YAP对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨长链非编码RNA （lncRNA） MALAT1在YAP调控的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移中的作用,并阐明其作用机制。方法：选择A549和H1299细胞系分为Scramble siRNA组（转染Scramble siRNA）、siYAP-1组（转染siYAP-1）和siYAP-2组（转染siYAP-2）。RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中YAP和MALAT1mRNA及YAP蛋白表达水平;在A549和H1299细胞中分别转染pcDNA3.1-YAP质粒（pcDNA3.1-YAP组）、共转染pcDNA3.1-YAP质粒和siMALAT1-2（pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组）及对照质粒（pcDNA3.1-YAP+Scramble siRNA组）,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果：siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中YAP mRNA及蛋白表达水平均明显低于Scramble siRNA组（P<0.05）,siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中MALAT1mRNA表达水平低于Scramble siRNA组（P<0.05）;与pcDNA3.1-YAP组比较,pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组A549和H1299细胞增殖能力降低（P<0.05）,H1299细胞迁移能力降低（P<0.05）。结论：在NSCLC细胞中,YAP通过调控lncRNA MALAT1的表达促进细胞的增殖和迁移。     

右美托咪定在减轻脂多糖诱导人肾小管上皮细胞损伤中的作用研究

目的探讨右美托咪定（DEX）在减轻脂多糖（LPS）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）损伤中的作用。方法体外培养HK-2,采用RNA测序检测DEX及LPS处理后细胞的mRNA表达,实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法验证DEX及LPS处理后HK-2的干扰素调节因子1（IRF1）表达;通过体外细胞转染上调或下调细胞的IRF1表达,CCK-8活性试验、Edu增殖分析及实时凋亡分析分别检测细胞的活性、增殖和凋亡情况。结果LPS处理后IRF1mRNA水平升高（1.00±0.12比2.69±0.33,P＜0.05）,蛋白表达增加,而DEX处理后IRF1mRNA水平降低（1.00±0.12比0.51±0.09,P＜0.05）,蛋白表达降低。过表达IRF1可以导致HK-2活性降低（2.10±0.02比1.56±0.16,P＜0.05）、增殖减慢且诱导凋亡（20523±2051比62183.26±7585.39,P＜0.05）;敲减IRF1可以增加LPS处理后的HK-2活性（0.65±0.08比1.23±0.13,P＜0.05）、维持增殖且降低LPS诱导的凋亡（85233.59±7952.23比62187.24±8742.68,P＜0.05）。DEX处理后可增加LPS条件下的HK-2活性（0.87±0.12比1.78±0.20,P＜0.05）,但过表达IRF1能够抵消DEX对细胞活性的保护作用（1.78±0.20比1.22±0.12,P＜0.05）。结论DEX可能通过抑制IRF1减轻LPS诱导的HK-2的损伤。     

IRF5对低分化胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制研究

目的探讨干扰素调节因子5（IRF5）对低分化胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取2019年12月至2020年7月杭州师范大学附属医院行胃镜活检及手术且经病理学检查证实为低分化胃癌石蜡标本5例以及正常胃黏膜组织石蜡标本5例,采用免疫组化法检测两组IRF5和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）相对表达水平。选取人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞作为正常对照,慢病毒转染低分化胃癌细胞系BGC-823,构建IRF5敲低的胃癌细胞BGC-IRF5组和作为对照的BGC-NC组。在BGC-IRF5中过表达MMP-9,构建BGC-MMP-9Over组。RT-PCR和Westernblot法检测IRF5和MMP-9相对表达水平;划痕实验和Transwell小室实验检测敲低IRF5对BGC-823迁移与侵袭能力的影响;Transwell小室实验检测MMP-9过表达对BGC-IRF5组侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因实验检测IRF5对MMP-9相对表达水平的调控。结果低分化胃癌组织中IRF5与MMP-9相对表达水平均明显高于正常胃黏膜组织（均P＜0.05）。BGC-NC组IRF5mRNA及蛋白相对表达水平均明显高于BGC-IRF5组和GES-1组（均P＜0.05）。BGC-IRF5组及BGC-NC组相对迁移水平分别为0.59±0.12和1.08±0.14,比较差异有统计学意义（P＜0.05）。BGC-IRF5组较BGC-MMP-9Over组和BGC-NC组MMP-9mRNA及蛋白相对表达水平均明显下降,穿基底膜细胞数量均明显减少（均P＜0.05）。IRF5过表达质粒+pGL3-MMP-9质粒较IRF5空载质粒+pGL3-空载质粒、IRF5空载质粒+pGL3-MMP-9质粒和IRF5过表达质粒+pGL3-空载质粒相对荧光素酶活性均明显升高（均P＜0.01）。结论IRF5可促进低分化胃癌细胞的侵袭和转移,可能通过调节MMP-9的相对表达水平发挥作用。     

