利用同种异体脱细胞血管基质预构小口径血管的研究

目的通过观察狗腹腔内预植同种异体脱细胞血管基质（ACVM）所形成的结缔组织管作为替代血管的力学性能，以及移植于自体股动脉后的组织结构变化，探讨利用同种异体ACVM预构小口径血管的可行性。方法在狗腹腔内埋植长8～12cm用硅胶棒支撑的已制备好的同种异体ACVM，3周后将硅胶棒周围形成的管状物作为血管替代物桥接移植于自体股动脉后，进行力学、组织学检查及与颈动脉、股静脉自体移植的对比分析。于移植术后6个月观测作为替代血管的通畅情况，组织学观察其组织结构变化。结果血管替代物的力学性能弱于正常动脉而强于正常静脉。组织学观察：形成的管状物内腔有少量的间皮细胞黏附；弹性纤维、胶原纤维结构较完整；纤维网中充满成纤维细胞。6个月后内皮细胞在替代物内壁连续覆盖，平滑肌细胞与对照组相近。移植6个月后异体ACVM组血管全部通畅。结论用同种异体ACVM预构的血管替代物，力学性能符合血管移植、血运重建的需求。所形成的结缔组织管作为血管替代物移植6个月后，管壁厚度及组织结构已接近正常血管。     

脱细胞基质在软骨组织工程中的应用

目的 综述脱细胞基质(acellular matrix,ACM)在软骨组织工程中的应用与研究进展. 方法 广泛查阅近年国内外相关文献,进行回顾与综合分析. 结果 许多研究者联合采用了渗透溶液法、冷冻干燥法和理化交联法等技术对软骨ACM支架进行了改进.软骨ACM支架用于构建组织工程软骨的实验结果 与ACM的特性密切相关. 结论 ACM在软骨组织工程领域有着广泛的应用前景,其特性的改进与完善非常重要.     

软骨脱细胞基质生物性的实验研究

目的　研究软骨脱细胞基质植入机体后其局部及重要脏器的反应。方法　将兔耳软骨行脱细胞处理。将 1 2只SD大鼠分四组 ,实验组为脱细胞软骨 ;对照 1组为新鲜软骨 ;对照 2组为Vicryl;对照 3组为硅胶条。将脱细胞处理及未处理的兔耳软骨、Vicryl和硅胶条分别植入鼠背部皮下 ,饲养至术后 7,1 5 ,30天后处死取材 ,每次每组处死 1只。取材的部位包括植入物及其周边组织 ,实验组同时取心、肺、肝、肾。标本以 1 0 %中性甲醛固定 2 4h ,常规HE染色。结果　脱细胞软骨周围有少量嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润 ,可见扩张的毛细血管 ,为炎性反应Ⅲ级。新鲜软骨周围有大量中性粒细胞浸润 ,其中可见不规则的钙化组织 ,为炎性反应Ⅳ级。硅胶和Vicryl均引发异物反应。实验组术后 4周内心、肺、肝、肾四种器官无器质性改变。结论　脱细胞软骨基质具有良好的组织相容性 ,是一种潜在软骨的替代材料及软骨组织工程支架材料     

脱细胞基质与血管内皮细胞体外相容性的研究

目的 将猪血管内皮细胞和异体猪血管脱细胞基质相结合，探讨开发一种制备血管移植物的新方法。方法 分别利用0．1％胰蛋白酶、0．02％乙二胺四乙酸钠(EDTA)和1．0％Triton X—100对猪主动脉作用24小时和176小时进行脱细胞。异体猪血管内皮细胞分离出来并进行体外细胞扩增，再将脱细胞的血管内表面种植上血管内皮细胞。通过光镜和扫描电镜检测脱细胞血管基质是否存在细胞成分和内皮细胞是否生长其上。结果 酶—化学除垢剂的脱细胞方法几乎使细胞完全脱落，且基质纤维的三维结构变得疏松。体外扩增的异体猪血管内皮细胞可以种植在脱细胞基质上并且具有伸展和增殖功能。结论 Triton X—100和胰蛋白酶制备的脱细胞基质与异体猪血管内皮细胞具有良好的生物相容性，能结合到一起并在体外生成血管移植物。     

