不同mRNA差异显示法筛选胃癌细胞耐药相关基因的研究

 目的　比较银染和放射自显影mRNA差异展示方法在分离、克隆胃癌细胞耐药相关基因过程中的优缺点。方法　长春新硷诱导人胃癌SGC790 1细胞 ,建立稳定的耐药细胞亚系SGC790 1/VCR。同时应用银染和放射自显影的mRNA差异展示方法筛选胃癌SGC790 1细胞和耐药细胞亚系SGC790 1/VCR之间mRNA表达的差异。结果　显示银染法省时 ,花费少 ,操作方便 ;在获得差异条带方面放射自显影法明显优于银染法 ,且其能得到较多低丰度的差异表达基因 ;而两者在二次PCR扩增 ,克隆 ,测序 ,杂交鉴定及假阳性率方面无明显差异。结论　银染mRNA差异展示法适合于高丰度差异表达基因的快速筛选 ,而放射自显影mRNA差异展示则能较彻底地显示两种细胞中多数mRNA的差异     

辐射致癌相关蛋白质的筛选及其表达

目的: 通过建立辐射致癌的细胞模型，应用蛋白质组学技术观察辐射癌变细胞和正常细胞间的差异蛋白表达谱，以期获得辐射致癌相关蛋白。方法：选取永生化的人支气管上皮细胞株（BEAS2B），利用γ射线照射诱导癌变，建立辐射致癌的细胞模型。应用二维凝胶电泳技术，筛选癌变细     

mRNA差异显示技术及其在肿瘤研究中的应用

mRNA差异显示技术是目前用于分析基因表达差异的方法，近年来发展迅速，广泛应用于肿瘤等生物学各领域。现综述mRNA差异显示技术的新发展及其在肿瘤研究中的应用。     

mRNA差异显示法筛选卵巢癌细胞株细胞耐药相关基因的初步研究

目的：研究卵巢癌耐药细胞系ＯＣ３／Ａｄｒ和卵巢癌敏感细胞系ＯＣ３在ｍＲＮＡ分子水平上的表达差异,方法：用高浓度阿霉素间歇诱导法建立卵巢癌耐药细胞系;应用ｍＲＮＡ差异显示方法找出两株细胞间ｃＤＮＡ差异表达片段,ＲＴ－ＰＣＲ检测耐药细胞表达差异片段在卵巢癌细胞和组织中的表达。结果：建立了稳定传代的卵巢癌耐药细胞系ＯＣ３／Ａｄｒ,耐药指数为１５．４;ＯＣ３／Ａｄｒ对ＶＰ１６,ＣＤＤＰ,５－ＦＵ的耐药指数     

mRNA差异显示技术及其在肿瘤研究中的应用

mRNA差异显示技术是目前用于分析基因表达差异的方法,近年来发展迅速,广泛应用于肿瘤等生物学各领域.现综述mRNA差异显示技术的新发展及其在肿瘤研究中的应用.     

差异显示技术在消化系统肿瘤研究中的应用

差异显示技术是近年发展并渐成熟的用于检测未知表达基因的新技术 ,本文简要回顾近年来该技术在消化系统肿瘤研究中的应用。     

mRNA差异显示技术的改进及在肿瘤中的应用

在真核生物中,从个体的发育、生长、衰老、死亡,到组织、细胞的分化、凋亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答,本质上都涉及基因在时间上或空间上选择性表达,即基因的差异表达,因而获取差异表达的基因将有助于了解正常生理变化和病理改变的分子机制,为基因诊断、基...     

应用荧光差异显示法对胃癌及癌前病变相关基因的研究

背景与目的：一般认为胃癌是由癌前病变(慢性萎缩性胃炎、肠化生和不典型增生)逐步发展形成的。mRNA差异显示法是筛选肿瘤发生、发展中差异表达基因的有用方法。在胃癌、癌前病变中寻找差异表达的基因将有助于确定胃癌发生前的胃粘膜组织的分子变化。方法：应用荧光mRNA差异显示技术分析胃癌(2例)、癌前病变(2例)和正常胃粘膜(2例)组织,鉴别并分离差异表达的基因片段,进行PCR再扩增。将扩增cDNA片段克隆后进行测序,测序结果提交GenBank,经BLAST软件检索以进行同源性分析。RT-PCR检测血影蛋白基因在胃癌(7例)、癌前病变(7例)和正常胃粘膜(7例)的表达。结果：发现4个差异表达的cDNA片段,其中3个cDNA片段在胃癌中高表达,1个cDNA片段在正常组织和癌前病变组织中高表达。1个在胃癌组织中高表达的cDNA片段与血影蛋白基因(SPTANl)同源,RT-PCR检测也发现血影蛋白基因在胃癌组织中高表达。另外3个与GenBank中已知的基因序列同源,但其功能目前尚不清楚。结论：所发现的4个差异表达的基因有3个在胃癌组织中高表达,其中SPTAN1基因在胃癌组织的表达比正常胃粘膜及胃异型增生组织表达明显高。     

