细胞膜穿透肽在肿瘤治疗中的应用

穿透细胞膜进入细胞内是许多作用靶点在细胞内的生物大分子发挥作用的先决条件,然而生物膜的生物屏障作用阻止了许多高分子物质进入细胞内,从而很大程度地限制了这些物质在治疗领域的应用。因此,如何引导这些物质穿透细胞膜是一个迫切需要解决的问题。传统的各种导向方法存在着     

细胞膜穿透肽及其在肿瘤治疗中的应用

穿透细胞膜进入细胞内是许多作用靶点在细胞内的生物大分子发挥作用的先决条件,然而生物膜的生物屏障作用阻止了许多高分子物质进入细胞内,从而很大程度地限制了这些物质的在治疗领域的应用.因此,如何引导这些物质穿透细胞膜是一个迫切需要解决的问题.     

噬菌体展示技术的应用及其进展

<正>1985年Smith首次证实丝状噬菌体fd基因组能通过基因工程的手段进行改造,将EcoRⅠ内切酶的部分基因片段(171 bp和132 bp)与pⅢ基因融合,获得的重组噬菌体可在体外稳定增生,表达产物能被抗EcoRⅠ内切酶抗体所识别。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与pⅢ的N端融合呈现在表面,可特异性地被抗体选择出来,并提出通过构建随机肽库可以了解抗体识别的抗原决定簇表位的     

噬菌体展示技术在汉坦病毒研究中的应用

噬菌体展示技术是近年发展起来的新技术,在研究蛋白质与蛋白质之间、抗原抗体之间的相互作用、新药开发、疾病诊断、疫苗研制以及病毒研究等方面具有广泛应用。文中就噬菌体展示技术在汉坦病毒研究中的应用现状作一综述。     

噬菌体展示技术及其在病原微生物研究中的应用进展

噬菌体是能特异性地感染细菌的一类病毒,其基因数目少,结构相对简单,容易在分子水平上操控其基因。噬菌体展示技术是将外源肽或蛋白以融合蛋白形式表达并呈现在噬菌体衣壳表面的分子生物学技术。与传统的研究方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单、耗时短等优点。本综述主要聚焦噬菌体展示技术在病原微生物抗原筛选、抗体制备和疫苗研制等方面的应用进展。     

噬菌体展示技术及其在药物筛选中的应用

噬菌体展示文库是目前广泛应用于生物医学领域的较为重要的分子工具,近年来相关研究进展迅速,目前该技术以具有库容量大、结合特异性强等特点而成为药物筛选的实用性工具.本文以噬菌体展示技术的原理为出发点,对噬菌体载体的分子生物学、噬菌体展示文库的构建和筛选及其在药物筛选中的应用进行了综述.     

噬菌体展示肽库技术应用的研究进展

噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术，它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面，使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要用途。     

噬菌体展示技术及其在医药上的主要应用

噬菌体展示技术（phage display）是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术，编码多肽的DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后，以融合蛋白的形式表达在噬菌体的表面，不影响噬菌体的生活周期。同时可保持目的蛋白的天然构象，且能被相应的抗体或受体所识别。随着此项技术的不断完善和发展，噬菌体展示技术已在许多领域得到广泛的运用：抗原表位筛选及疫苗研制、多肽药物的筛选、疾病检测等，并显示了良好的发展前景。本文对近几年来噬菌体展示技术的研究及应用进展作以综述。     

噬菌体展示技术在神经系统疾病中的应用

噬菌体展示是一种能够在丝状噬菌体表面展示大量多肽和蛋白质文库的分子多样性技术,从噬菌体展示的文库中几乎可以筛选出针对所有靶标存在高度亲和性和特异性的多肽、蛋白质及抗体,这些筛选的多肽及抗体已经被广泛应用于临床疾病的诊断和治疗。本文概要综述在神经变性疾病及神经免疫性等相关疾病中,噬菌体展示技术在探究疾病的病因、发病机制及疾病的诊断、治疗方面的研究现状及技术进展。     

