丁型肝炎病毒核酶在分子水平对丙型肝炎病毒RNA的反式剪切活性

锤头状核酶(hammerhead ribozyme)和发夹状核酶(hairpin ribozyme)能特异性定点剪切靶RNA分子,可用于抗病毒、抗肿瘤等基因治疗［1］。但假结样核酶（pseudoknot ribozyme）,如丁型肝炎病毒（HDV）核酶,包括基因组核酶（genomic ribozyme）和抗基因组核酶（antigenomic ribozyme）,是否具有抗病毒等活性,迄今研究鲜见［2］。本研究旨在评价基因组核酶对丙型肝炎病毒（HCV）RNA在分子水平的剪切活性。     

丁型肝炎病毒基因组核酶的反式剪切活性

目的 观察丁型肝炎病毒２种基因组核酶（ＨＤＶ ｇｅｎｏｍｉｃ ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ｇ Ｂｚ）是否存在式剪切活性。方法 合成ｇ。．Ｒｚ７４、ｇ．Ｒｚ５５的ＣＤＮＡ，克隆人质粒ｐＧＥＭ－４Ｚ，体外转录获取核酶ＲＮＡ，同时从质粒Ｒｚ２７７Ｂ上转嫌出同源性底物ＲＮＡ，以β－３２ｐ－ＵＴＰ标志，再将核酶与底物按比例混合，在一定条件下观察是否出现的剪切作用，结果 启动反应３０ｍｉｎ后，可以观察到的切产物，９０ｍ     

锤头状核酶RCP对HBV的P基因体外转录物的作用

本文根据Ｈａｓｅｌｏｆｆ和Ｇｅｒｌａｃｈ发表的锤头状核酶结构，设计合成了针对ＨＢＶａｙｗ株Ｐ基因５＇－端２３６０位点（ＧＵＣ）的核酶ＲＣＰ，其作用底物为ＨＢＶａｙｗＰ基因的翻译起始区（２１４０－２４２２区段），运用基因克隆结合体外转录的方法，评价了ＲＣＰ的切割活性，结果表明，ＲＣＰ在体外成功地切割了长为３４０个核苷酸的靶ＲＮＡ分子，这一工作为多们进一步在细胞内评价ＲＣＰ抑制ＨＢＶ全基因组复制及其知     

锤头状核酶的设计,构建及与反义RNA在阻断HBV基因表达中的比较研究

锤头状核酶的设计、构建及与反义ＲＮＡ在阻断ＨＢＶ基因表达中的比较研究ＤｅｓｉｇｎａｎｄｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅａｎｄｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｉｔｓｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｅｃｔｏｎＨＢＶｇｅｎｅｅｘｐ...     

献血员庚型肝炎病毒感染的血清流行病学研究

庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ)是近年来新发现的一种新型肝炎病毒 ,其基因组为单股正链的ＲＮＡ病毒 ,主要经血传播 ,可致急、慢性肝炎和无症状病毒携带状态。ＨＧＶ感染呈全球分布 ,我国ＨＧＶ感染分布较广 ,流行较为严重[1] 。为了解合肥地区献血员中ＨＧＶ感染情况 ,我们于 1998年     

庚型肝炎病毒的临床检测

庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ)是 1995年美国Ｇｅｎｅｌａｂｓ的Ｋｉｍ等和Ａｂｂｏｔｔ公司的Ｓｉｍｏｎｓ等发现的人类致肝炎病毒。ＨＧＶ为单股正链ＲＮＡ病毒 ,与丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)同属黄病毒属ＲＮＡ病毒 ,且具有相似的传播途径 ,但对其流行病学和临床特点等问题还了解甚少。本文应用套式聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术检测ＨＧＶ ,同时检测乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ) ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ、抗甲型肝炎病毒 (ＨＡＶ) ＩｇＭ ,抗戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ) ,丙氨酸氨基转移酶 (ＡＬＴ) ,天门冬酸氨基转移酶 (ＡＳＴ) ,血清胆红素 (ＳＢ) ,对 731例患…     

庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)临床研究进展

庚型肝炎病毒(ＨＧＶ/ＧＢＶ-Ｃ)是1995年美国Ｓｉｍｏｎｓ等[1]率先应用分子生物学技术发现的一种新型肝炎相关病毒(以下简称ＨＧＶ),其基因组为单股正链ＲＮＡ,与丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)同属黄病毒科。ＨＧＶ的发现,引起国际医学界的广泛关注并开展了大量研究。几年来有关ＨＧＶ诸方面的研究不断取得新的进展,研究结果表明,该病毒主要经血和血制品等肠道外途径传播。静注毒品成瘾者、血液透析病人、多次受血或使用血制品者、各种急慢性肝炎病人、器官移植病人以及肝炎相关的再生障碍性贫血病人等,是ＨＧＶ感染的高危人群。但由于庚型肝炎(Ｈ…     

