糖尿病小鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的变化

目的观察糖尿病小鼠海马星形胶质细胞及胶质酸性蛋白的变化.方法用四氧嘧啶对ICR小鼠造成糖尿病模型,利用免疫组织化学方法结合图像分析仪观察海马CA1、CA2、CA3和CA4区星形胶质细胞数目密度及胶质酸性蛋白表达的变化情况并与生理盐水组对照.结果 GFAP阳性细胞在海马各区均有分布.除CA2区外,糖尿病组GFAP阳性细胞在CA1、CA3和CA4区的密度较生理盐水组增加（P〈0.01）,GFAP阳性细胞的平均光密度值在各区均高于生理盐水组（P〈0.01）.结论糖尿病时海马星形胶质细胞数量及其胶质酸性蛋白表达增加,可能是星形胶质细胞对糖尿病糖代谢改变的一种保护性反应.     

新生鼠脑皮层星形胶质细胞培养及鉴定

目的：旨在获得较纯的星型胶质细胞，为进一步研究奠定基础。方法：采用细胞分离培养一差速粘附法。胰酶消化及机械吹打，分离SD新生1周大鼠大脑皮层细胞，用含20％血清DMEM／F12培养基培养。并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。结果：经原代及传代培养，获得大量几乎为单一种类细胞，其特点为胞体较大，形状不规则，胞质较丰富，细胞核圆形或卵圆形，常偏于胞体一侧，细胞突起较多较长，符合星形胶质细胞形态。GFAP-FITC免疫荧光染色绝大多数细胞为强阳性。结论：细胞分离培养-差速粘附法可获得较纯的星形胶质细胞。     

水囊压迫大鼠脑组织致星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白的变化

目的研究水囊压迫大鼠颅脑造成损伤后星形胶质细胞的反应。方法将改装后的5F漂浮导管球囊部位全部插入颅内硬膜外后,注射0．5ml无菌生理盐水人球囊使其扩张并维持压力2h。于伤后不同时间将大鼠处死,取脑组织进行HE染色和胶质纤维酸性蛋白（Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP）免疫组化染色。结果伤后存活1h组,可见GFAP阳性细胞散在于损伤区周围,但突起较短,反应性星形胶质细胞主要局限于创缘周围。伤后存活24h组,GFAP表达的范围扩大,在创缘及其伤区周围的阳性细胞增多,胞体增大,突起增长,且染色加深。24h在海马组织中已有GFAP阳性细胞表达。伤后存活3d、6d和12d组,阳性细胞的表达继续维持在高水平,且细胞形态各异,胞体变化较大,在创缘出现突起少而粗短的GFAP阳性细胞,而在损伤区周围、海马以及脑干的区域阳性细胞突起粗大不规则,突起进一步增长,胞浆突起染色较深。12d时,GFAP阳性细胞增多达到高峰,阳性细胞着色深,呈深棕黄色。结论水囊压迫造成脑组织损伤后星形胶质细胞的标志性蛋白GFAP表达出现规律性变化,表明水囊压迫的损伤模型可以模拟颅脑血肿的损伤。     

人大脑及脑干挫伤后星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白的变化

目的探讨人大脑及脑干挫伤后星形胶质细胞(Ast)及其特殊标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)变化与损伤时间的关系,以及大脑与脑干挫伤后病变的差异。方法对87例闭合性颅脑损伤死亡者脑挫伤组织进行病理学及GFAP免疫组织化学检查。结果脑挫伤后Ast灶性肥大及增生最早见于伤后12h,7～14d达高峰,30d胶质瘢痕基本形成。在Ast4项图像分析指标中,平均细胞数在伤后首先下降然后逐渐增加,细胞平均吸光度值、积分吸光度值及细胞平均面积在脑挫伤后14d内随时间延长而逐渐增加,大脑与脑干之间Ast的上述4项指标在脑挫伤后均呈正相关关系,相关性由高至低为:平均细胞数>平均吸光度值>积分吸光度值>细胞平均面积。结论星形胶质细胞GFAP免疫组织化学检查结合图像分析技术可用于脑挫伤后经过时间的推断,大脑与脑干挫伤后星形胶质细胞GFAP变化趋势基本一致。     

