通气量对新霉素种子罐代谢影响的研究

目的 研究不同通气量对生产新霉素的费氏链霉菌生理状况的影响,优化种子罐控制条件和移种时机,从而提高发酵水平,节约动力消耗,为工业化生产奠定基础。方法 在4个50L发酵罐中,控制装液量35L,转速400r/min,培养温度35℃,对同一批种子分别探究了通气比在0.5VVM(F2罐)、0.75VVM(F3罐)、1.0VVM(F4罐)、1.25VVM(F1罐)下,4罐还原糖、总糖、pH、菌浓、氨基氮、黏度、新霉素B产量、杂质C的变化趋势。结果 得出通气比大小对前20h孢子萌发速率影响小,20h后菌体开始进入对数生长期后,通气比较高(1.25VVM)有利于缩短pH回升时间,最大菌浓更高,杂质C组分更低。结论 前20h通气比控制在0.5VVM,20h后通气比控制在1.25VVM,最佳移种时机为35~40h。     

费氏链霉菌脱氢酶NeoE的生物信息学分析及其对产新霉素的影响

目的 NeoE是费氏链霉菌合成新霉素途径中一种重要的NAD(P)+依赖性脱氢酶,本研究的目的是预测其生物学性质及其对新霉素合成能力的影响。方法 由NCBI网站蛋白质数据库获得NeoE氨基酸序列,利用生物信息学网站及软件分析预测其特征。随后构建neoE过表达质粒,以接合转移方式得到高产重组菌株SF-neoE。最后经摇瓶发酵以及相关基因的转录分析探究NeoE对新霉素生物合成的影响。结果 NeoE由340个氨基酸组成,理论相对分子质量约为35228.33 Da,理论pI值5.14,不存在信号肽和跨膜区,是一个疏水性的稳定胞内蛋白。对含空载质粒菌株和重组菌株摇瓶发酵与RT-qPCR分析,结果表明第48小时neoE的相对表达水平较对照菌株提高了2.1倍,且NeoE的过量表达使得新霉素效价提高42%。结论 该结果为提高新霉素效价提供思路,并为后续定向改造NeoE探究其对费氏链霉菌生长代谢的影响奠定理论基础。     

费氏链霉菌遗传操作体系的优化与应用

目的 建立并优化费氏链霉菌的遗传操作体系,并通过分子改造得到新霉素效价提高的重组菌株,为后续获得新霉素高产菌株奠定理论基础。方法 选择费氏链霉菌最适产孢培养基和抗性筛选标记,对接合转移体系的关键影响因素进行优化,获得过表达neoC基因的重组菌株,以进一步研究neoC基因对新霉素效价的影响。结果 费氏链霉菌接合转移最适培养基为A75培养基,孢子最适处理条件为50℃热激10min,37℃预培养4h,最适供受比为10:1,安普霉素最适添加时间为15h,优化后接合转移频率提高了7.69倍,并得到了一株新霉素效价提高了22.29%的neoC基因过表达菌株SF-neoC。结论 成功建立并优化了费氏链霉菌的遗传操作体系,为后续基于费氏链霉菌分子改造的其它应用提供依据。     

浙新霉素对皮肤癣菌的体外抗真菌活性研究

目的：评价浙新霉素体外抗真菌活性。方法：采用CLSI推荐的M-38A方案测定浙新霉素对7种皮肤癣菌最小抑菌浓度（MIC）及最小杀菌浓度（MFC）。结果：浙新霉素对7种皮肤癣菌的MIC范围为0.125-2.000μg·ml^-1,MFC范围为0.250-4.000μg·ml^-1。结论：浙新霉素具有较强的抗真菌活性,能抑制和杀灭絮状表皮癣菌、红色毛癣菌、紫色毛癣菌、犬小孢子菌、须癣毛癣菌、断发毛癣菌、石膏样小孢子菌等多种皮肤癣菌。     

海绵共附生菌Streptomyces sp. LHW2432的次级代谢产物研究

目的 从海绵共附生菌Streptomyces sp. LHW2432的发酵产物中发现药用活性分子。方法 采用正向硅胶柱、ODS反向柱以及高效液相色谱分离技术,对LHW2432的发酵萃取物进行分离纯化;通过现代波谱技术和文献调研确定化合物结构;利用平板涂布法和微量稀释法,评价化合物对芽胞杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耻垢分支杆菌、白色念珠菌和大肠杆菌的抑菌活性。结果 从LHW2432发酵物中共分离鉴定了5个化合物：descycloavandulyl-lavanduquinocin (1)、N-acetyltyramine (2)、phomapyrone C (3)、germicidin A (4) 和germicidin I (5)。化合物1对MRSA和耻垢分支杆菌的最小抑菌浓度（MIC）值分别为100和64 μg/ml。结论 从LHW2432菌中分离得到5个化合物,其中,化合物1是新天然产物,可作为神经保护活性三环咔唑类生物碱的合成前体,其对G⁺菌有微弱的抑制活性。     

