单侧前牙反牙合对大鼠下颌髁突软骨内CaR、PTHrP表达的影响研究

目的　探索单侧前牙反牙合（unilateral anterior crossbite,UAC）对大鼠下颌髁突软骨内钙离子敏感受体（calcium-sensing receptor,CaR）、甲状旁腺激素相关蛋白（parathyroid hormone-related protein,PTHrP）分子表达以及软骨细胞增殖和发育的影响。方法　选择6周龄雌性SD大鼠48只,根据实验时间点（2、4、8周）随机分为3大组,每大组再随机分为2组（对照组、UAC实验组）,每组动物数量8只。对SD大鼠施加UAC刺激,于2、4、8周后分别处死各组大鼠,对颞下颌关节软骨进行CaR、PTHrP、PTHrP 受体（PPR）分子的免疫组化染色,提取软骨内mRNA进行增殖标志分子、软骨细胞表型分子和终末分化相关分子的Real-time PCR检测。结果　UAC实验组大鼠髁突软骨2周时即开始出现CaR的表达增高,4周时继发有PTHrP的表达上调,但是其惟一受体PPR的表达从2周时即显著降低;增殖标志分子和软骨细胞表型分子的表达从2周时开始显著降低,终末分化相关分子的表达从4周开始显著增高。结论　UAC可导致下颌髁突软骨内CaR、PTHrP表达改变,进而影响软骨细胞的增殖和分化状态。     

生长分化因子11对小鼠颞下颌关节骨关节炎髁突软骨细胞脂肪化的影响

目的 观察生长分化因子11(GDF11)对小鼠颞下颌关节(TMJ)骨关节炎(OA)髁突软骨细胞脂肪化的影响.方法 对雌性6周龄C57小鼠施加单侧前牙反(牙合)(UAC)刺激并局部注射GDF11.取TMJ髁突软骨进行番红O染色;GDF11、脂联素(Adiponectin)免疫组织化学染色;实时定量聚合酶链式反应(real...     

骨髓间充质干细胞来源的外泌体促进髁突软骨细胞再生的研究

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)外泌体(Exo)对髁突软骨细胞的细胞增殖、细胞周期及相关基因表达的影响.方法 获取大鼠BMSC和髁突软骨细胞.收集第三代BMSC培养72 h上清液,采用超速离心法提取Exo.实验组使用外泌体(BMSC-Exo)进行髁突软骨细胞培养,对照组使用低糖培养基进行髁突软骨细胞培养.细胞...     

异常咬合对小鼠髁突软骨细胞内质网应激性凋亡的影响研究

目的探讨异常咬合对小鼠髁突软骨细胞内质网应激性凋亡的影响。方法选取6周龄雌性C57BL/6J小鼠54只,随机分为4组,分别饲养1、3、7、11周,其中饲养1、3、7周的小鼠(各12只)再随机分为对照组和单侧前牙反(unilateral anterior crossbite,UAC)组,饲养11周的小鼠(18只)再随机分为对照组、UAC组和去冠组(UAC刺激7周后去除UAC刺激继续饲养至11周),每组小鼠均为6只。各组小鼠处死取材后对髁突软骨进行HE染色、糖相关蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,Caspase12)免疫组织化学染色以及TUNEL染色。结果(1)HE染色结果显示:各饲养期对照组小鼠髁突软骨细胞层次鲜明,软骨内细胞排列整齐;UAC组小鼠髁突软骨内软骨细胞数目减少,排列紊乱,随着时间延长这些变化逐渐加重。与同饲养期对照组相比,UAC组小鼠髁突软骨细胞密度、软骨厚度均显著减小(均P<0.05);去冠组小鼠髁突软骨细胞分层情况明显改善,软骨细胞密度、软骨厚度较UAC组有显著增加(均P<0.05),而与同饲养期对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)免疫组织化学染色、TUNEL染色结果显示:各饲养期对照组小鼠髁突软骨中GRP78阳性细胞在软骨浅层和深层均有分布,Caspase12阳性细胞主要分布在软骨深层,但数量均很少;UAC组小鼠髁突软骨中出现大量GRP78和Caspase12阳性细胞。UAC组小鼠髁突软骨GRP78、Caspase12和TUNEL阳性细胞率均高于同饲养期对照组(均P<0.05);去冠组小鼠髁突软骨GRP78、Caspase12和TUNEL阳性细胞率均显著低于UAC组(均P<0.05),而与同饲养期对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论异常咬合促进髁突软骨细胞内质网应激性凋亡,从而加重髁突软骨的退行性变。     