软骨脱细胞基质生物性的实验研究

目的研究软骨脱细胞基质植入机体后其局部及重要脏器的反应.方法将兔耳软骨行脱细胞处理.将12只SD大鼠分四组,实验组为脱细胞软骨;对照1组为新鲜软骨;对照2组为Vicryl;对照3组为硅胶条.将脱细胞处理及未处理的兔耳软骨、Vicryl和硅胶条分别植入鼠背部皮下,饲养至术后7,15,30天后处死取材,每次每组处死1只.取材的部位包括植入物及其周边组织,实验组同时取心、肺、肝、肾.标本以10%中性甲醛固定24h,常规HE染色.结果脱细胞软骨周围有少量嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润,可见扩张的毛细血管,为炎性反应Ⅲ级.新鲜软骨周围有大量中性粒细胞浸润,其中可见不规则的钙化组织,为炎性反应Ⅳ级.硅胶和Vicryl均引发异物反应.实验组术后4周内心、肺、肝、肾四种器官无器质性改变.结论脱细胞软骨基质具有良好的组织相容性,是一种潜在软骨的替代材料及软骨组织工程支架材料.     

脱细胞基质在泌尿管路组织工程中的应用

脱细胞基质是经理化方法脱去组织中抗原成分并富含胶原的一种材料，在泌尿管路缺损的替代再生与扩大研究中，显示了诱导膀胱、输尿管与尿道各层成分再生的潜力。随着制备工艺的完善与分子机制的阐明，脱细胞基质将会成为一种“现货供应”的泌尿系统修复材料。     

脱细胞基质在组织工程气管移植中的研究进展

目的综述脱细胞基质在组织工程气管中的研究现状、进展及未来前景。方法广泛查阅脱细胞基质在组织工程气管研究中的相关文献,对不同脱细胞基质修复人和动物气管病损的研究现状进行综合分析。结果气管组织工程应用的脱细胞基质包括空肠、膀胱、主动脉和气管。结论脱细胞膀胱基质及空肠基质在修复气管小范围非环形病损中具有较好效果,脱细胞主动脉基质在长段气管病损中的应用还需进一步研究,脱细胞气管基质在长段气管病损中具有良好的应用前景。     

脱细胞基质同种异体半月板移植的实验研究

目的 :探索同种异体半月板移植中移植半月板的处理方法 ,提高同种异体半月板移植效果。方法 :大耳白兔分为半月板供体组和受体组。供体组右内侧半月板低温冻存 ( -80℃ ) ,左内侧半月板进行脱细胞处理 (不用曲拉通X -10 0 )。将供体半月板移植到异体关节内 ,分批做大体、组织学、影像学观察。结果 :左侧半月板较右侧萎缩轻 ,关节面破坏程度轻 ,组织学和影像学检查均有统计学意义。结论 :经脱细胞处理 (不用曲拉通X -10 0 )的半月板同种异体移植较普通低温冻存半月板移植较果好     

人包皮脱细胞基质组织工程化尿道的可行性研究

目的:为人包皮脱细胞基质作为尿道组织工程修复材料提供依据。方法:制备人包皮脱细胞基质,对其进行组织学观察、细胞毒性以及体内实验,检验其作为尿道材料的安全性和组织相容性。结果:制备的人包皮脱细胞基质,细胞去除完全,用原代包皮上皮细胞测定其细胞毒性,结果显示细胞相对增值率在75%～99%之间,细胞毒性为1级,符合国家标准,回植体内后,随着时间的延长,人包皮脱细胞基质与尿路上皮细胞结合完好,正常尿道复层结构层次逐步恢复。结论:人包皮脱细胞基质抗原性低,相容性好,可以作为组织工程尿道的支架材料。     