活跃链霉菌nshA基因失活对那西肽发酵的影响

目的通过对活跃链霉菌那西肽生物合成基因簇中的nshA基因进行内部片段缺失,考察其对那西肽生物合成的影响。方法利用重叠延伸PCR(Gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)的方法失活nshA基因,并构建具有接合转移功能的大肠杆菌-链霉菌重组质粒pSH03,通过接合转移将重组质粒pSH03导入到活跃链霉菌细胞内,并通过同源交换形成活跃链霉菌基因组上的nshA基因失活。采用摇瓶进行发酵,采用HPLC的方法检测发酵液中诺西肽的含量。结果重组菌株的那西肽发酵产量较对照菌株有明显提高。结论 nshA基因对那西肽的生物合成有负调节作用,该基因的失活,有利于那西肽生物合成酶结构基因的表达,使诺西肽的产量有明显提高。     

剪切环境对南昌链霉菌形态和代谢的影响

通过在摇瓶和发酵罐上考察不同剪切环境对南昌链霉菌的代谢过程和菌丝形态的影响 ,并对某些菌丝形态参数进行了定量分析 ,发现南昌链霉菌对剪切的敏感性。在此基础上通过改变发酵罐上搅拌桨叶类型促进了前期菌体生长 ,并使最终发酵效价提高了 5 2     

劳伦链霉菌的诱变育种和发酵研究

劳伦链霉菌 (S.laurentii) ATCC312 5 5是含硫多肽类抗生素硫链丝菌肽 (Tsn)的产生菌。为提高Tsn产量 ,本研究采用 UV和 NTG对劳伦链霉菌野生型进行诱变 ,筛选抗 Cu2 、抗氯霉素或磷霉素超敏的菌株 ,经平皿初筛 ,摇瓶复筛 ,获得两株生产能力高于母株的菌株 ,即 UFOM30 2、UCL30 10。其 Tsn产量较野生菌株提高 5 8%和 38%。又经种龄、接种量、通风量、补料等发酵条件的探索 ,突变株 UFOM30 2最终 Tsn的产量可达 190 0 μg/ ml左右 ,比野生型活力提高一倍 ,达到工业生产的水平     

海洋链霉菌211726代谢产物的研究

目的对来自海洋环境的链霉菌211726(Streptomyces sp.211726)的代谢产物进行分离鉴定。方法采用大孔吸附树脂和硅胶柱色谱对链霉菌211726(Streptomyces sp.211726)的代谢产物进行分离,并通过理化性质及波谱学手段对所得化合物进行结构鉴定。结果与结论分离并鉴定了2个化合物:Nocardamine(1)及其铁络合物Ferrioxamine E(2),化合物2为首次从链霉菌中分得,化合物1、2为首次同时从同一微生物中分离获得。     

生米卡链霉菌突变引起生理代谢改变的研究

链霉菌每个菌种都有自己的生理代谢特征，同一菌种经过不同的处理获得的突变株由于遗传物质突变，其生理代谢也发生了变化，生米卡链霉菌的几种不同来源的菌株不仅产生麦迪霉素的效价有差异，而且菌体的生理特征、菌体蛋白及胞外酶也发生了改变，并且对外界加入的诱导物质也存在不同的反应．这表明经过不同的诱变处理后，菌株遗传调控改变引起生理代谢变化，导致麦迪霉素发酵效价各异．     

氯氮平和思瑞康对精神分裂症患者血糖代谢的影响

目的探讨服用抗精神病药物氯氮平和思瑞康对糖耐量的影响。方法92例精神分裂症患者随机分为氯氮平组和思瑞康组,各46例,两组患者治疗前和治疗后第4周末、8周末分别检测空腹血糖、餐后1h、2h和3h血糖,并分析糖耐量。结果治疗后4周末和8周末,氯氮平组餐后1h和2h血糖浓度与治疗前比较明显升高[(8.6±1.6)(8.8±1.8)mmol/Lvs.(7.1±1.1)mmol/L,(7.2±1.1)(7.4±1.2)mmol/Lvs.(5.8±0.8)];而思瑞康组无明显变化。治疗后氯氮平组(21.7%,10例)患者糖耐量减低的发生率高于思瑞康组(4.3%,2例),差异有显著性(χ2=6.13,P<0.05)。结论氯氮平对精神分裂症患者餐后血糖有影响,而思瑞康对血糖的影响甚微。     

