丹参酮ⅡA通过JNK通路诱导人骨肉瘤HOS细胞凋亡

目的:探究丹参酮ⅡA对人骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用CCK-8实验考察丹参酮ⅡA对HOS细胞活力的影响,并确定给药剂量。集落形成实验与细胞迁移实验研究丹参酮ⅡA对肿瘤细胞增殖与迁移能力的影响。Hoechst 33258染色、透射电镜与流式细胞技术检测丹参酮ⅡA对肿瘤细胞凋亡的影响。Western blot进一步检测细胞凋亡与JNK通路相关蛋白的变化;并通过JNK抑制剂验证肿瘤细胞中上述通路与凋亡的关系。结果:一定剂量的丹参酮ⅡA能抑制HOS细胞的增殖与迁移能力,且效应呈浓度依赖与作用时间依赖性,并能诱导凋亡发生。Western blot进一步表明,随着药物浓度增加,cleaved caspase-3与Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白表达下降,JNK通路相关蛋白表达上升,这些变化可被JNK抑制剂SP600125缓解。CCK-8实验结果显示,抑制JNK通路可减少药物导致的细胞活力抑制。结论:丹参酮ⅡA可通过JNK通路诱导人骨肉瘤HOS细胞发生凋亡,具有显著抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

曲古抑菌素A体内外杀伤卵巢癌细胞

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)在卵巢癌靶向治疗中的作用及机制.方法 以2种正常卵巢上皮细胞系IOSE-29和IOSE-329及3种卵巢癌细胞系ES-2、SKOV-3和OVCAR-8为研究对象,应用XTT法和流式细胞术检测TSA对卵巢癌细胞的抗增殖及诱导凋亡作用,并观察其体内疗效.结果 对比正常卵巢上皮,卵巢癌及其细胞系中HDAC6蛋白呈强阳性表达,其抑制剂TSA对ES-2,SKOV-3和OVCAR-8卵巢癌细胞系有明显杀伤作用,但正常卵巢上皮细胞对TSA不敏感,TSA处理组的卵巢癌细胞凋亡率和死亡率较未处理组高.体内实验表明:TSA处理组的ES-2裸鼠体内移植瘤生长速度较未处理组慢.结论 TSA可在体内外有效杀伤卵巢癌细胞,其机制部分是通过抑制HDAC6而实现的.     

Activin A通过JNK/ERK信号通路调控皮肤成纤维细胞肌动蛋白重组的研究

目的探讨Activin A对成纤维细胞微丝肌动蛋白的作用以及其信号机制。方法出生24 h内的C57BL/6乳鼠皮肤成纤维细胞分离培养。实验分为PBS组、Activin A组以及JNK特异性抑制剂SP600125组、ERK特异性抑制剂SL327组、p38特异性抑制剂SB202190组。3~5代成纤维细胞,提取细胞总蛋白,Western blot检测JNK、ERK、p38的磷酸化活性并且通过Phallotoxins染色观察成纤维细胞肌动蛋白变化。结果 Activin A可诱导成纤维细胞肌动蛋白聚集,给予JNK特异性抑制剂SP600125后,成纤维细胞肌动蛋白聚集现象完全被抑制;给予ERK特异性抑制剂SL327后,成纤维细胞肌动蛋白聚集现象减弱,但是尚未完全被抑制;而p38特异性抑制剂SB202190处理后,成纤维细胞肌动蛋白聚集未被抑制。结论 Activin A通过JNK和ERK信号通路诱导成纤维细胞肌动蛋白重组聚集。     

虾青素调控氧自由基/JNK信号通路介导脊髓损伤小鼠神经凋亡的研究

目的 探讨虾青素(Astaxanthin,AST)调控氧自由基/JNK信号通路对脊髓损伤处神经细胞的保护作用.方法 采用高空坠物法的方法制备脊髓损伤小鼠模型.将造模成功的小鼠随机分为SCI组与虾青素组(灌胃给予25 mg/kg的AST),另取正常C57BL/6小鼠作为假手术组.评价各组小鼠后肢功能;检测各组小鼠脊髓含水...     

