转Survivin基因树突状细胞抗消化道肿瘤的免疫效应研究

目的　研究转染Survivin的树突状细胞 (DC)在体外诱导高效而特异的抗消化道肿瘤免疫效应。方法　用脂质体作为介质 ,将Survivin基因转染入DC ,用Westernblot法检测培养上清Survivin的表达 ,检测这种DC分泌细胞因子白介素 (IL 12 )、肿瘤坏死因子 (TNF) α的功能 ,以及表面分子CD1a、CD83、MHcⅡ、CD80、CD86表达的高低 ,用MTT法诱导人特异的细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)的能力。结果　培养上清中均可以检测到Survivin表达 ;转基因DC的上清IL 12、TNF α两种细胞因子含量为 (2 65 .2± 3 2 .7)ng/L和(4 3 7.1± 83 .5 )ng/L明显比单纯DC组高(P <0 .0 5 ) ;转基因DC表面高表达CD1a、CD83、MHCⅡ、CD80、CD86;转基因的DC提呈的T细胞对胃癌细胞、结肠癌细胞、胆管癌细胞杀伤率分别为 :65 %、77%、85 % ,而未修饰的单纯DC杀伤作用较低。结论　Survivin基因转染修饰的DC能诱导细胞毒性T淋巴细胞的特异性 ,显著地提高DC的抗原提呈功能 ,体外能诱导高效而特异的抗癌免疫效应。     

转染RhoA基因对树突状细胞抗胃癌功能的影响

目的 研究转染RhoA基因对树突状细胞(DC)免疫功能的影响,观察修饰后的DC在体外诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应.方法 用增强型绿色荧光蛋白标记的RhoA重组腺病毒载体作为介质,将RhoA基因转染入DC,用RT-PCR法检测培养上清RhoA基因的表达.检测这种DC分泌细胞因子IL-12、TNF-α的功能,以及表面分子CD1α、CD83、MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达,用MTT法诱导人特异的细胞毒性T淋巴细胞的能力. 结果培养上清中均可以检测到RhoA基因表达;在这种转基因DC的上清中IL-12、TNF-α 含量分别为(301±24)和(418±64)pg/ml,明显比非转染的DC组高,P＜0.05;转基因DC表面高表达CD1α(70.13±0.03)、CD83(68.10±0.03)、MHC-Ⅱ(69.73±0.13)、CD80(78.73±0.25)、CD86(74.20±0.05),而在非转染的DC中是低表达的;经转染RhoA基因的DC提呈的T细胞对胃癌细胞的杀伤率为87%,而未修饰的DC杀伤作用较低. 结论RhoA基因转染修饰的DC能诱导细胞毒性T淋巴细胞的特异性,显著地提高DC的抗原提呈功能,在体外能诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应.     

IκBα突变体基因修饰树突状细胞降低同种T细胞的反应性

目的观察IκBα突变体基因修饰的树突状细胞(IκBαM-DC)对同种T细胞的反应性。方法利用腺病毒载体将IκBαM基因转染WF大鼠骨髓树突状细胞(DC),Western-blot法检测DC中IκBα、IκBαM基因的表达;用流式细胞仪检测DC中共刺激分子MHCⅡ、CD80、CD86、CD40的表达;酶联免疫法(ELISA)分析DC分泌IL-12的含量。通过混合淋巴细胞反应(MLR)分析Lewis大鼠T细胞对IκBαM-DC刺激的增殖能力,二次MLR检测IκBαM-DC诱导的T细胞抗原特异性的低反应性。结果IκBαM抑制DC共刺激分子MHCⅡ、CD80、CD86、CD40的表达及IL-12分泌。同种T细胞对IκBαM-DC刺激的增殖能力较未转染的DC反应明显降低;T细胞低反应具有抗原特异性。结论表达IκBα突变体基因的DC能降低同种T细胞的反应性。     