Effects of double encapsulation and coating on synthetic seed conversion in M.26 apple rootstock

Encapsulated vitro -derived apical buds of M.26 apple rootstock (Malus pumila Mill) can be employed for the formation of the synthetic seed. Satisfactory levels of conversion (plantlets from synthetic seed) can be achieved if there are adequate (i) rooting induction treatment, (ii) protocol of encapsulation, and (iii) nutritive and environmental conditions. For capsule manufacturing, sodium alginate is largely used; however, this is excessively permeable with loss of the nutritive substances (artificial endosperm) and/or dehydration risks during conservation and transport causing detrimental effects on the synthetic seed conversion and on the plantlet's growth. In order to overcome these problems, two experiments were carried out comparing simple encapsulation in alginate with double encapsulation, and with encapsulation-coating procedures. The presence of a second layer of alginate (double encapsulation) and of a thin external coating layer over the alginate (encapsulation-coating) did not show any detrimental effects on viability, sprouting and regrowth of the encapsulated microcuttings. Satisfactory conversion (70%) was reached with the encapsulation-coating procedure, whereas the double and simple encapsulation converted less than 40% of the synthetic seed. The effect of the addition to the capsule of an anti-microbial substance (Plant Preservative Mixture - PPM#174;) was examined: it did not compromise the conversion of the encapsulated microcuttings sown in ex-vitro non-aseptic conditions.     

发酵罐酸洗钝化对百日咳杆菌生长和产毒的影响

目的  探讨发酵罐酸洗钝化对百日咳杆菌生长和产毒的影响。方法  定期对百日咳发酵罐进行酸洗钝化处理,去除其表面附着的代谢螯合物。通过检测后续培养收获物菌浓度（550 nm吸光度值）、一次盐析物沉淀量、发酵产物中百日咳毒素（pertussis toxin,PT）和丝状血凝素（filamentous haemagglutinin,FHA）含量,比较分析判断酸洗钝化对发酵培养和产毒的影响。结果  对处理前后各连续10批相关指标进行比较,处理后菌体550 nm吸光度均值由4.663提高至5.490,一次盐析沉淀量均值由4.84 g/L提高至5.90 g/L,PT平均含量达到3.3 μg/ml,FHA平均含量达到7.6 μg/ml,处理前后各连续10批菌体浓度和一次盐析沉淀量数据采用t检验计算出P值分别为0.03和0.05,各项数据差异均有统计学意义（P≤0.05）。结论  定期对发酵罐进行酸洗钝化可有效改善百日咳杆菌发酵及产毒水平。     

实施国家基本药物制度对上海制药工业企业基层销售终端市场格局的影响

目的:评价上海实施国家基本药物制度之后对制药工业企业基层销售终端市场格局的影响。方法:比较国家基本药物制度实施前、后制药工业企业数量和市场集中度在基层销售终端市场中的变化;比较基本药物制度实施后,制药工业企业数量和市场集中度在基层销售终端市场和非基层销售终端市场中的变化。结果与结论:国家基本药物制度对基层销售终端市场中制药工业企业产生了洗牌效应。国家基本药物制度推动了制药工业企业基层销售终端市场集中度的提升,2011年下半年排名前1位、前4位和前8位企业的累计市场份额分别提升到6.18%、17.52%和29.96%。基层销售终端市场份额具有向大规模企业、大型外资企业和外地企业集中的趋势。     

Effects of clofibrate on ethanol-induced modifications in liver and adipose tissue metabolism: role of hepatic redox state and hormonal mechanisms.