丙型肝炎病毒干扰素敏感决定区基因“盒”的研究

目前公认对丙型肝炎治疗有效的药物是干扰素 ,其最终疗效亦只有 2 0 %左右。影响干扰素疗效的因素是多方面的[1] ,其中位于丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)非结构蛋白ＮＳ5Ａ的第2 2 0 9至 2 2 48位氨基酸序列与干扰素疗效密切相关 ,该区域称为干扰素敏感决定区 (ＩＳＤＲ) [2 ,3] 。干扰素的抗ＨＣＶ作用机理并不完全清楚 ,有报道认为干扰素诱导的细胞内抗病毒作用部分是由干扰素诱导的ＲＮＡ蛋白激酶 (ＰＫＲ)介导的[4 ,5] 。我们构建了含不同ＩＳＤＲ的基因“盒” ,在体外表达相应的蛋白质 ,探讨它们与ＰＫＲ的关系 ,试图从分子水平了解ＨＣＶ对干…     

39例庚型肝炎与乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒重叠感染的临床分析

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）是近年来发现的新型肝炎病毒。１９９６年１１月,Ｌｉｎｎｅｎ等在Ｓｃｉｅｎｃｅ上发表了它的基因组全序列〔１〕。我国学者也相继报道,从不同来源的血清标本中,检出了ＨＧＶＲＮＡ〔２～４〕。我们采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法,从各类肝病患者中,...     

抗HBVC基因核酶自剪切转录载体的构建

抗ＨＢＶＣ基因核酶自剪切转录载体的构建＊连建奇１周永兴１金由辛２（１第四军医大学唐都医院传染科西安７１００３８２中国科学院上海生物化学研究所）关键词乙型肝炎病毒Ｃ基因核酶自剪切中图号Ｒ５７５．１核酶（Ｒｚ）是一类具有酶特异性的ＲＮＡ分子，它能够序列特...     

乙型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响

惭型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响。方法 利用计算机辅助设计针对乙型肝炎病毒Ｃ基因的三个单一核酶构建Ｒｚ１核酶自剪切转录载体（ｐＧＥＭＲｚ１）,观察单一核酶（Ｒｚ１）对靶ＲＮＡ的切割作用及乙型肝炎病毒观察单一核酶（Ｒｚ１）对靶ＲＮＡ的切割作用及乙型肝炎病毒蛋白对核酶剪切作用的影响。结果 核酶自剪切转录载体体２上转录后,在顺式核酶发生自剪切后可将目的核酶正确地释放出来,计算机设计的单一核酶体外可剪     

丙型肝炎抗病毒治疗研究进展

丙型肝炎病毒 (以下简称ＨＣＶ)是美国学者于 1989年首先发现的一种肝炎病毒 ,其类似黄病毒 ,属单股正链ＲＮＡ病毒。该病毒基因变异株多、有氨基酸编码变异准种和常呈低水平复制等 ,感染人体后 ,大部分转为慢性ＨＣＶ感染 ,可导致肝硬化和肝细胞癌。经过十几年的研究 ,丙型肝炎的抗病毒治疗取得了较大进展 ,目前认为 ,合理有效的抗病毒治疗是防止丙型肝炎慢性化、纤维化和重症化的重要措施。现将近年来抗ＨＣＶ治疗研究进展综述如下 :1　抗ＨＣＶ治疗应答监测的指标在发现ＨＣＶＲＮＡ以前 ,人们把ＡＬＴ作为考核治疗慢性非甲非乙型输血后…     

125例丁型肝炎患者血清乙型肝炎病毒标志物的检测分析

丁型肝炎病毒 (ＨＤＶ)是一种缺陷ＲＮＡ病毒 ,一般认为其复制过程需要ＨＢｓＡｇ的帮助才能完成其存活周期[1 ] 。为探讨ＨＤＶ是否可以不依赖嗜肝ＤＮＡ病毒而独立进行ＲＮＡ复制和ＨＤＡｇ表达 ,我们对 12 5例ＨＤＶ阳性血清进行ＨＢＶ标志物检测 ,其结果分析如下。1　临床资料1.1　检测对象　系温州医学院第一附属医院 1998年 5月至2 0 0 0年 10月间肝炎门诊的ＨＤＶ感染者 12 5例 ,男 10 2例 ,女2 3例 ,年龄 17～ 6 8岁 ,平均 39岁。抗ＨＤＶ ＩｇＭ经重复测定均为阳性 ,ＨＡＶ ＩｇＭ、抗ＨＣＶ和抗ＨＥＶ ＩｇＭ经测定均为阴性。1.2…     

