SDF-1/CXCR4促进骨髓基质细胞迁移的作用

目的研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,SDF-1对BMSCs迁移、趋化作用,分析促进迁移规律和机理。为改善和提高骨髓基质细胞迁移能力寻找更有效的途径。为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础。方法体外培养大鼠骨髓基质细胞,应用免疫组化方法对骨髓基质细胞的CXCR4受体表达水平进行检测,运用微孔隔离室穿越实验方法,研究SDF-1对骨髓基质细胞迁移、趋化作用,并用SDF-1阻断剂加以证实。结果CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,SDF-1可促进骨髓基质细胞迁移。结论虽然CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,但是对促进骨髓基质细胞迁移起到至关重要的作用。     

2型糖尿病患者外周血中SDF-1水平和内皮祖细胞CXCR4表达率的变化

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)水平和内皮祖细胞(EPCs)表面SDF-1受体CXCR4表达率的变化及意义.方法: 测定104例T2DM患者和26例健康对照者外周血中SDF-1水平、EPCs数量和CXCR4表达率.糖尿病患者分单纯糖尿病组、血管病变组.结果: SDF-1水平和EPCs数量对照组、单纯糖尿病组、血管病变组依次下降(P<0.05 或<0.01);CXCR4表达率单纯糖尿病组较对照组、血管病变组升高(P<0.05或<0.01),血管病变组较对照组降低(P<0.05);SDF-1水平与EPCs数量成正相关(r=0.241,P<0.05).结论: T2DM患者外周血中SDF-1/CXCR4轴与EPCs的数量及功能密切相关,参与血管病变的发生与发展.     

雌激素受体激动剂对人脐血内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的:观察选择性雌激素受体(ER)激动剂PPT(α亚型激动剂)和DPN(β亚型激动剂)对人脐带血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells EPCs)增殖和迁移的影响,并与17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)的作用进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离获得脐带血单个核细胞,硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)双染及CD133免疫荧光鉴定EPCs。培养的EPCs分别加入不同浓度的E2、PPT和DPN(分别为1×10-10mol/L、1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L)进行细胞增殖实验分析(WST)、显微镜下EPCs计数及Transwell技术测定对EPCs迁移的影响。结果:E2及PPT呈浓度依赖性促进EPCs的增殖和迁移,PPT刺激作用等同于E2,DPN无刺激作用。结论:雌激素α亚型激动剂PPT明显刺激内皮祖细胞的增殖和迁移,其作用与17β-雌二醇相同。     

糖尿病肾病患者外周血中SDF-1水平的变化及意义

目的 探讨糖尿病肾病(DN)患者外周血中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)水平的变化及意义.方法 测定74例2型糖尿病(DM)患者和26例健康对照者(NC组)外周血中SDF-1水平、内皮祖细胞(EPC)数量、EPC表面SDF-1的受体CXCR4表达率.DM患者按尿白蛋白排泄率分单纯DM组(SDM组)、早期DN组(EDN组)、临床DN组(CDN组).结果 SDF-1水平和EPC数量NC组、SDM组、EDN组、CDN组依次下降(P＜0.05或0.01);CXCR4表达率SDM组较另3组升高(P＜0.05或0.01),CDN组较其它组降低(P＜0.05或0.01);2型DM患者SDF-1与HBA1c、病程、收缩期血压负相关(r=-0.398、-0.257、-0.241,P＜0.05或0.01),SDF-1与EPC正相关(r=0.278,P＜0.05);UAER与SDF-1、EPC负相关(r=-0.263、-0.248,P＜0.05),UAER为因变量多元逐步回归分析,进入方程的变量依次为HBA1c、收缩压、SDF-1、EPC和病程.结论 2型DM患者外周血中SDF-1/CXCR4轴的变化与DN的发生、发展有关.     

