促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达

目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成.GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用.文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h.GnRHa(10-7 mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达. 结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90min后,p-ERK水平在5min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90min时恢复到正常水平.加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平.用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05). 结论:GnRH激动剂可能通过ERK MAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌.     

低抗凝肝素对大鼠肝星状细胞生长的影响

目的:探讨低抗凝肝素对胎牛血清培养的大鼠肝星状细胞生长的影响.方法:肝星状细胞经体积分数为0.4%胎牛血清/DMEM培养液同步化48 h后分为对照组和实验组,对照组以体积分数为10%胎牛血清处理,实验组分别以体积分数为10%胎牛血清和不同质量浓度(8 g/L,40 g/L,200 g/L,1 000 g/L,5 000 g/L)低抗凝肝素处理,应用MTT法测定其对肝星状细胞生长的影响.结果:低抗凝肝素(40～5 000 g/L)对肝星状细胞的增殖有明显抑制作用(P＜0.05).在不同的作用时间,低抗凝肝素(200 g/L)均对肝星状细胞生长有明显抑制作用,且在其作用48 h后肝星状细胞生长速度明显减慢.结论:低抗凝肝素对大鼠肝星状细胞生长具有抑制作用.     

促性腺激素释放激素类似物对In-R1-G9细胞中胰高血糖素分泌的影响

目的 研究表明促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)可能对胰高血糖素具有调节作用,文中观察GnRH类似物对仓鼠胰高血糖素瘤细胞(In-R1-G9)胰高血糖素分泌的影响. 方法 通过Western blot和免疫细胞化学的方法检测GnRH受体在In-R1-G9细胞中的表达和定位,然后分别用终浓度为0、0.1、10、1000nmol/L的GnRH类似物处理培养的In-R1-G9细胞2h,用放射免疫法分别检测对照组和实验组中胰高血糖素分泌量. 结果 GnRH受体在In-R1-G9细胞中表达并定位在细胞膜上.低浓度的GnRH激动剂(GnRHa)(0.1nmol/L)增强胰高血糖素分泌的作用不显著;而高浓度的GnRHa(10、1000nmol/L)能显著增强胰高血糖素的分泌(P＜0.05).低浓度的GnRH拮抗剂(GnRHant)(0.1nmol/L)降低胰高血糖素分泌的作用不显著;而高浓度的GnRHant(10、1000nmol/L)能明显地抑制胰高血糖素的分泌(P＜0.05). 结论促性腺激素释放激素类似物能以浓度依赖性的方式调节In-R1-G9细胞中胰高血糖素的分泌,这一过程可能通过GnRH受体作用.     

INS-1细胞中生长激素及催乳素受体和IGFBP-3的表达调控

目的：研究生长激素(GH)和催乳素(PRL)受体在鼠胰腺肿瘤β细胞中的表达和调控及GH调节IGFBP-3的表达调控．方法：Northern，检测PRL，GH和IGFBP-3的mRNA表达．细胞培养，受体蛋白竞争结合实验，检测细胞膜受体特异结合．Western共价杂交，检测INS-I细胞中IGFBP-3蛋白表达．结果：在INS-1中，每个细胞有6600个人生长激素(hGH)受体蛋白结合点．GH受体的mRNA分子为1．6kb，PRL受体mRNA为0．5kb．bGH和rPRL抑制GH受体mRNA的表达，而bGH和rPRL上调促进PRL受体mRNA的表达．在INS-1中GH，PRL和IGF-I对IGFBP-3的mRNA和蛋白表达均有促进作用．结论：GH和PRL控制鼠胰腺β细胞的GH和PRL受体表达，GH对IGFBP-3表达作用不是通过IGF-I发生作用的。     

