乙型肝炎病毒相关的肝硬化患者外周血单个核细胞基因表达谱的研究

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）相关的肝硬化患者外周血单个核细胞的基因表达谱，探索慢性HBV相关的肝硬化形成的分子机制。方法应用含14 000条人体cDNA的微阵列芯片和来自外周血单个核细胞的标记cDNA，分析了10例慢性HBV相关肝硬化患者和10例健康人基因表达谱。通过应用GenePix 4000B扫描仪和ImaGene3．0分析软件比较Cy5标记的慢性HBV相关肝硬化来源cDNA与Cy3标记的健康人来源cDNA的杂交结果，获得个体基因的相对表达比值。结果和14 000条基因中，差异表达的基因有199条，占1．42％。其中108条基因表达水平上调，91条基因表达水平下调。这些差异表达的基因主要为细胞信号转导．细胞周期和代谢、凋亡及炎症相关类基因。结论HBV相关肝硬化发病过程中，发观众多基因的差异表达，为进一步阐明慢性HBV相关的肝硬化形成的分子机制提供基础。     

应用基因芯片筛选HBV对肝癌细胞耐药相关基因影响的初步研究

目的通过基因芯片技术探测HBV感染对肝癌细胞耐药相关基因表达的影响,为深入研究HBV在肝癌多药耐药中的作用及机制提供新的依据。方法以HepG2细胞作为对照,用稳定表达HBV的肝癌细胞HepG2. 2. 15模拟HBV感染的肝癌细胞,利用基因芯片筛选出耐药相关差异表达基因。Real-time PCR检测部分耐药基因表达以验证芯片筛选结果的准确性。结果肝癌细胞HepG2和HepG2. 2. 15中差异表达基因共1 263个,与药物相关基因58个,其中上调基因数31个,下调基因数27个,涉及药物转运相关基因、药物代谢相关基因、细胞增殖相关基因、细胞周期调控基因等。Real-time PCR检测MDR1、MRP2、LRP和GST结果与芯片结果一致,确定芯片检测结果可靠。结论 HBV感染影响肝癌细胞耐药相关基因表达,为进一步研究HBV感染在肝癌多药耐药中的作用提供线索。     

沉默Survivin人耐药肺癌细胞凋亡相关基因表达变化及临床意义

目的探讨沉默Survivin基因后人耐药肺腺癌(A549DDP)细胞系凋亡相关基因表达变化及临床意义。方法应用RT-PCR法及Western印迹法比较Survivin在人肺腺癌A549细胞系及其耐药A549DDP细胞系的表达水平;通过小分子RNA干扰沉默Survivin基因,并采用微阵列PCR基因芯片(PCR-Array)技术比较沉默Survivin后A549DDP细胞凋亡相关基因表达水平变化。结果 (1)Survivin mRNA、Survivin蛋白在人耐药非小细胞肺癌细胞系呈现高表达。(2)沉默Survivin后A549DDP细胞部分抗/促凋亡基因表达发生改变,促凋亡基因TP53、CASP3、CASP7呈高表达,抗凋亡基因bcl-2、TRAF1、BFAR呈低表达。结论 (1)Survivin与部分抗/促凋亡基因共同参与了非小细胞肺癌耐药的发生。(2)封闭Survivin可改变耐药肺癌细胞的促/抗凋亡基因的表达,Survivin可能作为上游调控点参与调控部分促/抗凋亡基因组的表达。(3)Survivin可能成为逆转肺癌耐药的一个新靶点。     

采用cDNA芯片对人胃腺癌凋亡相关基因表达谱的研究

背景：细胞凋亡及其调控基因在肿瘤（如胃癌）的发生、发展中的作用是当今研究的热点，有必要全面筛查胃癌相关凋亡基因。目的：研究胃癌发病过程中凋亡基因表达谱的变化。方法：利用人细胞凋亡相关基因cDNA芯片研究胃腺癌和癌旁组织中相关基因的改变。采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和组织芯片技术验证IGFBP4基因的表达情况。结果：在458个凋亡相关基因中，有17个基因在癌组织和癌旁组织中出现2倍以上的明显改变；4个基因表达增强，13个基因表达下调。荧光定量PCR和组织芯片验证结果与cDNA芯片相符。结论：发生改变的17个凋亡相关基因可能与胃腺癌的发病机制有关，并涉及整个凋亡途径，值得进一步深入研究。     

