一种用于测量培养上清液中新合成的人IgE的亲和素—生物素ELISA测定法

近年有不少学者致力于研究人IgE体外合成的调节,但体外合成的IgE量仅为pg水平,通常只能采用RIA法测量。本文报道将生物素—亲和素系统与ELISA结合,建立了一种测定人IgE的高灵敏度ELISA技术,可取代RIA法。     

阻断型抗人IgE单克隆抗体的制备及其表位分析

目的 利用基因重组抗原免疫小鼠,制备抗人IgE单克隆抗体,研究其特异性和功能.方法 用表达的重组人IgE-Fc免疫BLAB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,以间接ELISA法筛选杂交瘤上清.用ELISA阻断分析鉴定其生物学功能;通过丙氨酸突变扫描分析确定其抗原表位.结果 利用杂交瘤技术获得了1株抗人IgE的单克隆抗体178,它具有IgE抗体特异性反应,其识别的抗原表位位于IgE与其受体结合的关键部位.经鉴定其具有体外阻断IgE与其受体结合的活性.结论 利用基因重组抗原制备了1株抗人IgE的单克隆抗体178,此单克隆抗体具有体外阻断IgE与其受体结合的生物活性.     

基于纳米抗体的猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法的建立和性能评估

目的：通过噬菌体展示技术制备抗人IgE纳米抗体,将其用于磁微粒化学发光平台建立一种猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法。方法：在WHO/IUIS过敏原数据库中检索猫致敏蛋白信息,合成序列后在原核表达系统中表达和纯化猫皮屑致敏蛋白Fel d 1。使用人源IgE免疫新疆单峰驼提取淋巴细胞中的RNA建立噬菌体展示纳米抗体库,分析库容、多样性和插入率,通过筛选和鉴定获得抗人IgE纳米抗体。使用重组过敏原偶联磁微粒和吖啶酯标记纳米抗体,建立磁微粒化学法猫皮屑特异性IgE抗体检测方法。结果：噬菌体展示库的库容为1.88×108 cfu/ml,插入率为93.6%,纳米抗体纯度>95%。检测方法的线性范围为0.1～100 U/ml,与ImmunoCAP检测系统临床对比有较好的一致性。结论：成功建立了基于纳米抗体的猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法,为猫过敏性疾病辅助诊断提供了技术基础。     

纸片放射免疫吸附试验测定支气管哮喘病人血清总IgE

IgE是人血清中含量最少的一类免疫球蛋白,目前多用放射免疫或酶免疫技术作定量测定。Ceska等对纸片放射免疫吸附试验(PRIST)方法作了详述。此法简便、快速、敏感、特异。PRIST是一种因相双抗体夹心技术,先将抗IgE抗体偶联于溴化氰活化的滤纸片上,使与待测标本或IgE工作标准进行反应,洗净后加入~(125)I—抗IgE抗体再进行反应,洗净后测定滤纸片上复合物的放射能。后者随IgE量增多而增强。我们在建立PRIST方法之后,将其应用于检测支气管哮喘病人血清总IgE。现报告如下。材料与方法     

检测IgE最敏感方法的比较

目前,关于人类IgE的合成和调节的研究进展仍较缓慢,部分原因是缺乏测定IgE特别敏感的实验方法。因此,作者对双抗体放射免疫测定法(DARIA)、微量固相放射免疫测定法(MSPRIA)、敏感纸片放射免疫吸附试验(SPRIST)和超敏感的酶放射免疫测定法(USERIA)等四种测定IgE的方法进行了比较。对人血清和脐带血IgE     

IgE结合因子

为防治速发型过敏症,人们一直在寻求控制IgE抗体产生的有效方法.Ishizaka夫妇在发现IgE之后,便着力于研究IgE反应的调节机制.通过近10年的工作,发现了具有重要调控作用的两种IgE结合因子,即IgE增强因子和IgE抑制因子,并证明两种因     