实验性单侧前牙反牙合修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白和PTH/PTHrP受体-1表达的影响

目的 探讨实验性单侧前牙反牙合修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）及PTH/PTHrP 受体-1（PTH1R）表达的影响。方法 在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反牙合关系,2、 4、8周后取颞下颌关节（TMJ）,苏木精-伊红（HE）染色观察组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应检测PTHrP、PTH1R的表达情况。结果 8周时,实验组髁突软骨出现明显退行性变,PTHrP阳性细胞较对照组显著增多（P<0.01）, PTH1R阳性细胞明显减少（P<0.01）;实验组髁突软骨PTHrP mRNA的表达显著高于对照组（P<0.01）,而PTH1R mRNA表达明显降低（P<0.01）。结论 髁突软骨PTHrP的高表达因PTH1R的低表达不能有效发 挥作用,可能是髁突软骨骨关节病样变的重要分子机制之一。     

单侧前牙反牙合大鼠髁突异常分化的软骨细胞中CaMKⅡ的表达变化

目的:研究实验性单侧前牙反牙合(unilateral anterior crossbite,UAC)对大鼠髁突软骨的致病意义及对促软骨细胞分化的CaMKⅡ表达的影响。方法:40只6周龄SD雌性大鼠,随机等分为UAC组和对照组,其中UAC组左侧上下切牙各戴一套筒冠并形成反牙合关系,对照组不作处理。于实验开始后4周和8周取材,HE和番红O染色观察髁突软骨的组织形态变化,免疫组织化学染色观察CaMKⅡ的表达,Real-time PCR测量相关基因表达水平的变化。结果:UAC组髁突软骨细胞分化异常,软骨变薄,基质减少,且随时间的延长而加重(P<0.05),CaMKⅡ阳性细胞百分数以及CaMKⅡ和Mmp-13的mRNA表达水平上调,但促增殖的Pcna以及软骨基质Col2a1、 Aggrecan的mRNA的表达水平下调。结论:UAC可导致髁突软骨异常分化并伴有CaMKⅡ的高表达。     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子-1(TGF-β_1)表达变化的研究

目的：检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子－１（ＴＧＦ－β１）分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。方法：实验组戴模拟临床功能矫治器，引导大鼠下颌前伸，并在实验后不同时期处死大鼠，取下髁突，应用免疫组织化学方法探测ＴＧＦ－β１在髁突中的含量及分布。结果：髁突各层软骨细胞均有ＴＧＦ－β１的分布，以成熟层阳性强度最高；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨细胞各层ＴＧＦ－β１的表达均增强。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生     

偏侧咀嚼对生长发育期大鼠髁突软骨细胞热休克蛋白70表达的影响

目的:初步探讨偏侧咀嚼致颞下颌关节病的致病机理。方法:间断磨除大鼠单侧上下颌磨牙至龈缘,建立生长发育期大鼠偏侧咀嚼模型,采用免疫组织化学方法检测正常对照组及实验组大鼠髁突软骨热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果:正常组大鼠髁突软骨各带(表面带、增殖带、肥大带、钙化软骨带)均存在HSP70基础表达;实验组大鼠咀嚼侧髁突软骨细胞HSP70表达增强,而非咀嚼侧髁突软骨细胞HSP70表达无明显改变。结论:偏侧咀嚼可使生长发育期大鼠髁突软骨细胞HSP70表达增强,其致病机理仍有待进一步研究。     

