丙型肝炎病毒体外细胞转染模型的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)自1989年由美国学者Choo等首次从受感染的黑猩猩血清中分离得出,学者们对HCV体外培养体系进行了大量相关研究。从HCV动物模型到细胞模型,从HCV细胞感染模型到转染模型,从HCV亚基因组复制子到全基因组细胞培养体系,期望找到一种能够支持HCV体外复制的稳定可行的培养体系,来研究HCV复制机制和致病机制,尽早开发出新的抗HCV药物和有效的疫苗。     

慢性荨麻疹和肝炎病毒感染的相关性研究进展

荨麻疹病因复杂,多种多样。近年来发现肝炎病毒感染不仅可以引起肝细胞的损伤,也可以引起肝外组织的损伤和相关症状,特别是乙型和丙型肝炎病毒感染,他们与慢性荨麻疹的发病也存在一定联系。本文的目的是系统的分析近年来国内外报道的慢性荨麻疹与乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒感染的相关性研究。通过临床表现和皮肤病理、皮肤免疫病理方面的调查研究,认为肝炎病毒感染,特别是乙型和丙型肝炎病毒感染,可能引起免疫复合物介导的肝外组织的损伤与免疫反应,与慢性荨麻疹的发生发展有相关性。     

B1细胞与乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒的感染

病毒性肝炎的发病机制迄今为止尚未完全明确,乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)所致肝炎可能是肝脏细胞免疫防御反应病毒入侵的结果。B1细胞是新近认识的一种B细胞亚群,CD5分子是其特征性分子标志。CD5+B1细胞是机体防御肝炎病毒入侵的重要天然免疫细胞。CD5+B1细胞与机体内HBV感染的慢性化密切相关。CD81与CD5间通过分子串话机制直接参与HCV对宿主细胞的感染。     

乙型和丙型肝炎病毒重叠感染的临床观察与分析

我们对43例乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒重叠感染的病例进行了临床观察及分析.     

后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒模型的建立

目的:建立并验证后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒(DHBV)模型。方法:筛选3日龄DHBV阴性河南樱桃谷鸭,经胫静脉注射DHBV阳性血清建立DHBV模型鸭,连续观察42 d,采用荧光定量PCR方法检测鸭血清和肝脏中DHBV DNA变化情况。DHBV阴性鸭48只,分为正常组、模型组和3TC组,每组16只。模型组和3TC组于鸭3日龄时建模,模型组给予生理盐水2 mL/(kg·d),3TC组给予3TC 20 mg/(kg·d),连续给药10 d。PCR检测给药5、10 d后及停药3 d后血清和肝脏中DHBV DNA含量,并进行肝脏病理学观察。结果:感染2 d后,鸭血清和肝脏中均可检测到DHBV DNA。血清DHBV DNA水平第14天达到高峰,拷贝数为7.7×109mL-1,肝脏DHBV DNA第21天达到高峰,拷贝数达2.1×109mL-1,42 d内均维持较高的DHBV DNA水平。与模型组比较,3TC组鸭血清和肝脏DHBV DNA拷贝数明显降低(血清:F组间=17.625,F时间=68.141,F交互=134.517,P<0.001;肝脏:F组间=69.430,F时间=35.330,F交互=75.770,P<0.001)。3TC组鸭用药10 d后,血清和肝脏HBV DNA抑制率分别为86.5%和84.9%,但停药3 d后有轻度"反弹"现象。3TC组肝组织病变较模型组有明显改善。结论:河南樱桃谷鸭后天感染DHBV较敏感,病毒在体内增殖稳定,是DHBV感染的理想动物模型。     

乙型丙型肝炎病毒合并感染的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)是引起慢性肝病的常见原因,相当一部分HBV和/或HCV的慢性感染可发展为肝硬化,甚至可并发肝细胞癌(HCC).HBV和HCV双重感染的病人常可造成更为严重的肝病和增加HCC发生的危险性.合并感染的病人表现为不同的病毒复制和免疫状态.现就近年来对于HBV和HCV合并感染临床特征的文献作一综述.     