血管内皮生长因子通过缝隙连接蛋白43调节内皮祖细胞增殖迁移

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial groth factor,VEGF)是否通过缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)调控内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖迁移.方法 分离培养原代大鼠脾源性EPCs,不同浓度VEPF(0、10、50 ng/mL)刺激细胞,Western blot检测Cx43的表达.实验分3组:对照组、VEGF组、VEGF+siCx43组.荧光漂白恢复实验(fluorescence redistribution afterphotobleaching,FRAP)分别检测3 min内各组选定细胞荧光强度变化情况.CCK-8检测干扰Cx43蛋白表达对EPCs增殖的影响;Transwell小室迁移实验检测干扰Cx43蛋白表达对EPCs迁移的影响.结果 (1) VEGF促进EPCs中Cx43的表达(P＜0.05),且有浓度依赖性.(2)与对照组相比,VEGF组缝隙连接功能明显增强(P＜0.05);与VEGF组相比,VEGF+siCx43组缝隙连接功能明显降低(P＜0.05).(3)与对照组相比,VEGF组促进EPCs增殖及迁移,差异有统计学意义(P＜0.05);与VEGF组相比,VEGF+ siCx43组EPCs增殖及迁移活性明显降低(P＜0.05).结论 VEGF可以通过上调EPCs中Cx43的表达,引起缝隙连接功能增强,从而促进内皮祖细胞的增殖及迁移.     

冠心病患者循环内皮祖细胞与基质细胞衍生因子-1α的变化

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)与血浆基质细胞衍生因子-1α(SPF-1α)在冠心病中的作用及其临床应用价值。方法将44例患者分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=12)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=14)、急性心肌梗死(AMI)组(n=11)及对照组(n=7)。采集患者外周血进行EPCs的分离培养,激光聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPCs的数量,测定EPCs的迁移和黏附能力。用酶联免疫吸附法检测各组血浆SDF-1α水平,比较其与循环内皮祖细胞的数量、迁移和黏附能力有无相关性。结果AMI组EPCs集落形成数是对照组的2.7倍,其迁移能力较其他3组升高(P<0.01),但其黏附能力与UAP组相比差异无统计学意义(P>0.05);UAP组患者EPCs数量及迁移能力较SAP组和对照组升高(P<0.01);SAP组患者EPCs数量及迁移、黏附能力均比对照组减低(P<0.05)。与对照组相比,UAP和AMI组患者血浆SDF-1α水平明显降低(P<0.01)。SDF-1α浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈负相关,与循环EPCs黏附能力无相关性。结论AMI(发病7d内)和UAP可引起循环EPCs数量增多,迁移和黏附能力增强,这种变化可能与冠状动脉粥样斑块不稳定、消耗循环SDF-1α有关。     

2型糖尿病患者血清SDF-1和MMP-9的变化及相关性

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化及意义.方法 测定120例T2DM患者和30例健康对照者血清中SDF-1和MMP-9的水平、血管内皮祖细胞(EPCs)的数量和其表面CXCR4的表达率.糖尿病患者分单纯糖尿病组和血管病变组.结果 SDF-1水平和EPCs数量在对照组、单纯糖尿病组、血管病变组中依次下降(P<0.05 or 0.01);MMP-9水平在对照组、单纯糖尿病组和血管病变组中依次增高(P<0.01);CXCR4表达率单纯糖尿病组较对照组和血管病变组升高(P<0.05 or 0.01),血管病变组较对照组降低(P<0.05);SDF-1与MMP-9呈负相关(r=-0.223,P<0.05),与EPCs呈正相关(r=0.224,P<0.05);MMP-9与EPCs呈负相关(r=-0.215,P<0.05).结论 T2DM患者SDF-1/CXCR4轴与EPCs的数量及功能密切相关,MMP-9通过降低SDF-1水平可能是其促进血管病变的机制之一.     