血管内皮生长因子及其受体在大鼠下颌骨髁突软骨细胞中的表达和意义

目的：研究VEGF及其受体(Fh—1和Flk—1)在大鼠下颌骨髁突软骨细胞中的表达，探讨其对大鼠下颌骨髁突软骨生长发育的影响。方法：用免疫组化方法，对VEGF及其受体(Fh—1和Flk—1)在大鼠下颌骨髁突软骨细胞中的表达进行检测。结果：大鼠下颌骨髁突软骨的增殖层、肥大层、矿化和钙化层均有表达，而纤维层没有表达。结论：大鼠下颌骨髁突软骨的增殖层、肥大层及矿化和钙化层软骨细胞可产生并分泌VEGF及其受体(Fh—1和Flk—1)，VEGF可能在大鼠下颌骨髁突软骨生长发育中发挥作用。     

下颌持续前导对成年大鼠髁突软骨骨形态发生蛋白表达及超微结构的影响

目的 观察成年期大鼠在下颌持续前导作用下髁突软骨的改建以及超微结构的变化。方法 将30只9周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组佩戴上颌斜面导板,对照组不做任何处理,分别在第3、7、14、21、30天处死动物并取材,免疫组织化学染色检测骨形态发生蛋白2（BMP-2）在髁突中的表达及分布,透射电镜观察髁突软骨细胞的超微结构,Micro CT分析髁突骨质的变化。结果 与对照组相比,实验组髁突中部和后部软骨增生明显,软骨细胞BMP-2阳性细胞率及灰度值在第7天开始增多,随时间延长而增强,髁突软骨细胞的超微结构出现细胞核固缩,核周微丝变少、脂滴变小、内质网腔隙肿胀、细胞外基质增宽变多等。Micro-CT显示实验组的新生骨和骨小梁厚度、骨小梁数量和分离度随时间延长而增加。结论 在下颌持续前导下,成年期大鼠髁突软骨出现增生性改建,并存在BMP-2的高表达。     

两种异常咬合刺激对小鼠髁突影像及组织形态学影响研究

目的 探究异常咬合刺激对小鼠髁突影像及组织形态学影响.方法 选取6周龄雌性C57BL/6J小鼠36只,根据饲养时间(3、7周)均分小鼠后,再随机分为对照组、单侧前牙反(unilateral anterior crossbite,UAC)组和双侧前牙咬合抬高(bilateral anterior elevation,B...     

程序性坏死在髁突软骨退变中的作用

目的:探究程序性坏死(Necroptosis)在髁突软骨退变中的作用.方法:48只SD大鼠随机分为对照(Con)组、雌激素补充(E2)组、单侧前牙反(UAC)组、单侧前牙反+雌激素补充(U+E2)组(n = 12),3周后处死、取材.HE、番红O-固绿染色评价软骨退变程度;免疫组化及Western blot检测髁突...     

The effects of age and sex on the expression of aromatase in the rat temporomandibular joint

AIMS: To investigate the expression of aromatase in temporomandibular joints(TMJs) of male and female rats of different ages. METHODS: The expression of aromatase in terms of protein and mRNA was examined by immunohistochemistry, Western blot, and in situ hybridization in the TMJs of Sprague-Dawley rats. The expression level of aromatase protein was also quantified by the density of aromatase-positive chondrocytes in TMJ condylar cartilage. A tritiated water assay was used to analyze the activity of aromatase in cartilage chondrocytes. RESULTS: Strong aromatase protein and mRNA hybridization signals were detected in hypertrophic and mature chondrocytes in all the cases examined. The density of aromatase-positive chondrocytes was relatively stable at higher levels before 8 weeks of age. The density decreased gradually in females after 8 weeks of age but not in males. CONCLUSION: These results demonstrate that aromatase is expressed intensely in condylar cartilage and suggest that it may play an important role in pathophysiological mechanisms in condylar cartilage.     

