两株携带blaNDM-1基因布氏柠檬酸杆菌耐药性及同源性分析

目的 探讨携带blaNDM-1基因布氏柠檬酸杆菌的耐药特点及同源性。方法 试验菌株为从临床尿液标本中分离到的两株耐碳青霉烯类的布氏柠檬酸杆菌。采用Vitek-2全自动微生物鉴定与药敏分析系统进行鉴定及药敏试验，PCR扩增blaNDM-1基因并测序验证，质粒接合试验了解blaNDM-1基因是否可通过质粒进行水平传播，并对两菌株进行多位点序列分型(MLST)及ERIC-PCR分析。结果 两株菌对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类和碳青霉烯类均高度耐药，并携带blaNDM-1基因。接合试验成功将两株菌的blaNDM-1基因转移至大肠埃希菌EC600。MLST分型为ST171，ERIC-PCR发现扩增条带位置完全相同，即为同一基因型。结论 检出两株具有相同基因型ST171携带blaNDM-1基因的布氏柠檬酸杆菌，且菌株对碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药。     

2017-2020年某院临床分离耐碳青霉烯阴沟肠杆菌检测及分析

摘要：目的 通过研究本院近3年耐碳青霉烯阴沟肠杆菌,探讨其临床分布及相关耐药基因分布情况。方法 收集2017年1月至2020年9月山西白求恩医院分离的33株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌为研究对象,利用全自动快速生物质谱检测系统(美国Bruker,MicroflexLT/SH)进行细菌鉴定,VITEK2-Compact全自动微生物分析系统进行细菌药敏试验。采用改良碳青霉烯灭活试验进行耐药表型筛选。采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因(blaIMP、blaKPC、blaNDM 、blaVIM和blaOXA-48)。对所有菌株进行MLST分型和同源性分析。质粒接合转移实验研究耐药质粒的传播。结果 22株阴沟肠杆菌对厄他培南、亚胺培南、美罗培南均耐药,11株仅对厄他培南耐药。其中16株阴沟肠杆菌产NDM-1,4株产NDM-5,2株产IPM-1,1株菌同时产NDM-1和KPC-2。11株仅对厄他培南耐药阴沟肠杆菌中有两株检出blaNDM-1、两株检出blaKPC-2基因。MLST分型主要流行株为ST418型。质粒接合转移实验有14株转移成功。结论 本院耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌从2017年逐年增加,2020年出现暴发流行。携带的碳青霉烯酶基因以blaNDM为主,ST418型菌株占多数。耐药基因可通过质粒水平传播,所以加强临床耐药菌株筛检及控制对临床抗感染治疗作用关键。     

不同感染途径CREC分子分型特点及耐药分析#br#

目的 探讨我院不同感染途径耐碳青霉烯大肠埃希菌(carbapenem-resistant Escherichia coli, CREC)分子分型特点以及耐药情况,为临床预防和治疗提供依据。方法 收集我院2017年9月—2018年12月间不同感染途径获得的CREC共14株;菌株鉴定及药敏采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定/药敏系统,联合纸片扩散法(KB法)、E-Test方法进行药敏试验;用PCR技术分别对碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(blaSHV、blaTEM、blaCTX和blaOXA-1)、AmpC酶耐药基因(blaFOX、blaMOX和blaDHA)、膜孔蛋白基因(ompk35和ompk36)进行检测,同时进行质粒接合试验,掌握我院CREC耐药基因分布及流行情况;采用PFGE对14株不同感染途径CREC进行同源性分析,分析我院CREC分子流行特点。结果 临床资料：14株CREC主要来自重症医学科,占57.14%(8/14);痰标本检出5株,尿标本检出4株,血液标本检出2株,灌洗液、脑脊液、导管尖端各检出1株。耐药基因检出情况：14株CREC有12株携带blaNDM-5、1株携带blaKPC-2和1株携带blaNDM-1;我院CREC通常携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有ompk36基因的缺失。接合试验结果：仅1株CREC接合试验成功。PFGE分型结果：14株CREC分为4个PFGE分型,其中PT03为优势型别,包含11株菌。菌株耐药情况：CREC耐药情况十分严重,对单环β-内酰胺类、头孢类、左氧氟沙星、碳青霉烯类药物均表现耐药;而对氨基糖苷类以及磺胺类药物也达到92.86%的耐药率;对替加环素和多黏菌素均表现为敏感。结论     