乙型肝炎、丙型肝炎病毒相关性肝癌基因差异表达的生物信息学分析

目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)相关性肝癌的差异表达基因,探讨其基因功能富集的差异,促进对HBV、HCV相关性肝癌致病机理的了解。方法:从公共基因芯片数据库中下载数据集GSE44074,利用在线软件GEO2R筛选HBV相关性肝癌与HCV相关性肝癌间的差异表达基因,利用DAVID数据库、基因集富集分析(GSEA)方法等分析预测HBV、HCV相关性肝癌的基因功能富集的差异。结果:利用数据集GSE44074共筛选出34个差异表达基因(矫正后P<0.05)。HBV相关肝癌样本中高表达的基因与多细胞组织加工和生物学过程负向调控有关。HCV相关肝癌组中线粒体呼吸链、细胞器膜蛋白及线粒体膜功能等基因功能集存在显著上调。结论:HBV、HCV相关性肝癌样本间存在多个差异表达基因及差异基因功能富集。     

乙型和丙型肝炎病毒重叠感染的研究

目的：我国是乙型肝炎和丙型肝炎发病率较高的国家。而HBV和HCV有着相同的传播途径，为了解乙型肝炎病毒携带者和乙型肝炎患者重叠感染丙型肝炎病毒（HCV）状况，并探讨乙型肝炎病毒（HBV）、HCV重叠感染相互之间的影响。方法：应用ELISA法对726例HBV携带者和乙型肝炎患者进行了血清抗-HCV检测和HBV标志物检测。结果：726例HBV携带者和乙型肝炎患者血清抗-HCV阳性率为10．47％，男性阳性率为15．78％，女性阳性率为1．87％，年龄组以31—40岁阳性率最高为24．64％，不同人群以吸毒人员阳性率最高为78．89％。结论：HBV、HCV重叠感染通过注射是主要感染途径；HBV、HCV重叠感染者血清抗-HBe阳性率高于HBV携带者，显示HBV、HCV重叠感染使HBV的复制受到抑制。     

重型肝炎中甲、乙型肝炎病毒合并感染的探讨

报告经血清免疫学抗HAVIgM、抗-HBcIgM、HBV-DNA、HBsAg/IgM复合物以及乙肝三种抗原抗体系统检测48例重型肝炎中甲、乙型肝炎病毒感染情况。结果:31例为HBV感染,1例为HAV感染,1例未定型,15例(31.25％)为甲、乙型合并感染(混合感染7例、重叠感染8例)。15例中亚急性10例、慢性5例;死亡或恶化10例,与同期“单纯”感染的重肝比较,包括主要临床生化指标均无显著差异。有7例患者病程中有近期出现“急黄肝”症状的历史,随后病情突然加重;1例发生在住院期间,且血清抗-HAVIgM转阳,最后死亡。认为合并感染可使部分急、慢性肝炎病情加重,甚至发展成重型。应注意发现。     

多重PCR检测HBV和HCV方法的建立

目的:建立可同时检测血清HBVDNA和HCVRNA的多重PCR。方法:利用已知的基因序列设计了对于不同亚型HBV保守的C基因区的一对引物HBV-P623及对于不同亚型HCV高度保守的位于5’端非编码区(5’-NCR)的两对引物HCV-P289和HCV-P174,扩增经基因释放剂(Genereleaser)处理的HBV和HCV阳性血清。结果:多重引物、逆转录套式PCR反应体系可同时扩增HBV DNA和HCV RNA,分别在623bp和174bp处出现特异DNA扩增带。该反应体系具有较高的特异和敏感性,受检血清中仅含有10fgHBV DNA和5CID HCV RNA即可检出。血清标本不需要提取核酸,可直接进行PCR。用此体系检测30例输血后病人血清,其中15例为HBV感染,8例为HCV感染,7例为阴性。结论:多重PCR检测HBV及HCV的方法具有简便性和实用性。     

HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCVRNA检测的临床意义

目的探讨HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCV RNA检测的临床意义。方法收集我院HCV感染及其与HBV重叠患者血清标本共179例,分为慢性丙型肝炎组（n=101）、肝硬化组（n=45）和肝癌组（n=33）。采用ELISA法检测血清抗HCV,用荧光定量PCR检测HCV RNA;对重叠感染HCV和HBV的31例患者同时检测HBVDNA。结果 179例患者抗HCV的总阳性率为97.8%,高于HCV RNA的阳性率（69.8%）（P〈0.01）。肝硬化组和肝癌组HCV RNA的阳性率分别为82.2%和84.8%,高于慢性丙型肝炎组阳性率64.4%（P〈0.05）。HCV与HBV重叠感染组的HCV RNA的阳性率为48.4%,低于单纯HCV感染组的HCV RNA阳性率（71.6%）（P〈0.05）。HCV与HBV重叠感染患者的HBV DNA阳性率为35.5%,也显著低于单纯HBV感染患者阳性率（76.7%）（P〈0.01）。HCVRNA阳性组ALT异常率（60.8%）高于HCV RNA阴性组（35.2%）（P〈0.05）。结论对HCV感染相关的不同疾病患者联合检测抗HCV、HCV RNA和ALT,对于HCV和HBV重叠感染者同时检测HBV DNA,有利于疾病的明确诊断、病情观察及预后判断。     

122例艾滋病患者合并乙肝病毒 丙肝病毒感染的临床流行病学研究

目的 研究在抗逆转录病毒药物治疗(HAART)状态下HIV/AIDS患者合并乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)的流行状况以及相关血清生化和病毒学特征.方法 对122例正在接受HAART治疗的HIV/AIDS患者采集血标本,使用酶免法(ME-IA)检测乙肝五项指标(HBs Ag、抗-HBs、HBe Ag、抗-HBe、抗-HBc)、肝功能,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体,运用RT-PCR法对丙肝病毒抗体阳性标本以及表面抗原和/或核心抗体阳性标本分别进行HCV-RNA以及HBV-DNA测定.以43名单纯HCV感染者作为对照组进行研究.结果 122名 HIV/AIDS患者,乙肝五项指标全阴性97例(78.86％),表面抗原阳性3例(2.46％),表面抗体阳性者总计19例(15.57％),单纯核心抗体阳性者3例(2.46％).HCV 抗体阳性84例(68.85％),84例HCV抗体阳性标本中HCV-RNA 阳性58例(69.05％),HIV/HCV/HBV合并感染者为0.HIV/HCV合并感染组 HCV-RNA 水平与感染者性别,CD4 +细胞数水平无明显差异(P＞0.05);HIV/HCV合并感染组与单纯HCV感染组 HCV-RNA水平、肝功能异常率无明显差异(P＞0.05).结论 HIV感染者HBsAg阳性率低于普通人群,HIV/HCV合并感染的比例显著高于普通人群.HIV/HCV合并感染与单纯HCV感染者血清生化及病毒学改变相似.     

合并病毒性肝炎HIV感染患儿接受高效抗逆转录酶病毒治疗后肝功能变化

目的：观察获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患儿合并乙型肝炎病毒（HBV）/丙型肝炎病毒（HCV）感染与否在接受1年高效抗逆转录酶病毒疗法（HAART）后肝功能的变化情况。方法：收集2011年3月至2012年3月河南省141例AIDS患儿HAART治疗1年前后临床资料,分为HIV+HBV+HCV组（n=78）,HIV+HBV组（n=19）,单纯HIV组（n=44）。治疗前后分别用逆转录PCR检测血浆HIV RNA载量,流式细胞术检测CD4+T细胞数,酶联免疫吸附试验检测HCV抗体和HBV表面抗原,全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和总胆红素（TB）水平。结果：HAART治疗1年后,90.34%（127/141）患儿HIV RNA载量下降到检测水平以下（t=2.61, P<0.01）,CD4+T细胞数从（170.187±132.405）个/μl上升到（796.014±158.491）个/μl（t=3.17, P<0.01）。HAART治疗后患儿的转氨酶均升高（t=2.02, 均P<0.05）,奈韦拉平治疗组的ALT和AST分别由治疗前（18.28±13.74）U/L和（24.23±8.09）U/L升高到（55.35±22.40）U/L和（69.97±26.72）U/L（t=3.80、4.11,均P<0.01）,同时奈韦拉平治疗组的ALT和AST变化量亦明显高于依非韦伦治疗组(均P<0.01);使用奈韦拉平治疗的HIV+HBV+HCV合并感染患儿ALT和AST的变化量亦显著高于使用依非韦伦治疗患儿(均P<0.01)。结论：无论是否合并HBV/HCV感染,HAART均能有效抑制病毒复制,使CD4+T细胞计数上升,但同时会一定程度损伤肝细胞,尤见于合并感染者;正确选择用药方案,能够减少药物不良反应。     