MicroRNA-212-3p与靶基因转化生长因子-β2基因3'UTR的关系研究*

目的?构建转化生长因子-β2（TGF-β2）基因3''UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p（miR-212-3p）与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系。方法?将TGF-β2 3''UTR片段构建至双荧光素酶报告载体pYr-MirTarget上,随后将重组质粒与miR-212-3p核苷类、无核苷类及其抑制剂共同转染Saos-2细胞（人成骨肉瘤细胞）,通过双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,RT-PCR检测Hsa-miR-212及TGF-β2基因的mRNA相对表达量,Western blotting检测TGF-β2蛋白相对表达量。结果?miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组荧光素酶活性较对照组低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组Has-miR-212 mRNA相对表达量最高,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2 mRNA相对表达量最低,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最高（P?<0.05）。miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2蛋白相对表达量最高,miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。结论?该实验成功构建了TGF-β2基因3''UTR荧光素酶重组质粒,而且miR-212-3p可以与TGF-β2基因的3''UTR结合,抑制荧光素酶活性,由此推断TGF-β2是miR-212-3p的靶基因。     

miR-454-3p对鼻咽癌CNE-2细胞上皮-间质转化的调控机制

目的探讨miR-454-3p对鼻咽癌CNE-2细胞上皮-间质转化（EMT）的调控机制。方法收集2017年1月至2018年12月柳州市中医医院就诊的95例鼻咽癌患者的血清和鼻咽癌组织标本及健康体检者30例的血清,采用RT-qPCR检测miR-454-3p和E-盒结合锌指蛋白2（ZEB2）血清水平和mRNA的表达,对鼻咽癌组织中miR-454-3p和ZEB2mRNA的表达进行相关性分析。将CNE-2细胞随机分为Control组、miR-454-3pmimic组、Mimic-NC组、miR-454-3pmimic+ZEB2plasmid组和miR-454-3pmimic+vector组,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Westernblot检测ZEB2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。双荧光素酶实验验证miR-454-3p与ZEB2的靶向关系。结果鼻咽癌患者血清miR-454-3p水平低于健康体检者,差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻咽癌Ⅲ、Ⅳ期患者鼻咽癌组织miR-454-3p相对表达水平低于Ⅰ、Ⅱ期患者,ZEB2mRNA相对表达水平则升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。miR-454-3p与ZEB2mRNA的表达呈负相关（r=-0.734,P＜0.01）;与Mimic-NC组比较,miR-454-3pmimic组ZEB2、N-cadherin、Vimentin表达水平均降低,E-cadherin表达水平升高,侵袭细胞数及迁移率均降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,过表达ZEB2可逆转miR-454-3pmimie对EMT的抑制作用。双荧光素酶实验显示miR-454-3p可靶向ZEB23''UTR。结论miR-454-3p在鼻咽癌患者血清及癌组织中呈低表达,可通过靶向调控ZEB2的表达水平进而抑制鼻咽癌细胞EMT。     

缺血和再灌注心肌NHE－1mRNA表达的变化

目的探讨缺血再灌注心肌钠氢交换蛋白-1(NHE-1)mRNA表达的变化.方法成年大鼠心脏Langendorff离体灌流,随机分为六组(n=6),给予(1)正常灌流30min;(2)低灌流缺血60min;(3)低灌流缺血60min及再灌注30min;(4)预处理后低灌流缺血60min(5)预处理后低灌流缺血60min再灌注30min;(6)老龄大鼠离体心脏低灌流缺血60min等不同条件处理.保留心肌,使用RT-PCR方法对比不同处理条件下心肌NHE-1表达的变化.结果(1)缺血组心肌(Ⅰ)NHE-1mRNA水平(0.734±0.053)较正常对照组(N)(0.300±0.007)明显升高(P＜0.05),再灌注组心肌(R)NHE-1的mRNA水平(0.281±0.019)较缺血组降低(P＜0.05),与正常组无明显差异(P＞0.05);(2)预处理缺血组心肌(Pi)NHE-1 mRNA水平(0.256±0.011)较缺血组心肌(0.734±0.053)明显降低(P＜0.05),预处理再灌注组心肌(Pr)NHE-1 mRNA水平(0.135±0.011)较再灌注组心肌(0.281±0. 019)降低(P＜0.05);(3)老龄大鼠低灌流缺血心肌(S)NHE-1的mRNA表达(0.787±0.021)与成年大鼠低灌流缺血心肌(Ⅰ)NHE-1的mRNA表达无明显统计学差异.结论低灌流缺血心肌NHE-1表达较正常灌流心肌明显升高,预处理可以明显降低缺血及再灌注心肌NHE-1的表达.     

