调节性T细胞和Th17细胞在人体器官移植和自身免疫性疾病中的作用

幼稚T细胞的成熟与局部理化环境密切相关,最终产生具有效应（和记忆）作用或调节作用的细胞,并对自身抗原耐受。对自身抗原不耐受的幼稚T细胞不能被诱导成熟,这对防止自身免疫性疾病的发生意义重大。鼠类试验证实,幼稚CD4＋辅助性T细胞（Thp）能分化成至少四种类型的成熟辅助性T细胞,即Th1、Th2、Th17和调节性T（Treg）细胞。     

滤泡辅助性T细胞和滤泡调节性T细胞与自身免疫病

自身抗体作为自身免疫性风湿病的标志已被用于临床诊断数十年,而自身抗体产生的免疫学机制直到滤泡辅助性T细胞(T follicular helper,T_FHcells)和滤泡调节性T细胞(T follicular regulatory,T_FRcells)的发现才逐渐被阐明。在生发中心反应及体液免疫记忆形成过程中,T_FH细胞辅助抗体的亲和力成熟,而T_FR细胞则抑制T_FH介导的抗体反应。自身免疫性风湿性疾病患者的T_FH细胞数量增加且功能活跃,T_FR细胞的数量降低且功能低下,T_FH细胞和T_FR细胞之间的平衡发生异常。因此,深入研究T_FH和T_FR细胞发育及功能的分子机制,可为疾病治疗寻找新的靶标。随着对T_FH和T_FR细胞的深入了解,基于恢复T_FH和T_FR细胞间的平衡的策略,...     

膀胱肿瘤细胞产生的白介素-10对T细胞功能的抑制作用

目的 :了解膀胱肿瘤细胞产生的白介素 10对T细胞功能的抑制作用。方法 :用ELISA法检测膀胱肿瘤细胞株EJ、T2 4和正常移行上皮细胞培养上清中IL 10含量。用MTT法检测加与不加IL 10拮抗剂时膀胱肿瘤细胞株EJ、T2 4和正常移行上皮细胞对共培养的T细胞增殖情况的影响。结果 :EJ和T2 4细胞培养上清中IL 10水平明显高于正常移行上皮和T细胞 (P <0 0 1)。EJ组与IL 10阻断EJ组比较 ,T细胞的增殖反应降低 (P <0 0 5 ) ;IL 10阻断EJ组与IL 10阻断正常移行上皮组、正常移行上皮组、IL 10阻断T细胞组和T细胞组比较 ,T细胞的增殖反应降低 (P <0 0 5 ) ;T2 4组与IL 10阻断T2 4组比较 ,T细胞的增殖反应降低 (P <0 0 5 ) ,IL 10阻断T2 4组与IL 10阻断正常移行上皮组、正常移行上皮组、IL 10阻断T淋巴细胞组和T淋巴细胞组比较T淋巴细胞的增殖反应降低 (P <0 0 5 )。结论 :膀胱肿瘤细胞株EJ、T2 4细胞可通过产生IL 10 ,抑制T细胞增殖能力 ,但可能还存在其它机制。     

辅助性T细胞9及其功能研究进展

CD4+T细胞在免疫应答反应中发挥关键作用,CD4+T细胞根据其分泌的细胞因子的不同分为多种细胞亚群.其中辅助性T细胞9(Th9)细胞是最近发现的一种新型的CD4+效应T细胞,该细胞由Na(i)ve CD4+T细胞分化而来,可分泌特征性的细胞因子白细胞介素(IL)-9.Th9细胞的发育和分化具有独立的调节机制,其在过敏性炎症、自身免疫病和抗肿瘤免疫中发挥着重要作用.然而,Th9细胞在免疫应答反应中的调控,与其它CD4+T细胞亚群的相互作用及在疾病中的效应作用等问题仍需深入研究.     