曲古抑菌素A对核移植供体细胞组蛋白H3乙酰化水平的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对组蛋白H3乙酰化水平的影响,进而提高他们重编程的能力。方法用不同浓度的TSA处理胎儿成纤维细胞,应用免疫荧光和WesternBlot方法对细胞乙酰化水平进行量化分析。结果0.5nM,5nM,50nM和100nM浓度的TSA均引起供体成纤维细胞形态学的变化,对供体成纤维细胞组蛋白H3乙酰化有明显的剂量效应,随着TSA浓度增加,组蛋白H3乙酰化水平逐渐增加,在TSA浓度5nM时比0.5nM增加尤为明显。结论TSA能够提高胎儿成纤维细胞组蛋白H3乙酰化水平,提高核移植重编程的能力。     

蛇床子素对宫颈癌Hela-S3细胞活性、凋亡及相关信号通路的影响

目的:观察蛇床子素(OST)对宫颈癌Hela-S3细胞活性、凋亡的影响,探讨其相关机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖;DAPI及吖啶橙/碘化丙烷(AO/PI)染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-3、Caspase-9活性;免疫荧光法观察细胞活性氧(ROS)变化;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:不同浓度OST对Hela-S3细胞增殖抑制率明显上升,呈剂量依赖性;DAPI及AO/PI染色均显示OST可诱导Hela-S3细胞凋亡;流式细胞术检测结果显示,对照组、OST 120、200μg/ml组Hela-S3细胞48 h凋亡率分别为4.15%、31.53%及53.46%;比色法检测结果显示,不同浓度(120、160、200μg/ml)OST处理Hela-S3细胞后Caspase-3、Caspase-9活性明显上升(P<0.05);经不同浓度(80、120μg/ml)OST处理后,细胞ROS浓度逐渐升高;与对照组相比,OST组80、120、160μg/ml中Bcl-2、Survivin蛋白表达逐渐下降,而Bax、Cleaved-PA...     

KDM3A沉默对人乳腺癌 细胞系MDA-MB-231凋亡和侵袭能力的影响

目的 探讨siRNA介导的KDM3A基因沉默对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响.方法构建KDM3A基因特异性siRNA慢病毒载体.感染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞转染siRNA-KDM3A的效率;CCK-8法检测细胞增殖;Western blot检测细胞凋亡;Tran...     

曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞

 目的： 观察曲古抑菌素A(TSA)诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的适宜浓度。方法: C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞系体外培养。实验分为5组：对照组（DMSO,A组)和TSA干预组（25 nmol/L,B组;50 nmol/L,C组;100 nmol/L,D组;200 nmol/L,E组）。各组分两阶段用相应的培养基培养10 d后进行检测。双硫腙染色鉴定各组的胰岛素分泌细胞,结果进行半定量分析。免疫荧光染色鉴定各组的胰岛素分泌,比较各组胰岛素平均荧光强度。酶联免疫吸附试验检测各组胰岛素分泌细胞胰岛素的分泌量。结果: TSA作用10 d能够诱导C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细胞并分泌胰岛素。 B组胰岛素染色阳性面积、阳性率、胰岛素染色积分吸光度以及胰岛素平均荧光强度显著高于其它干预组,差异有统计学意义（均P<0.05）。 随着各干预组TSA浓度的升高,胰岛素的分泌量减少。B组胰岛素含量显著高于其它干预组,差异有统计学意义（均P<0.05）。结论：TSA处理10 d能诱导C57BL/6 小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细胞,并且25 nmol/L为TSA的适宜浓度。     

曲古抑菌素A对结肠癌细胞HCT116的作用及机制

目的通过组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人结肠癌细胞HCT116增殖与凋亡作用的研究,探讨TSA对结肠癌的作用机制。方法:应用四氮唑蓝(MTT)法、Hoechst染色法、Western blot法和光学显微镜观察经不同浓度TSA处理后的HCT116增殖、凋亡与相关蛋白的改变。结果:TSA可时间依赖性地抑制HCT116细胞生长,促进凋亡,但浓度依赖性不明显。与对照组相比,TSA作用时,脆性组氨酸三联体(FHIT)和Bax蛋白的表达均出现一定程度增加,而骨桥蛋白(OPN)的表达出现一定程度的降低,AKT蛋白表达变化不明显。结论:TSA可抑制结肠癌细胞HCT116增殖,促进其凋亡,其机制可能与上调FHIT和Bax的表达,下调OPN表达有关。     