抗丙型肝炎病毒核心IgM抗体与α—干扰素疗效的关系

抗丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)核心ＩｇＭ抗体 (抗ＨＣＶ ｃＩｇＭ ) ,作为ＨＣＶ活跃复制的血清学指标 ,已广泛应用于临床诊断[1,2 ] 。为了解慢性丙型肝炎患者用α 干扰素 (α ＩＦＮ)治疗时 ,血清抗ＨＣＶｃＩｇＭ检测结果与疗效的关系 ,我们对 35例接受α ＩＦＮ治疗的慢性丙型肝炎患者在治疗前、治疗结束和随访期的系列血清检测抗ＨＣＶｃＩｇＭ ,同时根据ＨＣＶＲＮＡ和血清ＡＬＴ的检测结果将此 35例患者分为治疗应答组、无应答组和反复组 ,对各组的抗ＨＣＶｃＩｇＭ检测结果进行了对比分析 ,结果报告如下。材料与方法一 .研究对象35例慢…     

丁型肝炎病毒RNA巢式逆转录PCR检测

为了提高丁型肝炎病毒的实验室诊断水平，建立一个高敏感性和特异性的丁型肝炎病毒的检测方法。根据ＧＥＮＢＡＮＫ中ＨＤＶ的核酸序列设计出巢式引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ方法对４０例肝炎患者进行检测。结果：２０例丁型肝炎病毒抗原阳性的ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，１０例丁型肝炎病毒抗体阳性中ＨＤＶＲＮＡ阳性６例，１０例单纯ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性的均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论：巢式逆转录ＰＣＲ可以作为丁型肝炎病毒临床检测的一种方法     

丙型肝炎病毒非结构区的研究进展

198 9年美国的Ｃｈｉｒｏｎ公司和美国疾病控制中心 (ＣＤＣ)通力合作 ,摒弃传统病毒学研究方法 ,将分子克隆技术首先引用到肝炎病毒学研究中 ,并于当年成功地获得第一个ＨＣＶｃＤＮＡ克隆[1 ] 。此后几十年内 ,有关ＨＣＶ的形态、结构、生物功能的研究已取得了很大的进展。对ＨＣＶ基因组序列的比较分析表明 ,非结构区编码的蛋白包括几个重要功能元件基序 ,他们在病毒的复制及致病中起着重要的作用 ,这些结构的功能均由体外实验证实。现就近年来有关ＨＣＶ非结构区的研究 ,综述如下。1　ＮＳ2ＮＳ2基因位于ＨＣＶ基因组 2 772～ 34 19核苷…     

原发性肝癌患者肝组织中HCVRNA和HCV抗原的定位

分别用原位杂交过氧化物酶与抗氧化物酶复合物法检测了７３例肝细胞癌患者肝组织切片中的丙型肝炎病毒ＲＮＡ和ＨＣＶ抗原以及乙型肝炎病毒的表面抗原和核心抗原。结果显示：ＨＣＶＲＮＡ，ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检测出率分别为２６．０％，２８．８％，７５．３％和２６．０％；ＨＣＶ阳性的肝细胞多呈散在型分布，可见有ＲＮＡ，ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检测率分别为２６．０％     

抗乙型肝炎病毒特异联合型核酶的体外切割作用

目的：探讨单一及多位点核酶对乙型肝炎病毒靶ＲＮＡ的切割作用。方法：利用计算机辅助设计针对乙型肝炎病毒Ｃ基因的三个单一核酶及特异联合型核酶,构建三个核酶各自及三个核酶串联的自剪切转录载体（ｐＧＥＭＲｚ１２３）观察单一及串联核酶（Ｒｚ１２３）对靶ＲＮＡ的切割作用。结果：构建的串联核酶自剪切转录载体体外转录后,在顺式核酶发生自剪切后可将目的核酶正确地释放出来,计算机设计的单一核酶体外可剪切靶ＲＮＡ,串联     

多重PCR扩增HBVDNA，HCVRNA和HDVRNA方法的建立

多重ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ，ＨＣＶＲＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ方法的建立阎小君，肖乐义，李陕区，苏成芝，郭晏海（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词聚合酶链反应；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；丁型肝炎病毒中图号Ｑ５２３乙型肝炎病毒（ＮＢＶ）和丙型...     

抗肿瘤核酶的研究进展

20世纪 8 0年代初 ,由美国科学家Ｃｅｃｈ和Ａｌｔ ｍａｎ发现了核酶 (Ｒｉｂｏｚｙｍｅ) ,它是一类具有生物催化活性的ＲＮＡ分子 ,可通过碱基配对特异性地与靶ＲＮＡ底物结合 ,定点切割ｍＲＮＡ靶分子 ,是一类很有希望的基因功能阻断剂 ,被形象地称为“分子剪刀”。它在抗病毒、抗肿瘤等领域的应用研究是目前基因治疗中的一个热点。本文简述核酶在抗肿瘤应用中的研究进展。1　核酶抗ｒａｓ基因ｒａｓ癌基因在细胞发育和肿瘤发生中起重要作用。ｒａｓ基因家族有Ｈ -ｒａｓ、Ｎ -ｒａｓ和Ｋ -ｒａｓ ,它们编码的蛋白质参与信号传导途径。肿…