丙酮酸乙酯对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用

目的:探讨百草枯(paraquat)时小鼠肺损伤的作用机制,及丙酮酸乙酯对肺损伤的保护作用.方法:C57BL 小鼠腹腔注射百草枯(20mg/kg)诱导损伤(PI组);2h后腹腔注射丙酮酸乙酯(40 mg/kg).在损伤6、12、24 h后,酶联免疫吸附法(ELIS)检测血清血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平;24 h后观察肺病理改变;免疫组织化学检测Caspase-3的蛋白表达.结果:PI组小鼠血清TNF-α和IL-1β水平在给予百草枯后迅速升高,约在6 h达高峰,之后迅速下降.经丙酮酸乙酯治疗,血清TNF-α和IL-1β水平均低于PI组,且在6h差异显著(P<0.01).结论:百草枯可引起小鼠细胞炎性因子TNF-α和IL-1β大量产生,TNF-α和IL-1β可能参与肺损伤过程;早期给予丙酮酸乙酯能降低TNF-α和IL-1β的释放,降低caspase-3蛋白的表达,抑制细胞凋亡,可以减轻肺组织损伤.     

丙酮酸乙酯对脓毒症小鼠器官损伤的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯(EP)与碱性磷酸酶(ALP)在脓毒症损伤过程中的作用机制.方法 建立小鼠盲肠结扎穿孔致脓毒症模型.90只雄性昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、EP干预组;制模后1 h EP组腹腔给予EP 75 mg/kg,模型组给予等量乳酸林格液;两组分别于术后15 min和1、3、6 h各取10只小鼠摘除眼球并取血后活杀.用全自动生化分析仪检测血清中ALP、尿酸(UA)及肺组织匀浆中乳酸/丙酮酸比值;采用苏木素-伊红(HE)染色观察小肠组织病理学变化并进行小肠病理损伤评分.结果 与假手术组比较,模型组和EP组血清ALP均呈显著下降趋势(P<0.05或P<0.01),EP组术后6 h显著低于模型组(P<0.05).模型组血清UA水平1 h时显著升高,3 h达峰值(P均<0.05),随后下降;而EP组呈相反的变化趋势,于1 h、3 h显著低于模型组(P均<0.05).EP组肺组织匀浆乳酸/丙酮酸比值于各时间点均显著低于模型组(P均<0.05).病理学观察发现,与模型组比较,EP组肠道结构损伤随时间延长明显减轻;3 h、6 h时小肠病理损伤评分明显低于模型组(P均<0.05).结论 EP能促进血清ALP的利用,降低血清UA水平,改善机体酸中毒以及肠道损伤,对脓毒症所致损伤的脏器发挥保护作用.     

丙酮酸乙酯对严重腹腔感染时肠黏膜过氧化损伤的防治作用

目的探讨丙酮酸乙酯对严重腹腔感染大鼠肠黏膜过氧化损伤的防治作用。方法将36只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组、腹腔感染组和治疗组，每组12只。腹腔感染组采用盲肠结扎加穿孔术（CLP）制作严重腹腔感染模型;治疗组行CLP后皮下注射丙酮酸乙酯40mg／kg，每8h1次；对照组仅行单纯剖腹手术。各组于术后24h和48h分别取小肠组织进行病理学观察，记录小肠黏膜病理损伤分级，同时检测小肠及血清丙二醛（MDA）含量、小肠髓过氧化物酶（MP0）活性。结果术后24h和48h腹腔感染组血清和小肠MDA水平均显著高于对照组（P均〈0．05）。且两者呈显著正相关（r=0．867，P〈0．05）；治疗组较腹腔感染组小肠黏膜病理性损害明显减轻，病理分级显著降低（P均〈0．05）；治疗组血清MDA和小肠MPO水平均明显低于腹腔感染组（P均〈0．05）。结论严重腹腔感染时过氧化损伤导致肠黏膜屏障功能障碍，丙酮酸乙酯具有减轻大鼠肠黏膜过氧化损伤的作用。     