SAPK/JNK信号通路在脑梗死后神经元凋亡中的作用

目的: 观察脑梗死后SAPK/JNK及Bcl-2/Bax信号途径中关键蛋白质的变化,以探寻各种病理因素引发神经元凋亡的分子机制。 方法: SD大鼠36只随机分为脑梗死组和假手术组。光化学法制作大脑皮层局灶缺血梗死模型, 称作光血栓皮层损伤(PCI)。7 d后取梗死灶同侧的大脑皮层行电镜检查,以Western blotting分析p-JNK1、p-JNK2、p-c-Jun、p-ATF-2、total JNK1、total JNK2、Bcl-2和Bax等关键蛋白的水平变化。结果: 光化学法可以成功复制大脑皮层局灶缺血梗死模型。在PCI后7 d,脑梗死组可见到神经元细胞凋亡和广泛的细胞器病变,p-JNK-1、p-JNK-2以及其下游的p-c-Jun、p-ATF-2的水平较假手术组显著升高,Bcl-2/Bax的比值显著降低 (P<0.05)。结论: 脑梗死发生后在较长的一段时间内都存在着以神经元凋亡为表现形式的迟发性神经细胞死亡,而这一过程可能与缺血缺氧性损伤激活了SAPK/JNK信号通路,及调节凋亡相关蛋白(如Bcl-2/Bax)等机制有关。     

Acinetobacter baumannii outer membrane protein A induces HeLa cell autophagy via MAPK/JNK signaling pathway

Autophagy is an evolutionary conserved self-balancing process that plays an important role in maintaining cellular homeostasis via the clearance of damaged organelles and misfolded proteins. Infection-triggered autophagy specifically inhibits the invasion of intracellular bacterial replication and hence protects the cells from microbial infections. It has been reported that Acinetobacter baumannii trigger cell autophagy. However, the role of its virulence protein OmpA remains unclear. Therefore, this study aimed to explore the effects of Acinetobacter baumannii OmpA on cell autophagy and its underlying molecular mechanisms. The results showed that OmpA induced autophagy in HeLa and RAW264.7 cells, increased LC3BII expression, and hindered p62 degradation. Moreover, OmpA triggered incomplete autophagy by interfering the fusion of autophagosomes with lysosomes. Besides, OmpA activated MAPK/JNK signaling pathway and enhanced the phosphorylation levels of JNK, p38, and ERK, c-Jun. Inhibition of JNK signaling pathway suppressed OmpA-induced autophagy in HeLa cells. Ab wild-type strains carrying OmpA triggered incomplete autophagy and resulted in a large number of IL-1β production. Ab-△OmpA strain (OmpA gene mutation) restored autophagic flux and reduced the accumulation of p62 and the release of IL-1β in HeLa cells. Rapamycin activated autophagy to inhibit OmpA-induced IL-1β secretion and protect HeLa cells from inflammatory damage. Collectively, these results suggest that OmpA can induce autophagy in HeLa cells through MAPK/JNK signaling pathway. Pre-treatment with Rapamycin activates autophagy and protects against cell death.     

PSMA对JNK/SAPK通路的激活及对前列腺癌细胞凋亡的调控*

 目的：探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)是否通过c-Jun氨基末端激酶/应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)通路对前列腺癌细胞凋亡进行调控。方法：利用前期研究中建立的高效阻断PSMA表达的shRNA慢病毒载体,阻断前列腺癌细胞中PSMA的表达作为实验的干扰组;同时利用构建的PSMA载体转染前列腺癌细胞,促进前列腺癌细胞中PSMA的表达作为阳性实验组;不做任何处理的细胞株作为空白组;加入JNK/SAPK抑制剂SP600125作为阴性对照。Western blotting及免疫细胞化学方法观察各组细胞p-JNK/SAPK的表达量,CCK-8法检测细胞生长情况、流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果：Western blotting及细胞免疫化学提示抑制PSMA表达后,p-JNK/SAPK表达水平下降;增强PSMA表达后p-JNK/SAPK表达水平上升;在SP600125作用下,3组细胞p-JNK/SAPK均处于较低水平,且彼此无明显差异。CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期提示PSMA表达受抑制后细胞增殖能力下降,细胞S期百分比减少;增加PSMA表达,细胞增殖能力增强,S期百分比增加;在SP600125作用下,3组细胞增殖和S期百分比均处于低水平,无明显差异。在抑制PSMA表达组中,前列腺癌细胞的凋亡率明显升高;而在增强PSMA表达组,细胞凋亡率明显降低;加入SP600125后,细胞凋亡率均低于常规培养组。结论：PSMA通过上调JNK/SAPK信号通路对前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及凋亡产生影响,但JNK/SAPK并不是唯一通路。     

JNK信号转导通路对神经干细胞增殖的影响

目的 探讨JNK信号转导通路对新生大鼠海马神经干细胞增殖的影响.方法 采用无血清培养技术体外培养新生大鼠海马神经干细胞,传至第4代,大多数克隆球直径约为200 μm时,进行单细胞克隆培养,单细胞克隆形成的克隆球进行传代.将培养细胞随机分为2组,对照组采用神经干细胞培养液进行培养,实验组中在神经干细胞培养液的基础上添加不...     