表观遗传学调控滤泡辅助性T细胞分化的研究进展

滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)定位于淋巴滤泡的辅助性T细胞亚群,主要功能为辅助B细胞参与体液免疫应答,对免疫球蛋白的产生有着重要作用。表观遗传学主要研究在基因的核苷酸序列不发生改变的情况下,基因表达的可遗传性变化,是免疫细胞的分化调控机制之一。研究发现Tfh细胞的分化具有可塑性,本文主要综述了表观遗传学调控在Tfh细胞分化方面的研究进展。     

类风湿性关节炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞比例增加并与疾病活动相关

目的通过检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的相对数量,探讨其在RA发病机制中的作用及其临床意义。方法选取符合入组标准的RA患者60例及健康体检者15例,采用流式细胞术检测Th17细胞/Treg占外周血CD4+细胞百分比,比较其在RA患者与健康体检者间的差异,分析其表达与肿胀关节数、压痛关节数、28个关节疾病活动度评分(DAS28)、疼痛视觉模拟评分(VAS)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)的关系。结果与健康对照组比较,RA组患者外周血Th17细胞数量明显增加、Treg数量明显减少。RA患者外周血中Th17细胞数量与肿胀关节数、压痛关节数、DAS28分值及CRP呈正相关;RA患者外周血中Treg的数量与肿胀关节数、压痛关节数、疼痛VAS、DAS28分值、ESR及CRP等病情活动指标无明显相关性。结论 RA患者外周血Th17细胞增加,Treg减少,以Th17占优势,Th17细胞数量增加与RA病情活动有关。     

静脉药瘾者辅助性T细胞功能的研究

目的　探讨静脉药瘾者辅助性T细胞的变化及与病毒感染的关系。方法　采集381例静脉药瘾者和10 2例健康体检者静脉血,用酶联免疫吸附法、放射免疫测定法检测外周血单个核细胞诱生的IFN γ和IL 4 ,血清中IL 2和IL 4 ,以及HBV和HCV感染的血清学指标。结果　①静脉药瘾者单个核细胞诱生的IFN γ、IL 4以及血清IL 2比对照组减低;血清IL 4增高,差异具有显著性意义(P <0 .0 1)。②静脉药瘾者HBV和HCV感染率增高,与对照组比较差异具有显著性意义;发生HBV和HCV感染时,静脉药瘾者单个核细胞诱生的IFN γ进一步降低。结论　静脉药瘾者Th1 Th2细胞失衡,机体抗病毒能力减弱,而病毒感染又加重细胞免疫功能紊乱。     

一氧化氮-NF-κB信号通路在人初始T细胞向Th1/Th2分化中的作用

目的 :探讨一氧化氮 (NO)核因子κB(NF κB)信号通路在人幼稚T细胞向 1型辅助性T细胞 (Th1) /2型辅助性T细胞(Th2 )分化过程中的作用。方法 :分离人脐血幼稚T细胞 ,分别加入不同浓度的NO供体硝普钠 (SNP)、NO合成抑制剂左旋精氨酸甲基酯 (NAME)和NF κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC) ,通过流式细胞术检测细胞内IFN γIL 4的表达 ,了解幼稚T细胞的分化。结果 :在不同浓度的SNP和NAME和PDTC作用下 ,表达IFN γ(即Th1)或IL 4(即Th2 )T细胞的百分率与对照组相比较均无显著差异 (P >0 .0 5)。结论 :NONF κB信号通路对人幼稚T细胞向Th1和Th2细胞的分化均无显著影响。该通路在Th1/Th2型细胞因子表达过程中的调控作用可能主要发生于成熟的Th1和Th2细胞水平     

小鼠嗜碱性细胞肝内高表达并辅助初始CD4+ T细胞向Th2应答偏极化

目的 比较嗜碱性细胞在小鼠多器官内分布水平,并分析肝脏嗜碱性细胞参与CD4+T细胞分化的免疫特征.方法 分离小鼠外周血、肝脏、脾脏、肺和淋巴结中单个核白细胞群,比较研究FcεR I+CD49b+细胞在单个核白细胞中的比例水平.免疫磁珠分选肝脏嗜碱性细胞后体外多种不同细胞因子共培养24 h,检测嗜碱性细胞的凋亡水平.IL-3通过渗透压微泵皮下稳定刺激小鼠1周后比较分析嗜碱性细胞在肝脏内白细胞中比例水平.最后检测嗜碱性细胞通过分泌细胞因子的方式影响初始CD4+T细胞向Th1/Th2分化状态的特征.结果 生理状态下小鼠嗜碱性细胞在肝脏中单个核白细胞中的比例显著高于外周血、脾脏、肺和淋巴结.IL-3在体外体内试验均证明可抑制嗜碱性细胞的凋亡,延长细胞寿命.嗜碱性细胞可通过分泌细胞因子的方式诱导初始CD4+T细胞向Th2应答偏极化并抑制Th1免疫应答.结论 嗜碱性细胞可增强Th2免疫应答和抑制Th1免疫应答,结合嗜碱性细胞在肝脏中高表达的事实,提示嗜碱性细胞可能参与肝脏特有的生理性免疫耐受状态的构成.     