噬菌体展示技术筛选卵巢癌细胞表面转移相关分子结合肽

目的：利用噬茵体7肽库筛选高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM表面转移相关分子结合肽。方法：利用噬茵体展示技术体外快速差减筛选（biopanning and rapid analysis of selective inter-activeligands,BRASIL）卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910PM,经过连续5轮生物淘洗,随机挑选14个噬茵体单克隆进行DNA测序,并进行ELISA、噬茵体竞争结合实验验证阳性噬茵体的亲和性。结果：噬菌体克隆Z3（短肽LRLRNTR）对高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM有较高的亲和性。结论：噬茵体展示技术筛选的短肽LRLRNTR可望为卵巢肿瘤早期诊断、转移复发及治疗提供新的方向。     

Screening and Identification of a Novel Hepatocellular Carcinoma Cell Binding Peptide by Using a Phage Display Library

The purpose of this study was to screen peptides that can specifically bind to human hepatocellular carcinoma(hHCC) cells using phage display of random peptide library in order to de-velope a peptide-based carrier for the diagnosis or therapy of hHCC.A peptide 12-mer phage display library was employed and 4 rounds of subtractive panning were performed using the hHCC cell line HepG2 as the target.After panning,the phages that specifically bound to and internalized in hHCC cells were selected.The selected phages demonstrated highly specific affinity to HepG2 cells analyzed by ELISA and immunofluorescence analysis.57.3% of the selected phage clones displayed repeated sequence FLLEPHLMDTSM,and 4 amino acid residues,FLEP were extremely conservative.Based on the sequencing results,a 16-mer peptide(WH-16) was synthesized.The competitive ELISA showed that the binding of the phage clones displayed sequence FLLEPHLMDTSM to HepG2 cells was efficiently inhibited by WH-16.Our findings indicate that cellular binding of phage is mediated via its displayed peptide and the synthesized 16-mer peptide may have the potential to be a delivery carrier in target diagnosis or therapy for hHCC.     

细胞穿透肽介导外源物质入胞转运研究进度

细胞穿透肽(cell-penetrating peptides, CPP)是一类能够携带外源物质进入细胞的多肽,因其结构和功能的独特性和实用性,近20年里在生物医学领域得到了长足的发展。目前CPP向体内和体外输送物质的方法逐渐成熟。在基础研究领域,已成为研究细胞内分子相互作用的有用工具;在应用方面,CPP药物已进入临床前、临床Ⅰ和Ⅱ期试验,在肿瘤、中枢神经系统疾病和心血管疾病的治疗中显示出明显优势。本文对CPP的发展历程、分类、入胞机制和应用等做一综述。     

噬菌体肽库筛选隐丹参酮高亲和性结合肽

通过噬菌体十二肽库,以隐丹参酮为靶分子,筛选与隐丹参酮具有高亲和性的结合短肽。经过噬菌体十二肽库的3轮淘选,获得阳性噬菌体克隆,挑选结合力强的克隆进行测序,得到隐丹参酮的高亲和性结合短肽序列,并进行生物信息学分析。本试验共筛选到10个隐丹参酮的高亲和性结合短肽序列,有614种蛋白质与其结构相匹配。多肽序列的核心序列为VILDFGEI。本研究获得了与隐丹参酮结合的高亲和性多肽,为深入研究隐丹参酮的作用靶点以及分子作用机制提供了实验依据和结构基础。     

从噬菌体展示肽库中筛选与人精子蛋白17结合的短肽序列

目的：随机从噬菌体12肽库中筛选与人精子蛋白17（Sp17）特异性结合的短肽序列,并进行鉴定.方法：以基因工程制备的人Sp17为钓饵蛋白,采用亲和淘筛法对噬菌体肽库进行三轮亲和淘筛.富集Sp17特异结合噬菌体,用ELISA鉴定其结合活性并进行DNA测序分析.结果：随机挑出20个噬菌体克隆进行鉴定,ELISA显示其中5个克隆与Sp17有较强结合活性,其氨基酸序列分别为QLMSNIHRRMII、RKMMNQTKRHLP、NTMKTMRIMMTR、RRRLLLMQRRMKR和SPRPMMRRIRKQ.结论：从噬菌体展示肽库中筛选鉴定出5个与人Sp17结合的12肽序列.     