胆管癌肿瘤裂解物修饰和p53基因导入对树突状细胞免疫效应的影响

目的　研究胆管癌裂解物对转染全长野生型p5 3的树突状细胞 (DC)免疫功能的影响。方法　用腺病毒作为介质 ,将全长野生型 p5 3转染入DC ,然后用胆管癌裂解物修饰已转染全长野生型 p5 3的DC(Lywtp5 3DC) ,检测这种DC表面分子B7-1、B7-2、MHC -Ⅰ、MHC -Ⅱ表达的高低 ,诱导特异的细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)的能力 ,对小鼠的免疫保护和对动物模型治疗作用。结果　经流式细胞仪检测胆管癌裂解物刺激的wtp5 3DC表面高表达B7-1( 86.70± 0 .0 7)、B7-2 ( 18.77± 0 .0 8)、MHC -Ⅰ ( 87.2 0± 0 .0 5 )、MHC -Ⅱ ( 5 6.70± 0 .0 7) ,而单纯DC这些分子是低表达的 ;Lywtp5 3DC能够特异性地杀伤胆管癌细胞 ,杀伤率为 81%。Lywtp5 3DC治疗组和其它组在肿瘤生长的直径大小之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,在Lywtp5 3DC治疗组中 ,肿瘤生长明显减慢。结论　全长野生型 p5 3基因转染 胆管癌裂解物联合修饰的DC能诱导CTLs的特异性 ,显著地提高DC的抗原提呈功能 ,体外能诱导高效而特异的抗胆管癌免疫效应。     

胃癌肿瘤裂解物修饰的树突状细胞体外诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞

目的　利用树突状细胞呈递肿瘤抗原的特性提高细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)对胃癌细胞的杀伤活性。方法　胃细胞癌患者外周血来源的有核细胞体外经GM -CSF和IL -4诱导产生树突状细胞 ,负载肿瘤裂解物后诱导自体CTLs产生。用细胞毒试验检测CTLs杀伤活性 ,和用ELISA测定细胞因子的分泌。结果　胃癌患者自体来源的DC裂解物能诱导产生的CTLs对自体胃癌细胞具有高杀伤率 ,可达 83 % ;致敏的DC组中IL -12与TNF -α的浓度 ( 1161± 2 3 9pg/ml,10 44± 3 12 pg/ml)显著高于未致敏的DC组 ( P <0 .0 5 )。结论　DC能呈递胃癌裂解物 ,诱导产生抗原特异性CTLs。     

表达IκBα突变体的树突状细胞对大鼠移植肾存活时间的影响

目的 观察IκBα突变体基因修饰的供体树突状细胞(IκBαM-Dc)对大鼠移植肾存活时间的影响.方法 利用重组腺病毒载体将IκBαM基因转染WF大鼠骨髓DC,流式细胞仪检测DC共刺激分子CD80、CD86表达.以wF大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,行同种肾移植.术前7 d,受体输注供体IκBαM-DC作为IκBαM组,未输注IκBαM-DC的受体作为对照组,观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.术后第14天检测受体T细胞对供体成熟DC及第三方大鼠成熟DC的反应性.结果 IκBαM明显抑制DC共刺激分子CD80、CD86表达.IκBαM组受体鼠移植肾存活时间为(32.5±7.8)d,较对照组移植肾存活时间(8.5±1.7)d明显延长(P<0.01);而其术后7 d血清肌酐为(57.3±8.2)μmol/L,较对照组血清肌酐(498.0±46.3)μmol/L明显减低.肾移植术后,IκBαM组受体T细胞对供体成熟DC反应明显低于对照组,而对第三方大鼠成熟DC的反应性与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 表达IκBα突变体的供体树突状细胞能诱导受体大鼠T细胞对供体抗原的免疫低反应,显著延长大鼠移植肾存活时间.     

基因转移对肿瘤坏死因子杀伤肿瘤细胞作用的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子受体 (TNFR)基因转移对TNF杀伤膀胱肿瘤细胞作用的影响。　方法　建立TNFR逆转录病毒表达载体 ,通过转染包装细胞PA317产生完整病毒颗粒 ;膀胱癌BIU 87细胞经病毒感染后 ,检测细胞表面TNFR数量及TNF杀伤作用变化。　结果　TNFR基因转移前膀胱癌BIU 87细胞表面与TNF结合的位点数量平均为 912个 /细胞 ,经病毒感染后 ,细胞表面与TNF结合的位点数量平均为 2 872个 /细胞 (P <0 .0 5 ) ;TNF对经病毒感染的BIU 87细胞的杀伤作用较未经病毒感染者明显增强 (P <0 .0 5 )。　结论　以逆转录病毒为载体的基因转移方法可以提高肿瘤细胞表面TNFR的表达量 ,从而增强TNF对肿瘤细胞的杀伤作用。     