大鼠大脑皮层星形胶质细胞的传代培养

目的：获得纯度较高的星形胶质细胞材料用于进一步实验。方法：采用大鼠神经胶质细胞的原代培养和传代培养方法。取生后24h以内Wistar大鼠脑皮层，用机械法和胰蛋白酶消化法分散细胞，制成细胞悬液，接种于无底物黏附培养瓶中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。培养液为DMEM/F12混合培养液。待细胞铺满瓶底后传代，并对传代细胞进行形态观察、吖啶橙荧光染色和星形胶质细胞的免疫细胞化学鉴定。结果：通过传代得到了形态典型含量较高的星形胶质细胞。结论：在无底物黏附培养的条件下，星形胶质细胞在体外能够得到良好的生长，并被纯化。     

大鼠脑皮质星形胶质细胞的纯化培养

目的获取纯度较高的大鼠脑皮质星形胶质细胞，用于进一步实验。方法取新生大鼠大脑，用酶消化结合机械吹打方法分离皮质细胞制成细胞悬液，差速贴壁法去除成纤维细胞，培养融合时，恒温摇床振荡法去除少突胶质细胞、小胶质细胞等，纯化后，观察星形胶质细胞生长变化规律，并通过GFAP免疫细胞化学方法鉴定星形胶质细胞。结果大鼠脑皮质细胞接种后24h全部贴壁，部分细胞已伸出突起；3～5d时细胞增殖最明显，细胞数目增加，体积增大，突起相互交织成网状；原代培养7～10d时细胞基本融合并开始分层生长。振荡纯化处理后，GFAP免疫细胞化学染色阳性细胞可达98％。结论用差速贴壁和恒温振荡方法可获得高纯度皮质源性星形胶席细胸．     

ASK1在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用

目的 探讨细胞凋亡信号调节蛋白1 (ASK1)在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用.方法 原代培养得到高纯度(＞96％)大鼠脊髓星形胶质细胞,建立星形胶质细胞损伤模型.星形胶质细胞损伤后立即给予生理盐水(损伤模型组)、ASK1特异性抑制剂(Trx组)、ASK1特异性抗体(抗体中和组)处理;对照组为原代大鼠脊髓星形胶质细胞,不作任何处理.应用蛋白质印迹法检测星形胶质细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况,应用免疫荧光标记技术检测星形胶质细胞划痕宽度的变化,应用CCK-8法检测星形胶质细胞增殖活性.结果 损伤后24 h及72 h损伤模型组GFAP和Vimentin蛋白的表达均显著高于对照组、Trx组和抗体中和组(P＜0.01);损伤后24 h及72 h损伤模型组星形胶质细胞划痕平均宽度明显小于对照组、Trx组和抗体中和组(P＜0.01);损伤后12h、24 h、72 h对照组、Trx组和抗体中和组星形胶质细胞增殖活性明显低于损伤模型组(P＜0.05).结论 大鼠脊髓星形胶质细胞损伤后阻断ASK1可抑制其细胞增生.     

大鼠脑皮层星形胶质细胞培养与鉴定

目的：介绍一种新的脑组织星形胶质细胞培养方法，为进一步研究奠定基础。方法：常规分离纯化星形胶质细胞，将其低密度种植，维持在含10％新生牛血清DMEM培养基中培养，并在长时期内不给予更换或补加培养液。利用GFAP—FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。结果：经原代及传代培养，获得大量几乎为单一种类细胞，其特点为细胞突起细长、胞体明显缩小、形态多样，最后细胞突起之间相互连接形成星形胶质细胞网络，并在相当长的时间内保持不变。GFAP—FITC免疫荧光染色为强阳性。结论：在限制细胞种植密度和限制给予培养液的培养条件下星形胶质细胞的体外形态发育与在体的情形基本一致，提示该细胞培养方法可能有助于研究中枢神经系统中星形胶质细胞的生理功能。     