促性腺激素释放激素拟似剂对青春期大鼠生长轴与性腺轴相关基因表达的影响

目的 探讨促性腺激素释放激素拟似剂(GnRHa)对青春期大鼠生长轴与性腺轴的影响及其作用机制。方法 青春期大鼠应用GnRHa后，取其下丘脑、垂体、卵巢、下肢骺软骨等组织，应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测组织中相应激素的基因表达水平。结果 GnRHa可使下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH)和垂体中GnRH受体(GnRHR)基因表达水平下降，下丘脑中生长激素释放抑制激素(SRIH)基因表达水平增高，生长激素释放激素(GHRH)基因表达无变化；垂体中生长激素(GH)、卵巢中雌激素受体(ER)、下肢骺软骨中胰岛素样生长因子—1(IGF-1)等基因表达水平均下降。结论GnRHa除抑制垂体GnRHR产生受体降调节外，还可抑制下丘脑GnRH的基因表达，使性腺激素水平降低，从而减缓第二性征的成熟程度和速度；同时GnRHa通过促进下丘脑SRIH的基因表达，抑制垂体GH和下肢骺软骨IGF-1的基因表达。这可能是Gn—RHa延缓特发性真性性早熟患儿骨骺闭合的机理之一。     

促性腺激素释放激素系统与妇科肿瘤的研究进展

促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的十肽激素,是神经内分泌调节系统相互联系的重要信号分子,对生殖调控具有重要意义.GnRH及其受体在多种人类恶性肿瘤组织中有表达,GnRH通过其受体介导调控肿瘤细胞增殖.GnRH及其人工合成的GnRH类似物有明显抗肿瘤细胞增生的作用,它拮抗生长因子促肿瘤细胞有丝分裂、抑制肿瘤细胞增殖的分子机制,可能与生长因子介导的有丝分裂信号传导通路有关联.GnRH通过抑制生长因子受体及其mRNA表达,抑制生长因子受体诱导的酪氨酸激酶活化,激活磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶,最终抑制转录因子活性,抑制肿瘤细胞有丝分裂.GnRH对于肿瘤细胞与垂体细胞的作用不同,与GnRHR信号传导机制不同有关,GnRH抗肿瘤细胞增生的作用是GnRHR通过与Gαi偶联进行的.     

阿拉瑞林对GnRH受体阳性肝癌细胞Fas/FasL基因表达的影响

目的　探讨Fas Fasl系统在LHRH类似物抑制肝癌细胞增殖过程中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测SMMC772 1肝癌细胞中GnRH受体的表达 ;用半定量RT PCR方法 (QRT PCR)观察LHRH类似物对SMMC772 1肝癌细胞中Fas FasL系统mRNA表达的变化。结果　SMMC772 1肝癌细胞呈GnRH及其受体免疫反应阳性。PCR反应产物均与预期长度相符合。Fas FasL mRNA水平随LHRH类似物浓度增加而增大 ,经方差分析各组间有显著性差异 (Fas ,F =16.5 18FasL ,F =111.5 83 ,P <0 .0 1)。结论　SMMC772 1肝癌细胞具有自分泌GnRH的功能 ;Fas FasL系统可能参与了LHRH类似物对肝癌细胞增殖的抑制作用     

雌激素受体拮抗剂对泌乳素腺瘤GH_3细胞增殖的影响

目的:探讨雌激素受体拮抗剂对泌乳素腺瘤细胞增殖的影响。方法:在同样去激素培养的条件下添加不同浓度雌激素和雌激素受体拮抗剂,应用MTT法检测其对GH_3细胞增殖的影响。结果:不同浓度的OHTam对GH_3细胞有明显的抑制作用,并且与剂量呈正相关,10~(-11) mol/L即有抑制作用,10~(-6) mol/L抑制作用达到最大。E_2可显著的刺激GH_3细胞增殖,10~(-12)mol/L即有促进增殖作用,10~(-9) mol/L作用达到最大,而后随着浓度的升高增殖作用反而逐渐减弱。结论:雌激素受体拮抗剂能显著抑制泌乳素腺瘤细胞的生长,理论上可以用于泌乳素腺瘤的药物治疗。     

促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist, GnRHa)(10-5mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L)和GnRH 拮抗剂(GnRH-antagonists, GnRHant)(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD) mRNA表达的改变. 结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA 分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01).同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45% (p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义. 结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSD mRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究.     

