例胶质瘤分别有11例(13.75%)和27例(33.75%)发生基因点突变和基因缺失,且PTEN基因失活与星形细胞瘤病理分级明显相关(P<0.05),其中高恶性度胶质瘤(III、IV级)突变率(24.44%)和缺失率(60%)明显高于低恶性度(I、II级)胶质瘤(P<0.05)。结论PTEN基因突变或缺失与胶质瘤病理分级关系密切,可能属于胶质瘤恶性进展的后期事件。     

PTEN／MMAC1基因表达与星形细胞瘤细胞增殖的相关性研究

目的研究人脑星形细胞瘤中PTEN/MMAC1基因编码蛋白的表达和星形细胞瘤增殖的关系,探讨PTEN/MMAC1基因突变在人脑星形细胞瘤增殖中的作用。方法应用PCR-SSCP、SP免疫组织化学法检测了52例星形细胞瘤中PTEN/MMAC1基因突变及表达情况,和肿瘤细胞核增殖抗原(PCNA)增殖程度;并用SPSS10.0统计软件分析PTEN/MMAC1基因表达与PCNA的关系。结果52例人脑星形细胞瘤中,PTEN/MMAC1蛋白表达缺失率约40.4%(21/52)。PTEN/MMAC1表达与肿瘤病理分级有显著关系,其中Ⅰ-Ⅱ级阳性率约80.0%,Ⅲ级约55.0%、Ⅳ级为33.3%,各级别组PTEN/MMAC1表达的差异有显著性(P<0.01);PTEN/MMAC1表达程度与星形细胞瘤的增殖呈显著负相关(r=-0.846,P<0.01)。结论PTEN/MMAC1表达与星形细胞瘤的恶性程度有关系,恶性程度越高,病人预后越差,该蛋白水平越低,肿瘤细胞的恶性增殖越明显。     

人脑星形细胞瘤PTEN／MMAC1基因突变的研究

目的：了解在人脑星形细胞瘤中PTEN／MMAC基因第五、第八外显子的突变情况及其在肿瘤恶性进展中的作用。方法：应用聚合酶链反应（PCR）、银染PCR－单链构象多态性（SSCP）技术对52例人脑星形细胞瘤，7例正常脑组织和3例外周血标本进行检测。结果：52例病人中8例发生PTEN／MMAC第五、第八外显子点突变，突变率为15．4％（8／52），其中20例病理Ⅰ-Ⅱ级的星形细胞瘤无突变，32例Ⅲ-Ⅳ级的星形细胞瘤中有8例发生点突变，突变率25％（8／32），两相较，相差显（P＜0．05），结论：人脑星形细胞瘤中存在PTEN／MMAC基因第五、第八外显子点突变，这可能是肿瘤恶性进展的重要事件之一。     

脑胶质瘤p16基因CPG岛高甲基化与基因失活的研究

目的探讨脑胶质瘤中p16基因5'端CPG岛高甲基化与该基因失活的相关性.方法应用免疫组化检测50例脑胶质瘤中P16蛋白的表达;应用PCR技术检测脑胶质瘤中p16基因第1、2外显子缺失及第1外显子5'CPG岛高甲基化.结果免疫组化结果显示50例脑胶质瘤组织中27例恶性胶质瘤P16蛋白缺失,23例低级别胶质瘤P16蛋白阳性;9例恶性胶质瘤p16基因纯合性缺失;P16蛋白阴性的恶性胶质瘤中7例显示p16基因CPG岛高甲基化.结论恶性脑胶质瘤中P16蛋白缺失而没有p16基因纯合性缺失,是由于p16基因5'端CPG岛高甲基化后抑制该基因的转录所致.p16基因高甲基化也是该基因失活的重要机制之一.     