Rel-A siRNA对大鼠树突状细胞的影响

目的 探讨siRNA沉默Rel-A基因表达对大鼠树突状细胞(DC)生物学效应的影响.方法 采用细胞因子诱导培养法体外扩增大鼠骨髓DC,经免疫磁珠纯化获得高纯度DC后, 针对Rel-A基因,采用半定量RT-PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测Rel-A的表达情况,筛选一对高效RNA干扰(RNAi)行慢病毒载体包装并转染DC(RNA干扰组), 以未转染RNAi的DC作为对照组.分别给予1mg/L的脂多糖(LPS)刺激,透射电镜观察RNAi对LPS促DC成熟的影响,并利用流式细胞术(FCM)检测DC表面CD80,CD86及MHC Ⅱ分子的变化;混合淋巴细胞反应(MLR)法检测T细胞增殖能力;ELISA法检测DC分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ( IFN-γ)和白介素12( IL-12)的浓度.结果 与空白对照组相比, 序列2组降低最明显,抑制率达90%,差异有统计学意义;透射电镜下可见RNAi Rel-A DC内多吞噬泡样结构;RNA干扰组CD80,CD86,MHC Ⅱ分子的表达、T细胞增殖能力及TNF-α,IFN-γ,IL-12的浓度与对照组相比均显著下降. 结论 RNA干扰技术能显著下调大鼠Rel-A基因的表达, Rel-A基因沉默DC的生物学效应表现为未成熟DC的特点.这种RNAi Rel-A DC可望作为一种新型的致耐受DC,而应用于免疫耐受的诱导研究.     

转化生长因子－β1基因修饰的不成熟树突状细胞的免疫生物学功能

目的 探讨转化生长因子(TGF) -β1基因转染后树突状细胞(DC)细胞表型和免疫生物学功能的变化.方法 利用大鼠骨髓细胞诱导、培养不成熟树突状细胞(imDC),以脂质体介导的pIRES2-EGFP-hTGF-β1转染imDC细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot法检测转染后各组imDC培养上清TGF-β1蛋白表达;通过流式细胞法、免疫细胞化学法及混合淋巴细胞反应检测各组imDC表面分子的分子表型和免疫功能变化.结果 TGF-β1基因转染的imDC上清中均检测相应蛋白的高表达,TGF-β1基因转染组TGF-β1蛋白表达(252.75±11.31) μg/L均高于mDC组(11.19±2.29) μg/L、imDC组(35.18±6.17) μg/L、空载体组(33.67±4.61)μg／L;基因转染组的表面分子CD86、CD80及MHCⅡ表达明显低于空载体组和无任何转染的imDC组;基因转染组的imDC对T的增殖研究结果显示有显著抑制作用,低于空载体和无任何转染的imDC组.结论 TGF-β1基因成功导人imDC,基因改造的imDC不但能维持不成熟状态同时分泌免疫耐受抑制蛋白,致免疫耐受作用显著增强.     

gp96多肽复合物树突状细胞疫苗诱导的体外抗胃癌实验研究

目的研究gp96多肽复合物树突状细胞(DC)疫苗特异性抗胃癌的免疫反应。方法应用层析技术从胃癌组织中提取gp96多肽复合物,制备gp96多肽复合物DC疫苗;采用流式细胞仪检测gp96多肽复合物DC疫苗表面分子的表达;ELISA检测gp96多肽复合物DC疫苗致敏的效应 T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-10的水平;51Cr释放实验检测gp96多肽复合物DC疫苗诱导的特异性对胃癌细胞的杀伤效应。结果gp96多肽复合物DC疫苗表面分子CD1α(79．3±4．1)％、CD80 (84．3±2．4)％、CD83(85．7±3．2)％和HLA-DR(83．4±2．9)％的表达显著增高;对原代培养胃癌细胞的杀伤率(58．5±10．7)％显著高于对SGC 7901细胞的杀伤率(24．0±4．2)％,两者相比差异有统计学意义,P<0．01;对HepG2细胞(13．8±2．8)％则无明显杀伤作用。DC疫苗诱导的效应T淋巴细胞分泌IFN-γ(2875±178)pg／ml的量明显增加,分泌IL-10(36±7)pg／ml的量显著降低。结论 gp96多肽复合物DC疫苗能诱导出较强的对自体胃癌细胞的杀伤作用,且具有高度特异性。     