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠肺微血管VEGF、VEGFR2、PAI-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的通过观察肺纤方提取物干预体外培养肺微血管的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR 2)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)基因表达的影响,探讨肺纤方干预肺纤维化微血管生成的机制。方法从肺纤维化模型大鼠分离培养肺微血管内皮细胞,将其等量分为模型组,氯沙坦组,泼尼松组,肺纤方大、中、小剂量组。模型组加入含20%胎牛血清的DMEM培养基,氯沙坦组加入含20%胎牛血清及10 mg/L氯沙坦的DMEM培养基,泼尼松组加入含20%胎牛血清及5 mg/L泼尼松的DMEM培养基,肺纤方大、中、小剂量组分别加入含20%胎牛血清及100、60、20 mg/L肺纤方提取物的DMEM培养基,分别作用24 h。双链嵌合荧光染料SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测VEGF、VEGFR 2、PAI-1与VCAM-1的mRNA转录水平。结果与模型组比较,肺纤方大、中、小剂量组VEGF基因表达水平均显著降低,而VEGFR2无显著差异;肺纤方大剂量组PAI-1 mRNA表达显著降低;肺纤方大、中剂量组VCAM-1 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论肺纤方可通过抑制肺微血管VEGF、PAI-1及VCAM-1的表达改善血凝及纤溶,抑制血管形成而发挥抗肺纤维化作用。     

不同超促排卵方案对子宫内膜性激素受体和白血病抑制因子表达的影响

目的：探讨促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）长方案和单纯促性腺激素（PMSG）超促排卵对分泌期子宫内膜雌、孕激素受体和白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：以小鼠为超促排卵动物模型，采用GnRHa＋PMSG长方案促排卵，以单用PMSG促排卵和自然周期为对照，在排卵后取子宫内膜，免疫组化定量测定腺上皮细胞雌、孕激素受体表达水平；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测内膜LIFmRNA表达。结果：免疫组化显示：GnRHa＋PMSG组在注hCG后内膜腺上皮细胞ER、PR免疫组化阳性细胞百分率为（88．46&#177;2．51）9／5、（84．71&#177;2．21）9／5，染色强度为（0．415&#177;0．048）AU、（0．454&#177;0．046）AU，均低于自然周期组同期值，分别为（92．36&#177;2．33）％、（87．82&#177;1．22）％和（0．602&#177;0．051）AU、（0．542&#177;0．055）AU（P〈0．01）；但高于单纯PMSG组，分别为（82．62&#177;1．63）％、（74．19&#177;1．39）％和（0．366&#177;0．044）AU、（0．364&#177;0．028）AU（P均〈0．05）。RT-PCR显示：GnRHa＋PMSG组注入hCG后内膜LIFmRNA表达相对量（1．703&#177;0．549）高于单纯PMSG组（1．535&#177;0．641，P〈0．01），但两者均低于自然周期组（1．959&#177;0．778，P〈0．01）。结论：GnRHa长方案辅助超促排卵可影响子宫内膜性激素受体和LIF的表达水平，可能对内膜容受性有一定影响，但优于单纯促性腺激素方案。     

生长因子和雌激素对大鼠垂体前叶细胞增殖活性及催乳素？…

目的 观察外源性生长因子和雌激素对离体正常大鼠垂体前叶细胞增殖活性及催乳素基因表达的影响,并探讨生长因子与雌激素作用的关系。方法 应用无血清原代培养的大鼠垂体前叶细胞,分别采用荧光染色细胞ＤＮＡ的激光扫描共聚焦显策镜扫描,以及原位杂交方法,观察了１７β－雌二醇,表皮生长因子及转化生长因子β１对大鼠垂有叶细胞增殖活性和催乳素基因表达的影响。结果 生长因子或雌激叶细胞增殖活性和催乳素基因表达的影响。结     

PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白和PAI-1的影响

目的：探讨血小板源性生长因子fPDGF）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白（VN）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响。方法：分别以0、5、10ng／rnl的PDGF—BB刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞12、24、48h．以ELISA法检测培养上清中FN水平，发色底物显色法检测PAI-1的活性；以0、5、10ng／ml的PDGF—BB刺激大鼠系膜细胞24h和10ng／ml PDGF-BB分别作用0、12、24、48h。RT-PCR方法检测系膜细胞PAI-1 mRNA的表达。结果：PDGF-BB在10ng／ml以内随浓度增加可促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA和FN表达．在48h内其表达呈时间依赖性。而PAI-1活性在24h时表达最高，以后逐渐下降、结论：PDGF-BB可上调FN和PAI-1及其mRNA表达．提示PDGF可能通过促进细胞外基质合成并抑制其降解而导致肾小球细胞外基质的积聚。     

环磷酸腺苷对心肌细胞血管紧张素Ⅱ：1型受体基因转录调节 …

目的 从信号转导的角度探讨环磷酸腺苷在心肌细胞血管紧张素Ⅱ１型（ＡＴ１）受体基因转录调节中的作用。方法 取１￣３ｄ的ＳＤ乳鼠心脏,用胰蛋白酶消化,差速贴壁分离法获得心肌细胞,用ＤＭＥＭ培养基进行培养并以相应药物给予刺激;     

雌激素和胰岛素样生长因子-I对子宫内膜癌孕激素受体亚型的调控研究

目的：通过研究雌激素、胰岛素样生长因子（IGF）－I对子宫内膜癌孕激素受体亚型A和B的调控作用,探讨孕激素对子宫内膜癌的作用机制及影响因素,为临床孕激素治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法：对体外培养子宫内膜癌细胞系HEC－IB和乳腺癌细胞系MCF－76,分别给予雌二醇（E2）10nmol/L和IGF－I 20ng/ml作用3d,用Western印迹方法观察两种孕激素受体亚型的蛋白质含量变化;从细胞中提取RNA,通过逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）,观察孕激素受体B亚型的mRNA水平的调控。结果：（1）Western印迹试验显示,HEC－IB细胞给予E2作用72h后,人孕激素受体（hPR)-A、hPR-B光密度值用药前后差异无显著意义,P．0．716,P＝0．391。给予IGF－I作用72h,hPR-A、hPR-B明显下调（P＝0．008,P＝0．002）。（2）RT－PCR显示,HEC－IB细胞中hPRB mRNA未见表达,给予10nmol/L雌激素刺激72h后,hPRB mRNA阳性,呈上调作用;经IGF－I 20ng/ml作用后,hPRB mRNA阳性,IGF－I对其有上调作用,但IGF－I的上调作用弱于雌激素。MCF－7细胞中hPRB mRNA未见表达,经10nmol/L雌激素刺激72h后,hPRB mRNA阳性,呈上调作用,但雌激素对hPRB mRNA的上调作用在MCF－7细胞中弱于HEC－IB细胞。结论：（1）E2和IGF－I对hPR亚型均有调控作用,且具有不同组织细胞特异性。（2）E2和IGF－I在基因水平或转录水平使hPRB mRNA上调,但在转录后可能存在某种抑制因素使hPRB蛋白质产生受到抑制。     

17-β雌二醇对人牙周膜细胞骨向分化时核因子κB受体激动子配体和骨保护因子表达的影响

目的:探讨17-β雌二醇(E2)对人牙周膜细胞(hPDLCs)骨向分化时核因子κB受体激动子配体(RANKL)和骨保护因子(OPG)表达的影响.方法:采用剂量对照设计,评价四代hPDLCs分别在含有0.1%无水乙醇(对照组)、10^-10mol/L E2(生理剂量组)或10^-7mol/L E2(高剂量组)的矿化诱导培养基中培养至72 h,时间点的观察荧光定量RT-PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果:高剂量和生理剂量E2均下调hPDLCs的RANKLmRNA的表达水平.高剂量组随时间增加RANKL的表达水平逐渐降低,第24,48和72小时的表达水平分别为对照组的31.0%,23.6%和15.4%;生理剂量组各时间点分别为对照组的28.4%,87.3%和22.6%.不同剂量E2均上调hPDLCs的OPG mRNA的表达水平,尤以第72小时作用明显,生理剂量组表达水平为对照组的210.1%;高剂量组为对照组的171.3%.结论:17-β雌二醇可能通过下调hPDLCs骨向分化时RANKL的表达并上调OPG的表达抑制破骨细胞的分化和牙槽骨的吸收,从而发挥对牙周组织的保护作用.     