星形胶质细胞的活化机制及功能研究

星形胶质细胞与神经元之间存在复杂的相互作用,以维持神经系统内环境的稳定.近年随着膜片钳及分子生物学技术的应用,人们发现星形胶质细胞表面不仅具有电压依赖的Na^＋、K^＋及Ca^2＋通道,而且分布着许多神经递质、神经肽、激素及神经营养因子受体[1],并能合成及分泌多种神经活性物质,在维持神经元内外环境、免疫调节及信号转导等方面具有重要作用,与中枢神经系统（central nervous system,CNS）疾病密切相关,因此星形胶质细胞对神经元生存起重要作用[2～4].在病理条件下,星形胶质细胞从静息状态快速向活化状态转变,其活化具有瀑布效应,活化的星形胶质细胞对神经元起保护或毒性作用,从而发挥“双刃”效应.进一步探讨星形胶质细胞的活化机制及功能,对认识脑的奥秘具有重要意义.     

两种不同脑损伤后星形胶质细胞反应性变化的比较研究

目的 探讨不同类型脑损伤后星形胶质细胞（AST）活化的时空分布及形态学变化特征。方法 本实验建立Wistar大鼠短暂性全脑缺血30min再灌注模型及脑皮质针刺伤模型,采用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）单克隆抗体免疫组化方法及图像分析技术对两种脑损伤后AST的反应进行对比观察。结果 ①脑缺血1d后可见AST活化,5d即达高峰。脑皮质针刺伤后AST的活化开始于第5－7天,第14天达高峰。②两种脑损伤后不同部位反应性AST的形态有明显差异。结论 本实验表明不同类型脑损伤后AST的反应不同,活化AST在形态上的差异可能与神经营养因子的运输,神经的修复与再生等功能相适应。     

缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

目的 研究缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞活性及损伤的影响,确定星形胶质细胞体外培养的最佳缺氧时间点以对其进行深入研究。方法 体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定。通以5%CO₂+95%N₂混合气体造成缺氧,分别观察缺氧不同时间段星形胶质细胞光镜下的形态变化,死亡细胞数目,培养上清液的氧分压、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 星形胶质细胞在缺氧条件下,随着时间延长,细胞逐渐出现肿胀、漂浮和坏死。与对照组相比,缺氧10h组死亡细胞数、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化均有明显差异(P<0.05),且与缺氧时间呈正相关,其中缺氧组细胞培养上清液中葡萄糖浓度比对照组明显降低,而乳酸盐浓度和LDH活性则明显升高,而缺氧8h组虽然葡萄糖和乳酸盐的浓度及LDH活性的变化明显,但星形胶质细胞保存着多突触的形态。结论 缺氧可致体外培养的鼠脑星形胶质细胞损伤甚至死亡,缺氧8h可作为以体外培养的鼠脑星形胶质细胞为研究对象的缺氧生物学研究的最佳时间点。     