树突状细胞融合瘤诱导抗结肠转移癌免疫应答

目的 检测结肠转移癌细胞SW620和树突状细胞（DC）融合构建的肿瘤疫苗对结肠转移癌细胞SW620及其同源结肠癌细胞SW480的杀伤作用。方法 应用促融合剂50％聚乙二醇（PEG）对SW620细胞和从外周血单个核细胞（PBMC）诱生的DC进行融合,用流式细胞仪（FCM）分析其表型并检测融合效率,电镜及免疫细胞化学观察DC、SW620和融合细胞（DC／SW620）形态;^51Cr释放法检测DC／SW620致敏CTL对SW620及SW480细胞的杀伤作用。结果 从PBMC成功诱生出高表达HLA-ABC、HLA-DR、CD80、CD86、CD83的成熟DC,DC／SW620的融合效率达到27．12％。融合细胞兼具DC与肿瘤细胞的结构特点及免疫表型。^51Cr释放法检测DC／SW620激活的CTL对SW620及SW480的杀伤作用强于各对照组（P〈0．01）。结论 DC与SW620细胞融合体外致敏自体T淋巴细胞能生成抗原特异CTL,对结肠转移癌细胞SW620及同源结肠癌细胞SW480有一定的杀伤作用。     

siRNA沉默survivin基因对肺癌细胞凋亡的影响

目的观察siRNA（Small interference RNA,siRNA）介导survivin基因对肺癌细胞凋亡作用。方法设计、合成针对survivin的siRNA并构建相应载体,转染对数生长期肺癌细胞A549,对比阴性对照组和空白对照组;半定量RT-PCR检测survivin mRNA的表达,MTT法检测细胞生长,流式细胞仪检测肺癌细胞的凋亡。结果转染siRNA组survivin mRNA表达明显低于阴性对照组和空白对照组（P〈0.05）。MTT法检测各组细胞生长曲线阴性对照组与空白对照组相比,转染后24,48,96小时及1周时细胞生长未受影响,siRNA组在转染后24,48小时细胞生长未受明显影响,而96小时及一周时明显抑制。转染siRNA组的细胞的凋亡率与阴性对照组与空白对照组相比显著增加（14.94%±1.60%vs 3.23%±0.46%,4.22%±0.34%,P〈0.05）。结论本实验提示siRNA沉默survivin基因能促进肺癌细胞的凋亡,survivin siRNA基因治疗有可能成为肺癌治疗的新靶点。     

腺病毒介导G250基因转染树突状细胞激活免疫效应细胞治疗肾癌的实验研究

目的 探讨以腺病毒(Ad)载体介导肾癌相关抗原G250基因转染制备树突状细胞(DC)瘤苗.体外诱导自体T淋巴细胞特异性抗肾癌免疫效应. 方法 自健康人外周血中提取单核细胞,将贴壁细胞分为3组(Ad-G250基因转染组、G250蛋白致敏组、未致敏组),用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和诱导活化;3组DC细胞中分别加入自体T淋巴细胞,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL).RT-PCR检测G250在DC细胞内的转录情况;流式细胞仪检测DC表面标志分子和G250抗原蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐法检测3组CTL对肾癌细胞株786-0和肺癌细胞株A549的杀伤活性. 结果 Ad-G250高效转染DC,G250阳性细胞率为(52.2±1.5)%,G250蛋白在DC:内成功表达:基因转染组DC中成功扩增出G250产物;Ad-G250转染的DC表面标志CD_(80)、CD_(83)、CD_(86)、CD_(1a)、HLA-DR表达高于其他2组.差异均有统计学意义(P<0.05).Ad-G250基因转染组、G250蛋白致敏组、未致敏组诱导的3组CTL对786-0靶细胞杀伤活性分别为(83.4±2.8)%、(79.6±2.4)%、(77.3±2.1)%,组间比较差异有统计学意义(F=69.172,P=0.000);3组CTL对A549靶细胞杀伤活性差异无统计学意义(F=0.373,P=0.693). 结论 以Ad为载体介导抗原基因转染DC,并诱导特异的CTL,技术上可行,所诱导的CTL杀伤活性强,有望成为一种肿瘤免疫治疗方法.     