基因芯片在肺癌发生相关基因筛查中的应用

目的 研究人肺癌发生相关基因表达谱,探讨肺癌发生的分子机制。方法 选取1280个与肿瘤相关的基因克隆。制备成肿瘤相关cDNA芯片。提取人肺癌组织以及相应正常组织RNA,反转录后标记为cDNA探针,与cDNA芯片杂交,经扫描及Quantarray3．0软件分析后比较两种组织中的差异表达基因。结果 共筛查出差异表达基因52条。其中表达上调基因35条,下调基因17条;按照基因功能可分为运输载体,代谢相关基因、细胞信号转导分子、细胞骨架、转录调控因子以及未知功能基因。结论 基因芯片可用于肺癌相关基因表达谱的筛查,为明确肺癌发生机制提供重要参考。     

通过转录组学探讨外膜蛋白相关基因在多药耐药鲍曼不动杆菌生物被膜中的异常调控

目的 通过研究转录组学探讨外膜蛋白相关基因在多药耐药鲍曼不动杆菌生物被膜生成中的作用.方法 收集筛选我院多药耐药鲍曼不动杆菌菌株.高通量测序分析鲍曼不动杆菌在不同的生长状态下基因表达的差异.结果 多药耐药鲍曼不动杆菌生物被膜状态与快速生长期相比,确实存在基因表达差异.表达差异的基因中,106个基因表达上调,92个基因表达下调.其中,外膜蛋白的相关基因在生物被膜状态是显著表达的.结论 细菌的生物被膜状态是一种独特的存在形式.在生物被膜状态下,表达差异的基因集中于菌体外膜蛋白的表达和细胞内通路的因子调控.外膜蛋白是鲍曼不动杆菌生物被膜生成过程中表达最丰富的蛋白之一,在菌体生物被膜形成和成熟过程中发挥重要作用.     

Fas基因修饰胃癌耐药细胞的表达

目的将 Fas 基因导入胃癌耐药细胞,建立 Fas 基因表达耐药株,并比较转导前后 mRNA 与蛋白的表达水平。方法:采用分子克隆技术将 Fas 基因插入真核表达载体 pBK-CMV 的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将重组表达载体转染受体细胞 SGC7901/VCR,G418筛选克隆细胞,Southern blot、Northern blot、Weston blot 检测Fas 基因和 Bcl-2基因的表达。结果:成功地构建了真核表达载体 pBK-Fas cDNA;转导细胞后,从2×10~5细胞中筛选出大约120个抗性克隆,转导率大于0.5‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗生细胞,从而建立了 Fas 基因表达耐药株,我们命名为 SGC7901/VCR Fas cells;杂交结果表明,转导株与非转导株均有Fas cDNA 的表达,但转导株 Fas mRNA 及其蛋白水平的表达则显著高于非转导株。结论:在胃癌耐药细胞中 Fas基因处于低表达状态;通过脂质体介导的基因转染,Fas 基因可成功地导入胃癌耐药细胞,并能有效地增强 FasmRNA 及其蛋白的表达,为诱导细胞凋亡逆转胃癌耐药细胞的研究奠定了重要基础。     

采用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达对C2C12细胞基因表达谱的影响

目的采用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达对C2C12细胞中基因表达谱的影响。方法用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中基因表达谱的改变(以空载体细胞为对照);用MEDLINE、Genomatix等生物信息学数据库和分析软件对在Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中表达发生改变的已命名基因进行功能和细胞信号通路分析。结果采用cDNA芯片筛选到在Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中表达发生改变的基因605个;其中下调的基因为250个,已命名基因为155个;上调的基因为355个,已命名基因为255个;其中包含多个炎症相关基因和凋亡相关基因。上述炎症相关基因属于13条细胞信号通路,凋亡相关基因属于9条细胞信号通路。结论Krüppel样因子4过表达能够引起C2C12细胞中多个下游基因表达发生改变。     

JAK/STAT信号通路相关基因在人胃腺癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株中的表达变化

目的 用基因芯片技术研究人胃腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株SGC7901／R及其亲本细胞株SGC7901 JAK／STAT信号传导通路相关基因表达谱的差异。方法 分别抽提两种细胞mRNA，经逆转录反应，用生物素标记的16-duTP将两种细胞的mRNA分别标记成两种CDNA探针，并与载有-组靶基因的人JAlL／STAT信号通路芯片进行杂交，通过软件对扫描图像进行数字化处理和分析，筛选2种细胞在该信号通路中有表达差异的基因。通过RT-PCR法分别对耐药细胞及其亲本细胞中的Stat3、核因子(NF)-KB1和bcl-x mRNA的表达水平进行检测。结果通过两种细胞株JAKIC／STAT信号通路的基因谱平行比较，筛选出人胃腺癌5-Fu耐药细胞株及其亲本细胞株中有表达差异2倍以上的基因共70个，其中表达上调＞2倍的40个，表达下调＞2倍的30个。RT-PCR的验证结果与芯片的筛查结果基本相符。结论 人胃腺癌5-Fu耐药细胞株中JAK／STAT信号通路基因表达谱的变化研究是对胃癌多药耐药分子机制研究的有力补充。     

