膜联蛋白A1基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A1(ANXA1)基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响及其机制.方法 应用免疫组化法检测100例胆囊癌组织中ANXA1基因的阳性表达,分析其与临床病理特征的关系.培养人胆囊癌GBC-SD细胞,分别将ANXA1小干扰RNA(ANXA1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染效果;细胞转染后培养48 h,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、STAT3、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)蛋白表达.结果 ANXA1基因在胆囊癌中的阳性表达率显著高于癌旁组织(69.0%比7.5%,χ2=43.261,P<0.01);ANXA1在胆囊癌中的表达与性别和年龄不相关(P>0.05),与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴转移显著相关(P<0.01).siRNA-NC组中ANXA1、Cleaved caspase3、STAT3、p-STAT3蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);ANXA1-siRNA组ANXA1蛋白表达、细胞存活率及p-STAT3蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),STAT3蛋白表达在三个组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 ANXA1基因的表达参与了胆囊癌的生长、分化和迁移过程,下调ANXA1的表达能抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的增殖,并通过下调Cleaved caspase3蛋白促进细胞凋亡,其机制与STAT3信号通路的调控有关.     

醉茄素A通过JAK/STAT通路对人肝癌耐药细胞HepG2/ADM凋亡的影响

目的研究醉茄素A通过Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活子(STAT)通路对人肝癌耐药细胞HepG2/阿霉素(ADM)凋亡的影响,并探讨JAK/STAT通路在其中可能的作用机制。方法体外培养HepG2/ADM细胞,分为对照组、醉茄素A 2.5、5.0、10.0μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况;Western blotting法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、cleaved caspase-3以及JAK/STAT通路中磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。结果醉茄素A 2.5、5.0、10.0μmol/L组HepG2/ADM细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量相关性(P<0.05)。与对照组相比,醉茄素A 2.5、5.0、10.0μmol/L组HepG2/ADM细胞部分细胞核发生碎片化、固缩,荧光强度增大,细胞凋亡指数及凋亡率显著升高(P<0.05),cleavedcaspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论醉茄素A可促进人肝癌耐药细胞Hep G2/ADM凋亡,其机制可能与抑制JAK/STAT通路活化,下调抑凋亡蛋白表达及上调促凋亡蛋白表达有关。     

STAT3反义寡核苷酸联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察STAT3反义寡核苷酸(STAT3 AS-ON)联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响.方法:体外培养Hep-2细胞,应用STAT3 AS-ON转染Hep-2细胞后,将培养细胞按是否进行放疗分为未放疗组与放疗组,未放疗组根据转染复合物的不同分为反义组、正义组及空白对照组,而放疗组分为反义 放疗组、正义 放疗组及放疗对照组.根据转染复合物的浓度(100、200、400 nmol/L)又将对应各组分为反义100、反义200、反义400、正义100、正义200、正义400组.其中放疗组Hep-2细胞给予γ射线(5 Gy)照射.MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:反义 放疗组的细胞存活率明显低于正义 放疗组和放疗对照组(P＜0.01),且随着STAT3 AS-ON转染浓度的增加而降低,反义 放疗组的细胞凋亡率明显高于正义 放疗组和放疗对照组(P＜0.01),而正义 放疗组和放疗对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论:STAT3 AS-ON联合γ射线作用于Hep-2细胞后,细胞增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,表明选择性阻断细胞内STAT3信号转导通路联合放疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径.     

STAT3反义寡核苷酸联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察STAT3反义寡核苷酸(STAT3 AS-ON)联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响.方法:体外培养Hep-2细胞,应用STAT3 AS-ON转染Hep-2细胞后,将培养细胞按是否进行放疗分为未放疗组与放疗组,未放疗组根据转染复合物的不同分为反义组、正义组及空白对照组,而放疗组分为反义+放疗组、正义+放疗组及放疗对照组.根据转染复合物的浓度(100、200、400 nmol/L)又将对应各组分为反义100、反义200、反义400、正义100、正义200、正义400组.其中放疗组Hep-2细胞给予γ射线(5 Gy)照射.MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:反义+放疗组的细胞存活率明显低于正义+放疗组和放疗对照组(P＜0.01),且随着STAT3 AS-ON转染浓度的增加而降低,反义+放疗组的细胞凋亡率明显高于正义+放疗组和放疗对照组(P＜0.01),而正义+放疗组和放疗对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论:STAT3 AS-ON联合γ射线作用于Hep-2细胞后,细胞增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,表明选择性阻断细胞内STAT3信号转导通路联合放疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径.     