软骨脱细胞基质支架材料的软骨组织工程实验研究

目的应用软骨脱细胞基质作为支架材料，按照组织工程的原理再生软骨，为修复软骨缺损探索新的途径。方法取新西兰大耳白兔1只，体重2．4kg，按改良Courtman法对兔耳软骨行脱细胞处理后用于实验。选用纯种6月龄新西兰大耳白兔18只，雌雄不限，体重2．4～2．6kg。每只耳形成2处1cm×1cm软骨缺损，按修复方式不同随机分为3组，每组24处缺损。A组，软骨脱细胞基质加软骨膜；B组，软骨脱细胞基质；C组软骨膜，作为对照。术后每日观察兔耳修复区的大体变化，并分别于4、12周每组处死3只动物，于修复区切取标本，行HE染色、藏红花红一奥尔新蓝染色、II型胶原基因探针原位杂交实验。结果术后4周内A、B组大体形态无明显改变；术后12周可见修复区轻度增厚，触摸时质地较正常软骨稍硬。C组术后2周，2只2处修复区形成痂皮，术后5周痂皮脱落形成穿孔。术后4周，A、B组HE染色可见软骨脱细胞基质周边有轻度的炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，未形成包囊，藏红花红．奥尔新蓝染色均阴性；C组软骨缺损处的软骨膜塌陷，无细胞增殖现象；各组修复区均未见II型胶原基因探针原位杂交显色。术后12周，A组HE染色示部分软骨脱细胞基质内有新生细胞，细胞排列不规律，ECM嗜碱性增强，藏红花红-奥尔新蓝染色呈阳性，II型胶原基因原位杂交显色示新生细胞内均有大片棕黄色阳性染色区域；B组HE染色示软骨脱细胞基质无吸收现象，周边无包囊，炎性细胞消失，藏红花红一奥尔新蓝染色呈阴性，未见II型胶原基因原位杂交显色；C组HE染色示近软骨断端处可见部分形成新生组织，藏红花红一奥尔新蓝染色呈阳性，II型胶原基因原位杂交显色可见棕黄色阳性染色细胞。结论脱细胞软骨可诱导软骨膜细胞向其中生长而重建软骨，软骨膜和脱细胞软骨复合移植是软骨组织工程的另一种选择。     

自体组织构建小口径血管的实验研究

目的在大鼠自体肌肉内预置硅胶棒后形成结缔组织管,观察将其作为血管替代物移植于腹主动脉后的组织结构变化。方法取Wistar大鼠48只随机分为对照组和2、4、6个月移植组。先在腹壁肌肉内埋植直径0 .2cm、长1.5cm硅胶棒,6周后将硅胶棒周围形成的结缔组织管状物作为血管替代物移植于大鼠腹主动脉,在移植术后2、4、6个月分别观察血管通畅情况,光镜、透射及扫描电镜观察替代物的组织结构。结果1.血管替代物移植于腹主动脉后2、4、6个月血管全部通畅。2 .组织学观察平滑肌细胞及内皮细胞在2个月组替代物仅中段少部分未覆盖,4个月组替代物内壁覆盖连续,6个月组与对照组相近,且在近吻合口端可见弹力膜形成。结论1.自体组织所形成的替代物移植于腹主动脉后6个月后管腔通畅良好。2 .移植后6个月的替代物管壁厚度及组织结构已接近正常血管。     

四肢小口径组织工程血管的实验研究

目的研究以小肠黏膜下层组织（small—calibu tissue，SIS）为血管支架，在体内血流条件下培养小口径组织工程血管的可行性。方法自犬隐动脉分离出血管种子细胞，与Ⅰ型胶原蛋白凝胶均匀混合，种植于SIS膜表面，包绕3mm聚乙烯棒制成3层管状支架，为实验组；制成单层无细胞管状支架，为对照组。两种支架作为血管移植物，分别植入15只犬两侧股动脉缺损处进行桥接吻合。术后进行彩超、组织学评价血管的形成过程。结果术后12周，14个3层血管支架保持通畅，通畅率为93．3％，有明显的血管生物结构形成。单层血管支架5个出现部分狭窄，只有3个完全通畅，通畅率为52．6％。结论SIS膜制成的3层血管支架能直接修复血管缺损，并能在体内环境中培形成生物化的小口径组织工程血管。     