脓毒症相关性脑病患者血清胶质纤维酸性蛋白的表达及其临床意义

目的：观察脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)患者血清胶质纤维酸性蛋白(glial fi brillary acidic protein,GFAP)的表达水平,并探讨其临床意义。方法：选取中南大学湘雅三医院在2016年10月至2018 年8月间收治的确诊为脓毒症的患者,采用酶联免疫吸附法检测患者血清GFAP及神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)和中枢神经特异蛋白S100β水平。同时对患者行ICU患者意识模糊评估法(Confusion Assessment Method for the ICU,CAM-ICU)评分,依据CAM-ICU评分将其分为SAE组和脓毒症未合并脑病(non-SAE)组。比较2组 患者的一般临床资料及住ICU时间、28 d病死率和180 d病死率。结果：152例脓毒症患者纳入本研究,其中SAE组 58例,non-SAE组94例。SAE组患者的序贯器官衰竭评价(Sequential Organ Failure Assessment,SOFA)得分、28 d病死率和 180 d病死率均显著高于non-SAE组(均P<0.001)。SAE患者24 h内血清GFAP,NSE,S100β水平均明显高于non-SAE组(均 P<0.001)。当血清GFAP水平为0.67 μg/L时,诊断SAE的灵敏度为75.9%,特异度为77.7%;GFAP诊断SAE的ROC曲线下 面积(area under the receiver operating characteristic curve,AUROC)为0.803,优于NSE(0.795)和S100β(0.750)。经Pearson 分析显示血清GFAP水平与急性生理学与慢性健康状况评价II(Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II,APACHE II)评分和SOFA评分呈正相关,与格拉斯哥昏迷评分(Glasgow Coma Scale,GCS)、28 d生存率、180 d生存率呈负相关。 结论：SAE患者血清GFAP水平明显升高,与SAE发病率及其病情严重程度和预后有关。     

Study on Remodeling of Astrocytes in Facial Neuclus after Peripheral Injury

To observe the glial reactions surrounding facial motor neurons following facial nerve anastomosis. At 1,7,21 and 60 d following facial nerve anastomosis, the recovery process of facial movement was observed, the glial fibrillary acidic protein （GFAP） immunoreactivity was analyzed by a combined method of fluorescent retrograde tracing and immunofluorescent histochemical staining, and the uhrastructure of astrocytes were observed under a transmission electron microscope （TEM）, respectively. Postoperatively the function of facial muscles could not return to normal, often accompanied with hyperkinetic syndromes such as synkinesis at the late stage. Motor neurons in every facial subnucleus could be retrogradely labeled by fluoro-gold （FG）, and displayed an evident somatotopic organization. Normally there was a considerable number of GFAP-positive cells in nonnucleus regions but few inside the facial nucleus region. Postoperatively the GFAP immunoreactivity in the anastomotic side increased significantly, but gradually decreased at the late stage. The ultrastructure of astrocytes in our experiment showed that the sheet-like process of astrocytes invested and protected the injured facial motor neurons. The present study shows that reactive astrocytes undergo some characteristic changes during the process of facial nerve injury and regeneration. The plastic change at the late stage may be involved in the mechanism of synkinesis.     

异氟烷对新生大鼠皮质星形胶质细胞形态和幼鼠行为学的影响

目的：探讨长时间吸入低浓度异氟烷对新生大鼠皮质星形胶质细胞的形态及幼鼠空间学习和记忆能力的影响。方法43只新生Wisrar大鼠随机分成两组,I组吸入1.1％的异氟烷6 h,C组吸入压缩空气和氧气的混合气体6 h,两组均维持吸入氧浓度为30％。在吸入麻醉后12、24、72、168 h两组分别取5只幼鼠,灌注取脑后用免疫荧光法标定星形胶质细胞,用Image J软件分析星形胶质细胞形态学的改变。在吸入异氟烷后6周,记录剩余幼鼠的存活率并将剩下的动物进行Morris水迷宫实验测试其空间学习和记忆能力。结果与C组相比,I组12 h和24 h激活星形胶质细胞的数目减少（P＜0.05）,12 h时抑制状态的星形胶质细胞的数目明显上升（P＜0.05）,其余时间点两组之间星形胶质细胞数目差异无统计学意义。两组幼鼠定位航行实验和空间探索实验结果差异无统计学意义。结论长时间吸入低浓度异氟烷会导致星形胶质细胞形态的暂时性改变,但是对于幼鼠成年后的认知功能无明显影响。     

