α-干扰素增强耐药性白血病K562/ADM细胞及其白血病干细胞对阿霉素的敏感性

目的研究α-干扰素(interferon alpha,IFN-α)对白血病多药耐药K562/ADM群体细胞及其白血病干细胞(LSC)对细胞周期特异性药物阿霉素敏感性的影响。方法以K562/ADM耐药细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色和AnnexinV/PI双染色分别测定细胞周期分布和细胞凋亡;抗CD34、CD38和CD123抗体以及Annexin V共染色检测群体细胞中LSC的含量及凋亡率。结果 IFN-α作用后K562/ADM细胞周期分布发生改变,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高。IFN-α与阿霉素联合作用,明显增强阿霉素对K562/ADM细胞的增殖抑制作用,细胞凋亡率增高。IFN-α可提高K562/ADM细胞群体中LSC的含量(比例),且增加LSC对阿霉素的敏感性,凋亡的LSC数量增高。结论 IFN-α促进K562/ADM群体细胞及其LSC进入细胞增殖周期而提高对细胞周期特异性抗癌药物阿霉素的敏感性。     

山柰酚诱导人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素凋亡的研究

目的 研究山柰酚对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素(ADR)的增殖与凋亡的作用机制.方法(1)将人乳腺细胞MCF-7分为2组:空白组(培养基)和实验组.实验组分别用含不同浓度的山柰酚(20,50,100,150,200,300,400,500μmol·L-1)的培养基干预.干预48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细...     

甲基苯丙胺诱导大鼠神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达

目的:探讨甲基苯丙胺对实验大鼠神经元凋亡的诱导以及凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。方法:选择Wistar♂大鼠20只,将动物随机分为4组,每组5只。4组中随机选3组为甲基苯丙胺实验组(B、C、D),1组为对照组(A)。B组给予甲基苯丙胺,20mg·kg-1,单次ip;C组给予甲基苯丙胺,每次20mg·kg-1,每天2次(8:00,20:00)ip,连续2d;D组给予甲基苯丙胺,每次20mg·kg-1,每天2次(8:00,20:00)ip,连续4d;A组给予等体积生理盐水。采用TUNEL法检测神经元凋亡,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达。结果:给予甲基苯丙胺后,大鼠各脑区有凋亡细胞形成,凋亡相关因子Caspase-3有不同程度的表达。结论:甲基苯丙胺可导致神经元的凋亡,并诱导凋亡相关因子Caspase-3的表达。     

依托泊苷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨依托泊苷对骨肉瘤细胞的毒性作用和作用机制。方法：用NTT比色法检测0．02,0．04,0．08,0．16,0．31,0．62,1．25,2．5,5．0mg·L~(-1)浓度梯度依托泊苷作用骨肉瘤细胞24,48,72和96h后的细胞活性。用流式细胞仪检测依托泊苷作用骨肉瘤细胞后细胞凋亡情况。用电镜观察药物作用后骨肉瘤细胞形态改变。结果：依托泊苷对骨肉瘤细胞有明显的生长抑制作用,随着药物浓度和作用时间的增加,细胞凋亡明显增加,依托泊苷可以诱导骨肉瘤细胞凋亡。依托泊苷作用后骨肉瘤细胞出现典型的凋亡改变,透视电镜可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集核膜下。结论：依托泊苷对骨肉瘤细胞有杀伤作用,细胞毒作用与促细胞凋亡有关。     

α干扰素增强顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡

目的探讨α干扰素对顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法使用α干扰素和顺铂单独或联合处理骨肉瘤U2OS(p53正常)和MG63细胞(p53突变),通过MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡,Hochest 33258荧光染色检测凋亡形态学变化,RT-PCR检测p53的mRNA表达,Western blot法检测p53、p21、Mdm2、Bax、Bcl-2和PARP蛋白水平的表达。结果药物处理72 h,α干扰素单独对U2OS和MG63细胞的生长无影响,但在U2OS而非MG63细胞中增强顺铂引起的生长抑制和凋亡,并增强凋亡形态学改变和PARP裂解。α干扰素+顺铂可增强p53和Bax的表达,减弱Bcl-2的表达,对p21的表达无影响,α干扰素没有增强顺铂引起的p53的mRNA表达。结论α干扰素通过p53通路在骨肉瘤U2OS细胞中增强顺铂诱导的生长抑制和凋亡。     

氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞,通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.结果浓度为1.77,3.55,5.32 mmoL·L-1的氧化苦参碱对OS732骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%,29.0%,47.0%;流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%,18.6%,27.7%;DNA电泳见DNA"梯形"图谱;显微镜显示细胞的凋亡形态.结论氧化苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡.     

阿霉素诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

为了更有效地发挥阿霉素抗瘤作用,国内外专家对阿霉素的抗瘤机制做了大量研究,其中涉及到多种信号分子,如Bcl-2基因家族、PTEN及其底物FAK、Wnt通路抑制因子（DKK和FrpHE）、蛋白激酶C、TNF基因家族等。     

硫化氢对脂多糖诱导的大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法♂SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只:空白对照组、LPS组、LPS+NaHS低剂量组、LPS+NaHS中剂量组、LPS+NaHS高低剂量组和LPS+PPG组。LPS组、LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组舌下静脉注射LPS(5 mg.kg-1),空白对照组注射等容量的生理盐水。LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组在注射LPS 3 h时腹腔分别注射低、中、高剂量的氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG),空白对照组和LPS组腹腔注射等容量生理盐水。各组大鼠均在舌下静脉注射LPS或生理盐水6 h后处死,取肺组织。应用流式细胞学技术检测各组大鼠肺组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肺组织Bcl-2和Bax的表达,Westernblot检测肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3和9(Caspase-3、9)的蛋白表达。结果 LPS组与空白对照组比较肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2蛋白表达明显减弱,Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+NaHS中、高剂量组肺组织细胞凋亡率明显降低,LPS+NaHS高剂量组Bcl-2阳性细胞表达明显增强,LPS+NaHS中、高剂量组Bax阳性细胞表达明显减弱,LPS+NaHS低、中、高剂量组Bcl-2/Bax比值明显增加,LPS+NaHS高剂量组Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显减弱(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+PPG组肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2阳性细胞表达明显减弱,Bax阳性细胞表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论 LPS诱导的ALI早期肺组织细胞凋亡增加,给予外源性H2S可减少肺组织细胞凋亡,可能与通过下调Bax、Caspase-3、9蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达有关。     

人肾透明细胞癌中细胞凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达

目的研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 Caspase-3与Caspase-9均在正常肾组织中可见少量弱阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少,两两比较结果显示,3组之间差异均有统计学意义（P〈0.01）。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关（r=0.988,P〈0.05）。结论癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。     

大蒜素诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及其机制的实验研究

目的探讨大蒜素诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法使用不同浓度大蒜素处理骨肿瘤细胞系后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术以及免疫印迹技术检测Bax的mRNA及蛋白水平的表达变化。结果大蒜素处理后骨肉瘤细胞凋亡率明显升高,并呈剂量依赖性;且细胞内的Bax的mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论大蒜素在体外可诱导多种骨肉瘤细胞凋亡,可能与上调Bax的表达,促进细胞色素c的释放有关;大蒜素有望成为一种新的治疗骨肉瘤的化疗药物。     