CD40 ligand is essential for generation of specific cytotoxic T cell responses in RNA-pulsed dendritic cell immunotherapy

BACKGROUND: Dendritic cell (DC)-based immunotherapy is a promising form of adjuvant therapy for high-risk tumors. DCs transfected with tumor-associated antigens are capable of stimulating antigen-specific T cells, but cytolytic responses have been disappointing. Activation of DC surface CD40 influences DC cytokine production, particularly that of interleukin (IL)-12, which favors a Th1 (cytotoxic) helper T cell response. This study evaluated the effects of exogenous soluble CD40 ligand (sCD40L) on RNA-transfected DC preparations and their subsequent ability to generate antimelanoma cytolytic T cells. METHODS: Human monocyte-derived DCs were cultured and transfected with mRNA encoding full-length melanoma-associated antigen, Mart-1, and matured with and without sCD40L. DC IL-12 secretion and the ability to stimulate na?ve T cells were assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), tetramer analysis, Elispot, and (51)Cr release assay. RESULTS: Mature DCs stimulated with sCD40L secreted higher levels of IL-12 compared with immature DCs and DCs matured without sCD40L (P <.001). DCs treated with sCD40L generated a greater number of antigen-specific T cells (P <.05) by tetramer and Elispot analyses, and yielded specific T cells with significant cytotoxicity against HLA-matched melanoma cell lines. CONCLUSIONS: CD40L augments DC IL-12 secretion and is essential to potentiate specific antimelanoma cytolytic responses stimulated by the Mart-1 antigen. sCD40L should be considered a crucial adjuvant in DC preparations for RNA-based DC vaccine therapies.     

白细胞介素-12基因修饰对树突状细胞表面分子表达及细胞因子分泌的影响

目的 观察白细胞介素(IL)-12基因修饰对树突状细胞(DC)表面分子及细胞因子分泌的影响.方法 采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的Dc;ELISA法检测各组DCs和各组T细胞上清中IL-12、IL-10、IFN-γ因子的分泌水平;流式细胞仪(FACS)分析各组DC表面CD83、CD86的表达;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;统计学分析比较各组间的差异.结果 IL-12基因修饰使得DC高表达CD83和CD86分子,分泌高水平IL-12及IFN-γ,但对IL-10因子的分泌无明显影响,刺激同源T淋巴细胞增殖明显,诱导激活的T细胞上清中IFN-γ水平显著增高、IL-10分泌水平显著降低.结论 经IL-12基因修饰后的DC表型成熟,分泌IL-12及IFN-γ的能力增强,对IL-10因子的分泌无影响,能抑制T细胞分泌IL-10因子,优化抗原提呈的微环境.     

大鼠树突状细胞CD86分子小干扰RNA慢病毒载体构建及其功能

目的 观察针对大鼠树突状细胞(DCs)表面共刺激分子CD86的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体转染骨髓来源大鼠DCs后,CD86分子mRNA水平变化及DC刺激T淋巴细胞增殖能力的变化.方法 将针对大鼠DCs表面共刺激分子CD86的siRNA慢病毒载体转染骨髓来源大鼠DCs,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测CD86分子mRNA水平,MLR检测转染后的树突状细胞刺激T淋巴细胞增殖能力的变化.结果 转染组CD86分子mRNA水平较未转染组及阴性对照组有明显下降.MLR中各实验组DC与细胞1:1、1:10、1:50混合72 h后492 nm吸光度值分别为,未转染组:0.876±0.117、0.582±0.085、0.472±0.034;阴性对照组:0.870±0.140、0.541±0.066、0.438±0.067;转染组:0.394±0.143、0.294±0.032、0.218±0.015.表明转染后的DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力较未转染组及阴性对照组显著降低.结论 实验所用针对CD86分子的siRNA慢病毒载体,可以特异性的抑制大鼠树突状细胞CD86基因的表达,降低树突状细胞对T淋巴细胞的刺激增殖能力.     