PTEN 在胶质瘤干/祖细胞中变异状态的研究

目的 为胶质瘤干/祖细胞来自神经干/祖细胞基因突变的推测寻找实验证据,以阐明二者之间的关联性.方法 体外培养的胶质瘤干/祖细胞和神经干/祖细胞,经免疫细胞化学法鉴定后分别进行RNA 提取、逆转录生成cDNA,以及针对PTEN 的逆转录聚合酶链反应;扩增产物进行正反双向测序并与野生型PTEN 基因序列比较肽链序列的异同.结果 神经干/祖细胞PTEN mRNA 序列无变异,胶质瘤干/祖细胞存在大量同义突变和少量异义突变,主要包括第1 号外显子第22 ~ 42 位碱基突变、第7 号外显子第712位碱基突变和第9号外显子第1192位碱基突变.致使PTEN 肽链上第8 ~ 14位氨基酸由原来的"IVSRNKR"突变为"LRLICIF",第238 位的"苯丙氨酸(F)"突变为"亮氨酸(L)",第398 位的"苏氨酸(T)"突变为"丝氨酸(S)".其中第8 ~ 14 位和第238 位氨基酸突变,使PTEN 与细胞膜的结合能力下降,细胞外信号难以转导进入细胞内;第398 位氨基酸突变则使PTEN 稳定性破坏,易被降解.结论 PTEN基因在胶质瘤恶性转化的早期即已失活,可能是胶质瘤形成的始动因素之一.     

胶质瘤1p/19q联合缺失特征分析

目的 研究胶质瘤中1p/19q联合缺失与患者临床特征及O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)表达的关系.方法 使用荧光原位杂交技术,对中山大学附属肿瘤医院2009年3月至2011年3月的63例手术确诊胶质瘤标本进行1p/19q联合缺失检测,利用统计学方法分析1p/19q联合缺失患者与无联合缺失患者在性别、年龄、部位、病理类型及MGMT表达状态是否有差异.结果 全组63例患者,男38例,女25例,年龄(41.7 ± 15.3)岁.其中,16例(25.4%)存在1p/19q联合缺失.1p/19q联合缺失患者与无联合缺失患者在性别、年龄及肿瘤部位间的差异无统计学意义.各病理类型1p/19q联合缺失的比例从高到低依次为少突胶质细胞瘤(9/16)、间变性少突胶质细胞瘤(3/8)、星形细胞瘤(2/10)、间变性星形细胞瘤(1/6)及胶质母细胞瘤(1/21),其差异有统计学意义(P ＜ 0.01).在全组63例胶质瘤及25例含少突成分胶质瘤中,MGMT阳性肿瘤1p/19q联合缺失比例与MGMT阴性组间的差异皆无统计学意义.结论 1p/19q联合缺失主要与胶质瘤的病理类型有关,含少突成分胶质瘤中1p/19q联合缺失比例较高.1p/19q联合缺失可作为少突胶质细胞瘤病理诊断的重要参考指标.     

脑胶质瘤P53基因及其表达蛋白研究进展

P53肿瘤抑制基因的缺失、点突变是迄今发现的胶质瘤最常见的分子生物学改变。近来的研究表明,星形细胞瘤P53基因突变率较其它类型的胶质瘤高,胶质瘤P53基因突变多分布于第4—8外显子上,以错义突变为主,常常合并另一等位基因杂合性丢失。P53基因的缺失、突变和胶质瘤的病理级别、增殖能力有关。免疫组化研究显示,恶性胶质瘤常常存在P53蛋白过度表达。本文就此方面的进展及面临的问题作一概述。     

胶质瘤中LGI 1的突变及微卫星不稳定性研究

目的 为了检测人脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞系LGI 1基因编码区中有无碱基突变及微卫星不稳定性(MSI)和杂合性缺失(LOH).方法 收集30例胶质瘤标本,2例脑膜瘤、2例瘤旁及2例颅脑损伤内减压脑组织标本及体外培养5个脑胶质瘤细胞系.提取组织标本及培养细胞基因组DNA.设计特异性引物分别扩增LGI 1各外显子序列,采用SSCP银染分析;扩增LGI 1微卫星序列,凝胶电泳银染分析;发现异常泳动条带进行DNA序列分析.结果 ①PCR-SSCP分析琼脂糖凝胶电泳检测有1例Ⅱ级胶质瘤标本未检测到第1 a外显子处扩增产物以及Ⅱ、Ⅲ级各1例胶质瘤标本均未检测到第8 c外显子处扩增产物.未在30例胶质瘤标本和4个脑胶质瘤细胞系中检测到电泳条带异常,在细胞系TJ905第5外显子处检测到电泳条带异常,经DNA测序分析证实确有突变.②在30例胶质瘤标本及5个细胞系中均未检测到MSI和LOH.结论 基因突变及MSI和LOH可能不是LGI 1在胶质瘤恶性进展过程中失活的主要原因.     