血管移植物置换犬颈总动脉的研究

目的 观察以猪血纤维蛋白/微孔聚氨酯弹性膜为管形支架内皮化构建的小口径血管移植物在体内血流动力条件下血管壁重塑过程.方法 用体外培养的小口径血管移植物置换6条犬双侧颈总动脉,于术后1 d、1周、2周、4周行影像学检查,并于术后5 d、2周、4周取材行组织学、免疫组织化学和扫描电镜检查以评价移植血管在体内重塑.结果 10根血管移植物中有8根仍保持通畅(通畅率80%);8根通畅的血管在术后至4周的不同时点取出发现其内表面菲薄、光滑,被覆盖一连续、鹅卵石样单层细胞,Ⅷ因子相关抗原抗体染色阳性.术后4周时新生动脉壁厚900μm,并于血管壁中层可见较多平滑肌细胞,而且最早于术后4周时在血管壁中层就可见弹力纤维.结论 猪血纤维蛋白/微孔聚氨酯弹性膜管形支架内皮化体外构建的小口径血管移植物在体内重塑后,可形成具有类似自体动脉壁结构.     

聚对二氧环己酮缝线编织构建仿生型人工小口径血管支架的实验研究

目的 探讨以聚对二氧环己酮(polydioxanone,PDS)缝线编织网管为中间弹力层,构建仿生型三层小口径血管支架的可行性,并检测其生物力学性能.方法 采用7-0 PDS缝线编织内径为4mm的网管,比较不同的编织结构和编织工艺角对PDS网管生物力学性能的影响.将小肠黏膜下基质包被于PDS支架外表面,以8-0 PDS缝线沿纵轴连续缝合固定,支架内层覆以复合硫酸软骨素共混胶原,真空冷冻干燥.检测血管支架的生物力学性能(爆破压力、抗拉伸能力、顺应性等),并与犬颈总动脉进行比较.方果 选择65°的编织工艺角编织内径为4 mm规则结构的网管,长度为3～5 cm;所制备的人工血管的爆破压为(43,50±8.30)kPa,断裂强度为(19.10±1.56)N,应变率为(42.88±3.16)%,径向顺应性为(5.96±0.87)%/100 mm Hg.方论 以PDS编织网管作为中间弹力层构建的复合型人工小血管支架力学性能满意,可以满足动物体内移植试验的需要.     

Tissue engineering human small-caliber autologous vessels using a xenogenous decellularized connective tissue matrix approach: preclinical comparative biomechanical studies

Suggesting that bioartificial vascular scaffolds cannot but tissue-engineered vessels can withstand biomechanical stress, we developed in vitro methods for preclinical biological material testings. The aim of the study was to evaluate the influence of revitalization of xenogenous scaffolds on biomechanical stability of tissue-engineered vessels. For measurement of radial distensibility, a salt-solution inflation method was used. The longitudinal tensile strength test (DIN 50145) was applied on bone-shaped specimen: tensile/tear strength (SigmaB/R), elongation at maximum yield stress/rupture (DeltaB/R), and modulus of elasticity were determined of native (NAs; n = 6), decellularized (DAs; n = 6), and decellularized carotid arteries reseeded with human vascular smooth muscle cells and human vascular endothelial cells (RAs; n = 7). Radial distensibility of DAs was significantly lower (113%) than for NAs (135%) (P < 0.001) or RAs (127%) (P = 0.018). At levels of 120 mm Hg and more, decellularized matrices burst (120, 160 [n = 2] and 200 mm Hg). Although RAs withstood levels up to 300 mm Hg, ANOVA revealed a significant difference from NA (P = 0.018). Compared with native vessels (NAs), SigmaB/R values were lower in DAs (44%; 57%) (P = 0.014 and P = 0.002, respectively) and were significantly higher in RAs (71%; 83%) (both P < 0.001). Similarly, DeltaB/R values were much higher in DAs compared with NAs (94%; 88%) (P < 0.001) and RAs (87%; 103%) (P < 0.001), but equivalent in NAs and RAs. Modulus of elasticity (2.6/1.1/3.7 to 16.6 N/mm(2)) of NAs, DAs, RAs was comparable (P = 0.088). Using newly developed in vitro methods for small-caliber vascular graft testing, this study proved that revitalization of decellularized connective tissue scaffolds led to vascular graft stability able to withstand biomechanical stress mimicking the human circulation. This tissue engineering approach provides a sufficiently stable autologized graft.     