正常人周围血初始和记忆T细胞亚群及细胞因子表达的探讨

目的：利用多色流式检测技术探讨初始和记忆T细胞亚群与细胞因子表达之间的关系。方法：自正常人静脉血中分离PBMC,经超抗原（SEB）刺激5h后,加入多种抗细胞表面标记和抗细胞因子抗体进行染色,利用流式细胞术检测,并利用Flow Jo软件分析结果。结果：根据CD45RO表达与否,将CD4^＋和CD8^＋T细胞分为初始和记忆T细胞,再根据归巢受体（CD62L）和趋化因子受体（CCR7）的表达与否,将初始和记忆T细胞进一步分为不同的亚群。当T细胞受到SEB激活后,CD45RO^＋和CD45RO^-的CD4^＋或CD8^＋T细胞均表达IL-2、IFN-γ和TNF-α。进一步分析结果表明,CD62L^hi和CD62L^hiCCR7^＋细胞不表达细胞因子,而CD62L^loCCR7^lo和CCR7^＋T细胞均表达细胞因子,其中CD62L^loCCR7^lo细胞表达细胞因子的阳性率明显高于CCR7^＋细胞亚群。结论：只利用CD45RO表达与否区分初始和记忆T细胞是不够准确的,同时检测CD62L的表达,可明显地提高其准确性。     

IL-2抑制小鼠CD4~+ CD62L~+ T细胞分化为Th17细胞

目的研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。方法免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,于抗体包被的培养板中培养3 d,实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基,IL-2处理组在对照组基础上于培养体系中添加IL-2。CFSE染色检测细胞增殖,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,ELISA检测培养上清中IL-17A的浓度,荧光定量PCR检测Rorγt mRNA的表达,流式细胞术检测CD4~+IL-17~+Th17的生成比例以及Rorγt的表达。结果磁珠分选的小鼠脾脏CD4+CD62L+nave T细胞纯度高于95%。与对照组相比,IL-2处理组细胞数目明显增多,增殖能力明显增强(P0.05),细胞凋亡比例降低(P0.05);IL-2处理组培养上清中IL-17A的浓度明显降低(P0.05),且CD4+IL-17+细胞比例下降,其特异性转录因子Rorγt的表达水平也显著降低(P0.05)。结论 IL-2在CD4+CD62L+T细胞分化为Th17的过程中,能够促进T细胞的增殖并且抑制Th17的分化。     

CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4+T细胞相关性的探讨

目的:探讨CD154 细胞的表型特征与初始和记忆CD4 T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3 抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4 T细胞,而不表达于CD8 T细胞。对比分析CD4 CD154 T和CD4 CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4 CD154 T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3 抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4 T细胞均为CD4 CD154 T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4 CD154 T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4 T细胞。     

多发性骨髓瘤患者外周血中TCR Vβ亚家族na(i)ve T细胞水平变化

目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中23个TCR Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在特点,从而了解MM患者相应Vβ亚家族na(i)ve T细胞的近期胸腺输出情况.方法:利用半巢式PCR分别扩增12例MM患者每5×104个外周血单个核细胞(PBMCs)中的23个Vβ亚家族sjTRECs,10例正常人外周血作为对照.结果:在5×104个PBMCs中,检测到MM患者sjTRECs的Vβ亚家族数量约为(5.00±2.45)个,与正常人的(9.60±5.48)个相比,检出的亚家族数量明显减少(P＜0.05);23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人中均可以检测到,而在MM患者仅检测到部分;并且Vβ2、Vβ10、Vβ16、Vβ17和Vβ21等5个亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常水平.12例MM患者检出的亚家族数量(2-9个)不等,患者的年龄与检出的亚家族数量存在负相关(r=-0.892;P＜0.01).结论:MM患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族na(i)ve T细胞存在不同程度的缺失或水平降低,表明患者存在不同程度的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能受损.     