藤梨根提取物通过 IL-6/STAT3信号通路调控食管癌细胞生物学行为的研究

目的探讨藤梨根提取物通过白细胞介素 -6/信号传导因子及转录激活因子 3(IL-6/STAT3)信号通路调控食管癌 EC9706细胞生物学行为的研究。方法本实验研究自 2018年 10月到 2019年 6月,分别用 1、5、10、100、500、1 000 mg/L的藤梨根提取物处理食管癌 EC-9706细胞,选取 100 mg/L作为最佳逆转实验浓度;用 IL-6/STAT3信号通路激活剂处理食管癌 EC-9706细胞。甲基噻唑基四唑( MTT)检测细胞的毒性;流式细胞术检测细胞的凋亡率; Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;划痕实验检测细胞的运动能力;蛋白免疫印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P21)、 B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白(Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)、信号传导及转录活化因子 3(STAT3)、磷酸化的信号传导与转录激活因、子-3(p-STAT3)蛋白的表达。结果藤梨根提取物明显促进了食管癌 EC-9706细胞凋亡( 37.35±2.37)并抑制了细胞增殖( 21.33±3.91)、迁移( 106.31±3.20)和侵袭( 67.29±2.99)(P<0.05);下调 CyclinD1(0.25±0.01)、 Bcl-2(0.26±0.03),、MMP-2(0.27±0.03)、 MMP-9(0.25±0.01)、 STAT3(0.34±0.03)、 p-STAT3(0.20±0.01)     

大鼠急性肺损伤过程中STAT3的活化对bcl-2 bax表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠急性肺损伤(ALI)过程中,信号转导和转录活化因子-3(STAT3)的活化是否可以起到一定的抗凋亡作用及其可能机制。方法健康雌性大鼠30只分为生理盐水组(NS)组、内毒素(LPS)损伤组、STAT3抑制剂——西罗莫司干预组。采用原位杂交法测定肺组织中STAT3基因的表达,免疫组织化学及细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL)测定肺组织中凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达及肺细胞的凋亡情况。结果以西罗莫司阻断STAT3的基因表达后,肺组织中抗调亡蛋白bcl-2表达下调,凋亡蛋白bax表达则增高,同时肺细胞凋亡数增加。结论急性肺损伤过程中STAT3通路的激活可上调bcl-2且下调bax的表达,从而起到一定的抗凋亡作用。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对肿瘤坏死因子-α诱导的肾小管细胞凋亡的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给予TNF-α(20μg.L-1)进行刺激。采用Western blot检测SOCS-1、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达;流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)观察HKC细胞凋亡情况。结果与对照组相比,TNF-α组肾小管上皮细胞凋亡明显增加,凋亡相关Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高;SOCS-1过表达能够抑制TNF-α刺激引起的HKC细胞的凋亡,下调JAK2和STAT1的磷酸化水平及Cleavedcaspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2蛋白比率。结论 SOCS-1过表达抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。     

缬沙坦对高糖培养系膜细胞信号转导和转录活化因子1、3表达的影响

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中信号转导和转录活化因子1、3的改变以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用W estern印迹检测信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)和放免法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白(F ibronectin,FN)和IV型胶原的含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1mRNA的表达。结果与低糖对照组相比,高糖组系膜细胞p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,TGF-β1、FN和IV型胶原含量增加,TGF-β1mRNA的表达增加。缬沙坦组p-STAT1和p-STAT3的表达明显下调,TGF-β1、FN和IV型胶原的含量减少,同时TGF-β1mRNA的表达降低。结论高糖状态下p-STAT1和p-STAT3表达明显升高,缬沙坦抑制肾小球系膜细胞TGF-β1和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现。     