热休克因子1调控的细胞凋亡相关基因的筛选与鉴定

[目的] 观察热休克因子1在热休克反应时对细胞凋亡相关基因表达的调控，同时筛选和初步鉴定热休克因子1调控的下游凋亡相关基因。方法 采用热休克因子1基因敲除小鼠热休克反应模型，抽提热休克因子1基因敲除小鼠和野生型小鼠心肌和肺组织的总RNA进行基因芯片实验，观察凋亡相关基因表达的情况；同时采用生物信息学技术对上述差异表达基因的启动子区进行分析，筛选含有热休克元件的基因；通过逆转录一聚合酶链反应进一步验证热休克因子1对上述基因表达的调控。结果 热休克反应后，野生型小鼠与热休克因子1基因敲除小鼠组织中差异表达的细胞凋亡相关基因有40个。经Genomatix和TESS软件分析发现其中Fasl、Fas、Bim、Bak等8个基因的启动子区含有热休克因子1结合位点。经逆转录一聚合酶链反应证实，热休克反应使Fasl在热休克因子1基因敲除小鼠的表达较野生型小鼠明显增高，而在稳定转染热休克因子1的Raw264.7细胞，Fasl的表达较转空载体细胞明显降低。结论 热休克因子1可调控FasL等多个细胞凋亡相关基因的表达。     

复发/难治性急性淋巴细胞白血病患者多药耐药基因表达及临床意义

目的探讨复发/难治性急性淋巴细胞白血病(ALL)患者多药耐药基因(mdr1基因)的表达及其临床意义。方法采用Northern blot法检测K562/A02细胞株mdr1基因的表达,RT-PCR法检测42例ALL患者(ALL组)、27例非白血病患者和健康人(对照组)mdr1基因的表达水平,分析mdr1基因过度表达的临床意义。结果ALL组mdr1基因过度表达率显著高于对照组(P<0.01),其中复发/难治者高于初诊和完全缓解(CR)者(P<0.01),临床耐药者高于非临床耐药者(P<0.01);非临床耐药者CR率显著高于临床耐药者(P<0.001)。结论mdr1基因过度表达与ALL患者临床耐药密切相关,是影响预后的重要因素;mdr1基因表达可作为判断ALL患者临床耐药和预后的指标。     

基因重组人巨细胞病毒pp150蛋白片段的原核表达及鉴定

目的以人巨细胞病毒（HCMV）AD169病毒株基因为模板,经PCR扩增了编码pp150蛋白片段的UL32基因,转入pMD18-T克隆载体后经酶切与表达载体pET-11a连接,转入大肠杆菌BL21,重组大肠杆菌经诱导表达pp150蛋白片段.经SDS-PAGE分析,其相对分子量约为21.5 kD,表达量约占菌体蛋白的16.38%,Western blot鉴定为阳性.表明成功构建了pp150蛋白片段的表达载体,并成功诱导表达了pp150蛋白,为进一步纯化该蛋白奠定了基础.     

慢性粒细胞白血病患者sorcin基因表达及其临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白（sorcin）基因表达与临床耐药和疗效的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测31例慢性粒细胞白血病（CML）患者（CML组）和27例健康人（对照组）sorcin基因表达。结果CML组sorcin基因阳性表达率明显高于对照组（P〈0．01）,其急变期患者阳性率高于慢性期和加速期患者（P分别为0．03和0．18）;CML临床耐药者sorcin基因表达显著高于非临床耐药者,疗效显著低于非临床耐药者。结论CML患者sorcin基因呈高表达,与临床耐药和预后密切相关;sorcin表达可作为检测临床耐药和判断CML患者预后的指标之一。     

人参强心滴丸治疗大鼠心力衰竭的作用机制研究

目的研究人参强心滴丸治疗大鼠充血性心力衰竭（CHF）的作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法复制CHF大鼠模型，分假手术组，模型组，人参强心滴丸高剂量组、低剂量组和对照组。采用流式细胞技术观察人参强心滴丸对CHF大鼠心肌细胞凋亡及相关调控基因bax和bcl-2蛋白表达的影响。结果模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显升高，bax蛋白表达增强，bcl-2蛋白表达减弱；各用药组心肌细胞凋亡率明显下降，bax蛋白表达减弱，bcl-2蛋白表达增强。结论人参强心滴丸可调整bax和bcl-2的蛋白表达强度，降低心肌细胞凋亡率，逆转心室重塑，改善CHF预后。     