Mechanisms by which clofibrate decreases the development of acute alcoholic fatty liver were studied, especially in regard to hepatic redox state and hormonal regulation of carbohydrate and lipid metabolism. A partial inhibition of the ethanol-induced increase in cytosolic NADH/NAD ratio was observed. As a result, in clofibrate-treated rats hepatic α-GP concentration during ethanol oxidation also remained at the same level as in normal control rats. Clofibrate treatment prevented the ethanol-induced increase in the adipose tissue cAMP and plasma FFA concentrations. Hepatic concentrations of CoA-SH, acetyl-CoA and long chain acyl-CoA were markedly increased by clofibrate treatment. Plasma insulin concentration was decreased in clofibrate-treated rats, which also showed an impaired glucose tolerance. The results show that clofibrate is able to restrict the availability of substrates (α-GP and fatty acids) for hepatic triglyceride synthesis in vivo. In addition, it was concluded that the partial inhibition of ethanol-induced fatty liver by clofibrate may result from the enhancement of the oxidation pathway of fatty acid metabolism as suggested by the enormous increase in hepatic content of CoA-SH and its derivatives.     

水分胁迫下肥料配比对葡萄光合速率与氮代谢的影响--测试文章

以无核白鸡心葡萄为试材,设置3个水平的水分处理和3个肥料配比,研究水分胁迫下肥料配比对无核白鸡心葡萄叶片叶面积、叶绿素含量、光合速率及氮代谢相关酶活性的影响。结果表明：萌芽期和坐果期土壤水分含量为田间持水量的55%～60%、施肥配比为N∶P∶K=2∶5∶3的水肥处理能有效促进叶面积增加,提高光合速率,是较好的水肥处理组合;转色期和采收后需维持正常含水量和适当增施钾肥可提高光合速率;土壤水分含量为田间持水量的55%～60%、施肥配比为N∶P∶K=2∶5∶3的水肥处理无核白鸡心葡萄硝酸还原酶活性较高,能有效促进氮肥的吸收利用;水分胁迫处理使谷氨酰胺合成酶活性先升高后降低,且使谷丙转氨酶活性升高。在生长期中轻度水分胁迫、适当增施钾肥能明显提高硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶与谷丙转氨酶活性,提高氮肥的转化利用。     

上海市实施国家基本药物制度对医药商业企业基层销售终端市场集中度的影响

目的:分析上海市实施国家基本药物制度对医药商业企业基层销售终端市场集中度的影响。方法:比较国家基本药物制度实施前、后即2010年下半年与2011年下半年基层销售终端市场中的医药商业企业数量和基层销售终端市场集中度。结果与结论:基层销售终端市场医药商业企业始终维持在20家,可见国家基本药物制度并未对医药商业企业产生挤出效应;2011年下半年市场份额排名前1位、前3位和前8位的企业累计市场份额(CR1、CR3和CR8)分别达到了31.75%、65.25%和90.77%,而2010年同期分别为29.41%、63.63%和87.43%,可见国家基本药物制度小幅度地提升了医药商业企业基层销售终端市场集中度。因此,需要采取更为有效的政策促进上海市医药商业企业的整合。     

UGT2B7 C802T和G211T基因多态性对癫痫患者丙戊酸代谢的影响

目的:检测尿苷二磷酸葡糖醛酰转移酶UGT2B7 C802T和G211T等位基因在癫痫患者中的分布和突变频率,探讨UGT2B7 C802T和G211T基因型对癫痫患者丙戊酸代谢的影响。方法:直接化学发光法测定丙戊酸血药浓度,PCR-RFLP技术检测UGT2B7 C802T和G211T基因多态性,PCR扩增产物直接测序验证基因型检测方法的可靠性。结果:102例癫痫患者中UGT2B7 C802T位点野生型CC14例,杂合突变型和纯合突变型CT、TT分别为46例和42例;UGT2B7 G211T位点的野生型GG78例,突变型GT、TT分别为23例和1例;位点802CC野生基因型患者服用单位剂量(mg·kg^-1)后的血药浓度为(3.02±1.32) μg·kg·ml^-1·mg^-1,CT基因型患者为(2.11±1.26) μg·kg·ml^-1·mg^-1,TT基因型患者为(2.31±1.25) μg·kg·ml^-1·mg^-1,CT、TT患者血药浓度较CC患者明显偏低,差异有统计学意义。位点211GG基因型患者服用单位剂量(mg·kg^-1)引起的血药浓度为(2.28±1.32) μg·kg·ml^-1·mg^-1,GT基因型患者为(2.30±1.38) μg·kg·ml^-1·mg^-1,GG型与GT型患者间无统计学差异。结论:UGT2B7 C802T基因多态性与丙戊酸的血药浓度有显著相关性,UGT2B7 G211T位点基因多态性与丙戊酸的血药浓度无显著相关性。临床上个体血药浓度的差异可能与UGT2B7 C802T基因多态性有关。