舒张性心力衰竭兔Ca2+调控蛋白相关基因表达的变化

目的探讨舒张性心力衰竭(DHF)时Ca2+调控蛋白相关基因表达的变化,以阐明DHF发生的分子机制.方法建立DHF兔模型,并设假手术为对照组,分别测定2组兔心肌细胞内Ca2+含量和肌浆网(SR)Ca2+-ATPase(钙泵)活性,并以定量RT-PCR和Westernblot技术检测Ca2+调控蛋白相关基因的转录和蛋白质表达水平.结果(1)DHF兔心肌细胞内Ca2+含量(μg/ml)显著高于对照组(1728±545vs633±168,P＜0.01);(2)DHF兔SR钙泵活性,细胞膜L型Ca2+通道和SR钙泵mRNA水平(μmol*mg-1*h-1)明显低于对照组(10.5±2.8vs21.1±5.7;0.75±0.11vs1.20±0.33;0.76±0.12vs1.24±0.38,P＜0.05～0.01);(3)DHF兔细胞膜L型Ca2+通道mRNA水平与左室舒张末压中度负相关(r=-0.74,P＜0.05),SR钙泵mRNA水平与左室舒张末压和左室松弛时间常数中度负相关(r分别为-0.81、-0.64,P＜0.05～0.01);DHF兔兰尼碱受体mRNA水平与左室松弛时间常数负相关(r=-0.71,P＜0.05);(4)DHF兔SR钙泵的蛋白质表达明显低于对照组(0.75±0.06vs1.02±0.09,P＜0.05).结论细胞膜L型Ca2+通道和SR钙泵mRNA和蛋白质表达减低是导致心肌细胞内Ca2+超负荷及DHF发生的重要因素.     

食管癌血红素加氧酶-1表达水平与氟尿嘧啶疗效的关系研究

目的 本实验旨在探讨Eca109食管鳞癌细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平与5氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的关系.方法 培养Eca109食管鳞癌细胞,应用RT-PCR及Western blot方法分别检测不同浓度(0、20、80、100 μmol/L)ZnppⅨ处理后细胞HO-1基因及HO-1蛋白表达水平,应用噻唑蓝(MTT)法检测各实验组细胞生长曲线及药物抑制率.结果 随着培养基ZnppⅨ浓度的增加,细胞抑制率显著增高,80 μmol/L ZnppⅨ组显著高于20 μmol/L ZnppⅨ组(P＜0.05).各组间HO-1mRNA的表达量依次为0.50±0.17、0.55±0.15、0.58±0.09、0.55士0.16,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).各组间HO-1的表达量依次为0.85±0.07、0.63±0.11、0.43±0.12、0.25±0.10,组间差异有统计学意义(F=20.01,P＜0.01).结论 Eca109食管癌细胞抑制率与ZnppⅨ浓度正相关,而ZnppⅨ不是从基因水平,而是从蛋白的表达水平抑制HO-1的表达.     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-485-3p调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性