表达HBV的SMMC-7721人肝癌细胞系模型的建立

目的：建立表达ＨＢＶ的体外培养的细胞克隆，为研究ＨＢＶ的生物学性状提供良好的细胞模型。方法：将３．２ｋｂＨＢＶ ＤＮＡ插入携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体ｐＣＮＣＸ，应用磷酸钙沉淀技术将其导入体外培养的ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞系。结果：成功地获得表达ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的细胞克隆。结论：应用磷酸钙沉淀技术将ＨＢＶ ＤＮＡ导入体外培养的细胞克隆，获得能表达ＨＢＶ的细胞克隆，为研究ＨＢＶ表达     

广西部分地区人类免疫缺陷病毒感染者合并丙型肝炎病毒感染情况分析

目的 了解广西人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者中HIV/丙型肝炎病毒(HCV)的混合感染率及其HCV RNA的阳性率,为今后HIV患者丙肝筛查及预防提供参考.方法 采用ELISA法检测HIV感染者血清中的丙肝病毒抗体,按结果分成抗-HCV(+)组和抗-HCV(-)组,再用巢式PCR法检测血清的HCV RNA,分析比较HCV RNA阳性率.结果 在300例HIV感染者中,有146例抗-HCV阳性,154例抗-HCV阴性;在抗-HCV阳性组中,HCV RNA的阳性率为78.08％(114/146);在抗-HCV阴性组中,HCV RNA阳性率为26.62％(41/154);ELISA法和巢式PCR法检测HCV感染的符合率为75.67％[(113+114)/300].结论 在广西的HIV感染者中HCV感染状况较严重.对HIV感染者进行丙肝筛查时,为减少漏诊率,建议采用PCR方法检测抗-HCV阴性血清中的HCV RNA.     

昆明地区丙型肝炎病毒感染者与HIV合并丙型肝炎病毒感染者肝损伤研究简

目的探讨单纯丙型肝炎病毒（HCV）感染和人类免疫缺陷病毒（HIV）合并HCV感染者肝损伤的差异。方法对抗病毒治疗前的HIV合并HCV感染患者、HIV感染者和单纯慢性HCV感染者进行病毒载量、肝功能[包括天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和总胆红素（TBIL）水平]和CD4＋T淋巴细胞计数的检测,对实验数据进行统计学分析。结果纳入研究的325例HIV合并HCV感染患者、97例单纯慢性丙型肝炎患者和582例单纯HIV感染者均存在肝功能异常,以单纯慢性HCV感染患者肝功能异常最为明显;合并感染者按HCV病毒载量分为HCVRNA〉1×10^3 IU／ml、〉1×10^4 IU／ml和〉1×10^5 IU／ml等三组,发现组间肝损伤的差异无统计学意义;合并感染患者按CD4＋T淋巴细胞数水平分为〉200个／ul和〈200个／ul两个组,组间肝损伤的差异无统计学意义。结论抗病毒治疗前单纯慢性HCV感染者的肝损伤程度较HIV／HCV合并感染者严重,合并感染者其HCV病毒载量和CD4＋T淋巴细胞水平差异对肝损伤程度无影响。     

南宁市102例HIV/HCV共感染者HCV基因型特征分析

目的了解南宁市静脉注射吸毒人群(IDUs)中HIV/HCV共感染者HCV基因亚型流行情况。方法收集2012—2014年间南宁市静脉注射吸毒人员HIV/HCV共感染者血浆样本总共108份,设计特异性引物,通过巢式PCR对HCV NS5B区域长339 bp的片段进行扩增并测序,构建系统进化树对HCV进行基因分型。结果 108份血浆样本中巢式PCR成功扩增基因片段102份,系统进化分析显示检出4种HCV基因型含6种基因亚型,各基因亚型所占样本比例为6a 34.31%(35/102)、3b 33.33%(34/102)、1a 20.59%(21/102)、1b 6.87%(7/102)、3a 3.92%(4/102)和2a 0.98%(1/102)。在不同人口学特征时102份样本HCV基因型组成差异无统计学意义(P0.05)。结论南宁市IDUs人群HIV/HCV共感染者中至少存在6种HCV基因亚型流行,6a、3b和1a为主要流行亚型。