不同感染途径CREC分子分型特点及耐药分析#br#

目的 探讨我院不同感染途径耐碳青霉烯大肠埃希菌(carbapenem-resistant Escherichia coli, CREC)分子分型特点以及耐药情况,为临床预防和治疗提供依据。方法 收集我院2017年9月—2018年12月间不同感染途径获得的CREC共14株;菌株鉴定及药敏采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定/药敏系统,联合纸片扩散法(KB法)、E-Test方法进行药敏试验;用PCR技术分别对碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(blaSHV、blaTEM、blaCTX和blaOXA-1)、AmpC酶耐药基因(blaFOX、blaMOX和blaDHA)、膜孔蛋白基因(ompk35和ompk36)进行检测,同时进行质粒接合试验,掌握我院CREC耐药基因分布及流行情况;采用PFGE对14株不同感染途径CREC进行同源性分析,分析我院CREC分子流行特点。结果 临床资料：14株CREC主要来自重症医学科,占57.14%(8/14);痰标本检出5株,尿标本检出4株,血液标本检出2株,灌洗液、脑脊液、导管尖端各检出1株。耐药基因检出情况：14株CREC有12株携带blaNDM-5、1株携带blaKPC-2和1株携带blaNDM-1;我院CREC通常携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有ompk36基因的缺失。接合试验结果：仅1株CREC接合试验成功。PFGE分型结果：14株CREC分为4个PFGE分型,其中PT03为优势型别,包含11株菌。菌株耐药情况：CREC耐药情况十分严重,对单环β-内酰胺类、头孢类、左氧氟沙星、碳青霉烯类药物均表现耐药;而对氨基糖苷类以及磺胺类药物也达到92.86%的耐药率;对替加环素和多黏菌素均表现为敏感。结论 我院CREC主要来自呼吸道标本,且存在克隆的流行,其优势型别的菌株多携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有Ompk36基因的缺失,且表现对多种抗生素呈高度耐药,提示我们应加大对CREC的管控,需密切监测并采取控制措施,阻断CREC在院内的传播和暴发。     

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

目的 探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法 携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果 12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功,电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论 碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性,TaqMan     

北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查

目的 调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法 挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48)；mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果 2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP，其中64株检出blaKPC-2基因，1株检出blaNDM-1基因，1株检出blaNDM-5基因，检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。mCIM和eCIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型，其中以ST11为主，共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药，对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现，仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上，其他均定位在质粒上，有4株细菌接合成功，其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒，质粒类型为IncX3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5，下游为bleMBL、trpF、dsbC和IS26。结论 北京地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子型别多态性大，同时又存在优势序列型，为ST11型。携带blaKPC-2基因的质粒大小不一，提示其遗传背景可能比较复杂。与blaKPC-2基因不同，对比国内外其他研究发现blaNDM-5基因的遗传背景比较稳定，IncX3型质粒在介导blaNDM-5基因的传播上发挥着重要作用。     

碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布特征及其机制探讨

目的分析碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布特征及其机制。方法收集青岛大学附属威海市中心医院2021年1-12月临床标本分离得到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌58株, 通过改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验确认表型, 聚合酶链式反应(PCR)扩增后纯化测序, 脉冲场凝胶电泳法(PFGE)聚类分析和多位点序列分型(MLST)分析其分子流行病学特征。结果碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)对阿米卡星敏感率为51.7%, 对环丙沙星、左旋氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素均具有较高耐药率(> 60%), 对头孢唑林、头孢他啶、头孢替坦及头孢吡肟耐药率为100.0%。58株菌株中46株(79.3%)改良Hodge试验阳性, 31株(53.5%)改良碳青霉烯灭活试验阳性。PCR扩增及基因测序显示, 42株(72.4%)菌株主要携带KPC-2基因, 12株(20.7%)菌株携带IMP-4基因, 4株(6.9%)菌株携带NDM-1基因。且携带IMP-4基因的12株菌株均携带KPC-2基因, 表现为改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验双阳性。PFGE聚类分析和MLST分析...     