辐射诱导辐射耐受鳞癌细胞株的建立及其生物学特性

目的通过辐射人喉鳞癌细胞株Hep-2获得辐射耐受细胞株Hep-2R，建立一个放射敏感性研究的对比模型。方法用γ线反复照射Hep-2细胞，建立辐射耐受细胞Hep-2R。成克隆实验法测定两株细胞不同剂量照射后的细胞存活分数，拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数。光镜、电镜、活细胞计数、染色体分析及流式细胞仪周期分布比较其生物学差异。结果经7个月辐射诱导得到了一个放射敏感性不同于亲本细胞株的Hep-2R细胞株，并已稳定传30代以上且辐射耐受性能稳定。其SF2=0．680、D0=3．24Gy、D0=1．90Gy、N=1．80，而Hep-2细胞SF2=0．415、Db=2．06Gy、D0=1．01Gy、N=1．64。Hep-2R细胞形态及染色体数目发生了改变，群体倍增时间较亲本细胞延长。细胞周期分析显示G1期细胞增多，S、G2期细胞减少。结论通过辐射诱导可以从Hep-2细胞株得到辐射耐受细胞株Hep-2R，这种相同背景、不同放射敏感细胞株为进一步研究放射敏感性的分子机制提供了一个良好对比模型。     

Establishment of differential display mRNA and its application in the study on the mechanism of lung cancer induced by radiation

DifferentialdisplaymRNAwasdevelopedasameth0dt0identifyandanalyzealteredgeneexpressionatthemRNAlevelinanyeukaryoticcell.l1]Regardingthem0lecularmechanismofradiation-ass0ciatedcancer,thealterationandregulati0nofwellknownoncogenesandsuppressergenes,suchasras,myc,p53andRbhavebeeninvestigatedextensively.'='WeusedandmodifiedthedifferentialdisplaymRNAtostudythegenesrelatedtolungcancerinducedbyradiation.MATERIALSANDMETHODSCellandTissueSampleRNAIsolati0nThecellsusedintheexperimentwereSH…     

BALB/C小鼠免疫耐受模型建立及移植人体肺癌初步研究

目的：获得一种能移植人体肿瘤并存活的动物模型。方法：将郑氏植物蛋白（ZPP）0.1ml皮下注射BALB／C小鼠，诱导其免疫耐受性移植人体肺肿瘤组织。结果：移植肺肿瘤在模型动物体内存活，成功率可达65％（26／40），而对照组小鼠体内移植瘤全部被排斥，不能存活。结论：ZPP可引起小鼠对人体肺肿瘤细胞免疫耐受，使移植瘤成活。     

枢复宁和胃复安对肺癌化疗引致恶心呕吐疗效分析

自１９９１年１月～９月，选择以顺铂为主的联合化疗方案（ＭＡＰ、ＭＶＰ、ＶＰ１６＋ＤＤＰ等）治疗８０例非小细胞肺癌。分为Ａ、Ｂ二组，即６０ｍｇ／Ｍ２（术后组）和９０ｍｇ／Ｍ２（治疗组）。疗效评定：急性期（ｄ１）枢复宁为９５％，优于胃复安（５７．５％）；延缓期（ｄ２～５）枢复宁为７７．５％，胃复安为８０％。枢复宁副作用是腹胀、便闭、大便干燥和肠蠕动增强，经对症治疗后均好转，未出现椎体外系反应。     

NSE—McAb双位点夹心ELISA的建立及在小细胞肺癌中的应用研究

本文在自制８株神经原特性烯醇化酶单抗（ＮＳＥ－ＭｃＡｂ）的基础上，对４株ＭｃＡｂ分别标记辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），经多次方阵排列滴定，建立了ＮＳＥ－ＭｃＡｂ双位点夹心ＥＬＩＳＡ。通过对２３例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ），３２例非小细胞肿癌，（ＮＳＣＬＣ），２２例肺良性疾病（ＢＰＤ）和正常对照血清中ＮＳＥ检测表明，对ＳＣＬＣ诊断的阳性率为８２．６％。特异性为９７．８％，对ＳＣＬＣ的临床分期和判断预后也有一     