SDF-1与自体骨髓干细胞治疗缺血性疾病

自体骨髓干细胞移植作为一种缺血性疾病的新的治疗手段,日益受到研究者重视。包含内皮祖细胞在内的自体骨髓干细胞受到缺血区域局部微环境的诱导,可以动员、迁移、分化生成新生血管,从而改善局部缺血。骨髓基质细胞衍生因子-1(SDF-1)是近年发现的细胞因子,生物作用广泛,对它的研究以往主要集中在血液病和艾滋病的治疗领域。自1997年发现SDF-1对CD34+细胞具有强效趋化作用以后,陆续有研究者将之用于心脑血管缺血性疾病的干细胞研究领域,并发现它可以明显的促缺血区域血管新生。肢体缺血的病变与心脑血管缺血性疾病相类似,综述SDF-1与自体骨髓干细胞移植的相关文献,有利于为血管外科研究者研究肢体缺血性疾病的治疗提供更广阔的思路。     

槲皮素对人内皮祖细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的研究氧自由基对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的损伤及槲皮素(quercetin,Que)的保护作用,并探讨可能机制。方法①分离内皮祖细胞并诱导其分化,随机分为:空白对照组;60～120μmol/L Que组;H2O2组;60～120μmol/L Que+H2O2组。②WST-1观察细胞增殖情况;③应用免疫细胞化学染色法观察p-JNK蛋白;④流式细胞术分析细胞凋亡改变。结果①低浓度的Que可以促进EPCs的增殖,而高浓度的Que则表现为抑制其增殖(P<0.05);②Que在60～120μmol/L范围内呈浓度依耐性降低H2O2诱导的EPCs凋亡率(P<0.01);③Que能抑制加入JNK激动剂后EPCs凋亡率的增加(P<0.05)。结论Que可促进H2O2诱导的EPCs的增殖,并通过阻断JNK信号通路抑制其凋亡。Que具有拮抗氧化应激条件下EPCs损伤的潜在作用。     

SDF-1与脑缺血后神经再生

基质细胞衍生因子-1（SDF-1）在多种组织器官中与其特异性受体CXCR4结合,构成SDF-1／CXCR4反应轴,参与多种生理和病理过程,如免疫、炎症反应、造血干细胞迁移和归巢以及HIV感染等。但是,有关SDF-1与神经再生之间关系的研究的报道很少。本文就SDF-1在脑缺血后神经细胞迁移和轴突再生等方面的作用做一综述。     

AMD3100 对 Lewis 肺癌进展及荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞积聚的影响

目的 观察趋化因子受体CXCR4拮抗剂AMD3100对Lewis肺癌进展及荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞(myeloid derived suppressor cells ,MDSCs)积聚的影响. 方法 60只荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠分为2组:PBS组(腹腔只注射PBS液,0.2 ml/只)、AMD3100组[腹腔注射溶解有2 mg/(kg*d) AMD3100的PBS液,0.2 ml/只,1次/d,共26 d],每组30只.隔日测2组小鼠体质量,记录成瘤时间.26 d随机处死2组荷瘤鼠各15只,剥离瘤体称量,观察肺转移灶数目,用免疫组化法计数瘤组织微血管密度(microvessel density,MVD),流式细胞仪测小鼠脾脏MDSCs比例;统计2组剩余小鼠自然生存天数. 结果 PBS组、AMD3100组小鼠Lewis肺癌成瘤时间分别为(8.03±1.47)、(9.97±1.50) d,接种瘤细胞后26 d瘤质量分别为(3.54±0.93)、(2.09±0.66)g,MVD值分别为(41.40±6.44)、(32.47± 5.33)个/HP,肺癌肺转移灶数目分别为(18.27±9.78)、(7.40± 5.83)个/只,MDSCs比例分别为(19.57±3.59)%、(31.42±5.04)%,中位生存时间分别是第29、34天,2组各项指标比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 AMD3100可延缓Lewis肺癌进展,但可能对荷Lewis 肺癌小鼠免疫产生一定的抑制作用.     