小分子干扰RNA抑制肺癌细胞Survivin表达对凋亡和顺铂耐药性的影响

目的 观察应用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制肺癌A549细胞中Survivin表达对细胞凋亡和顺铂耐药性的影响.方法 设计、合成特异性抑制Survivin表达的siRNA,转染肺癌A549细胞48 h后,检测Survivin基因mRNA表达量以及肺癌细胞凋亡率和对顺铂耐药性变化.结果 A549细胞转染Survivin特异siRNA后,Survivin/β-actin基因mRNA表达比例1.17±0.25下降至0.41±0.18,抑制率65.10%;细胞凋亡率由2.67%上升至32.33%;顺铂半数抑制浓度(ICSO)由6.37 ms/L降低至2.42 ms/L.结论 通过siRNA特异性抑制肺癌A549细胞中Survivin基因表达可增加凋亡,逆转顺铂耐药.     

Tumor specific cytotoxicity and telomerase down-regulation in prostate cancer by autologous dendritic cells loaded with whole tumor cell antigens

ObjectivesWe investigated the efficacy of cytotoxic activity of whole tumor cell-antigen loaded dendritic cells in the treatment of hormone refractory prostate cancer.Materials and methodsFrom 10 patients with HRPC, peripheral blood samples were obtained and cultured with GM-CSF and IL-4 to provide differentiation of peripheral blood mononuclear cells (PBMs) into dendritic cells (DCs). DC phenotype was confirmed by flow cytometry (MHC class II HLA-DR, CD80, CD86, CD83, CD14 expression analysis). Subsequently, whole tumor cell lysates of LNCaP, DU-145, and PC-3 lines were incubated with DCs. Direct antitumoral activity of induced DCs and activation of PBM cells by these DCs was assessed by lactate dehydrogenase (LDH) cytotoxicity assay. Post-treatment changes in the telomerase gene expression of tumor cells were investigated by real time RT-PCR analysis.ResultsLDH activity was highest in the PC-3 cell line (9.5%) and lowest in the DU-145 line (3.2%). Co-incubation of PBMs with activated DCs resulted in a significant increase at the levels of cytotoxicity in all cell lines. Likewise, incubation of tumor cells with activated DCs caused significant down-regulation of telomerase gene expression in all cell lines. Most pronounced suppression was in the LNCaP cell line (decrease by 97.1%). The decrease in the level of telomerase gene expression in DU-145 and PC-3 cell lines was 80% and 70%, respectively.ConclusionsCytotoxic immune response to prostate cancer-associated antigens can be elicited in vitro in patients with HRPC using an allogeneic tumor cell-based strategy. DC-based active immunotherapy appears as an effective treatment method in the pre-clinical setting and further phase I/II trials are warranted.     

靶向存活素基因短发卡RNA对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在裸鼠体内生长的影响

目的观察靶向存活素基因的特异性短发卡RNA（shRNA）对人脑胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠体内肿瘤生长和血管形成的影响。方法将U251细胞、稳定转染存活素基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251细胞（U251-SR细胞）、稳定转染空载体pWH1的U251细胞（U251-P细胞）,分别接种于15只裸鼠背部皮下,每组5只,观测肿瘤生长情况。采用免疫组化SABC方法检测存活素、增殖细胞核抗原（PCNA）以及第八因子相关抗原（FⅧRAg）在各组肿瘤标本中的表达;采用TUNEL方法检测凋亡细胞,分别计算各组肿瘤标本的增殖指数（PI）、凋亡指数（AI）以及微血管密度（MVD）。结果与U251、U251-P组相比,U251-SR组裸鼠肿瘤形成时间延迟,肿瘤生长缓慢,肿瘤体积及重量均明显减小（P均〈0.01）;肿瘤标本存活素蛋白表达明显下调;PI和MVD明显减少,AI明显升高（P均〈0．01）。结论靶向存活素基因的shRNA能够在裸鼠体内明显抑制U251细胞的肿瘤生长和血管形成。