丙酮酸乙酯对大鼠自身免疫性关节炎的治疗作用

目的观察丙酮酸乙酯对自身免疫性关节炎（CIA）大鼠关节炎症、骨质破坏及血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）表达水平的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的可能机制.方法实验大鼠分为正常对照组、CIA模型组和丙酮酸乙酯（EP）治疗组.用关节炎指数评价关节炎肿胀程度、HE染色、检测关节滑膜炎症及骨质破坏、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清TNF-α、IL-10浓度.结果 EP治疗组关节炎指数明显低于CIA模型组（P〈0.05）,EP治疗组炎性细胞渗出及骨质破坏明显低于CIA模型组（P〈0.05）,EP治疗组血清TNF-α水平较CIA模型组明显降低而IL-10水平明显升高（P〈0.05）.结论丙酮酸乙酯能减轻大鼠关节炎症、骨质破坏,能降低血清TNF-α表达水平、提高IL-10表达水平,表明丙酮酸乙酯有望成为治疗类风湿关节炎（RA）的一种新药.     

丙酮酸乙酯对小鼠胎盘和胎鼠早期生长的影响

目的分析丙酮酸乙酯对小鼠胎盘和胎鼠早期生长的影响。方法40只孕鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。在胎鼠器官形成期即妊娠第7~16天通过腹腔注射方式给药,低、中、高剂量组丙酮酸乙酯注射剂量分别为25 mg·kg^-1·d^-1、50 mg·kg^-1·d^-1和100 mg·kg^-1·d^-1。对照组注射等量生理盐水。在孕鼠妊娠的第17天经眼球取血后处死,通过对孕鼠的行为能力、脏器系数、黄体数、着床率、雌二醇、胎盘组织结构、胎鼠体重及胎鼠畸形等进行分析、检测,探讨丙酮酸乙酯对小鼠胎盘和胎鼠早期生长的影响。结果与对照组比较,胚胎发育期给孕鼠腹腔注射丙酮酸乙酯,中低剂量有助于促进卵巢、胎盘发育,提高胚胎着床率,促进雌二醇表达;过高浓度处理,则会造成卵巢和胎盘的功能的抑制作用。胚胎发育期给孕鼠腹腔注射丙酮酸乙酯,中低剂量有助于促进胚胎成活,降低胎鼠畸形率。结论合适剂量(50 mg·kg^-1·d^-1)的丙酮酸乙酯处理,有助于小鼠胎盘和胎鼠早期生长均有促进作用,过高剂量处理将发生一定的抑制作用。     

丙酮酸乙酯对大鼠脓毒症肺损伤的保护作用

目的观察丙酮酸乙酯对脓毒症肺损伤大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-1β（IL—1β）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达的影响，探讨丙酮酸乙酯治疗脓毒症肺损伤的免疫调节机制。方法40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症肺损伤组和丙酮酸乙酯（40mg／kg，每隔6h腹腔内注射一次）治疗组，每组10只。用ELISA法检测2h血清TNF—α、IL—1β表达。所有犬鼠24h后活杀，Western blotting法检测肺组织HMGB1的表达，观察PaO2、PaCO2和pH等血气变化以及肺组织的病理变化。结果脓毒症肺损伤组血清TNF—α、IL—1β和肺组织HMGB1表达显著增高，PaO2、pH降低，PaCO2升高，病理显示明显肺损伤（P均〈0．01）。丙酮酸乙酯治疗后血清TNF—α、IL—1β和肺组织HMGB1表达显著下调，PaO2、pH升高，PaCO2降低，病理显示肺损伤程度减轻（P均〈0．01）。结论丙酮酸乙酯能显著抑制TNF—α、IL—1β和HMGB1等早晚期炎症因子，改善低氧血症，对脓毒症肺损伤有明显保护作用。     

丙酮酸乙酯对肝细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨丙酮酸乙酯在肝细胞氧化应激损伤中的作用及机制。方法:通过对人肝细胞系L-02进行缺氧/复氧处理各1 h建立氧化应激损伤模型。将L-02根据干预措施分为对照组(Control组)、乳酸钠林格液组(LR组)、丙酮酸乙酯组(EP组)。应用日本日立公司7020全自动分析仪检测细胞培养上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)浓度;采用Hoechst 33342/碘化丙啶双标记荧光染色以及原位缺口末端标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡和坏死情况;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测各组caspase-9、caspase-3与多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达;采用荧光素发光法测量各组肝细胞内ATP浓度。结果:EP组细胞培养上清液中AST和ALT浓度均低于Control组和LR组(P0.05);EP组坏死细胞比例低于Control组和LR组(P0.05),但凋亡细胞比例高于Control组和LR组(P0.05)。EP组活化形式的caspase-9、caspase-3与PARP蛋白表达水平高于Control组和LR组(P0.05)。EP组细胞内ATP浓度显著高于Control组和LR组(P0.05)。结论:EP对肝细胞氧化应激损伤有保护作用,能减少坏死细胞数量,增加凋亡细胞数量,改变坏死及凋亡细胞比例。EP的细胞保护作用机制可能在于改善能量代谢,提高细胞内ATP浓度,激活"凋亡/坏死共同通路",激活凋亡过程。     