FcεRⅡ的研究进展

1966年Ishizaka 发现IgE,以后对IgE抗体系统研究取得很大成果。早期的研究局限在IgE 介导的变态反应,近十年来IgE 生物合成与调节、IgE 的Fc 受体(FcεR)已成为许多研究的主题。人和动物肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的FcεR 已被鉴定,以后在     

IgE抗体应答的机制

现已证明,抗变应原的IgE抗体不但引起枯草热,大概还与其他变应性疾病有关。鉴于IgE抗体在超敏反应中的重要作用,所以抑制或调节IgE抗体的产生,可能是治疗变应性疾病的主要措施之一。但,要达到这这一目的,了解IgE抗体应答的细胞方面的变化是必要条件。本文首先讨论参与IgE应答的B与T淋巴细胞的特点,然后介绍有关调节B细胞向IgE形成细胞分化的进展。     

儿童血清变应原体外检测结果临床分析

变态反应疾病是一种常见病.是以过量IgE抗体产生为特征的疾病,被世界卫生组织列为二十一世纪重点防治的三大疾病之一.世界各国变态反应性疾病的总发病高达10～30%[1],检查变应原对过敏性疾病患者有重要临床意义.我们采用体外检测变应原,对临床患者进行了检测.现将我院2002年11月～2004年12月检测的部分病例,做一分析,并报告如下.     

IL-4与IFN-γ的相互拮抗作用影响人IgE体外合成

IL-4能诱导无变态反应性健康供者脾、扁桃体及外周血中的单核细胞(MNC)在体外合成IgE。本文通过对70名无变态反应性健康供者MNCIgE 合成水平的研究,摸索体外IgE 合成最适培养条件,研究IFN-γ     

皮内试验与SIgE检测结果分析

测定人血清中的特异性IgE抗体是Ⅰ型变态反应性疾病的体外实验诊断的重要手段.通过以PharmaciaCAP变应原检测系统测定人血清中的特异性IgE与其相应的皮试结果进行比较分析,发现两种方法的一致性率较高.证明传统的皮内试验有一定的准确性,是可信的.     

合成人IgE肽抗血清抑制Ⅰ型变态反应的实验研究

作者设计合成了5个人IgE多肽片段,分别交联载体蛋白后免疫小鼠,诱生的抗血清有2个在ELISA中对人与鼠IgE分子有交叉反应,3个无反应。5个抗血清均显示有中等程度的被动皮肤过敏反应（PCA）抑制作用。被测试的2个抗血清在大鼠肥大细胞被动致敏试验中也显示了抑制作用。研究结果初步表明,采用人IgE分子受体结合部位的适当残基序列的合成肽疫苗,免疫动物所诱导的抗体可抑制Ⅰ型变态反应。     

影响人乳头瘤病毒相关细胞系增殖的因素

人乳头瘤病毒的基因表达与KC的增殖分化相互影响.近二十年来人们在如何体外重复两者之间的关系方面做了大量工作,但由于体外培养人乳头瘤病毒非常困难,因此有关实验多是采用体外培养的人乳头瘤病毒相关肿瘤细胞系作为研究对象.本文的内容包括(1)HPV相关细胞系体外培养的方法;(2)有关影响人乳头瘤病毒相关细胞系增殖的细胞因子和药物,及其作用机理.     

高活力人降钙素类似物vhCT的免疫原性研究

本研究用固相多肽合成法合成人降钙素类似物vhCT ,产物纯度达到等电聚焦均一 ,质谱测定分子量精确。生物活性为天然人降钙素的 2 0～ 2 5倍。用放射免疫法测定vhCT能与识别天然人降钙素的抗体起反应 ,产生IgG抗体的免疫原性随偶联的不同载体而有差异。但在BALB/C5 7小鼠体内不引起IgE增高。提示vhCT不产生IgE介导的过敏反应 ,具有药物应用前景。     