褪黑素对PDGF诱导的肝星状细胞中JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨褪黑素对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞-T6(HSC-T6)JAK2/STAT3信号通路的影响。方法将HSC-T6细胞分为6组:对照组、模型组、实验组(褪黑素1 nmol·L^-1、1μmol·L^-1、0.1 mmol·L^-1)、抑制剂组(AG490为JAK2/STAT3通路的抑制剂),MTT实验检测褪黑素对PDGF激活的HSC-T6细胞增殖的影响;免疫组化和Western blot检测褪黑素HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达。结果与对照组比较,PDGF能明显激活HSC-T6细胞增殖,明显上调HSC-T6细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达;与模型组比较,褪黑素和抑制剂均可抑制PDGF激活的HSC-T6细胞增殖,显著下调p-JAK2、p-STAT3的表达。结论褪黑素可抑制PDGF诱导的HSC-T6的活化与增殖,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

shRNA沉默elF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的 构建靶向真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)的shRNA表达载体,观察eIF4E表达抑制对喉癌细胞生物学行为的影响.方法 根据人eIF4E mRNA序列设计并构建2个靶向人eIF4E基因的shRNA真核表达载体(pSilencer4.1-sl和psilencer4.1-s2);然后以脂质体转染的方法将shRNA表达质粒转染至人喉癌细胞系Hep-2,经G418筛选出稳定转染的阳性细胞.分别通过反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术对构建成功的2个shRNA干扰质粒进行有效性筛选,分析其eIF4E mRNA及蛋白表达水平,并筛选出表达抑制最强的稳定转染喉癌细胞系(Hep-2-s2).通过噻唑蓝(MTT)试验检测Hep-2-s2细胞的体外增殖活性,流式细胞仪技术(FCM)检测其细胞周期和凋亡变化情况.结果 经双酶切证实转录shRNA的目的 基因片段已成功克隆入pSilencer4.1-CMVneo真核表达载体中,经测序证明插入序列完全正确;eIF4E-shRNA2可以显著下调eIF4E mRNA及蛋白表达水平;eIF4E基因的表达下调明显抑制Hep-2细胞的体外增殖(P＜0.05);Hep-2-s2细胞的Go/G1期细胞比例显著增加了(14.7±1.1)%,而S期细胞比例减少了(13.2±1.6)%(P＜0.05);Hep-2-s2的细胞凋亡率显著增加到(18.3±1.7)%(P＜0.05).结论 shRNA介导的eIF4E基因表达下调可显著降低喉癌细胞的增殖活性,同时诱导其细胞周期阻滞和凋亡率增加,为喉癌基因治疗筛选出了新的靶点.     

白细胞介素-12抗NK/T细胞淋巴瘤的活性及其机制研究

目的研究白细胞介素-12(IL-12)的抗NK/T细胞淋巴瘤活性及机制。方法培养NK/T细胞淋巴瘤的YTS细胞株并分为对照组、IL-12组、NC siRNA组、JAK2 siRNA组、空白质粒组、JAK2表达质粒组,用含有0.625、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 ng·mL^-1 IL-12的培养基处理或转染NC siRNA、JAK2 siRNA、空白质粒、JAK2表达质粒,检测细胞活力、细胞凋亡、细胞周期及细胞中JAK2及STAT3的表达;选择C57小鼠并建立移植瘤模型,随机分为对照组及IL-12组后,测定移植瘤质量及JAK2、STAT3的表达。结果在YTS细胞中,IL-12以及JAK2 siRNA能够抑制细胞活力、细胞周期及细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达,诱导细胞凋亡(P<0.05);转染JAK2的表达质粒能够使20.0 ng·mL^-1的IL-12抑制细胞活力、细胞周期、细胞中p-JAK2、p-STAT3表达及诱导细胞凋亡的作用减弱;在移植瘤小鼠中,IL-12干预后,移植瘤质量及移植瘤中p-JAK2、p-STAT3的表达均明显下降(P<0.05)。结论IL-12具有抗NK/T细胞淋巴瘤的活性且其机制与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。     

白介素12联合组织途径抑制因子2基因转染对喉癌细胞侵袭与凋亡的影响

目的探讨腺病毒介导的白介素12（IL-12）与组织途径抑制因子2（TFPI-2）基因联合转染对喉鳞癌细胞侵袭及凋亡的影响。方法将IL-12与TFPI-2体外转染喉鳞癌Hep-2细胞,酶联免疫吸附（ELISA）法检测IL-12和TFPI-2蛋白在Hep-2细胞的表达,应用四甲基偶氨唑盐酶反应比色法检测转染后的喉癌细胞生长与增殖情况,Boyden侵袭小室实验检测Hep-2细胞侵袭能力的变化,应用流式细胞仪检测喉癌细胞的凋亡。结果ELISA结果显示IL-12和TFPI-2在实验组Hep-2细胞表达增高,Boyden侵袭小室法显示实验组Hep-2细胞的侵袭能力降低,流式细胞仪显示实验组Hep-2细胞凋亡显著增加。结论IL—12与TFPI-2基因联合转染能有效抑制人喉鳞癌Hep-2细胞的馒袭能力并促进其凋亡。     