颞下颌关节软骨对咬合力刺激响应特征的动物实验启示

关节软骨主要的功能之一是承受一定的运动负荷,颞下颌关节髁突软骨所承受的功能负荷与咬合密切相关,因而颞下颌关节髁突软骨可以随咬合的变化而进行相应的改建。我们利用大鼠、小鼠进行的实验研究显示,用佩戴金属冠的方法加高小鼠双侧前牙咬合(bilateral anterior elevation,BAE),可导致小鼠髁突软骨明显增厚;而用金属冠制作单侧前牙反[牙合](unilateral anterior crossbite,UAC)不良修复体,则可导致髁突软骨出现明显的退行性变,直至髁突变形。我们利用这些可导致髁突软骨出现增殖性或退行性改建的动物模型进行在体基因修饰实验,探索髁突软骨改建过程中与细胞自噬、凋亡、终末分化等活动密切相关的信号通路,例如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapmycin,mTOR)信号,印第安刺猬信号(India hedgehog,Ihh),以及甲状旁腺素及其相关蛋白受体信号等,其结论有望指导临床工作中在纠正异常咬合基础上,从细胞和分子水平干预软骨细胞功能,预防和治疗颞下颌关节软骨退变。     

医用臭氧对颞下颌关节骨关节炎大鼠髁突软骨作用研究

目的    分析于颞下颌关节腔内注射医用臭氧对颞下颌关节骨关节炎（temporomandibular joint osteoarthritis，TMJOA）大鼠髁突软骨的作用。方法    选取8 ~ 10周龄雄性SD大鼠22只，随机分为对照组6只、模型组6只、实验组10只。模型组和实验组大鼠建立TMJOA模型3周后，实验组大鼠颞下颌关节腔内注射质量浓度为30 μg/mL的医用臭氧，其他2组注射生理盐水，每周1次，共3次。行锥形束CT（cone beam computed tomography，CBCT）扫描后处死各组大鼠并进行取材，观察髁突和关节盘的变化；采用HE、甲苯胺蓝染色并分别通过改良Mankin′s评分和平均光密度值分析髁突软骨细胞和基质的变化情况；采用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色观察破骨细胞数量及分布。结果    经CBCT检查和肉眼观察发现，模型组和实验组颞下颌关节髁突及关节盘呈现出不同程度的缺损，模型组缺损程度重于实验组。3组改良Mankin′s评分、平均光密度值和TRAP染色阳性细胞数比较，差异均有统计学意义（F值分别为93.462、44.498、113.918，均P < 0.05）。其中，模型组和实验组的改良Mankin′s评分、TRAP染色阳性细胞数均大于对照组，模型组这2个指标还高于实验组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）；模型组和实验组的平均光密度值低于对照组，模型组的平均光密度值低于实验组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。结论    于颞下颌关节腔内注射质量浓度为30 μg/mL的医用臭氧，可减轻TMJOA大鼠髁突软骨及软骨下骨的损伤。     

衰老与颞下颌关节骨关节病

骨关节病是导致中老年人慢性残疾最常见的原因之一,其病因和病理机制目前尚不明确。颞下颌关节骨关节病是一种能够累及整个颞下颌关节组织,导致患者口颌功能障碍及严重疼痛的慢性退行性疾病。近年来,衰老在骨关节病发生发展中的作用越来越受到重视。本文主要就衰老对颞下颌关节软骨细胞及软骨基质影响的研究进展做一概述,供研究参考。     

实验性咬合紊乱对大鼠髁突软骨局部雌激素表达的影响

目的探讨实验性咬合紊乱所致大鼠髁突软骨改建过程中的雌激素表达变化规律。方法通过正畸方法前移幼年及青春期雌性大鼠右侧上颌及左侧下颌第一磨牙,造成大鼠的实验性咬合紊乱模型,咬合紊乱组分别于2、4、6、8周后取材,去除咬合紊乱组则在实验6周时拔除第一磨牙,2周后取材。应用免疫组织化学SABC方法检测髁突软骨中雌激素的表达,并通过计算阳性细胞个数来探讨雌激素在不同时间点的表达变化规律。结果1）雌激素主要表达于大鼠髁突软骨的成熟层和肥大层;2）正常对照组大鼠髁突软骨中的雌激素表达水平自6周龄到16周龄呈逐渐降低的趋势;3）无论幼年组还是青春期组,咬合紊乱2周时雌激素表达均高于对照组（P<0.05）,4、6、8周时与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。去除咬合紊乱组雌激素表达高于正常对照及咬合紊乱8周组（P<0.01）。结论大鼠髁突软骨中雌激素的表达随年龄增长而减少,实验性咬合紊乱可以一过性升高髁突软骨中雌激素的表达水平。