人肥大细胞的IgE依赖性组胺和类胰蛋白酶分泌

目的　利用人结肠组织的肥大细胞和肥大细胞激活的体外研究系统评价人肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的能力及其机制。方法　经酶悬浮的人结肠肥大细胞与抗IgE抗体共同培养后记录浓度相关曲线和时间关系曲线。类胰蛋白酶用酶联免疫吸附试验的方法测量 ,而组胺则由一种以玻璃纤维为基础的荧光比色法测量。结果　抗IgE抗体可引起浓度相关性的组胺和类胰蛋白酶释放 ,最大组胺和类胰蛋白酶分泌量分别比基础分泌量超出 2 .7和 2 .5倍以上。抗IgE抗体的作用从加样后 10s开始 ,6min后达高峰并至少持续 15min。百日咳毒素和代谢抑制剂能够分别抑制抗IgE抗体引起的组胺和类胰蛋白酶释放。百日咳毒素还能够减少自发性类胰蛋白酶释放。结论　人结肠肥大细胞在受到抗IgE抗体刺激时具有平行释放类胰蛋白酶和组胺的能力 ,这个过程与肥大细胞膜G蛋白偶联受体的激活有关 ,并消耗能量。肥大细胞自发性释放组胺和类胰蛋白酶的功能可能是通过不同的机制实现的。     

FcεR~+淋巴细胞与IgE抗体的生成和调节

自证实IgE是引起过敏反应的主要抗体以来,IgE生成及调节的研究成为Ⅰ型变态反应的一个活跃而重要的课题.这一领域内的概况国内已有综述作了系统的介绍.近年来,有关这一领域内的研究又取得了许多实质性的进展,其中IgE的Fc受体(FcεR)阳性的淋巴细胞在IgE抗体的生成及调节中的作用尤其引人注目.本文就有关这方面的研究近况作一概述.一、淋巴细胞FcεR的一般特征现已清楚知道,小鼠、大鼠和人类都有部分淋巴细胞携带IgE Fc受体.这部分淋巴细胞形成一个功能独特的亚群.该亚群占全部淋巴细胞的比例因种属及个体的不同而异.在正常情况下,小鼠的FcεR阳性淋巴细胞(FcεR~+淋巴细胞)约占脾细胞及肠系膜淋巴结细胞(MLN细胞)的4-5%.     

人血中单核细胞体外合成IgE抗体:特应症病人与非特应症的正常人的比较

近年来通过实验动物体内测定,了解到许多调控IgE生物合成的免疫机制,但尚未在人体中进行类似的研究。我们对人体调控IgE合成的知识,主要依靠最近发展起来的体外测定系统的结果。各作者报告的结果不一致,关于正常人单核细胞是否能合成IgE、美洲商陆和金葡Cowan 1的影响和T细胞的作用等方面,尚有争论。     

过敏性鼻炎患儿过敏原特异性IgE检测与临床意义

目的 了解过敏性鼻炎儿童主要过敏原分布情况及特点,以指导临床防治.方法 采用免疫印迹法体外定量检测患儿血清中特异性IgE抗体及20种常见过敏原.结果 938例过敏性鼻炎患儿中,100%至少对一种以上的过敏原呈阳性反应,其中487例患儿总IgE〉400IU/Ml,230例患儿总IgE在200IU/ml~400IU/ml之间.在检测20种过敏原中以户尘螨和屋尘的阳性率最高（90.0%,80.8%）.结论 过敏性鼻炎患儿至少有一种特异性IgE抗体显著增加,户尘螨、屋尘、动物皮屑、羊肉和牛奶是引起儿童过敏性鼻炎的主要过敏原.儿童在春秋温暖季节易发过敏性鼻炎.     

肠道对抗原的反应

当口服抗原时,抗原如何刺激IgA抗体呢?这可能与调节IgA应答的T淋巴细胞的特殊解剖分布有关。在研究IgM、IgG和IgE应答时,证实T细胞调节抗体生成(有些是辅助,有些是抑制)的概念。发现刀豆素A(ConA)在致有丝分裂浓度时可刺激T细胞抑制IgM和IgG合成。Elson等报导ConA能刺激小     

人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定

利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增。CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测。结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95%的人IgE Fcε2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L)。提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础。