丙酮酸乙酯对脓毒性休克犬氧代谢及组织灌注指标的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯(EP)对脓毒性休克犬组织氧合及灌注指标的影响.方法 健康雄性杂种犬20只,用脂多糖(LPS)静脉注射复制犬脓毒性休克模型,随机分为对照组(n=8)和EP组(n=12).对照组只接受林格液复苏;EP组除给予林格液复苏外加EP,首剂0.05 g/kg,然后以0.05 g·kg-1·h-1的量持续泵入.脓毒性休克模型稳定后记为0 h,此后12 h内每2 h收集组织氧合及灌注指标:氧输送(DO2)、氧消耗(VO2)、血乳酸(Lac)水平、混合静脉血氧饱和度(S vO2)、尿量、胃黏膜pH值(pHi)、胃-动脉二氧化碳分压差(Pg-aCO2).结果 脓毒性休克模型建立后,DO2、VO2、S vO2、尿量明显下降(P均＜0.05),Lac、Pg-aCO2明显上升(P均＜0.05).EP组DO2逐渐回升,8 h后与对照组比较差异仍有统计学意义(P＜0.05);VO2也有增加趋势,但与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);S vO2逐渐上升,10 h后已显著超过制模前水平,且与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);Lac水平逐渐下降,8 h后与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);尿量在8 h后明显增加,10 h后与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);pHi在6 h后明显上升,且与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);Pg-aCO2在休克后8 h其升高程度较对照组低(P＜0.05).结论 EP可以改善脓毒性休克犬氧代谢及组织灌注.     

丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能保护作用的研究

目的 观察丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate ,EP)干预治疗对脓毒症大鼠生存率和肠黏膜屏障的影响.方法 ①EP对脓毒症大鼠生存率的影响:无特定病原雄性SD大鼠100只随机分为假手术组(A组)、脓毒症组(B组)、EP早期治疗组(C组)及EP延迟治疗组(D组),每组25只,利用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)制作大鼠脓毒症模型,各组均于术后6、12、18、24、36、48、60、72 h腹腔内注射给药3 mL,C、D组分别于术后6、12 h开始予EP(40 mg/kg),A、B两组同法予等量林格乳酸钠溶液(ringer lactate solution ,RLS),每隔12 h记录死亡情况,分析比较5 d生存率;②EP对脓毒症大鼠肠黏膜屏障的影响:80只无特定病原雄性SD大鼠随机分为四组,每组20只,分组及给药方法与方法一相同,术后24、48 h各处死10只.测定各时间点血浆D-乳酸、DAO的变化,同时用透射电镜观察术后48 h肠黏膜上皮细胞超微结构的变化.采用Kaplan- Meier生存分析法进行生存分析,多组均数间比较采用单因素方差分析的方法, 多组均数间两两比较采用SNK-q检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 A、B、C、D四组大鼠5 d生存率分别为100%、24%、68%、56%,与B组相比,C、D组大鼠5 d生存率明显提高(P<0.05),C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05);与B组相比,C、D组术后24 h和48 h血浆D-乳酸含量明显下降(P<0.01);与B组相比,C组、D术后24 h和48 h血浆DAO活性明显下降(P<0.01),C、D组术后24、48 h血浆D-乳酸含量、DAO活性差异无统计学意义(P＞0.05);电镜下C、D组肠黏膜上皮细胞损伤较B组明显减轻,细胞间紧密连接较清楚.结论 脓毒症时肠黏膜损伤严重,EP早期与延迟干预治疗能有效保护肠黏膜屏障,提高5 d生存率,具有抗脓毒症作用 .     