瘦素及胰岛素对人类肝细胞癌细胞系细胞瘦素受体mRNA表达的作用

目的研究瘦素及胰岛素对瘦素受体(OB—R)的调节作用。方法以人类肝细胞癌细胞系(HepG2)为实验摸型,采用6孔板培养皿培养HepG2细胞,4个孔作为一个浓度组,通过DNA序列测定及半定量的逆转录-聚合酶链反应等方法,分别观察了0、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L浓度的人类瘦素及胰岛素对HepG2细胞内瘦素受体mRNA表达水平的影响。结果通过RT-PCR及DNA序列测定,我们证明了HepG2细胞含有瘦素长型受体(Ob-Rb)及短型受体(OB-Ra：OB—R219．3);通过半定量RT-PCR,我们检测了Ob-Rb和OB-R219．3的mRNA表达水平。当HepG2细胞与不同浓度的瘦素孵育24h后,10^-7-10^-6mol／L浓度的瘦素明显抑制了OB—Rb的mRNA表达,并在10^-6mol／L浓度时达到最大抑制为43％;同样10^-8-10^-6mol／L浓度的瘦素亦明显抑制了OB-R219．3的mRNA表达,并在10^-6mol／L浓度时达到最大抑制为49％。当HepG2细胞与不同浓度的胰岛素孵育24h后,OB-Rb及OB—R219．3的mRNA表达水平无改变。结论在HepG2细胞内瘦素对OB-Rb及OB—R219．3的mRNA表达有下调作用,而胰岛素对OB-Rb及OB-R219．3的mRNA表达无调节作用,这对与我们了解瘦素抵抗及瘦素的外周功能具有重要意义。     

孕激素受体B亚型在子宫内膜癌细胞中的功能

目的:通过反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)技术特异性下调子宫内膜癌细胞系中孕激素受体亚型B(progestrone receptor isoform B, PR-B),在此基础上观察激素对转染前后细胞作用的改变,了解子宫内膜癌细胞中孕激素受体亚型功能的不同.方法:体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa和中分化子宫内膜癌细胞Hec-1B, 转染PR-B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸及错义寡核苷酸后,提取细胞蛋白,采用Western blot 方法测定各个条件下内膜癌细胞中两种孕激素受体亚型的表达;并在转染PR-B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸及错义寡核苷酸后,用MTT法测定转染前后各种激素对细胞生长作用的改变.结果:转染孕激素受体亚型PR-B的反义寡核苷酸后, 两种细胞系PR-B的表达较非转染组显著下调,孕激素受体亚型A(progesterone receptor isoform A,PR-A)的表达无明显变化.雌激素(17β-estradiol,E2)作用后72 h Ishikawa细胞生长显著高于对照组,Hec-1B细胞较对照组有升高趋势,但差异无统计学意义.孕激素(R5020)作用72 h后对Ishikawa细胞有显著抑制作用,96 h后对Hec-1B细胞有显著抑制作用.在雌、孕激素作用基础上加入米非司酮(mifepristone,RU486),96 h后Ishikawa细胞明显增生,而仅48 h后HEC-1B细胞明显增生.转染PR-B的反义寡核苷酸后,雌激素对内膜癌细胞生长的刺激作用较转染前增强 ,孕激素对细胞的生长抑制作用减弱甚至消失,米非司酮拮抗孕激素的作用较转染前显著降低. 结论:(1)向子宫内膜癌细胞系中转染PR-B的反义寡核苷酸可以下调PR-B的表达,使细胞优势表达PR-A;(2)雌激素可以刺激内膜癌细胞的生长,PR-B可能参与下调雌激素对内膜癌细胞的促生长作用;(3)孕激素在雌激素基础上抑制内膜癌细胞的生长,主要可能通过PR-B起抗内膜癌细胞增生作用;(4)米非司酮有拮抗孕激素抑制子宫内膜癌细胞生长的作用.PR-B可能参与介导了米非司酮拮抗孕激素的作用.