北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查

目的 调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法 挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48);mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果 2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP,其中64株检出blaKPC-2基因,1株检出blaNDM-1基因,1株检出blaNDM-5基因,检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。mCIM和eCIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型,其中以ST11为主,共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药,对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现,仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上,其他均定位在质粒上,有4株细菌接合成功,其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒,质粒类型为IncX3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5,下游为bleMBL、trpF、dsbC和IS26。结论     

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

目的 探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性，为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法 携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10，采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)，TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果 12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功，电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论 碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性，TaqMan RT-PCR检测可快速准确地为临床治疗提供依据。     

1株同时携带mcr-1和NDM-6基因的泛耐药大肠埃希菌研究北大核心CSCD

目的研究1株临床分离的黏菌素和碳青霉烯类均耐药的大肠埃希菌的耐药机制。方法用Vitek 2 Compact系统进行细菌鉴定;微量肉汤稀释法检测常见抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,亚胺培南和乙二胺四乙酸(IPM-EDTA)协同实验检测金属β-内酰胺酶;用聚合酶链式反应(PCR)扩增联合测序技术检测多种耐药基因;用多位点序列分型技术分析菌株的分子分型;用质粒结合试验研究bla_(NDM-6)和mcr-1基因是否通过质粒传播;S1酶切-脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和Southern印迹杂交分析携带bla_(NDM-6)和mcr-1质粒的分子特征。结果该株大肠埃希菌除替加环素敏感外,对β内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类药物耐药且同时对黏菌素类抗生素耐药。改良Hodge试验和IPM-EDTA协同试验结果阳性;PCR基因扩增及测序分析显示该菌株同时携带mcr-1,bla_(NDM-6),bla_(CTX-M-55),bla_(TEM-1),rmtB和aac(6')-Ib-cr;多位点序列分型(MLST)结果为ST156型;S1-PFGE和Southern blot结果显示bla_(NDM-6)基因位于大小约80 bp的质粒上,mcr-1基因位于大小约为33 bp的质粒上。结论同时携带mcr-1和bla_(NDM-6)的泛耐药大肠埃希菌已在临床出现,应引起高度重视。     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出blaKPC类基因(64株检出blaKPC-2、1株检出blaKPC-3)、9株(10.2%)检出blaNDM类基因(均为blaNDM-1)、7株(8.0%)检出blaIMP类基因(均为blaIMP-4)。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而blaNDM-1和blaIMP-4阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。     

广东省肇庆市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与MLST分型研究

目的 了解广东省肇庆市肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)临床分离株的抗生素耐药情况及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集肇庆市两家医院KP临床分离株63株，采用肉汤微量稀释法进行30种抗生素的体外药物敏感性试验，并对所有菌株进行多位点序列分型。结果 63株KP临床分离株的耐药谱特点可分为4类，即全敏感的高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(extended spectrum β-lactamases K. pneumoniae, ESBLsKP)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant K. pneumoniae, CRKP)和其他类型的多重耐药肺炎克雷伯菌(multidrug-resistant K. neumoniae，MDRKP)；MLST分型结果显示63株临床分离株可分成41个ST型。其中，ESBLsKP以ST37型(9株，39.13%)为主，CRKP以ST11型(5株，62.50%)为主，hvKP以ST65(5株，25.00%)型和ST23(3株，15.00%)型为主，而其他类型的多重耐药KP的ST型(12株9种ST型)则呈现明显的多态性。结论 我市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况比较严重，要加强院内感染监测，警惕其成为优势菌型并引发院内感染的风险。     