3-溴丙酮酸治疗人胃癌细胞动物模型的实验研究

目的:探讨3-溴丙酮酸(3-Bromopyruvic acid;3-BrPA)对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠皮下种植瘤的抑制作用。方法:建立人胃癌裸鼠皮下种植瘤模型,将成瘤后的裸鼠随机分为实验组:3-BrPA低、中、高剂量组,PBS(磷酸盐缓冲液)阴性对照组1(pH7.4)、对照组2(pH6.8～7.8)及阳性对照5-FU组。连续4周每天瘤体周围皮下注射给药,停药24h后取下瘤体;原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞凋亡指数,透射电镜下观察肿瘤组织细胞形态及结构变化;计算肿瘤的体积抑瘤率。结果:3-BrPA给药组的瘤体积分别与2个PBS组比较均有意义(P<0.05),其中高剂量组与5-FU组差异无统计学意义(P>0.05)。透射电镜观察到3-BrPA低、中、高组及5-FU组裸鼠的肿瘤组织细胞均出现典型的凋亡特征。TUNEL法检测凋亡指数显示:实验组凋亡指数分别与2个阴性对照组比较均有意义(P<0.05),其中5-FU组凋亡指数与中剂量组差异无统计学意义(P>0.05),而与高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:3-溴丙酮酸在体内对人胃癌细胞SGC-7901种植瘤有较强的抑制作用。     

X染色体连锁T-B＋严重联合免疫缺陷1例报告及文献复习

目的：分析1例临床罕见的X染色体连锁T-B＋严重联合免疫缺陷病（X-linked T-B＋severe combined immunodeficiency,X-SCID）患者的主要特征和诊治要点。方法：整理1例X-SCID患者的临床资料及流式细胞术检测和IL2RG基因分析结果,并结合相关文献进行分析。结果：患者为3个月17 d的男婴,出生后1个月始反复出现口腔溃疡、发热及难治性腹泻,实验室检查结果显示其体液及细胞免疫功能均低下,基因分析证实其存在IL2RG基因突变,确诊为X-SCID。结论：X-SCID的主要临床表现为,男性患儿在出生后早期即可发生严重的致死性感染,腹泻迁延不愈,体液和细胞免疫缺陷。该疾病可通过基因分析确诊,而早期诊断和及时进行骨髓移植可改善患儿的预后。     

超声造影对进展期胃癌肝转移的评价

目的 评价超声造影在诊断进展期胃癌肝转移中的价值.方法 对206例进展期胃癌患者运用超声造影技术对胃癌病灶进行检查的同时进行肝超声造影检查,观察肝超声造影增强情况,并与二维超声结果比较.结果 206例进展期胃癌患者二维超声检查共发现21例(85个)肝内转移性病变,而超声造影检查发现28例(147个)肝内转移性病变,新增7例(41个)二维超声检查均未发现肝内转移性病灶,而在胃癌超声造影检查同时发现肝内多个低增强才得到诊断,重新回到二维检查程序还是不能发现病灶.超声造影检查对肝转移灶的检出率显著高于二维检查(10.2%vs13.6%,X2=5.143,P＜0.05).结论 超声造影可弥补二维超声的不足,可作为进展期胃癌肝转移的首选检查方法之一.     

脓毒症氧化应激与抗氧化治疗研究进展

脓毒症(sepsis)是感染引起的全身炎性反应综合征,是急危重患者的严重并发症之一。氧化应激是机体活性氧簇和活性氮簇产生过多或清除能力下降,导致潜在性损伤的病理过程。氧化应激在脓毒症发生、发展中发挥重要作用,早期进行抗氧化干预可能有益于脓毒症防治。丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)是一种稳定的丙酮酸酯类衍生物,它对于发生急性损伤的器官具有显著的保护作用。本文就脓毒症氧化应激与丙酮酸乙酯抗氧化治疗的最新进展作一综述。     

丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠认知功能的改善作用及机制研究

目的探讨丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠认知功能的影响及其机制。 方法实验一：采用盲肠结扎穿孔法（CLP）制备脓毒症大鼠模型,50只健康雄性SD大鼠随机分为5组（n=10）,分别为假手术组（C组）、脓毒症组（S组）,脓毒症＋高迁移率运动蛋白族1（HMGB1）处理组（SH组）,假手术＋HMGB1处理组（H组）,脓毒症＋丙酮酸乙酯处理组（SE组）。SH组、H组则行侧脑室注射0.5 μg/μl重组HMGB1 5 μl,余3组侧脑室给予等体积0.9%NaCl;SE组皮下注射含80 mg/kg丙酮酸乙酯,余4组给予等量0.9%NaCl;造模后观察不同组别大鼠的7 d死亡率。实验二：分组处理同前（n=20）,造模处理48 h后行6 d Morris水迷宫定位航行训练及随后1次空间探索实验,检测大鼠学习记忆能力。实验三：分组同前（n=30）,造模处理48 h后,取脑组织测脑水含量,尼氏染色观察海马区神经元的形态数目,实时定量基因扩增荧光检测系统（RT-qPCR）检测海马HMGB1、离子钙接头分子（Iba-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）及β样淀粉前体蛋白（APP）的mRNA表达。 结果（1）与C组相比,S组、SH组生存率明显减低（P<0.05）,H组、SE组改变差异无统计学意义（P>0.05）。（2）Morris水迷宫行为学实验,5组间游泳速度差异无统计学意义（P>0.05）;与C组比较,S组、SH组、H组、SE组游泳距离、逃避潜伏期延长,穿越虚拟平台次数及目标象限停留时间百分比减少（P<0.05）;与S组比较,SH组游泳距离、逃避潜伏期增加,SE组缩短。（3）与C组比较,其余4组脑水含量增高（P<0.05）;与S组比较,SH组脑水含量增高,SE组脑水含量减低（P<0.05）,H组脑水含量低于S组但高于C组（P<0.05）。尼氏染色显示,与C组比较,S组、SH组、H组、SE组导致海马CA1区正常神经元数量减少（P<0.05）,与S组比较,SH组神经元数量较少,SE增高（P<0.05）。与C组比较,S组、SH组HMGB1、TNF-α、IL-1β、Iba-1、APP mRNA表达均上调（P<0.05）,SH组更为明显,SE组HMGB1、TNF-α、IL-1β、Iba-1 mRNA表达上调（P<0.05）,APP mRNA表达增加但差异无统计学意义（P>0.05）;与S组比较,SE组HMGB1、TNF-α、IL-1β、Iba-1 mRNA表达下调,APP mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。 结论丙酮酸乙酯可改善脓毒症所致的认知功能障碍,其机制与减轻炎症反应,改善血脑屏障功能有关。     

Short term exposure to ethyl pyruvate has long term anti-inflammatory effects on microglial cells

Ethyl pyruvate (EP) has been increasingly appreciated as an anti-inflammatory and neuroprotective agent with potent pharmacological properties relevant for treatment of various CNS disorders. Microglial cells seem to be particularly sensitive to its effects. In this study, microglial cells were exposed to EP for relatively short periods (10–120 min) and inflammatory properties of the cells were determined after 24 h of cultivation. Application of EP in the short-term periods inhibited production of interleukin-6, tumor necrosis factor and nitric oxide in microglial cells. At the same time, the effects on cell viability, reactive oxygen species generation and expression of F4/80 and CD40 of microglial cells were minor. NFκB activation was not affected by EP in the cells during the short exposures, thus implying that the observed effect of EP on cytokine and nitric oxide generation was performed in NFκB independent way. Importantly, effects of the short term EP treatment on microglial cells were detected by a real time cell analysis, as well. The observed ability of EP to affect microglial cell function after relatively short time of exposure is relevant for its therapeutic potential against inflammatory disorders of the CNS.     

小干扰RNA下调GLI1基因的表达对MKN28细胞转移侵袭行为的影响

目的利用siRNA技术下调GLI1基因的表达,在体外研究GLI1对MKN28胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法脂质体法将GLI1 siRNA转染MKN28胃癌细胞,采用RT-PCR观察GLI1 siRNA转染前后GLI1在mRNA水平的变化情况。培养MKN28胃癌细胞,将细胞分为转染GLI1 siRNA组、阴性siRNA组和对照组后,分别采用Transwell小室法检测各组细胞的侵袭和转移能力。结果转染GLI1 siRNA后GLI1基因表达在24 h和48 h明显下调。侵袭和转移实验显示:GLI1 siRNA组侵袭和转移细胞数目均低于阴性siRNA组和对照组(P<0.05),而阴性siRNA组和对照组间的差异均无统计学意义。结论转染GLI1 siRNA特异下调GLI1基因表达,在体外抑制胃癌MKN28细胞的侵袭和转移,可能是胃癌靶向治疗的靶点。