目的 研究长链非编码RNAMALAT1对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响机制。方法 运用紫杉醇浓度梯度诱导法检测紫杉醇耐药乳腺癌细胞SK-BR-3;将si-NC组（转染si-NC）、si-MALAT1组（转染si-MALAT1）、pc DNA组（转染pc DNA）、pcDNAMALAT1组（转染pc DNA-MALAT1）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-485-3p组（转染miR-485-3p mimics）、si-MALAT1+antimiR-NC组（共转染si-MALAT1和anti-miR-NC）、si-MALAT1+anti-miR-485-3p组（共转染si-MALAT1和anti-miR-485-3p）,均用脂质体法转染SK-BR-3/PR细胞;MTT法检测细胞IC50;Western blot检测细胞中P-gp、Bax、Bcl-2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MALAT1与miR-485-3p的结合力。结果 与紫杉醇敏感SK-BR-3细胞相比, SK-BR-3/PR细胞的IC50、MALAT1均上调,miR-485-3p下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。沉默MALAT1或过表达miR-485-3p均可下调SK-BR-3/PR细胞的IC50,下调P-gp和Bcl-2表达,上调Bax表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-485-3p是MALAT1的靶标。抑制miR-485-3p可逆转沉默MALAT1对SK-BR-3/PR细胞的IC50、P-gp、Bcl-2和Bax表达的影响,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 长 链非编码RNAMALAT1可调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与靶向miR-485-3p下调P-gp、Bcl-2,上调Bax有关。     

甲状旁腺切除术对甲状旁腺机能亢进性骨病的远期疗效

为了评价甲状旁腺切除术对原发性甲状旁腺机能亢进（ＰＨＰＴ）所致骨病的远期疗效，回顾分析了１６例术后平均５．１（１．０～１０．５）年患者的临床表现、骨结构和骨密度恢复情况，结果表明手术虽能明显改善患者骨病，但在随访终点有１０／１６例（６２．５％）骨病恢复不全，其中骨病重的Ｙ１组比骨病轻的Ｙ２组恢复不全比例更高（Ｐ＜０．０５），１４／１６例血骨钙素（ＢＧＰ）和尿吡啶并啉（Ｐｙｒ）浓度处于中青年对照组范围内，这意味着其成骨与破骨处于平衡状态。这些结果提示：ＰＨ－ＰＴ患者应尽早诊断治疗，术后应对患者密切随访，重视对骨病恢复不全者的后续治疗     

胰十二指肠切除术后住院时间影响因素分析-回顾性研究

Background. Postoperative hospital stay after pancreaticoduodenectomy (PD) was relatively longer than other gastrointestinal operations, The aim of current study was to investigate the risk factors of postoperative hospital stay after PD. Methods. Patients who were performed PD in Cancer Hospital Chinese Academy of Medical Sciences (CHCAMS) between December 2008 and November 2012 were selected for the retrospective study. The clinical and pathological data was collected and analyzed. The primary outcome was postoperative hospital stay. Normal discharge or recovery was defined as postoperative hospital stay no more than 10 days, otherwise it was defined as delayed discharge or recovery (including hospital death). Results. Finally, 152 patients were enrolled in present study. Postoperative hospital stay was 19.7±7.7 (7-57 d). 67 of 152 patients were normal discharge, and 85 of 152 patients were delayed discharge. The overall morbidity of complications was 62.5% (95/152), and the mortality rate was 3.29% (5/152). Multiple factors analysis showed that complication morbidity (adjusted OR=10.40, 95%CI=3.58-30.22), age (adjusted OR=4.09, 95%CI=1.16-14.39), BMI (body mass index) (adjusted OR=4.40, 95%CI=1.19-16.23), surgical procedure (adjusted OR=26.14, 95%CI=4.94-153.19), blood transfusion (adjusted OR=7.68, 95%CI=2.09-28.27) and fluid input (adjusted OR=3.47, 95%CI=1.24-11.57) were significantly associated with delayed discharge. Conclusions. Postoperative complications affects the postoperative hospital discharge. Furthermore, age, BMI, transfused red blood, surgical procedure and input might prolong LOS (length of hospital stay). Studies with more patients were needed in future.     

甲磺酰胺苯乙胺类化合物抗心律失常活性的定量构效关系研究(Ⅰ)