组织工程技术构建小口径血管的实验研究

目的 探讨运用组织工程技术构建血管组织的方法。方法 将体外培养、扩增的新生婴儿脐静脉血管内皮细胞与平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙酸材料上,形成细胞-材料复合物,将该复合物包绕于硅胶管使成管状结构后移植于裸鼠皮下,第2及第6周后行大体及组织学检测。结果 组织工程技术构建的血管组织大体结构与天然血管相似,免疫组化显示组织工程化血管最内层有Ⅷ因子阳性细胞覆盖,管壁内有大量细胞外基质及散在的α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞存在。结论 运用组织工程技术可形成具有与正常血管组织学结构相似的血管。     

小口径组织工程血管体外构建的研究

目的 探讨间充质干细胞体外构建组织工程血管的可行性.方法 将体外培养扩增的犬骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为平滑肌样细胞和内皮样细胞,接种于ε-己内酯/L-丙交酯(PCLA)支架上,将其置于生物反应器内,在搏动性力学(100±20/55±20)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)刺激条件下培养.3 d后行血管组织学检测.结果 血管支架拉伸强度6.1 MPa;骨髓间充质干细胞成功定向分化为平滑肌样细胞和内皮样细胞;血管腔内表面完全为细胞覆盖,表面的细胞沿液体流动的方向分布;种植的部分细胞已经渗透入血管壁内.结论 骨髓间充质干细胞可作为种子细胞,与PCLA支架在生物反应器内构建组织工程血管.     

组织工程化人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的　研究雪旺细胞和生物降解支架材料复合后构建成的组织工程化人工神经修复神经缺损的效果。方法　将雪旺细胞制成 1× 1 0 8/ml的ECM (extracellularmatrix,ECM)凝胶 ,与PLA无纺纤维布复合培养 7d ,置入PLA中空纤维管中 ,构建成组织工程化人工神经。建立大鼠坐骨神经缺损 1 0mm的动物模型 ,A组为人工神经组 ;B组为雪旺细胞复合ECM凝胶组 ;C组为单纯ECM凝胶组 ;D组为自体神经移植组。术后 8周、1 2周 ,行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果　术后 1 2周A组的再生神经纤维已越过远端缝合口 ,有髓神经纤维数和神经纤维密度稍差于D组 ,但再生神经组织的面积显著高于后者 ;A、D组的髓鞘厚度和dLAT、NCV、AMP、AREA均无显著差别 ,但明显高于B、C组。结论　雪旺细胞、ECM凝胶和PLA多孔材料与PLA中空纤维管组合后构建成的组织工程化人工神经 ,修复周围神经缺损的效果接近于自体神经移植     

肝血管显露在肝切除术中的应用

目的探讨肝血管解剖性显露技术在肝叶切除术中的意义。方法回顾性分析我院2005年5月-2007年8月使用肝血管解剖性显露技术行肝叶切除41例的临床资料。结果本组41例无一例出现术后出血不止或急性肝功能衰竭，均顺利一期康复出院。结论肝血管解剖性显露技术充分显露了肝需切范围内的主要血管，易于辨认，避免了余肝组织的缺血、淤血以及由此引发的大量肝细胞坏死所导致的急性肝功能衰竭、感染、化脓、胆汁漏及因流出道梗阻导致的出血不止等并发症的发生，是一种安全、有效、无严重副作用的切肝技术。