恶性胶质瘤的基因异常与治疗

胶质瘤的形成与发展是一个复杂的过程,癌基因的激活、过表达或扩增以及抑癌基因的缺失或突变失活,均可导致细胞增殖、分化和凋亡调节通路的异常。胶质瘤的病理级别越高,累积的分子遗传学改变也越多。     

多发性硬化免疫相关基因表达谱的基因芯片研究

目的：免疫相关基因芯片寻找多发性硬化表达差异的免疫相关基因，方法：将484条免疫相关基因的double(双点）cDNA产物按微矩阵排列点样于玻片上，例1患者及其对照为第1组，例2患者及其对照为第2组，例3患者及其对照为第3组。取各组外周血，分离淋巴细胞，提取总RNA，用RT－PCR逆转录成cDNA。标记cDNA探针，分别用cy-3-dUTP,cy5-dUTP标记正常人和多发性硬化患者cDNA。将基因芯片和杂交探针变性后杂交。洗干。用Scan Array4000扫描芯片，GenePixPro3.0软件分析cy3,cy5两种荧光信号的强度和比值。结果：1组中筛选出差异表达的基因22项，2组中出现差异表达的基因27项，3线中出现差异表达的基因72项，具有同一GeneID号的一对Double基因，其中1组6对，2组9对，3组30例。结论：试验结果显示正常人与MS患者免疫相关基因的表达有显著差异，不同发病阶段免疫相关基因表达有差异；以细胞免疫相关基因变化为主，体液免疫相关基因亦有异常表达。     

Language gene]

The human capacity for acquiring speech and language must derive, at least in part, from the genome. Recent advance in the field of molecular genetics finally discovered 'Language Gene'. Disruption of FOXP2 gene, the firstly identified 'language gene' causes severe speech and language disorder. To elucidate the anatomical basis of language processing in the brain, we examined the expression pattern of FOXP2/Foxp2 genes in the monkey and rat brains through development. We found the preferential expression of FOXP2/Foxp2 in the striosomal compartment of the developing striatum. Thus, we suggest the striatum, particularly striosomal system may participate in neural information processing for language and speech. Our suggestion is consistent with the declarative/ procedural model of language proposed by Ullman (1997, 2001), which the procedural memory-dependent mental grammar is rooted in the basal ganglia and the frontal cortex, and the declarative memory-dependent mental lexicon is rooted in the temporal lobe.     

Parkin gene therapy

The search for genetic mutations responsible for familial forms of Parkinson's disease (PD) has identified several genes and loci. Mutations in the parkin gene are linked to autosomal recessive juvenile parkinsonism. The genetic forms of PD are uncommon, but gene therapy targeting α-synuclein, parkin, or other pathways may be also applicable for idiopathic PD. Intriguingly, several studies suggest that parkin gene therapy could be useful in a subset of PD patients with mutations in the α-synuclein gene. Furthermore, if parkin overexpression can correct neuronal degeneration in the substantia nigra and striatum, it might be a potentially effective therapy for α-synucleinopathy.     

