乙型肝炎病毒感染与肝硬变关系的探讨

报告经病理确诊为肝硬变140例,证明HBVM阳性占81.5％,HE染色均见慢活肝病理特点,Victoria blue染色在血清HBVM阳性、HBsAg阴性和未查HBVM病例中,肝组织内能检出HBsAg者分别为77.6％、66.7％和60.0％,三者无明显差异。说明肝硬变患者血清HBsAg阴性并不能除外HBV感染可能。因此,认为我国肝硬变与HBV感染间存在密切因果关系,是HBV感染后慢活肝的一种结局,预防肝硬变主要应在预防HBV感染和慢活肝的治疗。     

反义寡核酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒为模板，通过聚合酶链反应扩增得到条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒基因组ＲＮＡ中核酶区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ＰＧＥＭ３Ｚ中，经筛选鉴定，得到一重组质粒，经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。     

丁型病毒性肝炎30例

我国是乙型肝炎的高发区,且存在着众多的HBsAg携带者,易导致丁型肝炎病毒的感染。此已引起国内学者的瞩目。但在以往的报道中,大多从实验室的角度加以探讨。现将住院病人中所发现的30例HDV感染者作一临床分析。1资料与方法1.1一般资料30例,男26例,女4例,20—40岁14例,41—60岁1     

乙型肝炎、丁型肝炎病毒联合诊断芯片制备的初步研究

目的制备联合检测乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)基因芯片并进行杂交验证。方法利用Primer Premier 5．0分别针对HBV、HDV基因保守区域设计多对PCR引物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体,提取阳性克隆质粒进行测序分析鉴定。用PixSys5500芯片打印仪将PCR产物打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片。样品荧光标记采用限制性显示(RD)技术,标记后进行杂交验证分析。结果序列分析表明,运用PCR技术得到的多个基因片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示,敏感性、特异性、重复性等指标均佳。结论利用PCR扩增产物作为探针制备HBV、HDV联合诊断芯片是一种快速、简便的实用方法,有着广阔的应用前景;利用RD技术标记样品可提高多种肝炎病毒混合检测的敏感性。     

反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。     

慢性无症状乙型肝炎病毒感染时检出HBxAg的意义

近年的研究已经明确了乙型肝炎病毒（HBV）X基因的核酸序列，认为X基因表达产物（HBxAg）可提高HBV的转录水平，与HBV慢性感染有密切关系。然而，HBxAg与HBV感染其它血清学标志物（HBVM）之间的相关性及其进展性肝损伤的联系报道极少。我们在用前瞻性方法，追踪7年研究学龄期儿童HBVM的发生、持续和转归的基础上，对确诊为慢性无症状HBV感染（ASI）的血清贮存样品，于1992年6月进行了HBXAg检测，掠讨HBXAg在HBV感染发展中的作用。对象与方法一、研究对象的选择和流行病学背景1985年5月至1992年6月3次对河北省庆县某村的一…     

胰腺乙型肝炎病毒感染及其与糖尿病的关系

目的　确定活体人胰腺组织是否存在乙型肝炎病毒感染 ,并探讨其与糖尿病可能存在的关系。方法　手术获取12例血清HBV标志物呈阳性病人的胰腺组织 ,以原位杂交、免疫组织化学和石蜡切片检测观察。结果　胰腺组织HBVDNA阳性率 8/ 12 ,其中口服葡萄糖耐量试验 (OGTT)异常的 7例检测结果均为阳性 ,OGTT正常的 5例中仅 1例阳性 ,HBVDNA主要位于胰腺和胰岛细胞核内。免疫组化检测胰腺HBsAg阳性率为 10 / 12 ,主要分布在细胞浆。结论　HBV可直接侵害胰腺腺泡和胰岛细胞 ,是造成胰腺功能异常和糖尿病的可能原因。     

乙型肝炎病毒基因组准种与变异特点的研究

探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因组异质性及其生物学意义。以已知HBV基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列，克隆入pGEM Teasy质粒，随机挑选克隆进行DNA测序并加以比较。测序结果发现，来源不同的5株HBV全基因组核苷酸序列的一致率为93．6％，不同克隆的4个开放读码框架长度有明显区别，氨基酸序列中存有移框、缺失、替换等多种变异类型。说明来源于同一患者的HBV基因组序列之间存在有较明显的变异现象，在患者体内构成了准种群。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3与乙型肝炎病毒 X蛋白协同反式激活作用的研究