以ＰＯＬＹＧＥＮ软件中的ＣＨＡＲＭｍ程序和集团坐标轮换法,对合成的１２个甲磺酰胺苯乙胺类化合物的结构进行计算机分子模拟。根据所得化合物的能量最低构象,计算了其ＶＤＷ体积、偶极矩、总键能、总键角能、总非正则能以及氮原子电荷等值,并对这些化合物进行ＣＮＤＯ／２法量化计算,这些计算结果作为结构参数分别与１２个化合物抗心律失常活性进行相关分析,以逐步回归法建立了两个相关性较好的方程：ｌｇｌ／ＭＥＣ＝６．９９９１－０．３８４２Ｘ２＋３．６７９６Ｘ５［ｎ＝１２,ｒ＝０．８５５９７５,ｓ＝０．１８９６７２,Ｆ＝１２．３３４６４＞Ｆ１－０．０５（３,９）＝３．８６］;ｌｇｌ／ＭＥＣ＝１４．７０３８－２１３．２６９２Ｘ４－１０．４８２９Ｘ５［ｎ＝１２,ｒ＝０．９３１９１９,ｓ＝０．１３３０４７,Ｆ＝２９．７１３５４＞Ｆ１－０．０１（３,９）＝６．９９］。结果提示,这类化合物的抗心律失常活性与分子中的原子轨道杂化程度和氮原子对分子ＨＯＭＯ和ＬＵ－ＭＯ的贡献有关,可以看出,氮上的取代不同会引起抗心律失常活性的不同     

基于网络药理学探讨独活-羌活-细辛治疗膝骨关节炎的作用机制*

目的 基于网络药理学的方法分析和预测独活-羌活-细辛治疗膝骨关节炎可能的作用机制。方法 利用TCMSP数据库获取独活、羌活、细辛的活性成分及靶点,与CTD、NCBI等数据库获取的膝骨关节炎疾病基因靶点映射,构建药物-活性成分-疾病靶点网络。进行MCODE聚类分析,通过Omicshare云平台和DAVID数据库GO、KEGG通路富集分析。结果 从3味药中共筛选出了36个活性成分及205个靶点,主要有山柰酚、 β-谷甾醇、芝麻脂素、异紫花前胡苷等关键成分,AKT1、ESR1、JUN、CASP3等为关键靶点,核心基因有NOS3、ESR1、COX1、NR1I2,关键的生物进程和通路有类固醇激素反应性、活性氧代谢过程、AGE-RAGE通路和TNF通路。结论 独活-羌活-细辛可能通过多成分、多靶点网络来治疗膝骨关节炎。     

欧洲刺柏（Juniper）

活性成分与药理作用欧洲刺柏药用部位是其浆果，具有促水排泄、防腐、抗胃肠胀气和抗风湿作用，还可改善胃功能。用作促水排泄药可增加尿量（水丢失），但不增加钠排泄。成分萜品烯-4-醇可增加肾小球滤过率，但刺激肾。欧洲刺柏浆果对单纯疱疹病毒体外显示抗病毒活性，并具抗真菌活性。动物实验显示，欧洲刺柏浆果提取物具有堕胎、抗生育、抗炎、抗胚胎植入、降血压、升血压和降血糖作用。欧洲刺柏浆果油具有兴奋子宫的活性，以及利尿、胃肠道抗菌和刺激作用，该油对平滑肌有阻止解痉作用。     

矮身材儿童血铅镉锌钙铁铜镁水平分析

目的探讨血铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平对儿童生长发育的影响。方法通过采用钨舟原子吸收光谱仪测定我院儿保门诊53例矮身材儿童（矮身材组）及53例正常儿童（对照组）末梢静脉血中铅、镉、锌、钙、铁、铜、镁水平,并对其与儿童生长发育关系进行分析。结果矮身材儿童血铅明显高于正常对照组,锌、钙、铁明显低于正常对照组（P〈0．05）。而血镉、铜、镁与对照组则无明显差异。矮身材组血铅男童明显高于女童（P〈0．05）。结论矮身材儿童的生长发育迟缓可能与高血铅,低血锌、钙、铁密切相关。儿童铅中毒防治和合理的膳食结构是降低儿童矮身材发生率的重要措施。     

原子吸收火焰法测定合力康粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量

目的：采用原子吸收火焰法测定合力康粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量。方法：用盐酸-硝酸-水(9：1．5：25)混酸湿法水浴加热消化处理样品,硝酸锶作镁离子释放剂,乙炔-空气火焰原子吸收法。结果：钾、钠、钙镁、锌、铁加样回收率与RSD(n=5)分剐为98．3％、0．8％;100．8％、3．2％;101．8％、1．3％;102．5％、2．1％;101．2％、2．8％;97．4％、2．4％。特征浓度分别为(产生0．0044吸收所需要的浓度,μg/m1)0．02、0．01、0．07、0．003、0．0l、0．06。结论：该方法简便、快速、结果准确,适用于合力康粉剂粉剂中钾、钠、钙、镁、锌、铁的含量测定。