结核分枝杆菌抗原模拟表位肽的筛选及免疫活性鉴定

目的：从噬菌体随机12肽库中筛选结核分枝杆菌模拟抗原表位,并初步研究其免疫活性。方法：以鹿结核阳性血清纯化多克隆抗体IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增过程进行3轮筛选,随机挑取20个单克隆进行特异性鉴定,将筛选后得到的阳性克隆扩增后免疫BALB/c小鼠作为实验组;以TBS为阴性对照组,BCG为阳性对照组,采用间接ELISA方法检测抗体效价,MTT法检测淋巴细胞增殖能力。每组小鼠免疫3周后再鼻腔接种BCG,3周后无菌取左全肺研磨计算肺脏荷菌量,取右全肺制备病理切片观察肺脏病理变化。结果：经三轮筛选后阳性克隆得到富集,ELISA鉴定20个单克隆中有15个阳性克隆阳性率为75%。免疫后实验组小鼠抗体水平高于BCG组(P<0.01)。小鼠脾淋巴细胞增殖实验,经ConA、LPS、PPD刺激后实验组SI值均高于BCG组,但差异无显著性(P>0.05),与TBS组比较差异有显著性(P<0.01)。实验组、BCG组均观察到少量的淋巴细胞浸润,而TBS组肺泡结构消失,组织发生实变。肺脏荷菌量实验显示实验组肺脏荷菌量［(4.080±0.035)log CFU·mg^-1)］ 低于TBS组［（4.360±0.110)log CFU·mg^-1］　(P<0.01),但高于BCG组荷菌量［(3.980±0.023)log CFU·mg^-1］(P>0.05)。结论：成功筛选得到含有结核分枝杆菌抗原模拟表位的阳性克隆,这些阳性克隆能有效诱导小鼠产生比BCG更高的抗体效价和保护效应,对其进行进一步序列测定和功能分析将有助于结核病疫苗的开发。     

人骨肉瘤细胞特异性结合肽的筛选及验证

目的获得人骨肉瘤细胞MG63特异性结合肽,为骨肉瘤靶向治疗奠定基础。方法应用噬菌体展示技术,以人骨肉瘤细胞作为靶细胞,293T细胞为差减细胞,筛选获得MG-63细胞特异性结合肽。酶联免疫法进行靶向性验证。应用荧光染色技术初步探讨短肽细胞受体位置。制作人骨肉瘤模型,尾静脉注射目标噬菌体,免疫组化检测其靶向性。结果经过四轮一步有机相离心分离方法,获得了与骨肉瘤细胞特异性结合的短肽,并测序获得其中出现次数最多的序列SLTNLSK,靶向验证结果显示该短肽有较强的特异性。结论应用噬菌体展示技术,获得了与人骨肉瘤细胞特异性结合的短肽,序列为SLTNLSK,并验证了其靶向性。可以作为骨肉瘤靶向治疗的导向性化合物。     

抗hTNF-α中和抗体识别表位的筛选和鉴定

目的:对噬菌体随机线性7肽库进行筛选,得到能与抗hTNF-α中和抗体特异性结合的表位肽.方法:以抗hT-NF-α中和抗体为靶,筛选噬菌体线性7肽库,双夹心ELISA,竞争抑制ELISA及MAP点杂交鉴定阳性噬菌体克隆.结果:经3轮筛选后随机挑取50个噬菌体克隆,经ELISA检测其中15个克隆显示与抗hTNF-α抗体有较强的结合能力,DNA测序结果得到的结构相似群为:WTFKMQP,WPFKMSP,WPYK-MIP和WNYKMLP,竞争性ELISA结果显示四个序列均能与TNF竞争性结合抗hTNF-α mAb,MAP点杂交结果显示筛选得到的多肽是能与抗hTNF-α抗体特异性结合的多肽.结论:筛选得到的7肽序列具有很高的同源性,并能与抗hTNF-α中和抗体特异性结合,为hTNF-α相关多肽疫苗的研究提供依据.     

汉坦病毒核衣壳蛋白mAb B11模拟结合肽的筛选和鉴定

目的：应用噬菌体展示肽文库筛选可与肾综合征出血热病毒mAb B11特异性结合的短肽。方法：采用Protein-A亲和纯化的单抗为筛选配基，对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘选，夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果：通过4轮淘选，ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽多数能与B11单抗特异性地结合（12／15），序列分析表明8个阳性克隆氨基酸序列分为4组，同源性分析显示核心序列可能为（M／F）HR（H／T）X（H／W）或（R／F）HX（H／T）P（W／M）（L／Y）。结论：基于表位水平的HFRSV特异性诊断试剂的研制和小分子多肽疫苗的设计提供了重要依据