APL经ATRA诱导后高白细胞征机制的进一步研究

目的 :揭示 APL患者 ATRA治疗后高白细胞征的机制。方法 :外周血 WBC计数及分类按常规进行。体内外粒 -单系集落 (CFU- GM)按半固体琼脂法进行。ATRA体内实验中的骨髓与脾脏均用 2 0 0目网研磨制成单个细胞悬液后计 WBC数。结果 :ATRA临床治疗 APL 患者可引起明显的 WBC、早幼粒及较成熟粒系升高。CFU- GM呈现升高趋势。而 APL 患者骨髓 CFU- L 逐渐降低。正常小鼠的体内实验中 ,ATRA明显增加其骨髓CFU - GM形成 ,6 0 min时外周 WBC增加 (P<0 .0 5 ) ,单位重量脾 WBC明显减少 ,但骨髓 WBC无明显变化。结论 :ATRA可引起小鼠贮存池 WBC向外周血中分布 ,体内作用 15 d后 ,骨髓 GU - GM升高。但与临床 APL患者 WBC变化的时相不一致。     

乳癌组织中C—erbB—2基因扩增与临床关系的研究

本文应用差别聚合酶链式反应检测了６３例乳癌患者新鲜手术标本的Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因。结果表明，共在１３例乳癌患者中检测出Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增。在有淋巴结转移的乳癌患者中，Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增的阳性率为２１．６％，尚无淋巴结转移的患者中，阳性率为１９．２％，两者无统计学差异。在５０例临床分期明确的病例中，Ⅲ期的Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增阳性检出率为５／１７，Ⅳ期为１／４，高于Ⅱ期４／２７及Ⅰ期０／２，但     

肺癌及肺鳞癌癌前病变中K—ras基因点突变的研究

应用ＰＣＲ技术及限制性片段长度多态性分析方法，研究了４１例非小细胞肺癌和１４例肺鳞癌癌前病变中的Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变，结果在非小细胞肺癌中检出１０例Ｋ－ｒａｓ基因点突变，突变率为２４．４％，而在１４例肺鳞癌癌前变中未检出一例，这提示Ｋ－ｒａｓ基因点突变虽然不发生在肺鳞癌癌前病变阶段，但仍与非小细胞肺癌的发生有密切关系。     

子宫内膜癌及其癌前病变中PHA受体与CEA的对比研究

本文采用ABC法对95例子宫内膜组织及其肿瘤进行PHA标记并与CEA进行对比研究。结果显示:癌的PHA阳性率为87.5％,而增殖性病变的阳性率较低:不典型增殖48.0％,腺瘤型增殖46.1％,腺囊型增殖42.8％,单纯型增殖33.3％。癌和不典型增殖CEA的阳件率分别为62.5％和60.0％,而其他增殖性病变的阳性率较低;腺瘤型增殖23.1％,腺囊型增殖14.3％,单纯型增殖0.06％。就癌的标记而言,PHA的阳性率高于CEA,且前者与分化有关,而后者与分化无关,然而由正常至癌演变至癌的过程中,两者的阳性率均显示递增趋势,其染色分布均由腔面移至胞浆。     

超分割放射治疗局部晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的探讨超分割放疗在晚期非小细胞肺癌治疗中的作用。方法超分割组：１２Ｇｙ／次,每日２次,间隔至少６ｈ,Ｄｒ７２Ｇｙ／６ｗ。常规组：２Ｇｙ／次,每天１次,Ｄｒ６４Ｇｙ／６４ｗ共３２次。两组均５ｄ／ｗ。结果超分割组和常规组总有效率分别为６４０％（１８／２８）和５７１％（１６／２８）,无显著性差异（Ｐ＞００５）。随访３年,超分割组和常规组的一年、二年和三年生存率及局部控制率分别为６７９％、３２１％、２１４％和６４３％、４２９％、２８６％;４６４％、１７９％、１０７％和４２９％、２５０％、１７９％;均有显著性差异（Ｐ＜００５）。两组放射性食管炎和肺炎的发生率分别为５３６％、７１％和３２１％、１７９％,无显著性差异（Ｐ＞００５）。结论超分割放射治疗局部晚期非小细胞肺癌,反应轻微,患者均可耐受;并有提高肿瘤局部控制率和改善长期生存率的作用,疗效优于单纯常规放疗。     

镉金属硫蛋白对小鼠脾淋巴细胞DNA链损伤和修复的体外实验研究

目的：为研究外源性镉金属硫蛋白对淋巴细胞ＤＮＡ的损伤和修复作用。方法：采用单细胞电泳地（ＳＣＧＥ）检测ＤＮＡ单链断裂（ＳＳＢＳ）,观察在脱金属硫蛋白和不同终浓度ＣｄＭＴ染毒作用３０分钟和６０分钟时ＤＮＡ链损伤,和去除受试物后３０分钟、６０分钟、１２０分钟时ＤＮＡ链损伤的修复。结果：ＤＮＡ－ＳＳＢＳ尾长在Ａｐｏ－ＭＴ作用未中;在中、高剂量ＣｄＭＴ染毒３０和６０分钟时都明显增长。损伤后链修复ＤＮＡ迁移