马钱子碱通过抑制IL-6/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:探讨马钱子碱(brucine)在体外对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响及可能的分子机制。方法:实验以人结肠癌细胞系SW480细胞为研究对象,分为空白对照组、brucine(1μmol/L)处理组、IL-6(100μg/L)处理组和brucine(1μmol/L)与IL-6(100μg/L)联用组,用CCK-8法检测细胞活力抑制率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。细胞免疫荧光检测相关蛋白表达定位和强度。结果:Brucine处理组和brucine与IL-6联用组都能抑制结肠癌细胞的活力,brucine浓度相同时,联用组抑制率小于brucine处理组(P0.05)。与空白对照组相比,单用brucine处理组凋亡细胞明显增多(P0.05)。与单用brucine相比,brucine与IL-6联用组凋亡细胞明显减少(P0.05)。与对照组相比,brucine能降低p-STAT3蛋白水平。与空白对照组相比,单用brucine组p-STAT3的蛋白减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP明显增多;与空白对照组相比,单用IL-6处理组的p-STAT3明显增多(P0.05);而与单用brucine相比,brucine与IL-6联合应用组的p-STAT3蛋白增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP均相对减少(P0.05)。结论:体外细胞实验中brucine可能通过调节IL-6/STAT3通路,抑制结肠癌SW480细胞中STAT3的磷酸化激活,从而发挥抗肿瘤作用。     

MEX3A通过PI3K/Akt信号通路促进结直肠癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨MEX3A在结直肠癌(CRC)中的表达水平,及MEX3A对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制.方法 通过TCGA数据库获取327例数据(正常组织41例,肿瘤组织286例),收集临床样本104例(癌旁组织27例,癌组织77例),进行免疫组织化学染色,分析MEX3A在结直肠癌和正常组织间表达的差异.利用Wes...     

Effects of portulacerebroside a on apoptosis of human leukemia HL60 cells and p38/JNK signaling pathway

Acute myeloid leukemia is known as one of the most malignant diseases. We aimed at exploring the effect of portulacerebroside A (PCA) on the apoptosis in human leukemia HL60 cells and clarify the possible mechanisms involved in. By MTT analysis, we found that PCA (1-100 μM) inhibited the cell viability in a time- and dose-dependent manner, and cell cycle was arrested at G0/G1 period. PCA treatment from 5 to 50 μM dose-dependently induced apoptosis from 12.7 ± 1.56% to 52.7 ± 6.214% of HL60 cells. Mitochondrial membrane potential (MMP) was decreased and reactive oxygen species (ROS) accumulated obviously. mRNA expressions and protein levels of Bax/Bcl-2, caspase-3 and caspase-9 were elevated significantly. ERK1/2, JNK1/2 and p38 MAPK pathway were blocked detected by western blot analysis. In conclusion, PCA can act as a new agent for leucocythemia treatment.     

PM2.5通过p38 MAPK信号通路影响血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:研究细颗粒物(PM2.5)对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,以及p38 MAPK信号通路在其中的作用。方法:体外培养人血管平滑肌细胞,分为对照组和不同浓度PM2.5染毒组,分别用PBS及6.25、12.5和25 mg/L的PM2.5作用于细胞,用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的变化,用划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移能力,然后根据结果选取PM2.5最强作用浓度染毒细胞,在不同时点用Western blot法检测p38MAPK信号分子的磷酸化改变,并观察用特异性抑制剂阻断p38 MAPK信号后细胞在PM2.5刺激下的增殖和迁移情况。结果:与对照组比较,PM2.5染毒可明显促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力,在设定的浓度范围内以12.5 mg/L浓度组的作用最为明显(P<0.05)。Western blot结果显示,12.5 mg/L PM2.5染毒可上调血管平滑肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平;而加入p38 MAPK抑制剂SB203580预处理后,PM2.5诱导的细胞增殖和迁移明显受到抑制,说明p38 MAPK可能介导PM2.5的毒性作用。结论:PM...