氯化钴对PC12细胞的凋亡作用

目的　确定氯化钴(CoCl2 )对PC12细胞的影响。方法　构建CoCl2 诱导的PC12细胞模型,检测CoCl2 对PC12细胞的毒性作用;将Caspases的抑制基因p3 5转染PC12细胞得到可稳定表达p3 5基因的细胞株PC12 p3 5 ,检测p3 5对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用;检测Caspases特异性多肽抑制剂Z VAD FMK对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用。结果　分别以10 0、3 0 0、5 0 0、70 0和10 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h或以5 0 0 μmol LCoCl2 分别诱导PC12细胞12、2 4、3 6、48和60h后,PC12细胞存活率均明显下降(P <0 0 1) ,并与CoCl2 诱导的时间和浓度呈正相关;细胞亚显微结构检测,流式细胞分析和DNA片段化结果也表明5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h可使PC12细胞出现明显凋亡特征。构建可稳定表达Caspase蛋白酶抑制基因p3 5的PC12细胞株,或分别加入5 0和10 0 μmol LCaspases多肽抑制剂Z VAD FMK预处理PC12细胞1h后,以5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h ,形态学观察结果,细胞存活率检测和流式细胞分析均表明p3 5基因和Z VAD FMK均可有效地抑制CoCl2 诱导的PC12细胞凋亡(P <0 0 1)。结论　CoCl2 可诱导PC12细胞凋亡。     

MDMA诱导大鼠神经元凋亡及凋亡相关因子caspase-3的表达

目的 探讨3,4 -亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)对实验大鼠神经元凋亡的诱导及凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)的表达.方法 将20只Wistar雄性大鼠随机均分为1组对照组(A)、3组MDMA实验组(B、C、D).B组予MDMA(20 mg · kg-1, ip, single),C组予MDMA(20 mg · kg-1, 8 am,8 pm,ip×2 d),D组予MDMA (20 mg · kg-1 ,8 am,8 pm,ip×4 d);A组给予等体积生理盐水.采用TUNEL法检测神经元凋亡,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达.结果 给予MDMA后,大鼠各相关脑区有凋亡细胞形成,Caspase-3有不同程度的表达.结论 MDMA可导致神经元的凋亡,并诱导凋亡相关因子Caspase-3的表达.     

药物诱导骨肉瘤细胞分化与凋亡的进展

骨肉瘤是儿童和青少年期最常见的原发骨恶性肿瘤,年发病率约为3/100万[1].目前最主要的治疗手段是手术治疗结合新辅助化疗,患者5年生存率大约在65％～75％[2].然而,复发和有肺部转移的患者预后相当差[3].另外,大多数的新辅助化疗药物副作用明显,耐药也很常见,尤其是顺铂和阿霉素.在过去的35年里,骨肉瘤的化学疗法并没有取得突破性的进展,因此新的更安全有效的化疗药物急需开发[4]. 传统抗肿瘤药物治疗恶性肿瘤基本原理是通过不同的途径引起肿瘤细胞死亡.目前诱导肿瘤细胞分化与凋亡已是国际研究的热点,本文就诱导骨肉瘤细胞分化和凋亡的新药物所取得的进展作一综述.     

蛋白激酶Cα和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在大肠癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨蛋白激酶Ca（PKC—α）与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）在大肠癌中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法检测83例大肠组织（正常组织15例,腺瘤组织21例,癌组织47例）中PKC-α和Caspase-3的表达水平,同时采用DNA原位末端标记法标记大肠癌组织中的凋亡细胞。结果PKC-α在大肠癌组织中阳性表达[31／47例（66．0％）]与正常组织[3／15例（20．0％）]及腺瘤[10／21例（47．6％）]相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。Caspase-3在正常组织中的阳性表达[12／15例（80．0％）],与腺瘤[13／21例（61．9％）]及大肠癌组织[15／47例（31．9％）]相比,差异有统计学意义（P〈0．05）,Caspase-3的阳性表达仅与大肠癌组织分化程度关系密切（P〈0．05）。PKC-仅阳性表达的大肠癌组织中细胞凋亡指数（1．62±0．57）明显低于阴性组（3．28±0．75）（P〈0．05）,Caspase-3阳性组细胞凋亡指数（2．40±0．55）明显高于阴性组（1．25±0．59）（P〈0．05）。PKC—α与Caspase-3的表达呈负相关（r=-0．498,P〈0．05）。结论PKC—α和Caspase-3与大肠癌的细胞凋亡密切相关,参与细胞凋亡的调节机制,在大肠癌恶变的过程中发挥重要作用。     