AMD3100对裸鼠结直肠癌肝转移模型中ICAM-1表达的影响

目的探讨CXCR4特异性抑制剂AMD3100对裸鼠结直肠癌肝转移模型中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法取对数生长期的Lovo细胞接种于BALB/C裸鼠脾脏,建立结直肠癌肝转移模型。将18只模型裸鼠随机分入3组:对照组、低剂量治疗组、高剂量治疗组。对照组每天给予0.1 mL生理盐水腹腔注射,治疗组予0.1 mL AMD3100腹腔注射,低剂量治疗组0.1 mmol/L、高剂量治疗组0.15 mmol/L,1次/d,持续6周。处死实验鼠,制作肝脏转移瘤病理切片,用免疫组织化学方法检测各组I-CAM-1蛋白的表达情况。结果免疫组织化学显示,治疗组裸鼠结直肠癌肝转移模型中,ICAM-1蛋白表达较对照组降低。结论AMD3100可致裸鼠结直肠癌肝转移模型中ICAM-1蛋白的表达水平降低。     

AMD3100对人肝癌HepG2细胞增殖与AFP表达的抑制作用

目的：检测AMD3100对人肝癌HepG2细胞增殖及其与甲胎蛋白（alphafetoprotein,AFP）表达的影响并探讨其意义。方法：显微镜观察不同浓度AMD3100对人肝癌HepG2细胞生长的影响;MTT法检测不同时间AMD3100对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,用Westernblotting分析不同浓度AMD3100干预前后AFP、CxCR4的表达变化。结果：AMD3100对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,且随着浓度的增加抑制作用越明显;给AMD3100处理后HepG2细胞的CXCR4和AFP表达明显减弱。结论：AMD3100对HepG2细胞的增殖有抑制作用,这种作用很可能与抑制AFP的表达有关。     

过表达趋化因子受体4的内皮祖细胞影响血管平滑肌细胞迁移、增殖

目的 研究过表达趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移、增殖的影响.方法 分离培养并鉴定大鼠骨髓来源EPCs.CXCR4的重组腺病毒感染EPCs后,流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞膜CXCR4受体及mRNA表达,CCK-8法、Transwell法分别检测EPCs增殖活性、迁移能力.建立过表达CXCR4的EPCs与VSMCs非接触共培养模型,Transwell法、CCK-8法检测EPCs对VSMCs的迁移、细胞存活的影响.结果 CXCR4重组腺病毒感染EPCs 48 h后,EPCs细胞膜CXCR4受体和mRNA表达明显增高(P＜0.01),过表达CXCR4对EPCs增殖活性无明显影响,但可增强EPCs定向迁移能力(P＜0.01).共培养模型中,SDF-1α诱导下,CXCR4组VSMCs迁移、细胞存活率明显降低(P＜0.05),无SDF-1α诱导下空白对照组、GFP组及CXCR4组VSMCs的迁移、细胞存活率整体高于SDF-1α诱导下各组(P＜0.05).结论 过表达CXCR4可增强EPCs的迁移能力,在SDF-1/CXCR4调控轴中加强EPCs对VSMCs迁移和增殖的抑制作用,可用于防治血管再狭窄的细胞治疗.     

辛伐他汀对内皮祖细胞增殖?迁移及凋亡影响的研究

目的:细胞水平观察不同浓度辛伐他汀对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的影响.方法:采用密度梯度离心法从人外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板上,培养7天后,收集贴壁细胞,通过激光共聚焦显微镜鉴定,FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化EPCs.以不同浓度辛伐他汀(分别为0.0001、0.0010、0.0100、0.1000、1.0000 μmol/L)或PI3K阻断剂(LY294002) 0.01μmol/L辛伐他汀和EPCs培养.分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室和碘化丙啶(PI)标记观察辛伐他汀对EPCs的增殖、迁移和凋亡影响.结果:辛伐他汀显著提高了外周血 EPCs的迁移能力、增殖能力与抗凋亡能力(P＜0.05).辛伐他汀浓度在0.01 μmol/L时对EPCs功能影响达到最大.随着药物浓度的继续增大,EPCs的上述功能反呈下降趋势,但0.1μmol/L组仍高于对照组.辛伐他汀对EPCs的功能影响能被LY294002阻断.结论:辛伐他汀能增加EPCs的增殖、迁移、抗凋亡功能,其机制可能与磷酸酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号途径有关.     

凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞增殖能力的影响

目的:观察凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓分离EPCs,培养7 d后收集贴壁细胞并加入不同浓度凝血酶(10-2,10-1,1,10,100 U/mL)干预一定时间(6,12,24,48 h)。CCK-8试剂盒检测EPCs增殖。实时定量PCR检测凝血酶刺激以及NF-κB抑制剂预处理以后EPCs的VEGF mRNA表达变化,ELISA法检测其分泌量变化。结果:凝血酶干预组的细胞增殖数均高于对照组,10 U/mL凝血酶作用24 h对内皮祖细胞数量影响最为显著(P<0.05)。与对照组相比,凝血酶刺激后VEGFmRNA表达及分泌量均增高,使用NF-κB抑制剂预处理后可以抑制凝血酶的这种作用。结论:凝血酶可以通过NF-κKB途径上调VEGF的表达,促进EPCs增殖。     

AMD3100联合G-CSF对糖尿病小鼠 骨髓内皮祖细胞的动员作用

目的：以糖尿病小鼠（db/db）为研究对象,比较单一使用AMD3100与AMD3100联合粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating,G-CSF）及两者不同使用顺序对骨髓内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）的动员效果,为临床获取糖尿病人EPCs进行细胞治疗提供思路。方法：采用AMD3100、重组人粒细胞集落刺激因子注射液（recombinant human granu－locyte colony-stimulating,rhG-CSF）参考国内外文献所述剂量和方法进行骨髓EPCs的动员。选用5~6周雄性小鼠,随机将80只db/db小鼠分为A组（AMD3100+NS动员组）,B组（AMD3100+G-CSF动员组）,C组（G-CSF+AMD3100动员组）和D组（NS空白对照组）;80只db/+小鼠为相应对照组,分组对应为A’组,B’组,C’组和D’组。每组在动员后第3 、7、10、14 天4个时间点于心脏部位取外周血,流式细胞仪检测CD34+/CD133+/Flk-1+细胞的比例。结果取平均值用均值±标准差（单位%）表示,统计学方法处理后进行比较和分析。结果：①D组和D’组在动员后第3、7、10、14 天4个时间点,CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例无差异（P >0.05）,但D’组中CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例高于D组（P=0.003）。②A组、B组和C组db/db小鼠在动员后第3、7、10、14 天4个时间点,CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例逐渐上升,A组至第7 天达到峰值,随后逐渐下降;B组和C组至第10 天达到峰值,随后逐渐下降,且在达到峰值时CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例与其余3个时间点相比差异有意义（P=0.000）。在第10 天,B组和C组db/db小鼠外周血中CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例较A组和D组高（P=0.000）,但B组和C组db/db小鼠外周血中CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例之间的差异无统计学意义（P >0.05）。③A’组、B’组和C’组db/+小鼠在动员后第3、7、10、14天4个时间点,CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例逐渐上升,至第7 天达到高峰,随后逐渐下降,且在第7天CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例与其余3个时间点相比差异有意义（P=0.000）。在达到峰值的第7天,C’组CD34+/CD133+/Flk-1+细胞比例较A’组、B’组和D’组高（P=0.000）。结论：AMD3100联合G-CSF动员骨髓EPCs的效果优于单一使用AMD3100的动员效果,在非糖尿病状态下,先使用G-CSF再联合AMD3100的动员作用更优,但在糖尿病状态下先使用AMD3100再联合G-CSF的动员作用更优。