院内多重耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学特征研究

目的 探讨某三级医院4年间多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)的分子流行病学特征。方法 对2013-2016年4年间某院临床筛选出的51株MDRAB用PCR法检测碳青霉烯酶基因, 多位点序列分型(MLST)鉴定菌株之间的亲缘关系。结果 51株MDRAB 100%都携带blaOXA-51型碳青霉烯酶基因，94.12%携带blaOXA-23型碳青霉烯酶基因。MLST分析发现有3种已报道的STs，依次为ST191(52.94%)、ST208(31.37%)和ST136(15.69%)，它们都属于克隆复合体CC92。其中4年间ST208在医院内持续性的播散，ST191和ST136在不同时间段间断性的播散。结论 该院各时间段分离的MDRAB都发生过相同ST克隆株的暴发流行，警示医院应加强预防院内感染暴发。     

天津地区4株金黄色葡萄球菌多位点测序分型

目的：应用分子进化学方法和信息学分析，研究4株金黄色葡萄球菌(SA)临床株的来源和遗传背景。方法：微量肉汤稀释法测定MIC、PCR扩增mecA基因，PBP2a平板乳胶凝集法识别MRSA、MSSA；应用多位点测序分型(Multilocus Sequencing Typing，MLST)进行ST分型比较。结果：2株MRSA，SA76和SA137，mecA基因的PCR扩增阳性，PBP2a平板乳胶凝集法阳性。另2株MSSA，SA11和SA155，mecA基因的PCR扩增、PBP2a平板乳胶凝集法阴性。MLST分型显示SA76和SA137的等位基因谱为2-3-1-1-4-4-3，归属ST9型，SA11为1-1-1-1-1-1-1，属ST1型，SA155为5-4-1-4-4-6-3，属ST7型。结论：MLST作为SA分型方法，分辨率高，结果准确，易于标准化。通过信息学分析，可以将MRSA克隆株、MLST分型、遗传背景和SCCmec联系起来．适于进行分子进化学研究。     

Characterisation of successive Acinetobacter baumannii isolates from a deceased haemophagocytic lymphohistiocytosis patient

In this study, 38 Acinetobacter baumannii isolates successively isolated from blood, skin swabs and tracheal aspirates from a single patient who died from haemophagocytic lymphohistiocytosis were investigated. The isolates were collected between March 2012 and August 2012. A. baumannii genotypes were determined by multilocus sequence typing (MLST) and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). In vitro antimicrobial susceptibility testing was performed and colistin heteroresistance and persistence were evaluated. The structure of AbaR resistance islands was explored, and serum sensitivity was determined. Based on MLST analysis, all 38 A. baumannii isolates showed the same sequence type (ST138). However, PFGE analysis showed that isolates from blood samples belonged to different genotypes depending on the isolation time: whilst blood isolates obtained at the early stages showed restriction patterns similar to those of isolates from other sources, isolates obtained at later stages exhibited a distinct pattern. All isolates were resistant to imipenem, cefepime, ciprofloxacin and piperacillin/tazobactam. Five isolates from tracheal aspirates and one from a skin swab were resistant to polymyxins, and two isolates from skin swabs and one from another source were non-susceptible to tigecycline. All colistin-susceptible isolates showed heteroresistance to colistin, and four were persisters. Isolates from blood showed higher survival rates against human serum than those from other sources. This study shows that the patient was infected with more than one A. baumannii strain. Heteroresistance, persistence or evasion of the innate immune response may explain the failure of antimicrobial treatments in this patient.     

2016—2018年成都某院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药变迁#br# 及耐药机制分析

目的 分析2016—2018年四川省中医医院临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)的耐药性变迁及耐药机制。方法 收集本院临床分离的CRKP菌株,PCR扩增碳青霉烯酶基因A类(blaKPC、blaGES、blaSME、blaIMI和blaNMC),B类(blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaSPM、blaGIM、blaSIM)和D类(blaOXA)。结果 近3年分离的CRKP对临床常用抗生素呈高水平耐药。经PCR扩增及测序确认,74株CRKP中,82.43%携带blaKPC-2型,10.81%携带blaNDM-1型,5.41%携带blaKPC-19型。结论 3年间本院分离的CRKP对临床常用抗生素呈高度耐药,菌株产blaKPC-2和blaNDM-1是本院CRKP最主要的耐药机制。