IL-1β促进nave T细胞向Th22细胞分化及在非小细胞肺癌中表达的相关性研究

目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)促进nave T细胞向Th22细胞转化的机制及其在非小细胞肺癌患者外周血中表达的相关性和临床意义。方法:采用CD4~+nave T细胞磁珠分选试剂盒分离健康人外周血单个核细胞中的CD4~+nave T细胞,加入转化生长因子β和IL-2促进其分化增殖,分化过程中加入IL-1β诱导其向Th22细胞的分化,流式细胞术检测CD4~+IL-22~+T细胞的比例,ELISA检测IL-22的表达。选择我院确诊为非小细胞肺癌的患者60人,其中Ⅰ期18人,Ⅱ期20人,Ⅲ期13人,IV期9人,同时选择健康人25例,用流式细胞术检测外周血中Th22(CD4~+IL-22~+)细胞的比例,ELISA检测血清中IL-1β和IL-22的水平。结果:IL-1β可以诱导na6ve T细胞向Th22细胞转化并促进IL-22的分泌(P0.05)。非小细胞肺癌患者外周血中Th22细胞比例及IL-22和IL-1β的水平均高于健康人且与临床分期相关(P0.05)。结论:IL-1β可以诱导Th22细胞的分化和IL-22的表达,三者的水平和非小细胞肺癌的进展相关,可能参与免疫抑制并促进非小细胞肺癌的发生。     

TGF-beta and IL-6 drive the production of IL-17 and IL-10 by T cells and restrain T(H)-17 cell-mediated pathology

Studies have shown that transforming growth factor-beta (TGF-beta) and interleukin 6 (IL-6) are required for the lineage commitment of pathogenic IL-17-producing T helper cells (T(H)-17 cells). Unexpectedly, here we found that stimulation of myelin-reactive T cells with TGF-beta plus IL-6 completely abrogated their pathogenic function despite upregulation of IL-17 production. Cells stimulated with TGF-beta plus IL-6 were present in the spleen as well as the central nervous system, but they failed to upregulate the proinflammatory chemokines crucial for central nervous system inflammation. In addition, these cells produced IL-10, which has potent anti-inflammatory activities. In contrast, stimulation with IL-23 promoted expression of IL-17 and proinflammatory chemokines but not IL-10. Hence, TGF-beta and IL-6 'drive' initial lineage commitment but also 'restrain' the pathogenic potential of T(H)-17 cells. Our findings suggest that full acquisition of pathogenic function by effector T(H)-17 cells is mediated by IL-23 rather than by TGF-beta and IL-6.     

Phenotypic differences between Th1 and Th17 cells and negative regulation of Th1 cell differentiation by IL-17

Recent evidence from several groups indicates that IL-17-producing Th17 cells, rather than, as once was thought, IFN-gamma-producing Th1 cells, can represent the key effector cells in the induction/development of several autoimmune and allergic disorders. Although Th17 cells exhibit certain phenotypic and developmental differences from Th1 cells, the extent of the differences between these two T cell subsets is still not fully understood. We found that the expression profile of cell surface molecules on Th17 cells has more similarities to that of Th1 cells than Th2 cells. However, although certain Th1-lineage markers [i.e., IL-18 receptor alpha, CXCR3, and T cell Ig domain, mucin-like domain-3 (TIM-3)], but not Th2-lineage markers (i.e., T1/ST2, TIM-1, and TIM-2), were expressed on Th17 cells, the intensity of expression was different between Th17 and Th1 cells. Moreover, the expression of CTLA-1, ICOS, programmed death ligand 1, CD153, Fas, and TNF-related activation-induced cytokine was greater on Th17 cells than on Th1 cells. We found that IL-23 or IL-17 can suppress Th1 cell differentiation in the presence of exogenous IL-12 in vitro. We also confirmed that IL-12 or IFN-gamma can negatively regulate Th17 cell differentiation. However, these cytokines could not modulate such effects on T cell differentiation in the absence of APC.     

天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析

目的:构建天然人源IgGFab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择。方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置,构建天然人源免疫球蛋白G基因文库;进一步从抗体库中随机挑选克隆,获得重轻链基因进行核苷酸序列测定并利用IgBLAST数据库分析抗体基因可变区的同源家族。结果:从4×108库容的天然人源IgGFab噬菌体抗体库中随机挑选克隆,对其中32个轻链及重链Fd基因插入正确的克隆进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推算,获得29条彼此完全不同的Fd重链基因及轻链基因。以IgBLAST数据库比对分析显示29条重链基因的V区分别属于VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)和VH7(3.4%)基因家族。29条轻链基因分别属于Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)基因家族和Vλ1(11.5%)基因家族。结论:以300份健康人外周血淋巴细胞的抗体基因构建的天然人源IgGFab噬菌体抗体库基因多样性良好,重链VH3基因家族存在优势表达。