BDNF对脊神经根结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化的影响

目的观测脊神经根结扎(SNL)大鼠脊髓背角中脑源性神经营养因子(BDNF)与星形胶质细胞活化标记蛋白胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)表达的变化,以及BDNF清除剂TrkB/Fc对GFAP表达和疼痛的影响。方法取18只SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组和SNL组(n=6)。分别于术前、术后第1～6天测定大鼠50%机械缩爪阈值(50%PWT),末次测定后取腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP和BDNF的表达。另取18只SD大鼠,随机分为对照组、SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组(n=6),其中对照组仅行鞘内置管术;SNL+安慰剂组和SNL+TrkB/Fc组分别在行SNL术前,予鞘内注入PBS或TrkB/Fc 10μL,术后1次/d×6 d,每次注药前1 h测定50%PWT,末次给药后1 h取大鼠腰膨大处脊髓背角经Western blotting检测GFAP的表达。结果术后第1～6天,SNL组手术同侧后肢50%PWT均较术前基础值显著下降(P<0.01);术后第6天,SNL组手术同侧脊髓背角BDNF和GFAP表达均较空白对照组显著升高(P<0.01);SNL+TrkB/Fc组大鼠手术同侧50%PWT与基础值比较无明显变化(P>0.05),手术同侧脊髓背角GFAP表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BDNF活化的脊髓星形胶质细胞对SNL诱发的神经病理性疼痛具有调控作用。     

电针对体外培养星形胶质细胞机械性损伤后反应性胶质化的影响

目的观察电针对体外培养星形胶质细胞(Astrocyte,Ast)机械性损伤后反应性胶质化的影响。方法取新生3d龄SD大鼠的大脑皮层进行Ast原代培养,取第三、四代细胞制作细胞机械性损伤模型,电针刺激,用倒置相差显微镜及免疫细胞化学荧光染色观察细胞生长增殖,细胞形态及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的变化。结果模型组Ast机械性损伤后,细胞增生,体积变大,GFAP表达增强。电针组较模型组细胞增生减少,细胞体积变化不大,GFAP表达较弱。结论电针刺激可以抑制体外培养Ast机械性损伤后的增生,降低细胞内GFAP的表达,即电针可以抑制Ast的反应性胶质化。     

新生儿窒息后脑损伤外周血S100β、GFAP的变化及临床意义

目的 探讨不同程度窒息新生儿血清钙结合蛋白S100β、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的变化及与行为神经测查方法 (neonatal behavioral neurological assessment,NBNA)评分的相关性,为早期预测新生儿脑损伤寻找依据....     

不同固定时间对脑胶质瘤免疫组化染色质量的影响

 目的 研究免疫标记物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、增殖指数（proliferation index,Ki67）在脑胶质瘤标本中因固定时间不同而对免疫组化染色结果产生的影响,以及GFAP和Ki67阳性表达的差异。方法 回顾性收集2018年1月至2019年12月上海市静安区中心医院71例脑胶质瘤标本,肿瘤直径≥2 cm,每例标本取6块大小为1 cm×1 cm×0.2 cm的肿瘤组织。4%甲醛固定处理,固定4 h、24 h、48 h、96 h、7 d和14 d后进行GFAP、Ki67免疫组化染色,比较不同固定时间对GFAP、Ki67阳性率的影响。结果 脑胶质瘤标本经过4 h、24 h、48 h、96 h、7 d和14 d固定处理后,GFAP有效阳性率分别为63.38%、97.18%、95.77%、92.95%、90.14%和77.46%,差异有统计学意义（χ²=51.802,P<0.001）,Ki67有效阳性率分别为87.32%、100%、100%、100%、98.59%和90.14%,差异有统计学意义（χ²=30.45,P<0.001）。固定24 h、48 h、96 h和7 d的组别中GFAP、Ki67的有效阳性率比较,组间差异无统计学意义。结论 不同固定时间对脑胶质瘤组织中GFAP、Ki67的免疫组化染色结果有影响,固定24 h、48 h、96 h、7 d的染色结果优于固定4 h和14 d。