拓普替康耐药卵巢癌细胞基因的表达变化及意义

目的 探讨人卵巢癌获得性拓普替康（TPT）耐药的相关基因。方法 采用大剂量间歇诱导法,用拓普替康（TPT）反复冲击诱导培养人卵巢癌SKOV3细胞株,建成SKOV3／TPT耐药株。用Affymetrix人类基因组U133A基因表达谱芯片,比较SKOV3／TPT及SKOV3细胞基因表达的差异。选择高表达的基因进行RT—PCR验证。结果 基因芯片检测发现,二者有283种基因表达有显著性差异。有7个差异表达基因可能参与了SKOV3／TPT细胞的耐药机制,其中上调最明显的基因为MRP3,其次为MRP7、钠离子通道蛋白及固醇异构酶基因;明显下调的基因有MRP4、假设蛋白和免疫球蛋白基因。RT—PCR检测MRP3mRNA在耐药细胞中呈高表达,与基因芯片结果一致。结论 MRP3、MRP4、MRP7、钠离子通道蛋白、固醇异构酶、假设蛋白和免疫球蛋白基因为人卵巢癌获得性TPT耐药相关基因。     

盐酸小檗碱抗大鼠胃癌前病变及其作用机制

[目的]探讨盐酸小檗碱对实验性大鼠胃癌前病变的影响及与细胞凋亡和P53、Bcl-2蛋白、mRNA表达水平的关系.[方法]采用N-甲基-N-亚硝基胍饮水法建立大鼠胃癌前病变模型,用盐酸小檗碱预防和大、中、小3种剂量干预治疗,观察大鼠的一般情况,以光镜观察胃癌前病变的发生率,并运用末端DNA标记法检测凋亡率(AI),免疫组化法检测细胞中P53和Bcl-2蛋白表达,逆转录多聚酶链式反应检测P53和Bcl-2的mRNA水平.[结果]经盐酸小檗碱干预大鼠,其癌前病变的发生率明显降低,与模型组比较P＜0.05,AI显著提高,3种剂量组与模型组比较均P＜0.05,并伴有Bcl-2、突变型P53基因蛋白表达水平降低,野生型P53基因mRNA水平升高,Bcl-2基因mRNA水平下调,其中以大剂量组尤为显著,与模型组比较P＜0.01.[结论]盐酸小檗碱能预防和治疗实验性大鼠胃癌前病变,其机制与提高细胞凋亡率和调控基因表达有关.     

至真方对人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/VCR中核因子-κB及P糖蛋白表达的影响

[目的]从核因子-κB（NF-κB）途径研究至真方对大肠癌多药耐药（MDR）细胞株———人大肠癌细胞株及长春新碱细胞株（HCT-8/VCR）的逆转作用及P糖蛋白（P-gp）表达的影响。[方法]CCK-8法测定HCT-8/VCR的MDR性及至真方含药血清对HCT-8/VCR细胞株的逆转作用;Real-time PCR及Western blot检测NF-κB/p65、MDR1mRNA,NF-κB/p65、P-gp蛋白的表达。[结果]至真方含药血清可明显抑制HCT-8/VCR细胞生长。不同浓度至真方含药血清作用24h后,HCT-8/VCR细胞NF-κB/p65、MDR1mRNA及NF-κB/p65、P-gp蛋白表达均降低,且呈浓度依赖性,与阴性对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。[结论]至真方对人大肠癌MDR细胞株HCT-8/VCR的逆转作用可能与其下调NF-κB、P-gp的表达相关。     

阻癌胃泰对胃癌前病变Bcl-2及P53 基因蛋白的影响

[目的]探讨胃癌前病变(PLGC)Bcl-2、P53基因蛋白的表达及阻癌胃泰的治疗机制.[方法]N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍溶液加胃黏膜机械损伤诱发Wistar大鼠PLGC状态.用阻癌胃泰与维酶素预防和治疗,观察对病变黏膜组织中P53、Bcl-2基因蛋白水平的影响.[结果]中药组能明显阻断化学致癌物对黏膜的炎症损伤,改善PLGC组织黏膜不典型增生程度;同时中药组治疗后Bcl-2、P53基因蛋白阳性指数亦明显低于病理对照组(P＜0.05).[结论]益气化瘀为主的阻癌胃泰通过改善PLGC大鼠气虚血瘀的病理基础,降低病变组织增殖水平,诱导细胞正常凋亡,从而对PLGC细胞的增殖有良好的阻断作用.