氯通道在阿霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的研究氯离子通道在阿霉素诱导的低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及凋亡性容积减小中的作用。方法采用全细胞膜片钳技术记录氯电流,流式细胞术检测细胞凋亡,活细胞图像分析法检测细胞容积变化。结果 (1)阿霉素诱导CNE-2Z细胞凋亡;(2)阿霉素诱导CNE-2Z细胞发生凋亡性容积减小,细胞外灌流阿霉素2 h,细胞容积减小约10%;(3)阿霉素可激活氯通道,产生一个有较明显外向优势的氯电流;(4)氯通道阻断剂5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoate(NPPB)明显抑制阿霉素诱导的凋亡性容积减小、细胞凋亡和氯电流。结论阿霉素可通过激活氯通道而诱导细胞凋亡,氯通道在阿霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡中发挥重要作用。     

细胞凋亡的检测技术与方法

细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。根据死亡细胞的形态学、生物化学和分子生物学特征,可以将凋亡细胞与坏死细胞区别开来。本文综述了常用的细胞凋亡检测技术与方法的基本原理,如形态学观察、荧光素染色、DNA阶梯、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性的检测等,并对各种方法的优点及局限性做一简要比较。用透射电镜进行超微结构观察仍是鉴定细胞凋亡的金标准。在选择细胞凋亡检测方法时,要充分了解各种方法的原理和应用范围,进行综合考虑。多种检测方法的联合应用常可获得准确的结果。     

迷迭香酸通过线粒体通路诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的研究

目的研究迷迭香酸通过线粒体通路诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法体外培养MG-63细胞,将10、20、30、40、50、60μmol/L迷迭香酸作用于MG-63细胞,MTT和CCK-8法检测迷迭香酸对细胞生长的影响;AO/EB染色法观察细胞凋亡;流式细胞仪检测对细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting法检测Cyt-c、Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 MTT和CCK-8结果显示迷迭香酸可浓度相关性地抑制MG-63细胞的生长;AO/BE染色可看到迷迭香酸组凋亡细胞明显增加;流式细胞仪检测结果显示迷迭香酸可浓度相关性地促进MG-63细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;Western blotting法结果显示与对照组比较,迷迭香酸20、40、60μmol/L组的Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达水平明显增加(P0.05、0.01);与对照组比较,迷迭香酸20、40、60μmol/L组的Bcl-2蛋白表达水平则明显降低(P0.05、0.01),且呈剂量相关性。结论迷迭香酸可显著促进人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其机制可能与调控线粒体凋亡通路有关。     

异十三基二乙胺诱导HL-60细胞凋亡及其作用机制

目的探讨异十三基二乙胺(D-108)体外诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡及其作用机制。方法应用生长曲线法检测D-108对HL-60细胞生长抑制作用;相差显微镜观察药物对HL-60细胞促凋亡形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期改变;DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡"梯状"DNA;比色法测定caspase-3,8,9酶活性:结果D-108显著抑制HL-60细胞生长,作用呈浓度及时间依赖性。HL-60细胞经D-108处理后,呈典型凋亡形态学改变,出现亚二倍体细胞峰及DNA梯状条带。caspase-3,9酶活性显著升高(P<0.01),而对caspase-8酶活性无明显影响。结论D-108在体外能有效诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能通过线粒体凋亡途径。     

灯盏花素促进阿霉素诱导的K562细胞凋亡

目的观察灯盏花素对淋巴细胞增殖和阿霉素致肿瘤细胞死亡的影响。方法MTT法检测细胞增殖,Western blot检测p53/bcl-2表达,Histone/DNA ELISA和流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA检测细胞色素C释放,分光光度法检测caspase-8和caspase-3激活。结果灯盏花素能增强小鼠淋巴细胞对阿霉素的抵抗,但促进阿霉素引起的K562细胞生长抑制、细胞色素C释放、caspase-8和caspase-3激活,上调其p53/bcl-2表达比率,增加细胞凋亡。结论灯盏花素有增强阿霉素抗肿瘤作用,激活肿瘤细胞凋亡通路可能是其化疗增敏的主要机制。