软骨组织工程基因转染技术中目的基因的研究与进展

目的：阐述软骨组织工程中的基因转染技术及其应用的研究现状，对目的基因的种类和选择进行，并提出其进一步应用的前景。 方法：以cartilage tissue engineering，gene transfer为检索词，检索Science Direct数据库(2003-01/2009-04)；以软骨组织工程，基因转染为检索词，检索CNKI数据库(2003-01/2009-04)。文献检索语种限制为英文和中文。纳入与软骨组织工程基因转染相关的内容，包括临床和基础研究；排除重复研究和明显不符合标准的文章。观察软骨细胞的分化情况及基因表达情况。 结果：计算机初检得到90篇文献，根据纳入排除标准，对软骨组织工程中的基因转染技术和基因的种类和选择进行分析。基因转染技术在软骨组织工程领域有着广阔的应用前景。选择哪些与软骨修复相关的基因作为转染的目的基因，是软骨组织工程中亟待解决的课题。目前用于研究的目的基因主要分为刺激软骨细胞增殖分化和基质形成、抑制软骨细胞肥大和成骨分化、抗炎性反应、抑制衰老和抑制凋亡这几大类。 结论：选择适当的目的基因，并用安全的基因转染方法进行软骨修复具有特别重要的意义。基因转染技术能否应用于临床将取决于是否能构建出安全有效的载体、目的基因和转染系统。     

The norepinephrine transporter gene is a candidate gene for panic disorder

Panic disorder (PD) is an anxiety disorder characterized by recurrent panic attacks with a lifetime prevalence of 4.7%. Genetic factors are known to contribute to the development of the disorder. Several lines of evidence point towards a major role of the norepinephrine system in the pathogenesis of PD. The SLC6A2 gene is located on chromosome 16q12.2 and encodes the norepinephrine transporter (NET), responsible for the reuptake of norepinephrine into presynaptic nerve terminals. The aim of the present study was to analyze genetic variants located within the NET gene for association with PD. The case-control sample consisted of 449 patients with PD and 279 ethnically matched controls. All cases fulfilled the ICD-10 diagnostic criteria for PD. Genotyping was performed using the Sequenom platform (Sequenom, Inc, San Diego, USA). To test for allelic and haplotypic association, the PLINK software was used, and COMBASSOC was applied to test for gene-wise association. After quality control 29 single nucleotide polymorphisms (SNPs) spanning the gene-region were successfully analyzed. Seven SNPs located within the 5' end of the gene were significantly associated with PD. Furthermore, the NET gene showed overall evidence for association with the disease (P?=?0.000035). In conclusion, the present study indicates that NET could be a susceptibility gene for PD.     

肾素基因G10631A和血管紧张素原基因C521T多态性与脑梗死的关系

目的 研究肾素(PEN)基因G10631A、血管紧张素原(AGT)基因C521T多态性与脑梗死的关系.方法 采用聚合酶链式反应.限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测82例脑梗死患者和89名正常对照者的REN基因10631位点、AGT基因521位点的多态性,并用Logistic回归分析两基因多态性与脑梗死的关系.观察两组基因单倍型的分布.结果 脑梗死组REN基因10631从基因型(31.7%)、A等位基因(49.4%).ACT基因521TT基因型(22.0%)、T等位基因频率(28.0%)显著高于正常对照组(10.1%、30.3%、6.7%、11.8%)(均P<0.05).Logistic回归分析显示,REN基因10631AA基因型、AGT基因521TT基因型增加脑梗死的发生概率,发病的相对危险度(OR)分别为2.798、3.492(均P<0.05).脑梗死组基因单倍型521T-10631A的分布频率明显高于正常对照组(P<0.005).结论 REN基因10631AA基因型和A等位基因、AGT基因521TT基因型和T等位基因可能为脑梗死的易患因素;单倍型521T-10631A可能是脑梗死发病的遗传危险因素.     

Viral imaging in gene therapy noninvasive demonstration of gene delivery and expression

Gene therapy is a rapidly developing modality of treatment, with applications in acquired and inherited disorders. Gene delivery vehicles ("vectors") are the main impediment in the evolution of gene therapy into a clinically acceptable mainstream therapy. Vectors based on viral particles are the most commonly used vehicles to carry genes to the organs and tissues of interest. Despite initial promise and substantial progress in the development of experimental gene therapy protocols, human gene therapy still is based on technologies that so far do not allow for routine clinical use. Recent progress in viral vector production and better understanding of molecular aspects of vector delivery and targeting issues has created the need for imaging techniques that would be useful in addressing the problems and opportunities inherent in viral gene therapy development. Two integral components of gene therapy monitoring, the imaging of gene delivery and the imaging of resultant exogenous gene expression, are recognized. These molecular imaging components provide a realistic means for assessment of safety and efficacy of preclinical and clinical development of gene therapy.