构建丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白3（NS3）的重组表达质粒pcDNA3.1(－）-NS3和表达乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白的重组质粒pcDNA3.1(－）-X，分别瞬时转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞，用免疫印记（Western blotting)方法鉴定病毒基因的表达。两个表达质粒分别及同时与报告质粒pCAT 3-promoter共转染HepG2细胞，检测报告基因氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达水平，酶的活性反映了表达的肝炎病毒蛋白对SV40病毒早期启动子功能的影响。结果显示，两个重组表达载体pcDNA3.1(－）-NS3及pcDNA3.1（－）-X在HepG2细胞均以瞬时表达相应的肝炎病毒蛋白；单独共转染实验中pcDNA3.1(－）-NS3.1(－）-X组的CAT的表达分别是对照的3．6倍和4．4倍，两种质粒共同转染时酶的表达是对照的8．5倍；表达质粒对CAT酶表达的激活作用呈剂量依赖性。研究表明，HepG2细胞中表达的HCV NS3蛋白和HBV X蛋白均具有反式激活SV40早期启动子的功能，并且两种蛋白的反式激活功能具有协同特性。本实验有助于解释HCV、HBV感染，尤其是共同感染的致病（癌）机制。     

慢性乙型肝炎肝组织Fas抗原表达及与HBV抗原的关系

用免疫组织化学技术检测了５２例慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）肝组织内的Ｆａｓ抗原、ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ。结果表明，４８例Ｆａｓ抗原阳性表达（９２．３％），主要在肝细胞浆内，其表达程度与肝组织活动性炎症分度密切相关，提示Ｆａｓ抗原介导的细胞凋亡在肝细胞损伤中起一定作用；肝细胞Ｆａｓ抗原的表达程度与ＨＢｓＡｇ相关而与ＨＢｃＡｇ不相关。     

血清HBsAg阴性和HBsAg阳性慢性活动性肝炎患者肝内HBV DNA的研究

用原位杂交法和ABG法对慢性活动性肝炎患者(以下称CAH)血清HBsAg阴性34例和阳性30例对比进行了肝内HBV DNA、HBcAg和HBsAg的检测。上述检出率在34例HBsAg阴性CAH者中分别为23.5％,23.5％和32.4％,30例HBsAg阳性者中分别为63.3％、56.7％和83.3％。结果表明,在我国,血清HBsAg阴性、HBV相关抗体阳性或阴性的CAH中,仍有少部分人肝内存在HBV DNA和HBV抗原表达,并与肝病发病机理有关。血清HBsAg阳性的CAH者中,无论血清HBeAg阳性,或抗HBe阳性、或HBeAg阴性,均有较高比例的肝内HBV DNA和HBV抗原检出。肝内HBcAg与肝内HBV DNA关系密切,可作为反映HBV活跃复制指标;肝内HBsAg则不然。     

HLA-DRB1*07与广东汉族人慢性乙型肝炎相关性的研究

为探讨HLA DRB1 0 7与广东汉族人慢性乙型肝炎的相关性 ,收集HBV慢性携带者 10 0例、自动清除者 2 1例和非HBV暴露者 70例作为研究对象 ,采用序列特异性引物聚合酶链反应法检测HLA DRB1 0 7,双抗体夹心法检测IFN γ和IL 4。结果发现 ,慢性携带者HLA DRB1 0 7的阳性率为 30 % ,高于自动清除组 (4 76 % ,P <0 0 5 )和非暴露组 (8 5 % ,P <0 0 5 ) ;HBV慢性携带者中 ,HLA DRB1 0 7阳性者外周血IFN γ表达水平为 1132 0 4±75 36pg/ml,IL 4表达水平为 876 79± 4 7 5 3pg/ml,而HLA DRB1 0 7阴性者IFN γ表达水平为 14 32 10±198 13pg/ml,IL 4表达水平为 6 81 99± 6 1 5 9pg/ml,HLA DRB1 0 7阳性者外周血IL 4表达水平高于阴性者 (P <0 0 5 ) ,而二者之间IFN γ的表达水平无显著差异。结果表明HLA DRB1 0 7与广东汉族人慢性乙型肝炎关联     

生物靶标光敏剂对鸭乙肝病毒的特异结合及杀灭作用研究

目的：利用生物靶标效应的原理。探索一种特异灭活病毒的光化学方法。方法：将针对鸭乙肝病毒（DHBV）设计并人工合成的两条三螺旋结构寡核苷酸（TFO）分别标记8-甲氧基补骨脂素（8-MOP），并将这种复合物（TFO-P）与长波紫外线（UVA）共同作用于血液中的DHBV，通过原代细胞感染，酶联免疫测定，DMA斑点杂交等试验。观察在一定作用条件下，TFO-P对DHBV-DNA的特异结合及其所产生的特异光敏效应对DHBV的灭活程度。结果：DHBV-DNA样品斑点印迹随TFO-P含量的增加明显增强，而同时处理的血液中的白细胞DNA样品斑点印迹无明显增强；在TFO-P的加入量为0.1mmol/ml,UVA照射强度为180μg/cm^2时，5min-20min的UVA照射可灭活DHBV1.90-6.4个对数级，灭活病理条件下，所产生的光敏效应能有效灭活血液中的DHBV，灭活滴度可达6个对数级以上。