干扰LOX基因对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响

目的 探讨抑制赖氨酰氧化酶（LOX）基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响。方法 转染LOX干扰质粒的 Hep-2细胞株,RT-PCR 检测 LOX mRNA,Western blot检测喉癌Hep-2细胞中LOX蛋白及细胞增殖侵袭相关蛋白Ki-67、PCNA、MMP-2/9的表达情况;MTT法检测不同剂量射线对Hep-2细胞生存率的影响,流式细胞术（FCM）检测 Hep-2 细胞凋亡。结果 转染 LOX干扰质粒后 Hep-2细胞中,LOX蛋白和 mRNA 的表达水平下调;Western blot结果显示转染组细胞LOX、Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达明显低于阴性对照组和空白对照组;同时不同剂量射线对Hep-2细胞生存率影响呈剂量依赖性,转染组细胞转染后联合放疗细胞凋亡率明显高于空白及阴性对照组。结论 LOX干扰可特异下调LOX表达,抑制细胞增殖侵袭,作用机制可能与Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达下调有关,并且可增强放疗敏感性,为临床提供一个新的靶点,提高喉鳞癌治疗效果。     

miRNA-221对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的miRNA-221-siRNA,探讨其下调miRNA-221对肝癌HepG2细胞系生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体pGCSIL-GFP,将重组miRNA-221-RNAi-LV感染肝癌HepG2细胞系中,设为实验干扰组(miRNA-221-siRNA,SI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和正常组(normal,N组);分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-221目的基因的表达情况;用噻唑蓝比色法检测增殖情况、transwell小盒迁移实验检测迁移情况、Hochest33258凋亡实验检测调亡情况.结果 (1) miRNA-221-RNAi-LV可显著降低miRNA-221的表达;(2) MTT实验96 h,SI组吸光度显著低于NC组和N组(P=0.003 2);(3)迁移能力明显减弱(P=0.000 4);(4)SI组细胞凋亡明显增加,促凋亡基因Caspase 3基因表达明显上调(P--0.000 2).结论 miRNA-221-siRNA通过抑制miRNA-221的表达抑制肝癌HepG2细胞增殖,促进肝癌HepG2细胞凋亡,降低其迁移能力.     

信号转导和转录激活因子基因表达的抑制及其对HepG_2细胞增殖的影响

目的探讨应用RNAi技术沉默信号转导和转录激活因子(STAT3)基因对肝癌HepG2细胞的影响。方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(SiRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,转染人肝癌细胞HepG2细胞。通过半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测STAT3基因mRNA和蛋白水平的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染后细胞增殖的变化。结果成功构建了pGeneSil 1-shRNA-STAT3重组质粒,并转染HepG2肝癌细胞;半定量RT-PCR、Western blot结果显示,重组质粒转染组细胞的STAT3基因表达在mRNA及蛋白水平上显著低于对照组;MTT实验结果显示,重组质粒转染组细胞的增殖明显受到抑制。结论pGeneSil 1.0-shRNA-STAT3转染HepG2肝癌细胞后,可有效抑制STAT3的表达,并抑制肝癌细胞的生长及增殖。     

siRNA沉默STAT3基因对TGF-β1诱导小鼠胰腺星状细胞活化的影响CSCD

目的通过siRNA沉默小鼠胰腺星状细胞中STAT3基因,探讨STAT3信号转导通路在慢性胰腺炎胰腺纤维化中的作用。方法根据Gene Bank中STAT3全长c DNA序列,选取特异性序列为干扰作用的靶点,构建STAT3siRNA表达载体,脂质体介导转染PSC,ELISA法检测PSC产生的趋化因子,MTT法检测胰腺星状细胞增殖,细胞爬片免疫组化染色检测α-SMA阳性细胞,Western blot和RT-PCR检测胰腺星状细胞STAT3蛋白及mRNA表达水平,在确定胰腺星状细胞内STAT3基因成功沉默的基础上,给予TGF-β1刺激PSC。结果和对照组相比,ELISA法,MTT法和细胞爬片免疫组化显示各时间点,诱导组、空载组和转染组A值,α-SMA,IL-6和MCP-1表达量均有所升高(P<0.01),转染组A值,α-SMA,IL-6和MCP-1表达量明显低于诱导组和空载组(P<0.01),诱导组和空载组A值,α-SMA、IL-6和MCP-1表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。PCR和Western blot结果显示,和对照组相比,诱导组、空载组和转染组α-SMA和Smad2表达明显升高(P<0.01),p-Smad2和PPAR-γ的表达明显降低(P<0.01),转染组α-SMA和Smad2的表达明显低于导组和空载组(P<0.01),p-Smad2和PPAR-γ表达明显高于诱导组和空载组(P<0.01)。转染组STAT3和p-STAT3表达明显低于对照组、诱导组和空载组(P<0.01)。结论siRNA通过调控STAT3信号通路介导下游靶基因的表达,参与抑制胰腺星状细胞活化、进而对抗胰腺纤维化。这一结果为慢性胰腺炎的治疗提供了新的治疗靶点。     

siRNA沉默STAT3基因对TGF-β1诱导小鼠胰腺星状细胞活化的影响

目的通过siRNA沉默小鼠胰腺星状细胞中STAT3基因,探讨STAT3信号转导通路在慢性胰腺炎胰腺纤维化中的作用。方法根据GeneBank中STAT3全长cDNA序列,选取特异性序列为干扰作用的靶点,构建STAT3siRNA表达载体,脂质体介导转染PSC,ELISA法检测PSC产生的趋化因子,MTT法检测胰腺星状细胞增殖,细胞爬片免疫组化染色检测α-SMA阳性细胞,Western blot和RT-PCR检测胰腺星状细胞STAT3蛋白及mRNA表达水平,在确定胰腺星状细胞内STAT3基因成功沉默的基础上,给予TGF-β1刺激PSC。结果和对照组相比,ELISA法,MTT法和细胞爬片免疫组化显示各时间点,诱导组、空载组和转染组A值,α-SMA, IL-6和MCP-1表达量均有所升高(P0.01),转染组A值,α-SMA, IL-6和MCP-1表达量明显低于诱导组和空载组(P0.01),诱导组和空载组A值,α-SMA、IL-6和MCP-1表达比较差异无统计学意义(P0.05)。PCR和Western blot结果显示,和对照组相比,诱导组、空载组和转染组α-SMA和Smad2表达明显升高(P0.01),p-Smad2和PPAR-γ的表达明显降低(P0.01),转染组α-SMA和Smad2的表达明显低于导组和空载组(P0.01),p-Smad2和PPAR-γ表达明显高于诱导组和空载组(P0.01)。转染组STAT3和p-STAT3表达明显低于对照组、诱导组和空载组(P0.01)。结论 siRNA通过调控STAT3信号通路介导下游靶基因的表达,参与抑制胰腺星状细胞活化、进而对抗胰腺纤维化。这一结果为慢性胰腺炎的治疗提供了新的治疗靶点。     

Hsulf-1在肝癌细胞系中的作用及STAT3信号通路研究

目的基于肝癌细胞中人硫酸酯酶-1(human sulfatase-1,Hsulf-1)基因对STAT3信号通路的影响,探讨Hsulf-1基因在肝癌发生发展中的作用。方法应用RT-PCR方法测定Hsulf-1在肝癌细胞中的表达;通过Western blot方法测定Huslf-1在HGF加入前后对STAT3磷酸化(p-STAT3)水平及下游蛋白的影响。结果 5-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-d C和曲古抑菌素Actrichostain A,TSA)处理Hep G2细胞中Hsulf-1表达增加,且2者具有协同作用;与正常细胞相比,Hsulf-1在肝癌细胞系中(Hep G2,Hep3B,Huh-7,SMMC-7221)表达水平下降,在转染pc DNA3.1(+)/Hsulf-1以及pc DNA3.1(+)/STAT3siRNA-Hsulf-1中的Hep G2细胞,Hsulf-1的蛋白表达量增加,p-STAT3和c-met的表达水平下降,在未转染组以及转染阴性siRNA的Hep G2细胞中,结论则相反。结论 Hsulf-1在肝癌细胞中表达下降;Hsulf-1在肝癌细胞中可抑制由HGF刺激的p-STAT3及下游蛋白的表达水平。     

细胞因子信号传导抑制蛋白1对糖基化终末产物诱导的肾小管细胞转分化的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用白蛋白和AGEs进行刺激。采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenI,ColI)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和ColI蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。